螺旋體的檢驗

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重慶醫科大學Lunan

一、概述

螺旋體（Spirochete）是一類細長、柔軟、彎曲呈螺旋狀，運動活潑的原核細胞型微生物。

生物學性狀介于細菌與原蟲之間。

似細菌：有CW，原始核，二分裂方式繁殖，對抗生素敏感，可人工培養。

似原蟲：運動有賴于菌體內鞭毛的屈曲與收縮。所致疾病能周期性再發。

第一節分類分子生物分類的發展2004年《伯杰細菌分類手冊》將螺旋體分為1目3科13屬

螺旋體廣泛存在自然界和動物體內，種類多，

致病性螺旋體主要有下述3個屬：

疏螺旋體屬（Borrelia）密螺旋體屬（Treponema）鉤端螺旋體屬（leptospira）

問號狀鉤端S→野鼠、豬（儲存宿主）→腎→尿→水→疫水→接觸易感者的破損皮膚粘膜→鉤體病，國內以該種S為主。雙曲鉤端S→接觸感染者的破損皮膚粘膜→一般不致病

第二節鉤端S屬（Leptospira）一、臨床意義

鉤體病是一種典型的人獸共患病；全世界至少已發現200多種動物為問號狀鉤體的攜帶者。鉤體病遍布世界各地，我國也是一個常見病和多發病，秋收季節（打谷時）高發，故又名打谷黃。早期臨床癥狀為：寒熱、酸痛、一身Pa、眼紅、腿痛、淋巴大（有差異）。

其他癥狀：P238二、鉤端螺旋體的檢驗

鉤端S型別多，型與型之間無交叉免疫，應用暗視野顯微鏡凝集溶解試驗（MAT）和凝集吸收試驗（AAT）可將鉤端S屬進行血清群和血清型分類。

目前把問號狀鉤體至少分為25個血清群，273個血清型，我國使用的問號狀鉤體參考菌株有15群15型，其中大多數為我國流行的群或型，參見表16-2。

（一）檢驗程序(圖16-2)

直接鏡檢，分離培養，動物實驗

（二）標本采集

發病第一周內采血液1-2ml。

發病第二周開始采尿（30-50ml）和腦脊液（0.5-1.0ml）。

測Ab采雙份血清（6-10天，3-4周各采一次）

尸檢時采肝、腎、腦、肺等臟器。

（三）標本直接鏡檢

1、直接顯微鏡觀察

①標本→差速離心→沉淀→1滴+蓋破片→暗野觀察

②標本→鍍銀染色（S+AgNO3+甲醛）→普通顯微鏡觀察：S呈棕色

③標本→直接免疫熒光法→熒光顯微鏡觀察

2、核酸檢測DNA探針檢測標本中鉤體核酸可檢出含有200條鉤體的標本。加用PCR技術擴增鉤體特異DNA片段：23sDNA，可檢測出全血、血清、腦脊液、尿液可檢出10條鉤體；引物序列：P241；（四）分離培養

標本（血，尿）→柯氏（Korthof）培養基（28~30℃1周）→云霧狀混濁→暗野顯微鏡觀察→有鉤體存在→已知診斷的血清→鑒定其血清群和型。若無鉤體存在→繼續培養30天，仍無鉤體生長→則判為陰性。

目的意義：

（1）可確診病人。

（2）查明鉤體菌型的分布狀態，疫源地存在的特點和研制相應的疫苗，進而為防控鉤體病的流行提供可靠資料。

（3）充實國家標準菌株。

（五）抗體檢測

采取疑似病人發病初期和3-4周的雙份血清或腦脊液，56℃30min滅活。

1、顯微鏡凝集溶解試驗：測疑似鉤體病人雙份血清中的Ab效價，一般效價>1：300有診斷意義，或雙份血清效價增高4倍以上，則可確診本病。

原理：鉤體病人血清中同時存在凝集素和溶解素，故在凝集反應的同時往往伴有溶解現象。

用途：因本試驗具有高度型的特異性，故可用已知Ag測未知Ab，也可用已知Ab來鑒定未知Ag，從而協助鉤體病的診斷或分型。

方法：

（1）用PBS倍比稀釋患者血清（0.1ml/管）：

1：50、1：100、1：200……1：1600

（2）加入等量活鉤體Ag(0.1ml/管)：

輕搖混均，28~30℃2小時。

（3）于暗視顯微鏡下判鉤體的效價

“1+”25%的菌體凝集

“2+”50%以上菌體凝集或溶解

“3+”75%以上菌體凝集或溶解

“4+”近100%菌體凝集或溶解

“—”全部菌體正常，與鹽水對照相同。

結果：Ab效價>1：300或雙份血清Ab效價相差4倍以上為陽性。

2、間接凝集試驗

鉤體屬特異Ag→載體（乳膠顆粒、活性碳、干血細胞）→（致敏顆粒）+病人血清（Ab）→載體的間接凝集。

3、ELISA

用ELISA法和IgM-斑點-ELISA法可間接檢測鉤體病人血清中特異Ab，可用于鉤體病的快速診斷。被檢血清須經56℃30min滅活，當OD值為陰性對照血清OD值的2倍時為陽性。也可用肉眼直接觀察結果。

（六）動物試驗

幼齡豚鼠或金地鼠對鉤體敏感，稱為鉤體的“生物濾器”，故可用來檢查疫水或有雜菌污染的標本。但費用高，操作復雜。

防治措施：“三早一就”。防鼠滅鼠，保護水源，接種疫苗等。

伯氏S→硬蜱（媒介）→萊姆病（lymedisease）：游走性紅斑，圓形皮損，發熱，頭痛。

第三節疏S屬（Borrelia）：萊姆病檢驗螺旋稀疏且兩端稍尖；周漿鞭毛有2~100根以上，與運動有關；Giemsa染色為淡紫色，鍍銀染色為棕褐色；營養要求高，微需氧，5%~10%CO2促進生長，常用BSK培養基（長鏈飽和與不飽和脂肪酸，氨基酸和牛血清蛋白及滅活兔血清等），生長緩慢；奮森S→梭b協同→機體免疫力下降→奮森咽峽炎、牙齦炎、口頰壞疽、潰瘍性口腔炎。回歸熱流行性回歸熱(虱傳回歸熱)地方性回歸熱(蜱傳回歸熱)反復發熱緩解3-10次蒼白(梅毒)亞種→性傳播→梅毒(STD)

地方亞種→粘膜損傷→地方性梅毒

極細(雅司)亞種→接觸皮損→雅司病第四節密S屬（Treponema）品他S→皮損→品他病蒼白S：分三個亞種梅毒（syphilis）

只感染人類：性病梅毒，先天梅毒，輸血后梅毒。性病性梅毒按照病程分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期早期

Ⅰ期梅毒：傳染性極強，無痛性硬下疳。一年

Ⅱ期梅毒：梅毒疹，淋巴結腫大。十年

Ⅲ期梅毒：傳染性小但破壞性大，神經梅毒，心血管梅毒，梅毒瘤最常見。基本病變是慢性肉芽腫。梅毒螺旋體的檢驗

（一）標本的采集

下疳分泌物，皮疹滲出液，組織塊→組織懸液，血清或血漿（4℃或-20℃送檢）。

（二）檢驗程序：圖16-6

（三）檢驗方法

1、直接鏡檢

標本→玻片→暗視野顯微鏡→有幼小的密螺旋體，有診斷意義。也可用鍍銀法或直接熒光檢測法。

免疫熒光染色鍍銀染色2、分離培養

棉尾兔上皮細胞在1.5%O2、5%CO2、93.5%N233℃條件下經9-12天獲培養成功，并保持毒力，但條件高，僅適用實驗室研究。必要時可作兔睪丸接種保存菌種，但毒力消失。

3、PCR

多個靶基因，常規用PCR，巢氏PCR，熒光PCR。診斷血清學陰性的早期梅毒和神經梅毒，以及區分胎傳梅毒和母體梅毒有意義。

4、血清學試驗

由于潛伏期和晚期梅毒不出現皮膚粘膜病損，得不到直接檢出的標本，加之梅毒螺旋體不能在體外迅速分離和生長，所以血清學試驗非常重要。有兩個試驗類型的試驗：

(1)非密螺旋體Ag：用牛心肌的心脂質作為Ag測病人血清中的反應素（抗脂質Ab），陽性率高，有診斷價值，常用有2種試驗（VDRL、RPR）。

(2)密螺旋體Ag試驗：用密螺旋體Ag檢測病人血清中特異Ab，有5種試驗（FTA-ABS、FTA-ABSDS、MHA-TP、ELISA和IBT），由于梅毒螺旋體和雅司螺旋體Ag相似，故血清學試驗不能區別這些密螺旋體所致疾病。此外自身免疫性疾病有時也可以出現假陽性。

上述血清學試驗的選擇原則：

WHO初篩試驗：VDRL、RPR，

確認試驗：FTA-ABS、FTA-ABS-DS、

MHA-TP、ELISA和IBT。

對疑為先天性梅毒者：

可用RPR半定量試驗每月檢測一次，連續6個月，檢測反應素效價。或用VDRL定量試驗檢測Ab效價的變化。如Ab效價增高或穩定在高水平，表明是先天梅毒，如Ab是來自母體IgG，通常2-3月內消失。

瓦氏反應,Wassermannreaction利用抗原抗體復合物同補體結合，把含有已知濃度的補體反應液中的補體消耗掉使濃度減低的現象，以檢出抗原或抗體的試驗，為高敏度檢出方法之一，特別是根據抗原物質的特性，抗原抗體反應不能用沉淀反應或凝集反應觀察時也可以利用此法；綿羊紅細胞+抗體溶血反應，檢測還有多少補體存在；思考題：

1、何謂顯微鏡凝集溶解試驗（概念、原理、用途、方法）？

2、某地秋收季節疑有鉤體病流行，你應如何確診病人？并采取哪些防治措施？

3、簡述梅毒病的微生物學檢驗。

支原體的檢驗

一、概念

支原體（Mycoplasma）是一類缺乏細胞壁、呈高度多形性，能通過除菌濾器，在無生命的培養基中能生長繁殖的最小原核細胞型微生物。（能形成有分支的長絲）

缺乏CW，呈多形性（球狀、絲狀、酒瓶狀）d=0.2μm±，能通過細菌濾器，能在無生命的人工培養基中繁殖（二分裂法，分枝出芽……）。菌落為“油煎蛋”狀。含DNA和RNA兩種遺傳物質。

其大小似病毒，生活方式似細菌，它是一類微小的原核M。

生物學特征

支原體與L型細菌的區別1、在遺傳上與細菌無關2、CM含高濃度膽固醇3、大多需高滲培養基支原體L型細菌1、與原菌相關，常可以恢復2、CM不含膽固醇3、在一般培養基穩定4、生長慢，菌落小，d0.1-0.3mm4、菌落稍大，d0.5-1.0mm5、液體培養混濁度低5、液體培養有一定混濁度，可粘附于管壁或管底二、主要致病支原體肺炎支原體溶脲脲原體人型支原體生殖器支原體穿通支原體1、肺炎支原體——肺炎，支氣管炎，肺外并發癥（腦膜炎、心肌炎、心包炎、腎炎等）。兒童青少年居多，秋冬多發。嬰兒有間質性肺炎時應考慮。

2、溶脲脲原體——非淋菌性尿道炎（NGU）、不育癥、慢性前列腺炎、流產、不孕癥、新生兒低體重等癥。

3、生殖器支原體——可能與持續性、復發性非淋菌性尿道炎、V急性盆腔炎、陰道炎、慢性前列腺炎（泌尿生殖道感染）。

4、穿通支原體——多見于艾滋病（是加速AIDS進程的一個協同因子）

5、人型支原體——非淋菌性尿道炎、慢性前列腺炎、宮頸炎與盆腔炎。（泌尿生殖道感染）。

三、M檢驗

采取合格標本：病人痰、咽拭子、鼻咽洗液、支氣管分泌物、胸水；（肺炎支原體）

尿液（晨尿中段）、泌尿道分泌物、前列腺分泌物、陰道分泌物、宮頸分泌物等（脲原體）

檢驗程序見圖17-3P256

1、直接鏡檢：EM下可發現d200nm大小有三層細胞膜的Giemsa染色呈淡紫色顆粒。沒有細胞壁。2、分離培養（營養要求相似細菌）：Hayflick培養基：牛心消化液+20%小牛血清+新鮮酵母浸膏+抑菌物+醋酸鉈+CO2，pH7.6-8.0，37℃1-4周方長出油煎蛋樣菌落（LP或HP），陽性率僅64%。

肺炎支原體“油煎蛋”菌落(10×)3、鑒定本培養和檢測根據肺炎支原體在宿主細胞內代謝累積分解葡萄糖，通過化學顯色的方法在較短的時間內快速檢測出肺炎支原體。支原體之間的鑒別（圖17-1）。

支原體葡萄糖精氨酸尿素吸附細胞致病性肺炎支原體+--紅細胞肺炎、支氣管炎泌尿生殖道感染泌尿生殖道感染人型支原體-+--生殖器支原體+---穿通支原體++-紅細胞、CD4+T細胞、巨噬細胞條件感染、多見于艾滋病溶脲脲原體--+-泌尿生殖道感染4、PCR：查肺炎支原體的DNA，快速敏感、特異、防感染。（敏感。避免污染）

5、抗體檢測：ELISA（可靠，特異性和敏感性高）；冷凝集試驗（4℃凝集，37攝氏度散開）；補體結合試驗；間接血凝試驗（肺支和生殖道支有交叉反應）。

冷凝集試驗

肺炎支原體引起的肺炎患者血清中常產生冷凝集素（非特異性自身Ab，IgM），它與2%O型人或自身的RBC，在4℃過夜，出現RBC凝集現象，效價>1：64（常規法），50%的病人發病1-2周后呈陽性反應，是一種非特性血清學反應。

呼吸道合胞V、腮腺炎V、流感V等感染后也可出現血中冷凝集素效價升高。

解脲脲原體

（Ureaplasmaurealyticum，Uu

）也稱“溶脲脲原體”。是人類泌尿生殖道最常見的寄生菌。與性接觸的多少和有無有關。液體培養基陽性可初步報告。檢驗程序（圖17-5）培養結果相應固體培養基后，培養基中硫酸鎂與氨反應，氫氧化鎂黑色沉淀—黑色菌落陽性陰性衣原體的檢驗（Chlamydia）

一、概念

衣原體（Chlamydia）是一類專性細胞內寄生，有獨特發育周期，能通過細菌濾器的原核細胞型微生物。

似細菌：

有兩種遺傳物質（DNA+RNA），有核糖體和復雜的酶系統，有CW，二分裂法繁殖，對抗生素敏感。

似病毒：

體積微小，能通過細菌濾器，活C內寄生。

二、致病情況

沙眼CH→沙眼，是致盲的主要原因。尚可引起包涵體結膜炎，數周或數月可痊愈。

淋巴肉芽腫CH→淋巴肉芽腫。

上述兩種CH是致嚴重的性傳播疾病之病原，引起泌尿生殖道感染。

鸚鵡熱CH→肺炎

肺炎CH→肺炎。

三、微生物學檢驗

疑為CH感染的患者，要確定診斷必須對患者進行CH的檢驗。操作的實驗室必須注意安全，以防環境污染和實驗室感染，尤其是操作鸚鵡熱的實驗室，應嚴格按強毒株實驗室管理條例修建和操作。

（一）直接鏡檢：

1、找包涵體：疑為沙眼CH感染，應取眼穹窿及眼結合膜或宮頸（上皮或分泌物）刮片，經干燥固定后姬姆薩染色，查包涵體，只要查見有包涵體(密度較低，疏松，呈空泡型，內含糖原，碘液染色呈陽性)則有診斷價值，此法簡便、快速，但敏感性差，陽性率僅為30-40%。

2、IF檢查Ag：用直接熒光Ab法檢測上皮細胞內典型CH-Ag

（二）酶免疫檢測：檢測標本中可溶性Ag

（三）膠體金法檢測衣原體（常用）

（四）核酸檢測：

DNA探針雜交：敏感，特異，快速，僅1h。

PCR技術：敏感、特異、快速、僅4-5h

（五）分離培養與鑒定

采取適當標本→處理→分離培養：

細胞培養:（最可靠的方法）

沙眼CH、淋巴肉芽腫CH→McCoy、Hela-229。

尚可用HEP-2和H-292分離培養肺炎CH。

雞胚卵黃囊：沙眼CH（湯飛凡.1956）

小白鼠：鸚鵡熱CH→腹腔、滴鼻。

鑒定試驗：

Giemsa染色→暗野鏡檢：沙眼CH成熟包涵體(主要為原體，嗜酸性)呈紫紅色，而其幼稚型包涵體(主要含始體，嗜堿性)呈暗藍色，且均位于上皮細胞胞質內。（圖18-2）

Lugol碘液染色→HP→在黃色背景上見到紅褐色胞質內包涵體，可作為鑒別沙眼CH與其他CH(不含糖原)的參考。

IF-Ab染色法：為特異血清學鑒定。可鑒定CH的型別；

抗外膜蛋白(MOMP)單克隆抗體鑒別生殖道標本培養物的沙眼CH。

抗LPS單抗用于鑒別呼吸道標本培養物的鸚鵡熱CH和肺炎CH。

（五）抗體檢測：

可用補體結合試驗（CF），微量免疫熒光測驗(MIF），酶免疫法等測Ab，但在臨床診斷中價值不大。不易獲得衣原體感染者急性期、恢復期雙份血清，另性傳播疾病的高危人群原有Ab水平較高，因限制了血清學診斷CH感染的價值。

立克次體的檢驗

一、概念

（Rickettsia）天然寄生于節肢動物體內（虱、蚤、蜱、螨），并以節肢動物為傳播媒介進行傳播的一類G-小桿狀或球桿狀的專性寄生于宿主細胞內繁殖的原核細胞微生物。

為了紀念因研究斑疹傷寒不幸感染而獻身的US青年醫生Ricketts，為紀念他的貢獻，便以他的名字而命名此類微生物。

立克次體的共同特點是：

1.大小介于細菌與病毒之間；

2.有細胞壁，但形態多樣；

3.絕大多數為專性細胞內寄生；

4.含有DNA和RNA兩種核酸，以二分裂方式繁殖；

5.大多是人畜共患病原體，引起人類發熱出疹性疾病；

6.以節肢動物為傳播媒介或為儲存宿主；

7.對四環素、氯霉素等抗菌藥物敏感。

二、致病情況

1、普氏R→人虱→流行性斑疹傷寒，在世界各地流行。

2、莫氏R→鼠蚤→地方性斑疹傷寒，在世界各地流行。

3、恙蟲病R→恙螨→恙蟲熱病，在臺灣、福建、兩廣、浙江、江蘇、東南亞、日本、有報導。

4、貝納柯克斯體(Q熱R)→蜱→Q熱，在世界各地流行

5、埃立克體→蜱→埃立克體病

6、漢賽巴通體→接觸貓→貓抓病、桿菌性血管瘤-桿菌性紫殿（HIV，tumor，organtransplantation）……共20余種

三、M檢驗

R的實驗室診斷是確診R感染和進行流行病學調查的重要措施。R的傳染性強，必須注意實驗室的安全與防護，實驗室工作者應事先接種疫苗，必要時應進行藥物預防。

（一）采取合格標本（血液，活檢或尸檢標本）→適當處理

（二）標本直接檢測：

1.免疫熒光檢測:臟器印片、切片，檢測Ag；

2.核酸檢測:PCR敏感性高。

（三）分離培養：GP腹腔接種：發熱、陰囊腫脹；雞胚卵黃囊接種:收獲卵黃囊；細胞培養：HeLa、Vero…。

（四）血清學診斷（雙份血清，測Ab效價，或用已知Ab，鑒定未知Ag）：

IFA（間接免疫熒光）、ELISA、CF（補結）、MA（微量凝集）、IHA（間接血凝）、LA（乳膠凝集）和外斐試驗（Weil-Felixreaction）。

外斐試驗：

因為絕大部分R（Q熱等除外）與某些變形桿菌（OX19、OX2、OXk）有共同的耐熱性多糖類屬Ag，所以利用變形桿菌這些菌株代替R作為Ag，檢測疑為R患者血清中相應的Ab的一種非特異性交叉凝集反應。用以協助R病的診斷，一般效價>1：160為陽性，若在病程中有4倍增長更有診斷價值。

特點：Ag易得，方法簡便；但缺乏敏感性與特異性。有試管法和玻片法兩種。

思考題：

1、簡述支原體、衣原體、立克次體的概念和基本檢驗技術。

2、為什么衣原體、立克次體和支原體是介于細菌和V之間的M？它們可分別引起哪些疾病？

3、試比較L型菌和支原體有何異同？

4、名詞解釋：

外斐試驗、冷凝集試驗

真菌的檢驗

一、概述

真菌（Fungus）為不分根、莖、葉和不含葉綠素的一大類真核細胞微生物。

真菌分布廣，種類多。目前公認的有8000個屬，100萬個種。

大多真菌對人類是有益的，其中有些真菌為人類創造了巨大的物質財富：如食用菌（香菇、木耳、銀耳）、藥用真菌（神曲、茯苓、靈芝、麥角等）、工業真菌（制醬、釀醋、釀酒、制革、生產抗生素等）、農業真菌（9.20生長制激素、醣化飼料、微生物飼料添加劑等）。

但有少數真菌（400種）可引起人致病，叫病原性真菌。

按其侵犯部位不同，病原性真菌可分為淺部感染真菌（表面真菌、皮膚癬真菌和皮下組織感染真菌）和深部感染真菌（假絲酵母菌、隱球菌、曲霉、毛菌目真菌、組織胞漿菌和卡氏肺孢菌）。

近年來由于抗生素、免疫抑制劑和放射療法等在臨床廣泛應用，招致菌群失調和機體免疫因素降低，引起真菌二重感染與日俱增，應引起醫務工作者的高度重視。另有大量文獻報告黃曲霉素可導致肝臟變性、肝細胞壞死、肝硬化，也可誘發家兔、GP等動物的實驗性肝癌，可能與人的肝癌相關。

鐮刀菌——胃癌，胰腺癌，垂體和腦腫瘤。

青霉菌——甲狀腺瘤，肝臟腫瘤。

展青霉素——肉瘤。臨床上疑為真菌病的患者要明確診斷，必須進行真菌的檢驗。

一、正確采集與處理標本

根據真菌感染的部位采集不同的標本，要求保質、保量、保鮮和無污染。

原則：早期采集；無菌采集；根據目的菌的特征性用不同的方法采集；采集適量標本；安全采集。1、痰：采晨痰，采前清潔口腔、深咳取痰5-10

ml于滅菌容器中，2h內送至實驗室，若>2h則需加入抗生素（“氯”0.05mg/ml或“青”20u/ml，“鏈”40u/ml）于4℃中冷藏，注意無菌操作，有條件者應取支氣管沖洗液。若痰液粘稠，則用N-乙酰半胱氨酸或二硫丙醇稀釋，再取0.5ml接種于培養基。

2、腦脊液、尿液、膿汁：應在無菌條件下穿刺取材，2000rpm15min離心，取沉淀物涂片鏡檢，并取0.1ml沉淀物接種適當培養基。

3、血液：無菌條件下取抗凝血，置于適當培養基中30℃有O2培養，每周檢查一次，并取培養物于肉湯中培養，連續觀察6周。

4、皮屑：清潔皮膚，用75%酒精消毒局部皮膚，用無菌水擦去酒精，再取標本。

5、毛發：取病發15根、消毒。3-5根直接鏡檢

，5-10根接種于SDA斜面。

6、甲屑：鉆取交界處組織培養。

7、活檢標本：取2份，一份鏡檢培養，另一份送病理檢驗。二、直接鏡檢

標本→制片（標本+10%KOH，加蓋玻片，并微加熱）→鏡檢（LPorHP）：菌絲、孢子。

該法可直接快速準確地確定有無真菌感染，但陰性結果也不能完全除外真菌感染。

三、分離培養

可確定真菌的菌種，彌補直接鏡檢之不足。

培養基：常用沙氏培養基

培養條件：

淺部真菌常用22～28℃（平均25℃），需O2、潮濕、PH5.5，生長緩慢、1-2W才長出菌落。

深部真菌條件似普通細菌，35℃～37℃，3-4天可見菌落。

培養方法：

1、大培養：標本→沙氏斜面→菌落形態：酵母型(如酵母菌、新生隱球菌)；類酵母型(如白色假絲酵母)；絲狀型(皮膚絲狀菌…)。

2、小培養

標本→玻片培養基+蓋玻片→直接鏡檢菌絲、孢子

注意真菌的臨床標本檢驗主要依靠直接鏡檢及分離培養技術，只要在臨床標本中連續3次檢出同種形態的菌絲和孢子及某種特殊結構，則可認為所查真菌為致病性真菌。

四、動物接種

是研究真菌的重要方法之一。

動物實驗目的：

1、分離病原性真菌。

2、確定菌種的致病性；

3、觀察真菌在組織內的形態及組織學變化；

4、可恢復和加強菌種的毒力；

5、用于真菌的基礎研究。

如新生隱球菌—小白鼠敏感，腹腔或顱內注射，小白鼠很快發病，并可于腹腔或顱組織中找到本菌。

又如白色假絲酵母—家兔感染最敏感和強烈，用1ml1%NS菌懸液靜脈注射，4-5天內可死亡，腎臟可見小膿腫，鏡檢可見2.5-4.0μm的芽生細胞。

再如皮膚絲狀菌懸液外涂于GP或家兔的皮膚，可引起皮膚感染。

五、病理組織檢驗

是診斷真菌病，特別是深部真菌及鑒定雙相真菌（在動物體內和37℃含動物蛋白的培基內呈酵母型，在22℃沙氏培養基上出現絲狀型菌落）的重要方法。真菌引起的病理變化為非特異性，但