犐犆犛６５．１２０

犅４６

中華人民共和國國家標準

犌犅／犜１７４８０—２００８

代替ＧＢ／Ｔ１７４８０—１９９８

飼料中黃曲霉毒素犅１的測定

酶聯免疫吸附法

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２００８１１２１發布２００９０２０１實施

中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局

發布

中國國家標準化管理委員會

書

犌犅／犜１７４８０—２００８

前言

本標準代替ＧＢ／Ｔ１７４８０—１９９８《飼料中黃曲霉毒素Ｂ１的測定酶聯免疫吸附法》。

本標準與ＧＢ／Ｔ１７４８０—１９９８相比主要修改如下：

———范圍中增加“本標準檢出限為０．１μｇ／ｋｇ”；

———規范性引用文件中，用“ＧＢ／Ｔ２０１９５動物飼料試樣的制備”代替“ＧＢ／Ｔ８３８１—１９８７飼料中

黃曲霉毒素Ｂ１的測定方法”；

———試劑盒組成中，增加“注意：不同測試盒制造商間的產品組成和操作會有細微的差別，應嚴格按

說明書要求規范操作”；

———儀器、設備條款中，刪除冰箱條款；增加電動振蕩器、具塞磨三角瓶；

———將“取樣”條款改為“試樣制備”，同時將“按ＧＢ／Ｔ８３８１—１９８７中５．１要求采集、處理樣品，制

成分析用的試樣”改為“按ＧＢ／Ｔ２０１９５要求制備試樣”；

———限量測定條款中，將測定操作的分級條款合并為一個條款，并刪除表格，均用文字敘述測定

過程；

———定量測定條款中增加“結果保留２位有效數字”；

———原“其他”條款刪除，將“凡接觸ＡＦＢ１的容器，需浸入１％次氯酸鈉（ＮａＣｌＯ２）溶液，１２ｈ后清洗

備用。為分析人員安全，操作時要帶上醫用乳膠手套”改為“警告”條款；

———增加了資料性附錄Ａ；

———將樣品溶液稀釋表及稀釋倍數與結果計算表作為資料性附錄Ｂ。

本標準的附錄Ａ和附錄Ｂ均為資料性附錄。

本標準由全國飼料工業標準化技術委員會提出并歸口。

本標準起草單位：江蘇省微生物研究所有限責任公司。

本標準主要起草人：李利東、宓曉黎、袁建興、杜姝蓮。

本標準于１９９８年首次發布，本次為第一次修訂。

Ⅰ

書

犌犅／犜１７４８０—２００８

飼料中黃曲霉毒素犅１的測定

酶聯免疫吸附法

１范圍

本標準規定了飼料中黃曲霉毒素Ｂ１的酶聯免疫吸附測定（ＥＬＩＳＡ）方法。

本標準適用于各種飼料原料、配合飼料及濃縮飼料中黃曲霉毒素Ｂ１的測定。

本標準檢出限為０．１μｇ／ｋｇ。

２規范性引用文件

下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有

的修改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據本標準達成協議的各方研究

是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。

ＧＢ／Ｔ２０１９５動物飼料試樣的制備（ＧＢ／Ｔ２０１９５—２００６，ＩＳＯ６４９８：１９９８，ＩＤＴ）

３原理

試樣中黃曲霉毒素Ｂ１、酶標黃曲霉毒素Ｂ１抗原與包被于微量反應板中的黃曲霉毒素Ｂ１特異性抗

體進行免疫競爭性反應，加入酶底物后顯色，試樣中黃曲霉毒素Ｂ１的含量與顏色成反比。用目測法或

儀器法通過與黃曲霉毒素Ｂ１標準溶液比較判斷或計算試樣中黃曲霉毒素Ｂ１的含量。

４試劑和材料

除非另有說明，在分析中僅使用確認為分析純的試劑和蒸餾水或去離子水或相當純度的水。

４．１黃曲霉毒素Ｂ１酶聯免疫測試盒中的試劑

注意：不同測試盒制造商間的產品組成和操作會有細微的差別，應嚴格按說明書要求規范操作。

４．１．１包被抗黃曲霉毒素Ｂ１抗體的聚苯乙烯微量反應板。

４．１．２樣品稀釋液：甲醇蒸餾水（７＋９３）。

４．１．３黃曲霉毒素Ｂ１標準溶液：１．００μｇ／Ｌ、５０．００μｇ／Ｌ。

警告———凡接觸黃曲霉毒素犅１的容器，需浸入１％次氯酸鈉（犖犪犆犾犗２）溶液，１２犺后清洗備用。為

分析人員安全，操作時要帶上醫用乳膠手套。

４．１．４酶標黃曲霉毒素Ｂ１抗原：黃曲霉毒素Ｂ１辣根過氧化物酶交聯物。

４．１．５０．０１ｍｏｌ／ＬｐＨ７．５磷酸鹽緩沖液的配制：稱取３．０１ｇ磷酸氫二鈉（Ｎａ２ＨＰＯ４·１２Ｈ２Ｏ）、

０．２５ｇ磷酸二氫鈉（ＮａＨ２ＰＯ４·２Ｈ２Ｏ）、８．７６ｇ氯化鈉（ＮａＣｌ），加水溶解至１Ｌ。

４．１．６酶標黃曲霉毒素Ｂ１抗原稀釋液：稱取０．１ｇ牛血清白蛋白（ＢＳＡ）溶于１００ｍＬｐＨ７．５磷酸鹽緩

沖液（４．１．５）。

４．１．７０．１ｍｏｌ／ＬｐＨ７．５磷酸鹽緩沖液：稱取３０．１ｇ磷酸氫二鈉（Ｎａ２ＨＰＯ４·１２Ｈ２Ｏ）、２．５ｇ磷酸二

氫鈉（ＮａＨ２ＰＯ４·２Ｈ２Ｏ）、８７．６ｇ氯化鈉（ＮａＣｌ），加水溶解至１Ｌ。

４．１．８洗滌母液：吸取０．５ｍＬ吐溫２０于１０００ｍＬ０．１ｍｏｌ／ＬｐＨ７．５