動物細胞融合與動物細胞融合

目標：1、舉例說出動物細胞融合的原理和應用2、單克隆抗體的制備和應用細胞A細胞B雜種細胞滅活的病毒物理法化學法仙臺病毒

一、動物細胞融合

2、過程：1、概念：用

誘導動物細胞融合過程細胞核病毒顆粒細胞核思考討論：1、滅活的病毒誘導細胞融合的原理是：2、為什么細胞融合過程中使用的病毒需要滅活？滅活的病毒用途誘導方法融合前處理方法原理動物細胞融合植物體細胞雜交比較項目比較項目植物、動物細胞融合的比較主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株用途物理、化學方法（同左）滅活的病毒物理法（離心、振蕩、電刺激）化學法（聚乙二醇）誘導方法使細胞分散后誘導細胞融合去除細胞壁后誘導原生質體融合融合前的處理方法細胞膜的流動性細胞膜的流動性、植物細胞全能性原理動物細胞融合植物體細胞雜交比較項目比較項目植物、動物細胞融合的比較單克隆抗體二、單克隆抗體1、什么是抗體？其本質是什么？

2、傳統的抗體生產方法及缺陷是什么？抗體是從何來的？B淋巴細胞產生抗體。

抗體是機體受抗原刺激后產生的、并能與該抗原發生特異性結合的具有免疫功能的球蛋白。3、B淋巴細胞有什么特點？

（１）．B淋巴細胞受抗原刺激后，可以產生抗體。（２）．動物體內的B淋巴細胞可以產生百萬種以上的抗體，每種抗體對特定的抗原具有特異性免疫作用。（３）．每一個淋巴細胞只能產生一種抗體。3、B淋巴細胞有什么特點？單克隆抗體及特點：單克隆抗體及特點：

由單個B淋巴細胞經過無性繁殖（克隆），形成基因型相同的細胞群，這一細胞群所產生的化學性質單一、特異性強的抗體稱為單克隆抗體。

特異性強、靈敏度高

遺憾的是……單克隆抗體制備過程？1、單克隆抗體：2、特點：單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程

注射抗原B淋巴細胞骨髓瘤細胞細胞融合、篩選雜交瘤細胞細胞培養篩選，繼續培養足夠數量的、能產生特定抗體的細胞群體外培養注射到小鼠腹腔單克隆抗體視頻\單克隆抗體的制備.flv思考：1、本過程利用了哪些技術？細胞融合技術和動物細胞培養技術2、為什么選用小鼠骨髓瘤細胞與B細胞融合？這樣融合成的雜交瘤細胞，繼承了雙親細胞的遺傳物質，不僅具有B細胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領，因而可以獲得大量單克隆抗體3、整個制備過程為何要經過兩次篩選?第一次篩選得到雜交瘤細胞（多種），第二次需先在多孔培養板上，在每孔只有一個雜交瘤細胞的情況下開始培養，然后再篩選出能產生特異性抗體的細胞群。由于該細胞群是單個雜交瘤細胞克隆得來的，所以產生的抗體必然是化學性質單一的，特異性強的單克隆抗體。這里的單克隆的確有單個細胞克隆的含義，只不過克隆的不是B淋巴細胞，而是雜交瘤細胞。

BBBB瘤瘤瘤瘤4、細胞融合后培養液中有幾種細胞單克隆抗體的應用小結動物細胞融合的原理和誘導方法單克隆抗體制備過程三個“一”一個誘導細胞融合的新方法－－一個新細胞－－一個優勢－－滅活的病毒雜交瘤細胞單克隆抗體：特異性強、靈敏度高的優勢1.動物細胞工程技術的基礎是：（）

A．動物細胞融合

B．胚胎移植

C．動物細胞培養

D．核移植教學目標鞏固Ｃ２．在動物細胞融合和植物體細胞雜交的比較中，正確的是（）A．結果是相同的

B．雜種細胞的形成過程基本相同C．操作過程中酶的作用相同D．誘導融合的手段相同教學目標鞏固Ｂ３.單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細胞和B淋巴細胞誘導融合后，要用特定培養基篩選出雜交瘤細胞，在這種培養基上不能存活增殖的細胞是（）①淋巴細胞②小鼠骨髓瘤細胞③B淋巴細胞自身融合細胞④小鼠骨髓瘤細胞自身融合細胞⑤雜交瘤細胞A．②④B．①③⑤C．①②③④D．②③C教學目標鞏固已知細胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷，人淋巴細胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤細胞盡管沒有S途徑，但能不斷分裂增殖，將這兩種細胞在試管中混合，加聚乙二醇促融，獲得雜交瘤細胞，請回答：

（1）試管中除融合的雜交瘤細胞外，還有_____________種融合細胞。

（2）設計一方法（不考慮機械方法），從培養液中分離出雜交瘤細胞，并說明原理。

方法：原理：解析：

（1）試管中有人的淋巴細胞和小鼠骨髓瘤細胞，在促溶劑的作用下，可能出現以下3種細胞的融合情況，人的淋巴細胞和淋巴細胞融合，小鼠的骨髓瘤細胞和骨髓瘤細胞融合，人的淋巴細胞和小鼠的骨髓瘤細胞融合，實驗需要的是第3種細胞，即雜交瘤細胞；

（2）要將雜交瘤細胞分離出來，可以在培養液中加入氨基嘌呤，收集增殖的細胞；加入氨基嘌呤后，使D合成途徑阻斷，僅有D合成途徑的骨髓瘤細胞及其彼此融合的細胞就不能增殖，但人淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合后的雜種細胞中可以利用淋巴細胞中的S途徑合成DNA而增殖。變式訓練生產單克隆抗體時，要在培養液中加入某種