（第1課時）第2節微生物的培養技術和應用一、微生物的基本培養技術特點：個體微小,結構簡單；繁殖快，適應性強；易變異微生物病毒細菌放線菌真菌原生動物

原核生物界

原生生物界真菌界病毒界一、微生物是一切肉眼看不見或看不清楚的微小生物的總稱．圖1-1常見的三種細菌典型形態A.球菌B.桿菌C.弧菌細菌自養菌:異養菌:腐生菌、寄生菌腐生菌以動植物尸體、腐敗食物等作為營養物；寄生菌寄生于活體內，從宿主的有機物獲得營養。所有的病原菌都是異養菌，大部分屬寄生菌。光合自養型:光合細菌化能自養型:硝化細菌,鐵細菌,硫細菌細菌的同化作用類型細菌的異化作用類型需氧型：醋酸桿菌厭氧型：乳酸菌菌落：單個或少數細菌在固體培養基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定形態結構的子細胞群體.細菌的菌落特征因種而異菌落是鑒定菌種的重要依據

思考：我們曾經學過根據菌落來辨別細菌的例子！S型R型1.何為培養基？3.不同的培養基有不同的配方，但是其基本成分都相同，都包括哪些營養構成？有何作用？請舉例說明。閱讀教材P9~10相關內容，回答以下問題：2.按照不同的劃分標準，培養基有哪些類型及用途？（1）按物理性質分：固體培養基用于菌種分離、鑒定、計數液體培養基用于工業生產、連續培養半固體培養基用于菌種保存（2）按化學組成分：天然培養基用于工業生產合成培養基用于菌種分離、鑒定（3）按目的用途分：

選擇培養基添加或缺少某種化學成分用于菌種分離

鑒別培養基添加某指示劑或化學藥劑用于菌種鑒別2、培養基的類型及用途二、培養基及配制人們按照微生物對營養物質的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養基質。1、概念選擇培養基應用加入青霉素分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽分離金黃色葡萄球菌不加氮源分離固氮菌不加含碳有機物的無碳培養基分離自養型微生物只加尿素為唯一氮源的培養基分離尿素分解菌只加纖維素為唯一碳源的培養基分離纖維素分解菌大腸桿菌在伊紅美藍培養基（EMB培養基）：黑色光亮金屬光澤鑒別培養四種纖維素分解菌在剛果紅培養基上形成的透明圈加了酚紅指示劑的培養基，指示劑變紅培養的基本配方（P83附錄3

）不管哪種培養基，一般都含有_____、_____、____和____等營養物質,另外還需要滿足微生物生長對

、

(例如:生長因子)以及

的要求。碳源氮源水無機鹽pH特殊營養物質氧氣分析營養構成？1000ml牛肉膏蛋白胨培養基的營養構成凝固劑基本成分：3.培養基的營養成分碳源、氮源、水、無機鹽特殊成分：生長因子營養物質定義作用主要來源碳源凡能提供所需碳元素的物質構成生物體的細胞物質和一些代謝產物，有些是異養生物的能源物質無機碳源：CO2、NaHCO3有機碳源：糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等自養微生物異養微生物營養物質

定義

作用主要來源氮源生長因子凡能提供所需氮元素的物質合成蛋白質、核酸以及含氮的代謝產物無機氮源：N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽有機氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、酵母膏等生長必不可少的微量有機物酶和核酸的組成成分維生素、氨基酸、堿基等培養乳酸桿菌時在培養基中添加維生素4.配制原則⑴目的要明確：⑵營養要協調：⑶pH要適宜：有機碳源異養型：根據微生物的種類、培養目的選擇原料自養型：不加碳源細菌偏中性或微堿，真菌偏酸（CO2碳源）生產科研培養基中各營養物質的濃度和比例要適宜。（第2課時）1.獲得純凈培養物的關鍵？其保證是？2.什么是無菌技術？無菌技術包括哪些方面？其目的？3.什么是消毒和滅菌？兩者有何區別？4.常用的消毒與滅菌的方法有哪些？有何要求？5.說出干熱滅菌法和高壓蒸汽滅菌法的操作步驟？三、無菌技術閱讀教材P10~11相關內容，回答以下問題：2.無菌技術的概念

無菌操作泛指在培養微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。1.獲得純凈培養物的關鍵是，防止外來雜菌入侵的保證是。防止外來雜菌的入侵無菌技術無菌技術包括：實驗操作空間消毒操作者的手、衣著消毒實驗用具、器皿、培養基滅菌實驗操作過程，酒精燈火焰附近進行無菌技術目的：防止實驗室的培養物被其它外來微生物污染；避免操作者被微生物感染。超凈工作臺實驗操作時，避免已經滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸。（1）消毒定義：指使用較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體表面或內部一部分對人體有害的微生物。（不包括芽孢和孢子）3.消毒與滅菌的概念及兩者的區別

（2）滅菌的定義：

使用強烈的理化因素殺死物體內外所有的微生物，包括芽孢和孢子，而達到完全無菌之過程。

芽孢有些細菌在一定的條件下，細胞里面形成一個橢圓形的休眠體，叫做芽孢。例如，有的細菌的芽孢，煮沸3小時以后才死亡。孢子細菌、原生動物、真菌和植物等產生的一種有繁殖作用的生殖細胞。能直接發育成新個體。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環境有很強的抵抗力。芽孢又小又輕，可以隨風飄散。當環境適宜（如溫度、水分適宜）的時候，芽孢又可以萌發，形成一個細菌.1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：62-65℃下煮30min

或80-90℃處理30s-1min3、化學藥劑消毒法:用75%酒精進行皮

膚消毒;氯氣消毒水源4、紫外線消毒……(1)消毒的方法：4.常用的消毒與滅菌的方法1、灼燒滅菌在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒(2)滅菌的方法：2、干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。滅菌時保證熱空氣流通。常用方法：高壓蒸汽滅菌3、濕熱滅菌：利用沸水、流通蒸汽、高壓蒸汽滅菌。

最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌，100kPa、121℃下維持15-30min.它可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體，同時可以基本保持培養基的營養成分不被破壞。

有些玻璃器皿也可采用高溫干熱滅菌。為了防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用硅膠帽，它們只可讓空氣通過，而空氣中的其他微生物不能通過。做好消毒或滅菌后，避免已滅菌處理的材料用具與周圍物品接觸。為避免周圍環境中微生物的污染，許多操作都應在

并在

附近進行。超凈工作臺酒精燈火焰判斷以下需要哪種消毒或滅菌方法1.日常生活常用

。

2.對不耐高溫的液體，用

。3.接種室、接種箱、超凈工作臺噴灑石炭酸或煤酚皂以增強

效果。4.操作者雙手用酒精

。5.飲用水源用氯氣等化學藥物

。6.表面滅菌和空氣滅菌用

。7.接種環、接種針、試管口用

。8.玻璃器皿、金屬用具用

。9.培養基、無菌水用

。10.培養皿能否用高壓蒸汽滅菌？11.實驗結束后，使用后的培養基應進行

處理，才能扔掉。思考煮沸消毒法巴氏消毒法消毒消毒化學藥劑消毒法紫外線消毒灼燒滅菌干熱滅菌高壓蒸汽滅菌不能，因為培養皿要保持干燥，應該用干熱滅菌。滅菌（第3課時）四、微生物的純培養

培養物：

將接種于培養基內，在合適條件下形成的含特定種類微生物的群體稱為培養物。

純培養物及純培養：由單一個體繁殖所得的微生物群體稱為純培養物，獲得純培養物的過程稱為純培養。

純培養步驟：配制培養基、滅菌、接種、分離、培養閱讀教材P11相關內容，回答以下問題：探究實踐：酵母菌的純培養

閱讀教材P12相關內容，回答以下問題：一、實驗原理1.菌落：2.方法：分散的微生物在適宜的固體培養基表面或內部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態結構的子細胞群體，即菌落。平板劃線法和稀釋涂布平板法采用平板劃線法和稀釋涂布平板法能將單個微生物分散在固體培養基上，之后經培養得到的單菌落一般是由單個微生物繁殖形成的純培養物。3.培養基：馬鈴薯瓊脂培養基二、目的要求三、材料用具四、方法步驟1.制備培養基

配制培養基滅菌加瓊脂的目的是什么?作為凝固劑調pHpH7.6（用0.1%的氫氧化鈉或鹽酸溶液把培養基調節到所要求的值）分裝分裝過程中注意不要使培養基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分裝三角瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。在滅菌前,用牛皮紙、舊報紙包緊盛有培養基的錐形瓶的目的是什么？在滅菌時能避免水蒸汽凝結時浸濕棉塞，在取出培養基錐形瓶時也起到隔絕空氣中雜菌污染的作用。倒平板

待培養基冷卻到50℃左右時，在酒精燈火焰附近倒平板。無菌檢查將滅菌的培養基放入37℃的溫室中培養24—48小時，以檢查滅菌是否徹底。如果有菌落生長，說明培養基

。已被污染1.培養基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養基的溫度？問題討論

答：用手觸摸盛有培養基的錐形瓶，感覺剛剛不燙手時。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？

答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養基。3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養微生物嗎？為什么？

答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固后的培養基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養基表面的水分更好地揮發，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養基，造成污染。

答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養基上滋生，因此最好不要用這個平板培養微生物。31原理：2.接種和分離酵母菌通過接種環在固體培養基表面連續劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養基的表面。經數次劃線后培養，可以分離得到單菌落。接種方法：平板劃線法劃3個平板1個不劃線（重復實驗）（空白對照）一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達到分離單菌落的目的；二是存留在劃破處的單個細胞無法形成規矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落。平板劃線的操作方法討論1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環？在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環嗎？為什么？答：操作的第一步灼燒接種環是為了避免接種環上可能存在的微生物污染培養物；每次劃線前灼燒接種環是為了殺死上次劃線結束后，接種環上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數的增加，使每次劃線時菌種的數目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結束后灼燒接種環，能及時殺死接種環上殘留的菌種，避免細菌污染環境和感染操作者。2.在灼燒接種環之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？答：以免接種環溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：劃線后，線條末端細菌的數目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。3.培養酵母菌完成平板劃線后，待菌液被培養基吸收，將接種后的平板和一個未接種的平板倒置，放入28℃左右（培養溫度因酵母菌種的不同而稍有差異）的恒溫培養箱中培養24-48h，分別觀察記錄結果。2.在接種酵母菌的培