DB130865.020.20DB1308B05承 德 市 地 方 標 準DB1308/T316—2022香菇固體轉液體菌種生產技術規程2022-10-31發布 2022-11-01實施承德市市場監督管理局 發布DB1308/T316DB1308/T316—2022前 言本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。本文件由承德市農業農村局歸口。本文件起草單位：平泉市希才應用菌科技發展有限公司。I香菇固體轉液體菌種生產技術規程范圍本文件規定了香菇固體轉液體菌種生產的前期準備、操作流程以及各步驟的操作方法指示。本文件適用于香菇固體轉液體菌種生產過程管理。規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。本文件沒有規范性引用文件。術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。前期準備培養基小米谷粒、0.5%食品級甘油、葡萄糖粉、食品級酵母粉、100目豆粕粉、100目玉米粉等。儀器設備高壓滅菌鍋、超凈工作臺、液體發酵罐、生化培養箱、搖床、pH酸度計、比重計、打漿機、液體0.950750mlPDA操作流程谷粒選擇→谷粒浸泡→濾水→添加石膏→裝瓶→滅菌→接菌→菌絲培養→搖瓶→后續養菌→低溫處理→谷粒菌種懸浮液制備→懸浮液過濾→轉罐擴大培養→檢驗→備用。操作方法谷粒選擇選擇帶皮小米谷粒，籽粒飽滿、無雜質、直徑為0.1cm～0.15cm，破碎率控制在2%以內。谷粒浸泡使用塑料桶或箱作為容器，將谷粒倒入容器中，加水浸泡，水與谷粒的體積比為2:1。環境溫度20℃１415101024h濾水浸泡完成后濾水，將谷粒置于50目篩子上進行濾水；以篩底沒有水滴滴下，且手抓谷粒不粘手為宜。添加石膏按照谷粒干重的1%比例添加石膏，攪拌均勻。裝瓶750ml1.3kg～1.4kg。使用無棉蓋體扣蓋封口，作為培養基。滅菌裝瓶后的培養基在4h121℃時保持4h，確保滅菌徹底。接菌2520mm×200mm的斜面試管PDA培養基母種轉接4瓶培養基。菌絲培養接菌完成后，在培養溫度為22℃，空氣相對濕度為60%，二氧化碳濃度不超過0.2%的條件下進行培養。搖瓶當菌絲長到培養基1/4后續養菌待培養基中長滿菌絲后，繼續培養10d～12d，令菌絲長入培養基內部，充分分解谷粒培養基，使谷粒充分軟化，培養成為谷粒原種。該階段的管理要加強通風換氣，二氧化碳濃度不要高于0.15%。低溫處理將長好菌絲的谷粒菌種在4℃環境下放置6h。谷粒菌種懸浮液制備在無菌的條件下，使用打漿機對低溫處理的谷粒菌種進行充分破碎，在破碎過程中加入溫度為4℃的0.5%的無菌甘油溶液，使破碎后的谷粒菌種變成懸浮漿液，其中谷粒菌種與甘油溶液的體積比為1:1。打漿機對谷粒菌種進行破碎時采用間歇模式，每旋轉30s停頓10s，以旋轉10次為限，防止打漿過程中溫度升高。２懸浮液過濾三角瓶消毒，安裝消毒后的50目篩片，打漿結束后倒入三角瓶中過濾。轉罐擴大培養在無菌條件下，將過濾后的谷粒菌種懸浮液轉入到盛裝培養液的液體發酵罐中進行液體發酵培養，懸浮漿液與培養液的體積比為1:1200。發酵罐培養液成分按質量配比為：玉米粉2%、豆粕粉2%、葡萄糖1.5%、酵母粉0.5%和94%的無菌水。發酵罐內培養條件為溫度25℃，罐內壓力0.01兆帕，培養6d。檢驗取樣在擴大培養即將結束時檢驗一次即可，即在培養6d取樣檢驗。感官檢查看旋5min不沉淀，表明菌種生長力強；反之，如果菌絲極易沉淀，說明菌絲已老化或死亡。嗅理化試驗菌絲干重量取液體菌種10ml，用水分測試儀烘干至含水量18%，然后稱量，菌絲干重≥2g為合格。液體粘稠度將液體菌種置于量筒中，使用比重計進行粘稠度測量，比重超過1.2為合格。pH將液體菌種取出后，使用pH值酸度計進行精準