復習回顧1、基因工程又稱為？基因工程的原理是?2、基因工程中用到的工具中，“分子手術刀”是？來源是？其作用是？體現了酶的什么特性？作用部位是什么鍵？3、限制酶切割之后的結果是產生？從中軸線兩側切割得到的是什么末端？從中軸線處切開呢？4、獲得目的基因需要切幾個切口？產生幾個黏性末端？切割質粒呢？5、“分子縫合針”是？根據什么分為兩大類？哪兩大類？這兩類酶的區別是？6、DNA連接酶連接的是？DNA聚合酶連接的是？7、DNA連接酶作用于什么鍵？8、載體主要有哪幾類？其中，最常用的是？它的本質是？9、載體必須具備的四個條件是？10、寫出限制酶切割后的黏性末端。基因工程的基本操作程序原核細胞的基因結構(補充內容）非編碼區非編碼區編碼區編碼區上游編碼區下游與RNA聚合酶結合位點啟動子終止子①不編碼蛋白質。：編碼蛋白質,連續不間斷編碼區非編碼區原核細胞的基因結構②調控遺傳信息表達,上游有啟動子，下游有終止子真核細胞的基因結構（補充內容）編碼區非編碼區非編碼區與RNA聚合酶結合位點內含子外顯子啟動子終止子編碼區上游編碼區下游真核細胞的基因結構編碼區非編碼區外顯子：能編碼蛋白質的序列內含子：不能編碼蛋白質的序列：有調控作用,上游有啟動子，下游有終止子非編碼序列：包括非編碼區和內含子

基因工程的基本操作程序主要包括哪幾個步驟？1、目的基因的獲取2、基因表達載體的構建3、將目的基因導入受體細胞4、目的基因的檢測與鑒定問題1一：目的基因的獲取

如蘇云金芽孢桿菌的抗蟲基因，還有植物的抗病（抗病毒、抗細菌）基因、種子貯藏蛋白的基因，以及人的胰島素基因、干擾素基因等。

1.目的基因主要是指___________________編碼蛋白質的基因目的基因指的是：？也可以是具有調控作用的因子獲取目的基因的常用方法有哪些?1、從基因文庫中獲取目的基因2、利用PCR技術擴增目的基因3、人工合成目的基因反轉錄法化學合成法(一)從基因文庫中獲取目的基因將含有某種生物不同基因的許多DNA片斷，導入到受體菌的群體中儲存，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫1.基因文庫概念2.基因文庫類型基因組文庫部分基因文庫（包含一種生物的所有基因）（包含一種生物的一部分基因）(一)從基因文庫中獲取目的基因3.基因組文庫的構建提取某種生物的全部DNA用適當的限制酶一定大小的DNA片段將DNA片段與載體連接導入受體菌中儲存基因組文庫4.cDNA文庫的構建建提取某種生物物的某器官或或特定發育時期的mRNA單鏈DNA雙鏈cDNA片段重組載體與載體連接接cDNA文庫庫反（逆）轉錄錄酶DNA聚聚合酶導入受體菌中中儲存兩種基因文庫庫的主要區別別如下表（課課本P10））文庫類型cDNA文庫基因組文庫文庫大小小大基因中啟動子無有基因中內含子無有基因多少部分基因全部基因物種間的基因交流可以部分基因可以總結1、概念：PCR全稱為為________________，是一項項在生物____復復制_____________的的核酸合成技技術3、條件：2、原理：__________多聚酶鏈式反反應體外特定DNA片段DNA雙鏈復制(二)利用PCR技術術擴增增目目的的基基因因模板板（目目的的基基因因））原料料(脫脫氧氧核核苷苷酸酸)引物物（一一小小段段單單鏈鏈DNA））耐高高溫溫的的DNA聚聚合合酶酶（（Taq酶酶））溫度度控控制制4、、操操作作前前提提：：一段段已已知知目目的的基基因因的的核核苷苷酸酸序序列列，，以以便便合合成成引引物物。。6、結果果：5、擴增增形式：：指數形式式（2n）在短時間間內大量量擴增目目的基因因7、過程程：a、變性性（90℃℃-95℃）：：雙鏈DNA模模板在熱熱作用下，_____斷裂裂，形成成___________b、復性性（55℃℃-60℃）：：系統溫溫度降低低，引物物與DNA模模板結合合，形成成局部________。c、延伸伸（70℃℃-75℃）：：在Taq酶的的作用下下，從引物開始始進行堿堿基互補補配對，，合成與與模板互補補的________。氫鍵單鏈DNA雙鏈DNA鏈(二)利利用PCR技術術擴增目目的基因因動畫演演示（三）人人工合成成目的基基因反轉錄法法：以目的基基因轉錄錄成的信信使RNA為模模板，反反轉錄成成互補的的單鏈DNA，，然后在在酶的作作用下合合成雙鏈鏈DNA，從而而獲得所所需的基基因。化學合成成法DNA合成儀推測推測合成前提：基因比較較小、核核苷酸序序列已知知蛋白質的的氨基酸酸順序mRNA核苷酸酸序列基因DNA的核核苷酸酸序列列目的基因問題43、如如果不不知道道目的的基因因的核核苷酸酸序列列，可可采用用_________________獲取目目的基基因的的三種種方法法應用用1、如如果有有目的的基因因的核核苷酸酸序列列，而而且基基因比比較大大，可可采用用____________2、如如果知知道目目的基基因的的序列列，而而且基基因比比較小小，可可采用用________________PCR技術術擴增增化學合合成法法從基因因文庫庫獲取取的方方法復習回回顧1、基基因工工程的的基本本操作作程序序的四四個步步驟是是？核核心是是？2、目目的基基因指指的是是什么么基因因？3、獲獲取目目的基基因常常用的的三種種方法法是？？其中中人工工合成成法又又包括括哪兩兩種?4、基基因文文庫包包括哪哪兩類類？5、PCR的原原理是是？PCR全稱稱是？？PCR擴擴增過過程中中的解解旋方方式是是？PCR需要要的條條件有有？6、基基因表表達載載體的的構建建的目目的是是？7、一一個基基因表表達載載體的的組成成包括括哪幾幾部分分？8、標標記基基因的的作用用是？？9、啟啟動子子，終終止子子的位位置，，作用用？起起始密密碼子子，終終止密密碼子子呢？？二：基基因表表達載載體的的構建建———基因因工程程的核心1目的：：使目的的基因因在受受體細細胞中中穩定存存在，并且且可以以遺傳給給下一一代，同時時使目目的基基因能能夠表達和和發揮揮作用。。2組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因等啟動子子：位于基基因的的首端的一段段特殊殊的DNA片斷斷，RNA聚合合酶識別和和結合合的部部位，，啟動動轉錄錄終止子子：位于基基因的的尾端的一段段特殊殊的DNA片斷斷，能能終止mRNA的的轉錄錄（與與終止止密碼碼子區區別））標記基基因：：鑒別受體細細胞中中是否否含有有目的的基因因，從從而將將有目目的基基因的的細胞胞篩選出來3.基因表表達載體的的構建過程程質粒DNA分子子限制酶處理理兩個切口四個黏性末末端DNA連接接酶重組DNA分子（重重組質粒））同一種一個切口兩個黏性末末端三、將目的的基因導入入受體細胞胞1轉化概念：目的基因進入受體細胞內，并且在受體細胞內維持穩定和表達的過程。2轉化的實質：目的基因整合到受體細胞的染色體DNA上生物種類植物細胞動物細胞微生物細胞常用方法農桿菌轉化法基因槍法花粉管通道法顯微注射法Ca2＋處理法受體細胞一般是體細胞受精卵-------------4、目的基因因導入受體體細胞的方方法1、將目的的基因導入入植物細胞胞的方法：：（1）農桿菌轉化化法①農桿菌特點點：易感染雙子子葉植物和和裸子植物物，對大多多數單子葉葉植物沒有有感染能力力②原理：Ti質粒上上的T-DNA可以轉移到到受體細胞胞，并整合合到受體細細胞染色體的DNA上。三、目的基基因導入受受體細胞構建基因表表達載體轉入農桿菌植物細胞導入穩定維持和和表達③過程：（2）基因槍法：目的基因導導入單子葉植物物細胞基因槍法（3）花粉管通道道法：將目的基因因導入植物物細胞①操作方法法：在植物物花受粉后后，花粉形形成花粉管管還末愈合合前期，剪剪去柱頭，，然后，滴滴入DNA（含的基基因）使目目的基因借借助花粉管管通道進入入受體細胞胞②特點:十分分簡便經濟濟。③例：轉基因因抗蟲棉（（我國）（4）、將將目的基因因導入動物物細胞方法：顯微注射法法目的基因表表達載體提純取卵（受精卵））顯微注射受精卵新新性狀動物物為什么動物物細胞要用用受精卵做做受體細胞胞？全能性受限限制（5）、將將目的基因因導入微生生物細胞①微生物作受受體細胞優優點：繁殖快、多多為單細胞胞、遺傳物物質相對少少②常用菌：：大腸桿菌菌③常用法：：Ca2+處理獲得感感受態細胞胞（改變細胞胞壁的通透透性）④過程：Ca2+處理大腸桿菌感受態細胞感受態細胞胞吸收DNA表達載體與感受態細胞混合導入過程完完成后，全全部受體細細胞都能攝攝入入重組DNA分子嗎嗎？真正能攝入入重組DNA分子的的受體細胞胞很少，且且有的會攝攝入載體-載體，目目的基因-目的基因因類型目的基因進進入受體細細胞后，是是否都能穩穩定維持和和表達？不一定，需需要檢測問題4問題5——檢查是是否成功分子水平個體水平：：①檢測轉基基因生物染染色體的DNA上是否插入入了目的基基因②檢測目的的基因是否否轉錄出了了mRNA③檢測目的的基因是否否翻譯成蛋蛋白質抗蟲鑒定、、抗病鑒定定、活性鑒鑒定等方法、工具具：方法、工具具：方法、工具具：DNA分子子雜交、DNA探針針分子雜交、、DNA探探針抗原-抗體體雜交、抗抗體四、目的基基因的檢測測與鑒定方法：接種實驗轉基因生物的DNA探針15N15N14N14N（1）檢測轉轉基因生物物染色體的的DNA上上是否插入入了目的基因基因探針：：放射性同位位素等標記記的含有目目的基因DNA片段段方法——DNA分子子雜交技術術變性變性知識延伸——DNA分子子雜交技術術該方法是根根據堿基互互補配對原原則，把互互補的雙鏈鏈DNA解解開，把單單股的DNA小片段段用同位素素、熒光分分子或化學學發光催化化劑等進行行標記，之之后同被檢檢測的DNA中的同同源互補序序列雜交，，從而檢出出所要查明明的DNA或基因。。變性方法——分子雜交技技術（2）檢測測目的基因因是否轉錄錄出了mRNA探針15N15N轉基因生物物的mRNA14N14N提取（3）檢測測目的基因因是否翻譯譯成蛋白質質方法——抗抗原-抗體體雜交蘇云金桿菌Bt毒素蛋蛋白將Bt毒蛋蛋白注射小小鼠體內從小鼠血管管抽出血液液分離出抗抗Bt毒素素的抗體抗體蛋白質出現雜交帶帶脫分化組織培養（4）除上上述分子檢檢測外，有有時還需進進行個體生物學學水平的鑒鑒定：如抗抗性特性——檢