NEB產(chǎn)品知識和市場培訓

2001年8月市場與技術(shù)支持部第一部分NEB廠家背景回顧美國總部：Beverly,MA1975~2001支柱產(chǎn)品——工具酶先進的基因克隆和高表達體系的構(gòu)建技術(shù)120種自主開發(fā)的酶60多種酶是由NEB首先篩選到并進入商品化生產(chǎn)二十五年的生產(chǎn)歷史國際化的生產(chǎn)和營銷網(wǎng)絡(luò)在全世界35個國家和地區(qū)有分銷商美國、英國、德國、加拿大四個生產(chǎn)基地專業(yè)水準的廠商發(fā)酵中心——生產(chǎn)部酶制備和DNA重組技術(shù)中心——研發(fā)部分子生物學和寄生蟲學研究中心——基礎(chǔ)研究院第二部分NEB產(chǎn)品講解核酸工具酶DNA限制性內(nèi)切酶DNA聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶Vent系列的PCR聚合酶DNA/RNA修飾酶單位的定義

在50l反應(yīng)體系中，1小時內(nèi)，完全消化1g的DNA所 需要的酶量為1Unit

包裝與規(guī)格常用酶大多數(shù)為10U/l

緩沖液4種不同顏色標記的標準緩沖液和特定緩沖液

稀釋液

分為A、B、C三種，依表詢

儲藏條件在不被稀釋的情況下，可長期存放在零下20度長達20之久DNA限制性內(nèi)切酶嚴格的質(zhì)量檢驗：非特異性的內(nèi)切酶活性檢測核酸酶污染檢測外切酶污染檢測藍白斑篩選檢測DNA限制性內(nèi)切酶針對于常用在克隆實驗中的酶檢驗過量酶切對DNA末端的完整性是否有破壞NEB自主克隆的酶基因從重組菌株中提純的酶隨酶另附一管BSA酶識別位點被dam或dcm甲基化后不能被切動酶是否耐熱經(jīng)過藍白斑法檢測目錄書中出現(xiàn)的標志符號的含義最佳的工具酶反應(yīng)溫度酶所對應(yīng)的緩沖液編號DNA限制性內(nèi)切酶Homing核酸內(nèi)切酶識別12-40堿基的長的、對稱識別位點的稀有內(nèi)切酶

同裂酶的概念識別同一酶切位點的一組內(nèi)切酶

BSA的作用酶保護劑，在反應(yīng)中保證酶具有最佳的活性DNA限制性內(nèi)切酶小常識：NEB限制制性內(nèi)內(nèi)切酶酶的賣賣點：：種類非非常齊齊全，，（豐豐富的的稀有有酶））穩(wěn)定性性好，，存放放時間間長價格在在進口口酶類類里適適中質(zhì)量可可靠DNA限制性內(nèi)切酶DNA/RNA聚合酶DNA或RNA的探探針標標記3’末末端和和5’’末端端的補補平3’末末端的的堿基基置換換DNA測序序反應(yīng)應(yīng)、定定點突突變和和轉(zhuǎn)錄錄3’末末端突突出的的切平平特性性：：以單鏈鏈DNA或或RNA為為模板板，從從5’’端向向3’’端合合成新新鏈應(yīng)用用性能指指標：：5’端端向3’端端的外外切活活性3’端端向5’端端的外外切活活性聚合速速度錯配率率耐熱性性延伸能能力常用的的種類類：E.coliDNAPolymeraseIKlenowFragment（（3’’—5’exo-）T4DNAPolymeraseTerminalTransferaseM-MuLVReverseTranscriptase*M-MuLVReverseTranscriptase（RNaseH-）T7/Sp6RNAPolymeraseDNA/RNA聚合酶NEBVent系列聚合酶VentDNAPolymerase主要應(yīng)應(yīng)用：：常規(guī)規(guī)PCR擴擴增雙脫氧氧法測測序NEBVent系列聚合酶VentDNAPolymerase與常規(guī)規(guī)Taq酶酶的錯錯配率率比較較賣點：：高保真真耐熱性性非常常好DNA/RNA修飾酶DNA/RNAModifyingEnzyme連接酶酶………………………………………Ligase激酶……………………………………………Kinase堿性磷磷酸酶酶………………………………PhosphataseBeta瓊瓊脂糖糖酶……………………………Agarase甲基化化酶……………………………………Methylase核酸酶酶………………………………………Nuclease外切酶酶………………………………………Exonulease內(nèi)切酶酶………………………………………EndonuleaserecA重重組蛋蛋白酶酶………………………recAProteinDNA/RNA修飾酶重點產(chǎn)產(chǎn)品：：T4DNALigase單位定定義：：20000NEBUnit=300WeissUnit4000NEBUnit=60WeissUnitT4PolynucleotideKinase（（T4PNK））對DNA5’末末端進進行磷磷酸化化，用用于探探針標標記或或克隆隆AlkalinePhosphatase,CalfIntesinal（（CIP）去除DNA5‘和和3’’的磷磷酸基基團，，用于于制備備5‘‘的置置換標標記記和載載體克克隆，，阻止止載體體的自自我連連接。。分子量標準DNA分子量標準常用類類型：：整數(shù)數(shù)分子子量的的Marker1kbDNALadder2-logDNALadder100bpDNALadderNEW噬菌體體DNA和和質(zhì)粒粒DNA酶消化化型的的DNA分分子量量標準準非整數(shù)數(shù)型的的DNA分子量標準DNA分子量標準PGF分分子量量標準準DNA被包包埋在在凝膠膠中，，以注注射器器的形形式包包裝用于幾幾十kb至至上千千kb的DNA分離離時的的Marker脈沖電電泳分分離分子量量種類類：LowRangeMidRangeLambdaLadderYeastChromosomeRNA分分子量量標準準適用于于普通通凝膠膠或變變性膠膠條帶為為整數(shù)數(shù)的分分子量量RNA分子量標準蛋白分子量標準蛋白分分子量量標準準普通型型………………2-212kDa（（精精確））預染型型………………6-175kDa（（估估計））HRP蛋白白Marker檢測測包6.5-165kDa（Biotin標記記，BiotinAb）蛋白工具酶蛋白酶酶內(nèi)切糖糖苷酶酶外切糖糖苷酶酶蛋白激激酶和和抑制制劑蛋白磷磷酸化化酶和和抑制制劑FactorXaProtease探針標記雜交檢測NEBlotKit隨機引引物法法探針針標記記試劑劑盒下游應(yīng)應(yīng)用：：文庫篩篩選Southern/Northern原位雜雜交賣點點：：標記的的dNTP參入入率高高模板用用量在在25ng到2ug半小時時即可可完成成標記記反應(yīng)應(yīng)可用于于多種種類型型的標標記dNTP（（同位位素或或非同同位素素標記記）NEBlotPhototopeKit隨機引引物法法生物素素探針標標記試試劑盒盒用于化化學發(fā)發(fā)光檢檢測與Phptotope-StarChemiluminescentDetectionKit配配合使使用生物素素標記記的探探針穩(wěn)穩(wěn)定，，可長長時間間存放放雜交后后可洗洗脫下下來，，進行行反復復雜交交Phptotope-StarChemiluminescentDetectionKit賣點點：：靈敏度度同位位素檢檢測法法相當當曝光時時間短短，只只需10-70分鐘鐘信號穩(wěn)穩(wěn)定，，可通通過改改變曝曝光時時間來來摸索索最佳佳的信信號強強度第三部部分NEB蛋蛋白白表達達產(chǎn)品品介紹紹pMAL蛋蛋白白融合合表達達與純化化系統(tǒng)統(tǒng)賣點點：生產(chǎn)級級別的的應(yīng)用用高水平平表達達量－－1升培培養(yǎng)上上清可可達到到100mg的的蛋白白產(chǎn)量量與MBP融融合表表達可可以增增加蛋蛋白的的溶解解性IMPACT蛋蛋白表表達與純化化系統(tǒng)統(tǒng)賣點點：應(yīng)用了了蛋白白內(nèi)含含肽自自我剪剪切技技術(shù)無需蛋蛋白酶酶去除除標簽簽，只只需一一次過過柱純純化過過程Intein可可接在在蛋白白的C端或或N端端IMPACT-CNSystemIMPACT-TWINSystem賣點點：應(yīng)用了了蛋白白內(nèi)含含肽自自我剪剪切技技術(shù)，，將兩兩個Intein接接在目目的蛋蛋白的的兩端端。無需蛋蛋白酶酶去除除標簽簽，只只需一一次過過柱純純化過過程Intein行行使剪剪切功功能后后，可可在目目的蛋蛋白兩兩端產(chǎn)產(chǎn)生帶帶S的的氨基基和羧羧基，，可環(huán)環(huán)化，，可標標記第三部部分NEB英文文目錄錄附錄錄的內(nèi)內(nèi)容介介紹NEBcutterV1.0內(nèi)容一一分分子生生物學學數(shù)據(jù)據(jù)庫索索引REBASE限限制性性內(nèi)切切酶數(shù)數(shù)據(jù)庫庫3100種種限制制性酶酶的相相關(guān)信信息酶的基基因序序列、、甲基基化敏敏感位位點、、結(jié)構(gòu)構(gòu)………5600篇篇參考考文獻獻InBase內(nèi)內(nèi)含肽肽數(shù)據(jù)據(jù)庫分子生生物學學數(shù)據(jù)據(jù)庫網(wǎng)網(wǎng)址總總匯224個網(wǎng)網(wǎng)址可按功功能領(lǐng)領(lǐng)域分分類查查找內(nèi)容二二工工具酶酶常用用查詢詢表以酶識識別序序列分分類的的索引引同裂酶酶索引引限制性性內(nèi)切切酶的的發(fā)展展歷史史和知知識背背景NEBuffer的的酶－－活活性性對照照表雙酶切切緩沖沖液選選擇表表酶－稀稀釋液液對照照查詢詢表限制性性酶在在引物物延伸伸反應(yīng)應(yīng)中的的活性性表限制性性核酸酸內(nèi)切切酶的的熱失失活對對照表表酶切反反應(yīng)酶酶用量量查詢詢表補平反反應(yīng)新新酶識識別位位點查查詢表表相同粘粘端酶酶查詢詢表限制性性酶識識別位位點中中甲基基化位位點查查詢表表內(nèi)容三三分分子生生物學學常用用工具具表常用E.coli菌菌株表表型及及基因因型查查詢表表常用遺遺傳標標記NEB菌株株描述述遺傳密密碼表表氨基酸酸化學學結(jié)構(gòu)構(gòu)常用單單位換換算常用載載體上上的酶酶識別別位點點出現(xiàn)現(xiàn)頻率率常用載載體的的酶切切圖譜譜內(nèi)容四四分分子子生物物學實實驗Protocol瓊脂糖糖包埋埋的DNA的限限制性性酶消消化基因組組酶消消化的的選擇擇指導導甲基化化酶反反應(yīng)第五部部分NEB銷售統(tǒng)統(tǒng)計分分析單位：：萬美美金QIAGENClontechNEB分子生生物學學試劑劑產(chǎn)品品銷售售比例例統(tǒng)計2000.4~2001.32000.