CNAS-CL036ISO15189認可準則（2012年版）在分子診斷領域的應用要求介紹2014111日起實行湖南省臨床檢驗中心呂岳峰1范圍 CNAS對分子診斷領域的認可要求，包雜交試驗（包括原位雜交試驗）、核酸電泳分析等。2規范性引用文件 下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用最新版本（包括修改單）適用于本文件。GB/T20468-2006臨床實驗室定量測定室內質量控制指南CNAS-RL02能力驗證規則CNSA-CL31內部校準要求臨床技術操作規范·2004醫療機構臨床基因擴增檢驗實驗室工作導則病理科建設與管理指南（試行），衛辦醫政發〔2009〕31號3術語和定義4管理要求4.1組織和管理責任4.1.1.2實驗室為獨立法人單位的，應有醫療機構執業許可；實驗有醫學實驗室，2年。4.1.2.5應至少有1名具有副高及以上專業技術職務任職資格，從事分子診斷工作至少5年。4.2質量管理體系?4.3文件控制?4.4服務協議4.5受委托實驗室的檢驗4.6外部服務和供應4.7咨詢服務4.8投訴的解決4.9不符合的識別和控制?4.10糾正措施?4.11預防措施?4.12持續改進?4.13記錄控制4.14評估和審核4.15管理評審5.1人員

5技術要求5.1.2分子診斷實驗室（以下簡稱實驗室）專業技術職稱、從事分子診斷工作至少3年。 分子診斷得上崗證后方可上崗。 任職資格，并有從事分子病理工作的經歷。 認可的授權簽字人事申請認可授權簽字領域專業技術工作至少3年。5.1.3實驗室應至少具有2名檢驗/檢查人員。5.1.6應每年評估員工的工作能力。對新進員工在最初62次能力評審，保存評估記錄。 當職責變更時，或6個月以上再上崗時，或政策、程序、崗，并記錄。5.2設施和環境條件5.2.1針對性的防護措施及合適的警告。5.2.2涉及基因擴增檢驗的實驗室原則上分四個獨立的工作區域：用自動分析儀（擴增產物閉管檢測），作量而定。上述每個區域應有充足空間以保證：樣品處置符合分析前、后樣品分區放置；儀器放置符合維修和操作要求；樣品制備區放置生物安全柜、離心機和冰箱等儀器設備；打印檢驗報告時交叉污染的控制。工作區域應符合如下要求：c）實驗室各分區應配置固定和移動紫外線燈，波長為254nm臺的60～90cm；e）樣品制備區應配置二級生物安全柜和洗眼器，實驗室附近應有噴淋裝置。 用于組織切片、脫蠟、水化、染色等。脫蠟、水化及染色應在通風設施中進行。?5.2.3用以保存臨床樣品和試劑的設施應設置目標溫度和允許范圍，并記錄。實驗室應有溫度失控時的處理措施并記錄。5.2.6不同的實驗區域應當有其各自的清潔用具應立即對工作區進行清潔，必要時進行消毒及去污染。 應依據所用分析設備和實驗過程的要求，制定環境溫濕度控制要求并記錄應有溫濕度失控時的處理措施并記錄。擴增儀應配備不間斷電源（UPS）；應依據用途（如：RNA檢測用水），制定適宜的水質標準（如：應除RNase），并定期檢測。 分子檢驗各工作區域應有明確的標記。進入基因擴增實驗室各工作區應照單一方向進行，即試劑貯存和準備區→樣品制備區→擴增區→擴增產物分析區。不同的工作區域宜使用不同的工作服（如不同的顏色）。工作人員離開各工作區域時，不應將工作服帶出。5.3實驗室設備、試劑和耗材5.3.1.1RNA檢測，宜配備－70℃的冷凍設備。需要時，配備高速冷凍離心機。芯。PCR試驗用容器應可密閉，不同工作區域內的設備、物品不能混用。 電熱恒溫箱、脫蠟缸、水化缸及HE染色缸等。5.3.1.4應按國家法規要求對強檢設備進行檢定。應進行外部校準至少對分析設備的加樣系統、檢測系統和溫控系統進行校準（時）。分析設備和輔助設備的內部校準應符合CNAS-CL《內部校準要求》。 生物安全柜等進行校準。5.3.1.5設備故障后，應首先分析故障原因，如果設備故障可能影響了測、驗證：可校準的項目實施校準驗證，必要時，實施校準；質控物檢驗；與其他儀器或方法比對，偏差符合附錄A.3的要求；以前檢驗過的樣品再檢驗，偏差符合附錄A.5的要求。5.3.2.1實驗室應建立試劑和關鍵耗材（如離心管、帶濾芯的吸頭）的驗收程序，（宜參考附錄A）。5.3.2.3實驗室應對關鍵耗材進行驗收，驗收試驗至少應包括：外觀檢查：肉眼可看出的，如包裝完整性、有效期等； 性能驗證率和核酸擴增效率、試劑的批間差異、關鍵耗材的抑制物等。試劑性能驗證記錄應能反映該批試劑的核酸提取效率和核酸擴增效率。驗證試劑批間差異和耗材的抑制物A.6要求即可視為滿足要求。特殊情況下，如實驗室懷疑提取試劑有質量問題，可采用凝膠電泳試驗比較核酸提取物與核酸標準物確認核酸片段提取的完整性、260nm紫外波長測定確認核酸提取的產率、260nm/280nm比值確認核酸提取的純度。用于定性檢驗的試劑，選擇陰性和弱陽性的樣品進行試劑批號驗證。求參照附錄A.6要求。方法和要求參照附錄A.6要求。檢驗前過程5.4.4.3應規定分子診斷樣品留取的具體要求，如：DNase和/RNase的一次性密閉容器；EDTA和枸櫞酸鹽為首選抗凝劑，不使用肝素抗凝（不受肝素干擾時除外）；RNA（HCVRNA）擴增檢測的血樣品宜進行抗凝處理，并盡快分離血漿，以避免RNA離血清。分泌物、拭子、腫瘤組織等樣品留取的注意事項等。5.4.6e基于組織/細胞學形態基礎的分子檢測項目應由具有病理診斷資質的醫師確認樣品是否滿足檢測要求。5.4.7超長期儲存后的標本，使用前應再次評估標本的完整性。 檢測樣品若為組織，應采用10%定液的量和固定時間應符合檢測要求。檢驗過程5.5.1.2定量檢測方法和程序的分析性能驗證內容至少應包括精密度、正確度、線性、測量和/或可報告范圍、抗干擾能力等。定性檢測項目驗證內容至少應包括測定下限、特異性、準確度（金標準比較）、抗干擾能力等。驗證結果應經過授權人審核。應使用驗證過的核酸抽提和純化方法，必要時進行核酸定量。 對產前檢驗，在完成分子診斷前應保留備份培養物并跟蹤監測實宜由同一實驗室檢驗；如有足夠的標本，應從兩份不同標本中提取DNA應有程序評估并減少這種影響。 應有明確和統一的原位雜交（ISH）陽性信號的標準，并建立本實驗室的陽性閾值。組織病理ISH并采用國際通用的評分標準。5.6.2.1總則

檢驗結果質量的保證應制定室內質量控制程序，定量測定可參照GB/T20468-2006對核酸檢測防污染的具體措施。 DNA質量評價記錄。需要時，應對RNA的質量進行評價，并選擇合適的“管家”mRNARNARNA質量評價記錄及假陰性率監測記錄。 對用于基因突變檢測的石蠟包埋樣品，應有病理醫師從組織形態細胞進行富集。 因，適當時采取糾正措施。5.6.2.2質控物 定性檢測項目，每次實驗應設置陰性、弱陽性和/性質控物。如為基因突變、基因多態性或基因型檢測，則應包括最能反映檢測情況的突變或基因型樣品，每批檢測的質控至少應有一種基因突變或基因型。 質控物。5.6.2.3質控數據質控規則應確保試驗的穩定性和檢驗結果的可靠性。 定量檢測項目質控圖應包括質控結果、質控物名稱、濃度、批控時的分析處理程序和糾正措施等。定性檢測項目：陰陽性符合預期。5.6.3.1CNAS-RL02《能力驗證規則》的要求參加相應的能力驗證/室間質評。應保留參加能力驗證/的結果和證書。實驗室負責人或指定人員應監控室間質評活動的結果，并在結果報告上簽字。5.6.3.2通過與其他實驗室（如已獲認可的實驗室、使用相同檢測方法的實驗室、使用配套系統的實驗室）規定比對實驗室的選擇原則； 5基因突變或基因型；2次；判定標準：應有≥80%的結果符合要求。5.6.4實驗室使用兩套及以上檢測系統檢測同一項目時，應次，20，濃度水平應覆蓋測量區間；應定期（15份臨床樣品）進行檢驗人員的結果比對、考核并記錄。比對結果應符合附錄A的要求。使用不同生物參考區間的檢測系統間不宜進行比對。 2年。5.7檢驗后過程5.7.2原始樣品、核酸提取物和/或核酸擴增產物應規定保存期，便于復查。為便于追溯，凝膠圖像和斑點雜交條帶和/或通過掃描、業要求。5.8結果報告5.8.3除了通用要求外，適用時，分子診斷報告內容還應包括方法5.9結果發布5.10實驗室信息管理附錄A（規范性附錄）分子診斷項目分析性能標準A.1應不低于國家標準、行業標準、地方法規要求。A.2自建檢測系統不精密度要求：以能力驗證/室間質評評價界限（0.4對數值）作為允許總誤差（TEa），重復性精密度<3/5TEa；中間精密度<4/5TEa。A.354份樣品測量結果偏倚<7.5%。A.4實驗室內分析系統定期比對：樣品數n≥20間，計算回歸方程，系統誤差應<7.5%。A.5留樣再測判斷標準：按照項目穩定性要求選取最長期限樣品，54偏倚<7.5%。A.6試劑批間差異、耗材的抑制物的驗收判斷標準：選取5個舊批號檢測過的樣品，覆蓋測量區間（值、低值、中值和高值），至少4個樣品測量結果偏倚<7.5%，其中陰性和臨界值樣品必須符合預期。A.7標準可依據制造商聲明的性能標準而制定。附錄B（規范性附錄）分子診斷領域申請認可項目要求B.1以下分子檢驗項目，每一組項目為完整能力項目，如果實驗室目（33項）儀器/方法報告結果時，全部儀器/方法均應申請認可。肝炎系列：HBV、HCV（實驗室僅