DNA的瓊脂糖凝膠電泳分子生物學基本技術三峽大學醫學院生物化學教研室DNA的瓊脂糖凝膠電泳分子生物學基本技術三峽大學醫學院生物化凝膠電泳凝膠電泳：由瓊脂、瓊脂糖、淀粉膠及聚丙烯酰胺等物質作支持體的電泳。特點：1.可以制成非常均勻的凝膠，帶電質點在凝膠的孔中泳動。2.操作方法簡便，電泳速度快。3.分辨率高，重復性好，電泳圖譜清晰。4.適用于生化、免疫等定性定量測定。

凝膠電泳凝膠電泳：由瓊脂、瓊脂糖、淀粉膠及聚丙烯酰胺等物質作瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳是分離鑒定和純化DNA片段的標準方法。該技術操作簡便快速，可以分辨用其它方法（如密度梯度離心法）所無法分離的DNA片段。當用低濃度的熒光嵌入染料溴化乙啶(Ethidiumbromide,EB)染色,在紫外光下至少可以檢出1-10ng的DNA條帶,從而可以確定DNA片段在凝膠中的位置。此外,還可以從電泳后的凝膠中回收特定的DNA條帶,用于以后的克隆操作。瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳是分離鑒定和純化DNA片段的標準瓊脂糖凝膠天然瓊脂（agar）:又名瓊膠、菜燕、凍粉從石花菜及其它紅藻類植物提取出來的一種線狀高聚物。瓊脂糖（agarose）瓊脂膠（agaropectin）:含硫酸根和羧基的強酸性多糖，在電場作用下能產生較強的電滲現象。瓊脂瓊脂糖凝膠天然瓊脂（agar）:又名瓊膠、菜燕、凍粉瓊脂糖瓊脂糖是由瓊脂中提取出來的，D-半乳糖和3、6-脫水-L-半乳糖結合的鏈狀多糖。中性物質，不帶電荷D-半乳糖3，6-脫水-L-半乳糖瓊脂糖D-半乳糖3，6-脫水-L-半乳糖

瓊脂糖鏈依分子內和分子間氫鍵及其它力的作用使其互相盤繞形成繩狀瓊脂糖束，構成大網孔型凝膠。瓊脂糖鏈依分子內和分子間氫鍵及其它力的作用使其互相盤瓊脂糖凝膠的優點(1)

操作簡單，電泳速度快，樣品不需事先處理就可進行電泳。(2)瓊脂糖凝膠結構均勻，對樣品吸附極微，因此電泳圖譜清晰，分辨率高，重復性好。(3)瓊脂糖透明無紫外吸收，電泳過程和結果可直接用紫外監測及定量分析。(4)電泳后區帶易染色，樣品易洗脫，便于定量測定。制成干膜可長期保存。瓊脂糖凝膠的優點(1)操作簡單，電泳速度快，樣品不需事先處缺點：1.機械強度差，易破碎，濃度不能太低。2.易被細菌污染，不易保存，臨用前配制。3.瓊脂糖支持層上的區帶易于擴散，電泳后必須立即固定染色。4.與PAGE相比，分子篩作用小，區帶少。

缺點：影響瓊脂糖凝膠電泳的因素DNA分子的大小：實驗證明，DNA片段遷移距離與其分子量的對數成反比；瓊脂糖的濃度：一定大小的DNA片段在不同濃度的瓊脂凝膠中，電泳遷移率不相同；DNA分子的構型：不同構型的DNA在瓊脂糖凝膠中的電泳速度差別較大。影響瓊脂糖凝膠電泳的因素DNA分子的大小：實驗證明，DNA片瓊脂糖凝膠濃度與可分辨的DNA大小范圍的關系瓊脂糖凝膠濃度/(%)可分辨的線性DNA大小范圍/(kb)0.360~50.620~10.710~0.80.97~0.51.26~0.41.54~0.22.03~0.1瓊脂糖凝膠濃度與可分辨的DNA大小范圍的關系瓊脂糖凝膠濃度核酸構型與瓊脂糖凝膠電泳分離的關系在分子量相當的情況下，不同構型的DNA的移動速度次序如下：共價閉環DNA(covalentlyclosedcircular，簡稱cccDNA)＞直線DNA＞開環的雙鏈環狀DNA。核酸構型與瓊脂糖凝膠電泳分離的關系在分子量相當的情況下，不同質粒同一種質粒，由于其構象不同，電泳時的遷移率也不同。常會出現兩條或三條電泳帶一條是超螺旋質粒DNA的帶，移動速度最快；另一條是（松弛）螺旋狀質粒DNA帶（開環質粒DNA），移動速度最慢。有時因為有一些質粒DNA在提取過程中遭到損傷而線性化（線狀質粒DNA），其移動速度介于螺旋狀和超螺旋狀質粒DNA之間。質粒同一種質粒，由于其構象不同，電泳時的遷移率也不同。RelaxedcircleLinearizedformSuper-coiledform質粒RelaxedcircleLinearizedformS離子強度影響

電泳緩沖液的組成及其離子強度影響DNA的電泳遷移率。在沒有離子存在時(如誤用蒸餾水配制凝膠),電導率最小,DNA幾乎不移動；在高離子強度的緩沖液中(如誤加10×電泳緩沖液),則電導很高并明顯產熱,嚴重時會引起凝膠熔化或DNA變性。離子強度影響

電泳緩沖液的組成及其離子強度影響DNA的電泳緩沖液

常用三種緩沖液Tris-硼酸（TBE）Tris-乙酸（TAE）Tris-磷酸（TPE）Tris（三羥甲基氨基甲烷）：是一種生物堿，常用于生物實驗中配制各種pH值的緩沖液。1M的Tris溶液的pH值大約是10～11。EDTA可螯合二價陽離子，抑制DNA酶的活性，防止DNA降解。TBE與TPE：緩沖容量高，DNA分離效果好，但TPE在DNA片段回收時含磷酸鹽濃度高，容易使DNA沉淀，TAE：緩沖容量低，但價格較便宜。電泳緩沖液常用三種緩沖液EDTA乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraaceticacid），是一種有機化合物。它是一個六齒配體，可以螯合多種金屬離子。抑制DNA酶的活性，防止DNA降解。由于EDTA在水及酸中的溶解度很小，常用的為其二鈉鹽，也簡寫為EDTA。EDTA乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetr10×TBE緩沖液的配制配方Tris108克EDTA9.3克硼酸55克H2O至1000mlpH應為8.0～8.2臨用時用水稀至1×TBE（10倍稀釋）10×TBE緩沖液的配制配方上樣緩沖液

0.25％溴酚蘭；0.25％二甲苯青；30％甘油水溶液作用：①增加樣品密度，使其比重增加，以確保DNA均勻沉入加樣孔內②在電泳中形成肉眼可見的指

示帶，可預測核酸電泳的速度和位置③使樣品呈色，使加樣操作更方便上樣緩沖液0.25％溴酚蘭；0.25％二甲苯青；30％甘油膠濃度（%）溴酚藍二甲苯青0.61kb10.6kb2kb1.40.2kb1.6kb20.15kb

核酸電泳常用的指示劑：溴酚藍（bromophenolblue,Bb）；

二甲苯青（xylenecyanol,Xc），它攜帶的電荷量比溴酚藍少，在凝膠中的遷移率比溴酚藍慢。

膠濃度（%）溴酚藍二甲苯青0.61kb10.6kb2kb1.溴化乙錠（ethidiumbromide，EB）是一種熒光染料，EB分子可嵌入核酸雙鏈的堿基對之間，在紫外線激發下，發出桔紅色熒光可在凝膠電泳液中加入終濃度為0.5ug/ml的EB，有時亦可在電泳后，將凝膠浸入該濃度的溶液中染色10～15minEB染料有許多優點，如染色操作簡便、快速，靈敏度高，10ng或更少的DNA即可檢出。注意：EB被認為是一種強致癌物質，操作時應盡量小心，配置和使用EB時都應帶上手套，且注意不要把EB灑到桌面或地板上。核酸電泳的染色劑溴化乙錠（ethidiumbromide，EB）注意：EB由于插入了溴化乙錠分子，在紫外光照射下，瓊脂糖凝膠電泳中DNA的條帶便呈現出橘黃色熒光，易于鑒定。溴化乙錠染料的化學結構及其對DNA分子的插入作用由于插入了溴化乙錠分子，在紫外光照射下，瓊脂糖凝膠電泳中D銀染色銀染色液中的銀離子(Ag+)可與核酸形成穩定的復合物，然后用還原劑如甲醛使Ag+還原成銀顆粒，可把核酸電泳帶染成黑褐色。主要用于聚丙烯酰胺凝膠電泳染色，也用于瓊脂糖凝膠染色。靈敏度比EB高200倍，但銀染色后，DNA不宜回收銀染色聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺(acrylamide，Acr)和交聯劑N，N-甲叉雙丙烯酰胺(methylene-bisacrylamide，Bis)在加速劑和催化劑的作用下聚合交聯成三維網狀結構的凝膠。聚丙烯酰胺的優點：(1)凝膠透明，有彈性，機械性能好。(2)化學性能穩定，與被分離物不起化學反應。(3)對pH和溫度變化較穩定。(4)幾乎無電滲作用，樣品分離重復性好。(5)樣品不易擴散，且用量少，其靈敏度可達10-6g。(6)凝膠孔徑可調節，通過改變單體及交聯劑的濃度調節凝膠的孔徑。(7)分辨率高。聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳

（SDS）

SDS是陰離子去污劑，化學名稱十二烷基磺酸鈉

(sodiumdodecylsulfate)由于SDS帶有大量負電荷，當其與蛋白質結合時，所帶的負電荷大大超過了天然蛋白質原有的負電荷，因而消除或掩蓋了不同種類蛋白質間原有電荷的差異，使其均帶有相同密度的負電荷，因而可利用分子量差異將各種蛋白質分開。SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳

（SDS）SDS是陰瓊脂糖凝膠天然瓊脂課件夾在兩塊玻璃板之間的凝膠電泳緩沖液電泳緩沖液加在槽中的經SDS處理的樣品電源夾在兩塊玻璃板之間的凝膠電泳緩沖液電泳緩沖液加在槽垂直板電泳裝置加樣樣品遷移方向垂直板電泳裝置加樣樣品遷移方向電泳過程中分子遷移的規律，小分子走在前頭，大分子滯后。混合樣品帶孔膠按分子大小分離電泳方向電泳小分子大分子電泳過程中分子遷移的規律，小分子走在前頭，大分子滯后。混合樣染色方法蛋白質染色氨基黑10B：氨基黑10B是酸性染料。其磺酸基與蛋白質反應形成復合鹽，是最常見的蛋白質染料之一。考馬斯亮藍R250

考馬斯亮藍G250銀染色法染色方法蛋白質染色電泳后的凝膠經考馬斯亮籃染色、脫色后的凝膠照片電泳后的凝膠經考馬斯亮籃染色、脫色后的凝膠照片標準蛋白分子量未知蛋白在一定的凝膠濃度下，多肽鏈分子量的對數與多肽鏈的相對遷移率成線性關系，所以可以通過標準曲線求未知多肽鏈分子量。相對遷移率標準蛋白分子量未知蛋白在一定的凝膠濃度下，多肽鏈分子量的對數實驗目的掌握瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的原理和方法。實驗目的掌握瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的原理和方法。實驗原理DNA分子在瓊脂糖中泳動時有電荷效應和分子篩效應，但主要為分子篩效應。在pH值為8.0～8.3時，核酸分子堿基幾乎不解離，磷酸全部解離，核酸分子帶負電，在電泳時向正極移動。采用適當濃度的凝膠介質作為電泳支持物，在分子篩的作用下，使分子大小和構象不同的核酸分子泳動率出現較大的差異，從而達到分離核酸片段檢測其大小的目的。核酸分子中嵌入熒光染料（如EB）后，在紫外燈下可觀察到核酸片段所在的位置。實驗原理DNA分子在瓊脂糖中泳動時有電荷效應和分子篩效應，但實驗器材和試劑實驗器材：制膠模具，水平式電泳槽，電泳儀，微量移液器,微波爐,紫外透射儀或凝膠成像系統。樣品：DNA分子量標準品，DNA樣品試劑瓊脂糖1×電泳緩沖液（TBE）6×上樣緩沖液溴化乙錠(EB)：10mg/ml

實驗器材和試劑實驗器材：電泳儀電泳槽與制膠模具微波爐電泳儀電泳槽與制膠模具微波爐凝膠成像分析系統紫外透射儀凝膠成像分析系統紫外透射儀實驗操作實驗操作操作步驟1.準備用蒸餾水將電泳槽和梳子沖洗干凈，放在水平桌面上，并架好梳子操作步驟1.準備2.配制1%瓊脂糖凝膠及倒膠具體步驟：三角瓶內：1g瓊脂糖+100ml(1×TBE)煮膠溶解冷卻至60℃(不燙手)加EB倒板室溫下充分凝固垂直向上拔出梳子將膠板放入電泳槽向電泳槽中加入1xTBE緩沖液至剛沒過凝膠表面。2.配制1%瓊脂糖凝膠及倒膠具體步驟：瓊脂糖凝膠天然瓊脂課件水平式電泳裝置水平式電泳裝置3.加樣將DNA樣品（5ul）與6×上樣緩沖液（1ul）混勻后，用微量加樣槍小心加入樣品孔內。注意加樣槍的槍頭不可插入過深，以免刺穿凝膠，導致樣品外溢。每加完一個樣品要更換槍頭，以防止EB污染。

3.加樣將DNA樣品（5ul）與6×上樣緩沖液（1ul）瓊脂糖凝膠天然瓊脂課件4.電泳接通電源，一般紅色為正極，黑色為負極，切記DNA樣品由負極往正極泳動（靠近加樣孔的一端為負），電壓為5V/cm（長度以兩個電極之間的距離計算）根據指示劑泳動的位置，判斷是否終止電泳4.電泳接通電源，一般紅色為正極，黑色為負極，切記DNA樣AgaroseGelElectrophoresis+AgaroseGelElectrophoresis+5.結果觀察電泳結束后，將凝膠板取出。在紫外儀上觀察電泳帶及其位置，記錄實驗結果。5.結果觀察電泳結束后，將凝膠板取出。在紫外儀上觀察電泳帶注意事項1、倒膠時把握好膠的溫度，不要高于60℃，否則溫度太高會使制板變形；2、膠一定要凝固好才能拔梳子，方向一定要豎直向上，不要弄壞點樣孔；3、點樣時槍頭下伸，點樣孔內不能有氣泡，不要刺穿凝膠；4、EB有毒，切勿用手接觸，更不要污染環境，膠勿亂扔；5、紫外線照射不要太久。注意事項1、倒膠時把握好膠的溫度，不要高于60℃，否則溫結果與討論繪制實驗裝置圖及實驗結果示意圖結果與討論繪制實驗裝置圖及實驗結果示意圖下周：實驗考試口試+操作考試口試：二人一組，一位同學回答，另一位同學補充，答完一題后交換。操作考試：移液管、加樣槍或721的使用，由老師隨機指定其中一項進行操作。下周：實驗考試口試+操作考試DNA的瓊脂糖凝膠電泳分子生物學基本技術三峽大學醫學院生物化學教研室DNA的瓊脂糖凝膠電泳分子生物學基本技術三峽大學醫學院生物化凝膠電泳凝膠電泳：由瓊脂、瓊脂糖、淀粉膠及聚丙烯酰胺等物質作支持體的電泳。特點：1.可以制成非常均勻的凝膠，帶電質點在凝膠的孔中泳動。2.操作方法簡便，電泳速度快。3.分辨率高，重復性好，電泳圖譜清晰。4.適用于生化、免疫等定性定量測定。

凝膠電泳凝膠電泳：由瓊脂、瓊脂糖、淀粉膠及聚丙烯酰胺等物質作瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳是分離鑒定和純化DNA片段的標準方法。該技術操作簡便快速，可以分辨用其它方法（如密度梯度離心法）所無法分離的DNA片段。當用低濃度的熒光嵌入染料溴化乙啶(Ethidiumbromide,EB)染色,在紫外光下至少可以檢出1-10ng的DNA條帶,從而可以確定DNA片段在凝膠中的位置。此外,還可以從電泳后的凝膠中回收特定的DNA條帶,用于以后的克隆操作。瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳是分離鑒定和純化DNA片段的標準瓊脂糖凝膠天然瓊脂（agar）:又名瓊膠、菜燕、凍粉從石花菜及其它紅藻類植物提取出來的一種線狀高聚物。瓊脂糖（agarose）瓊脂膠（agaropectin）:含硫酸根和羧基的強酸性多糖，在電場作用下能產生較強的電滲現象。瓊脂瓊脂糖凝膠天然瓊脂（agar）:又名瓊膠、菜燕、凍粉瓊脂糖瓊脂糖是由瓊脂中提取出來的，D-半乳糖和3、6-脫水-L-半乳糖結合的鏈狀多糖。中性物質，不帶電荷D-半乳糖3，6-脫水-L-半乳糖瓊脂糖D-半乳糖3，6-脫水-L-半乳糖

瓊脂糖鏈依分子內和分子間氫鍵及其它力的作用使其互相盤繞形成繩狀瓊脂糖束，構成大網孔型凝膠。瓊脂糖鏈依分子內和分子間氫鍵及其它力的作用使其互相盤瓊脂糖凝膠的優點(1)

操作簡單，電泳速度快，樣品不需事先處理就可進行電泳。(2)瓊脂糖凝膠結構均勻，對樣品吸附極微，因此電泳圖譜清晰，分辨率高，重復性好。(3)瓊脂糖透明無紫外吸收，電泳過程和結果可直接用紫外監測及定量分析。(4)電泳后區帶易染色，樣品易洗脫，便于定量測定。制成干膜可長期保存。瓊脂糖凝膠的優點(1)操作簡單，電泳速度快，樣品不需事先處缺點：1.機械強度差，易破碎，濃度不能太低。2.易被細菌污染，不易保存，臨用前配制。3.瓊脂糖支持層上的區帶易于擴散，電泳后必須立即固定染色。4.與PAGE相比，分子篩作用小，區帶少。

缺點：影響瓊脂糖凝膠電泳的因素DNA分子的大小：實驗證明，DNA片段遷移距離與其分子量的對數成反比；瓊脂糖的濃度：一定大小的DNA片段在不同濃度的瓊脂凝膠中，電泳遷移率不相同；DNA分子的構型：不同構型的DNA在瓊脂糖凝膠中的電泳速度差別較大。影響瓊脂糖凝膠電泳的因素DNA分子的大小：實驗證明，DNA片瓊脂糖凝膠濃度與可分辨的DNA大小范圍的關系瓊脂糖凝膠濃度/(%)可分辨的線性DNA大小范圍/(kb)0.360~50.620~10.710~0.80.97~0.51.26~0.41.54~0.22.03~0.1瓊脂糖凝膠濃度與可分辨的DNA大小范圍的關系瓊脂糖凝膠濃度核酸構型與瓊脂糖凝膠電泳分離的關系在分子量相當的情況下，不同構型的DNA的移動速度次序如下：共價閉環DNA(covalentlyclosedcircular，簡稱cccDNA)＞直線DNA＞開環的雙鏈環狀DNA。核酸構型與瓊脂糖凝膠電泳分離的關系在分子量相當的情況下，不同質粒同一種質粒，由于其構象不同，電泳時的遷移率也不同。常會出現兩條或三條電泳帶一條是超螺旋質粒DNA的帶，移動速度最快；另一條是（松弛）螺旋狀質粒DNA帶（開環質粒DNA），移動速度最慢。有時因為有一些質粒DNA在提取過程中遭到損傷而線性化（線狀質粒DNA），其移動速度介于螺旋狀和超螺旋狀質粒DNA之間。質粒同一種質粒，由于其構象不同，電泳時的遷移率也不同。RelaxedcircleLinearizedformSuper-coiledform質粒RelaxedcircleLinearizedformS離子強度影響

電泳緩沖液的組成及其離子強度影響DNA的電泳遷移率。在沒有離子存在時(如誤用蒸餾水配制凝膠),電導率最小,DNA幾乎不移動；在高離子強度的緩沖液中(如誤加10×電泳緩沖液),則電導很高并明顯產熱,嚴重時會引起凝膠熔化或DNA變性。離子強度影響

電泳緩沖液的組成及其離子強度影響DNA的電泳緩沖液

常用三種緩沖液Tris-硼酸（TBE）Tris-乙酸（TAE）Tris-磷酸（TPE）Tris（三羥甲基氨基甲烷）：是一種生物堿，常用于生物實驗中配制各種pH值的緩沖液。1M的Tris溶液的pH值大約是10～11。EDTA可螯合二價陽離子，抑制DNA酶的活性，防止DNA降解。TBE與TPE：緩沖容量高，DNA分離效果好，但TPE在DNA片段回收時含磷酸鹽濃度高，容易使DNA沉淀，TAE：緩沖容量低，但價格較便宜。電泳緩沖液常用三種緩沖液EDTA乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraaceticacid），是一種有機化合物。它是一個六齒配體，可以螯合多種金屬離子。抑制DNA酶的活性，防止DNA降解。由于EDTA在水及酸中的溶解度很小，常用的為其二鈉鹽，也簡寫為EDTA。EDTA乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetr10×TBE緩沖液的配制配方Tris108克EDTA9.3克硼酸55克H2O至1000mlpH應為8.0～8.2臨用時用水稀至1×TBE（10倍稀釋）10×TBE緩沖液的配制配方上樣緩沖液

0.25％溴酚蘭；0.25％二甲苯青；30％甘油水溶液作用：①增加樣品密度，使其比重增加，以確保DNA均勻沉入加樣孔內②在電泳中形成肉眼可見的指

示帶，可預測核酸電泳的速度和位置③使樣品呈色，使加樣操作更方便上樣緩沖液0.25％溴酚蘭；0.25％二甲苯青；30％甘油膠濃度（%）溴酚藍二甲苯青0.61kb10.6kb2kb1.40.2kb1.6kb20.15kb

核酸電泳常用的指示劑：溴酚藍（bromophenolblue,Bb）；

二甲苯青（xylenecyanol,Xc），它攜帶的電荷量比溴酚藍少，在凝膠中的遷移率比溴酚藍慢。

膠濃度（%）溴酚藍二甲苯青0.61kb10.6kb2kb1.溴化乙錠（ethidiumbromide，EB）是一種熒光染料，EB分子可嵌入核酸雙鏈的堿基對之間，在紫外線激發下，發出桔紅色熒光可在凝膠電泳液中加入終濃度為0.5ug/ml的EB，有時亦可在電泳后，將凝膠浸入該濃度的溶液中染色10～15minEB染料有許多優點，如染色操作簡便、快速，靈敏度高，10ng或更少的DNA即可檢出。注意：EB被認為是一種強致癌物質，操作時應盡量小心，配置和使用EB時都應帶上手套，且注意不要把EB灑到桌面或地板上。核酸電泳的染色劑溴化乙錠（ethidiumbromide，EB）注意：EB由于插入了溴化乙錠分子，在紫外光照射下，瓊脂糖凝膠電泳中DNA的條帶便呈現出橘黃色熒光，易于鑒定。溴化乙錠染料的化學結構及其對DNA分子的插入作用由于插入了溴化乙錠分子，在紫外光照射下，瓊脂糖凝膠電泳中D銀染色銀染色液中的銀離子(Ag+)可與核酸形成穩定的復合物，然后用還原劑如甲醛使Ag+還原成銀顆粒，可把核酸電泳帶染成黑褐色。主要用于聚丙烯酰胺凝膠電泳染色，也用于瓊脂糖凝膠染色。靈敏度比EB高200倍，但銀染色后，DNA不宜回收銀染色聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺(acrylamide，Acr)和交聯劑N，N-甲叉雙丙烯酰胺(methylene-bisacrylamide，Bis)在加速劑和催化劑的作用下聚合交聯成三維網狀結構的凝膠。聚丙烯酰胺的優點：(1)凝膠透明，有彈性，機械性能好。(2)化學性能穩定，與被分離物不起化學反應。(3)對pH和溫度變化較穩定。(4)幾乎無電滲作用，樣品分離重復性好。(5)樣品不易擴散，且用量少，其靈敏度可達10-6g。(6)凝膠孔徑可調節，通過改變單體及交聯劑的濃度調節凝膠的孔徑。(7)分辨率高。聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳

（SDS）

SDS是陰離子去污劑，化學名稱十二烷基磺酸鈉

(sodiumdodecylsulfate)由于SDS帶有大量負電荷，當其與蛋白質結合時，所帶的負電荷大大超過了天然蛋白質原有的負電荷，因而消除或掩蓋了不同種類蛋白質間原有電荷的差異，使其均帶有相同密度的負電荷，因而可利用分子量差異將各種蛋白質分開。SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳

（SDS）SDS是陰瓊脂糖凝膠天然瓊脂課件夾在兩塊玻璃板之間的凝膠電泳緩沖液電泳緩沖液加在槽中的經SDS處理的樣品電源夾在兩塊玻璃板之間的凝膠電泳緩沖液電泳緩沖液加在槽垂直板電泳裝置加樣樣品遷移方向垂直板電泳裝置加樣樣品遷移方向電泳過程中分子遷移的規律，小分子走在前頭，大分子滯后。混合樣品帶孔膠按分子大小分離電泳方向電泳小分子大分子電泳過程中分子遷移的規律，小分子走在前頭，大分子滯后。混合樣染色方法蛋白質染色氨基黑10B：氨基黑10B是酸性染料。其磺酸基與蛋白質反應形成復合鹽，是最常見的蛋白質染料之一。考馬斯亮藍R250

考馬斯亮藍G250銀染色法染色方法蛋白質染色電泳后的凝膠經考馬斯亮籃染色、脫色后的凝膠照片電泳后的凝膠經考馬斯亮籃染色、脫色后的凝膠照片標準蛋白分子量未知蛋白在一定的凝膠濃度下，多肽鏈分子量的對數與多肽鏈的相對遷移率成線性關系，所以可以通過標準曲線求未知多肽鏈分子量。相對遷移率標準蛋白分子量未知蛋白在一定的凝膠濃度下，多肽鏈分子量的對數實驗目的掌握瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的原理和方法。實驗目的掌握瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的原理和方法。實驗原理DNA分子在瓊脂糖中泳動時有電荷效應和分子篩效應，但主要為分子篩效應。在pH值為8.0～8.3時，核酸分子堿基幾乎不解離，磷酸全部解離，核酸分子帶負電，在電泳時向正極移動。采用適當濃度的凝膠介質作為電泳支持物，在分子篩的作用下，使分子大小和構象不同的核酸分子泳動率出現較大的差異，從而達到分離核酸片段檢測其大小的目的。核酸分子中嵌入熒光染料（如EB）后，在紫外燈下可觀察到核酸片段所在的位置。實驗原理DNA分子在瓊脂糖中泳動時有電荷效應和分子篩效應，但實驗器材和試劑實驗器材：制膠模具，水平式電泳槽，電泳儀，微