生物測定分析方法如何進行驗證驗證驗證就是證明采用的方法適合于相應檢測要求，具有相當?shù)臏蚀_性和可靠性，進而可以達到控制產(chǎn)品質(zhì)量的目的。生物制品檢測方法

生物制品質(zhì)控中采用的方法包括理化分析方法和生物學測定方法。生物制品的理化分析方法驗證原則與化學藥品相同.本課件僅對生物測定方法驗證進行討論

生物測定方法酶反應試驗

是指在體外能促進酶分子的活化或本身具備酶的活性，通過底物的變化檢測酶活性。這類方法的變異相對較小，結(jié)果比較準確。試驗結(jié)果的變化范圍一般在5~20%之間。生物測定方法結(jié)合試驗

是基于產(chǎn)品與某種物質(zhì)的結(jié)合特性而設計的試驗，如免疫結(jié)合試驗。目前主要用于生物制品的鑒別。這類方法的變異也相對較小。*結(jié)合試驗中測定的分子不一定都具有生物活性一般講結(jié)合試驗結(jié)果的變化范圍在5~20%之間。生物測定方法細胞測定試驗是指產(chǎn)品可以誘導細胞產(chǎn)生可測定的應答，如細胞增殖、聚集、分化、死亡、遷移或產(chǎn)生特定的化學物質(zhì)等。細胞測定試驗一般能較好地反映制品的生物學活性，常用于各種生物制品的活性（效力）測定。相對而言,方法的變異較大。與使用傳代細胞相比，使用原代細胞的方法變異更大。通常細胞測定的結(jié)果變化在50%以上。（30%）*精心操作以保證試驗結(jié)果的一致性生物測定方法動物試驗

是指以整體動物為試驗材料檢測制品生物學活性（或效力）的試驗方法。由于動物實驗的成本高、周期長和變異大，所以一般僅用于成品檢定。更復雜并且包括動物的飼養(yǎng)、管理和維護。一般測定一個藥物的生物活性是通過與已知的標準品或未處理（未免疫）的動物進行比較而得。方法的變異一般相對較大,通常動物試驗的測定結(jié)果變化在50%以上。生物測定方法來源標準方法(法定方法)非標準方法(非法定方法,內(nèi)控方法)原則上，對于各類方法均需進行驗證，但依方法來源的不同對于驗證的要求有所不同。生物測定法驗證目前我們的成品分析方法均為法定方法.在被確定為法定方法前已經(jīng)過了適當?shù)尿炞C。企業(yè)使用前需進行轉(zhuǎn)移性驗證,以證實在企業(yè)實驗室條件與實際的使用條件下該方法也是適用的。專屬性如何驗證生物學測定方法的專屬性與測定方法及產(chǎn)品組成密切相關，所以應首先從測試原理、測試用材料和供試品組成等方面分析方法的專屬性。CHO細胞殘留，采用ELISA法，確認抗體的特異性及目標蛋白的非干擾性。如何進行？采用CHO蛋白標準品作為樣品測試。（標準品濃度應選擇質(zhì)量標準限度左右的濃度）陽性結(jié)果選用產(chǎn)品（目標蛋白）作為樣品測試。（濃度應選擇日常測試中的最大濃度，即范圍的上限）陰性結(jié)果用產(chǎn)品加CHO蛋白標準品測試。應陽性結(jié)果。應有重現(xiàn)性，至少3個測試結(jié)果。專屬性如何驗證SDS電泳純度檢測目的，目標蛋白的純度驗證方法：采用37度或更高溫度將產(chǎn)品降解，獲得產(chǎn)品二聚體雜質(zhì)與未降解的產(chǎn)品同時做實驗，對照，降解后產(chǎn)品檢測結(jié)果明顯出現(xiàn)雜質(zhì)帶。此外，需考慮產(chǎn)品中可能存在的小分子蛋白雜質(zhì)。應有重現(xiàn)性，至少3次檢測結(jié)果中間精密度如何驗證步驟：準備3個不同稀釋度的樣品（測量范圍內(nèi)的高、中、低濃度）在一組3次試驗中對每個稀釋度重復測定3次。測定不同工作日之間的變化測定不同批號的試驗樣品間的變化測定不同實驗員間的變化等等計算每一試驗每一濃度測定的平均值和標準偏差計算試驗間每一濃度的變異系數(shù)檢測限如何驗證對于生物測定，LOD就是能產(chǎn)生比空白對照液強的反饋的最低試樣濃度。通常認為反饋是空白對照標準偏差的2-3倍時為較為滿意的測定限度。下述以免疫測定OD值為例：檢測限如何驗證-例子目的：確定比空白對照高3個標準偏差的值步驟：配制適宜濃度的標準樣品配制空白對照液按照SOP進行至少3次測定，并至少做兩個平行測定樣品和空白的OD值計算空白對照間的標準偏差LOD=3*空白的標準