第三次實驗安徽醫科大學微生物學教研室2012.03合肥

醫學微生物學實驗三(一)示教1、多媒體①噬菌體溶菌現象②炭疽芽胞桿菌串珠實驗2、模型:變形桿菌遷徙生長現象(二)操作1、紫外線殺菌作用：菌種為金葡菌和大腸埃希菌(兩人一碟,四人一組)2、膿標本的分離培養(一):混合金葡菌和大腸埃希菌標本在普通培養基上四區劃線分離單菌落并做革蘭染色實驗三噬菌體溶菌現象示教噬菌體(bacteriophage,phage)是感染細菌、真菌、放線菌或螺旋體等微生物的病毒的總稱，因部分能引起宿主菌的裂解，故稱為噬菌體。在營養瓊脂平皿上培養A.普通大腸桿菌+噬菌體結果顯示僅B平皿上出噬斑現象AB噬菌體的噬斑現象

在營養瓊脂平皿上培養的變形桿菌遷移狀生長A.變形桿菌在營養瓊脂上呈現叢集樣生長B.變形桿菌在含有1%石炭酸營養瓊脂上的呈點狀生長（營養瓊脂，18h，37℃）AB細菌遷移狀生長現象

串珠試驗示教

菌種：炭疽桿菌炭疽桿菌（Bacillusanthraci）屬于需氧芽孢桿菌屬，菌體粗大，兩端平截或凹陷，是致病菌中最大的細菌。排列似竹節狀，無鞭毛，無動力，革蘭氏染色陽性。菌落呈毛玻璃狀，邊緣不整齊，呈卷發狀。能引起羊、牛、馬等動物及人類的人畜共患急性、熱性、敗血性傳染病。表現為脾臟顯著腫大；皮下及漿膜下結締組織出血性浸潤；血液凝固不良，呈煤焦油樣。炭疽桿菌曾被帝國主義作為致死戰劑之一。平時，牧民、農民、皮毛和屠宰工作者易受感染。利用青霉素處理炭疽桿菌，可以破壞細菌的細胞壁中的肽聚糖，所以造成細菌內部的滲透壓大，造成細菌膨脹變圓，呈串珠狀排列。此現象是炭疽芽孢桿菌所特有的，具有鑒別意義。AB革蘭陽性需氧芽胞桿菌炭疽芽胞桿菌A.炭疽芽胞桿菌純培養的鏡下形態(革蘭染色)B.炭疽芽胞桿菌獸血涂片的鏡下形態(瑞氏染色)炭疽桿菌革蘭染色青霉素處理炭疽桿菌形成的串珠現象菌種：金葡菌、大腸埃希菌（二人一碟、四人一組）方法：密集劃線步驟：用接種環（無菌）取細菌培養物在無菌的普通瓊脂平板上做密集劃線后置于紫外燈下，將皿蓋蓋一半，接受紫外線照射30min；然后倒置溫箱培養18~24h后，觀察結果。紫外線殺菌作用操作注意事項：

1、無菌操作

2、密集劃線使細菌充分較均勻地分散在培養基表面

3、在平皿背面作好標記（標本名稱，姓名，日期，班級)，再進行紫外線照射和培養

.12341圖示膿標本的分離培養（一）

四區劃線分離單菌落實驗目的

1、掌握細菌分離培養的方法

2、掌握細菌單個菌落的觀察

3、熟悉混合標本的分離鑒定程序實驗原理將待檢材料進行分離培養，常用的分離接種法是瓊脂板分區劃線法，是借劃線將混雜的細菌在瓊脂平板上分開來，使個別的細菌能固定在某一點，經培養繁殖后形成單個菌落，以達到分離獲得純種細菌，再進一步鑒定的目的。今天實驗主要使用的是分區劃線法中的四區劃線法。

1、膿標本

2、培養基（普通瓊脂平皿），革蘭染色液一套

3、生理鹽水、載玻片、接種環、酒精燈等實驗材料

1，四區劃線：膿標本

接種環燒灼滅菌后取標本涂布與平板1區內作數次Z形劃線，再在2、3、4區依次Z形劃線（注意：劃完一區后應燒掉環上的殘菌）。每一區的劃線與上區交叉接觸，每區保持一定距離，密而不重，如此后一區菌量少于前一區，逐漸減少以至劃線上的細菌呈單個菌分布。37℃溫箱倒置培養18～24小時。并作革蘭染色觀察混合細菌的種類、染色性和形態。實驗方法12341、整個操作在酒精燈火焰邊進行。2、接種環和培養皿呈30~45度角，用力均勻，不要劃破平皿。3、倒置培養，37℃溫箱培養18~24h。4、在皿底做上標記(標本名稱，姓名，班級，日期）（通常為1,2區）。注意事項2，革蘭染色：膿標本，觀察混合細菌的種類、染色性和形態注意：上次革蘭染色實驗所使用的是菌苔，所以在涂片前需加生理鹽水，而本實驗所使用的是菌液，在涂片前不需加生理鹽水，且由于本次