關于混合菌種接種與接種比例對酶活的影響第1頁，共18頁，2022年，5月20日，6點45分，星期五實驗前言纖維素是自然界中合成量最大的有機物之一，約占植物秸稈的30%～50%，但是利用率較低，核心問題是纖維素酶的活性低。纖維素酶是具有不用酶活性的酶復合物，主要包括外切纖維素酶（C1酶）、內切纖維素酶（Cx酶），β-葡萄糖苷酶（CB酶）。當3中酶的活性比例適當，就能完成對纖維素的降解。已知綠色木霉和黑曲霉的上述3種作用于纖維素的位點不同，對其降解程度也不同。用混合發酵可充分發揮各酶之間的協同作用，提高酶活性從而提高對纖維素的利用率。第2頁，共18頁，2022年，5月20日，6點45分，星期五菌種簡介黑曲霉：絲孢綱，絲孢目，叢梗孢科，曲霉屬真菌廣泛分布。可生產淀粉酶、酸性蛋白酶、纖維素酶、果膠酶、葡萄糖氧化酶、檸檬酸、葡糖酸和沒食子酸等，是重要的發酵工業菌種。生長適溫37℃，最低相對濕度為88%，能引致水分較高的糧食霉變和其他工業器材的霉變。

綠色木霉：絲孢綱、絲孢目，粘孢菌類，是一種普遍存在的真菌。可產生纖維素酶、幾丁質酶、木聚糖酶等，是產纖維素酶活性最高的菌株之一。濕度生長適溫為20－28℃，營養生長的相對濕度要求92%以上。第3頁，共18頁，2022年，5月20日，6點45分，星期五實驗流程介紹實驗思路

實驗步驟Step1

Step2Step3實驗數據的處理列表法

作圖法預期實驗結果實驗結果分析討論第4頁，共18頁，2022年，5月20日，6點45分，星期五Logo控制變量法：本實驗室驗證與探究混合菌種的接種與接種比例對酶活性的影響，其他所有無關變量（例如:溫度，濕度和培養時間）都應相同且適宜。實驗思路1設置對照法：一是將綠色木霉，黑曲霉單菌株發酵的酶活性與混合菌株發酵的酶活性進行比較；而是在保持接種菌株總量一定的前提下，改變各組分所比例，設置多個對照組相互對照。2做圖法：將實驗數據用圖像表示出來，令實驗結果更清楚明白，便于得出實驗結論。3第5頁，共18頁，2022年，5月20日，6點45分，星期五LogoCONTAIN實驗步驟

Step2：菌種孢子的培養

Step3：粗酶液的制備與酶活性的測定

Step1:培養基的配置與菌種孢子懸濁液的制取

第6頁，共18頁，2022年，5月20日，6點45分，星期五Step1:培養基的配置：斜面培養基（馬鈴薯，葡萄糖，瓊脂，水等）固體發酵培養基（稻草秸稈粉，水等）孢子懸濁液的制取：在2個斜面培養基上分別在適宜條件下培養綠色木霉與黑曲霉菌株2天，并制得一定且相同濃度的孢子懸濁液。第7頁，共18頁，2022年，5月20日，6點45分，星期五黑曲霉的孢子孢子頭狀如"菊花"第8頁，共18頁，2022年，5月20日，6點45分，星期五綠色木霉的孢子第9頁，共18頁，2022年，5月20日，6點45分，星期五LogoCONTAIN實驗步驟

Step2：菌種孢子的培養

Step3：粗酶液的制備與酶活性的測定

Step1:培養基的配置與菌種孢子懸濁液的制取

第10頁，共18頁，2022年，5月20日，6點45分，星期五Step2:菌種孢子的培養：取等體積兩種霉菌的孢子培養液V分別接種于2個相同的固體培養基中使混合孢子培養液的體積也為V，改變綠色木霉與黑曲霉孢子培養液的比例為1：9，2：8，3：7，4：6，5：5，6：4,7：3,8：2,9：1，分別接種于9個相同的固體培養基中將上述11個培養基置于相同且適宜的環境中培養3天，每天翻曲一次第11頁，共18頁，2022年，5月20日，6點45分，星期五PICTURES綠色木霉第12頁，共18頁，2022年，5月20日，6點45分，星期五PICTURES黑曲霉第13頁，共18頁，2022年，5月20日，6點45分，星期五LogoCONTAIN實驗步驟

Step2：菌種孢子的培養

Step3：粗酶液的制備與酶活性的測定

Step1:培養基的配置與菌種孢子懸濁液的制取

第14頁，共18頁，2022年，5月20日，6點45分，星期五Step3：粗酶液的制備：在固體發酵產物中加入6倍的檸檬酸緩沖液，經過搖床，離心，過濾，靜置后，其上清液即為粗酶液，放于4‘C冰箱保存備用酶活性的測定：采用一定的方法對11組粗酶液進行CMC酶活性測定，FPA酶活性測定，β-葡萄糖苷酶活性測定，繪制表格，記錄實驗數據（具體方法可以參考《時珍國醫國藥》2010年第21卷第12期3330至3331頁）第15頁，共18頁，2022年，5月20日，6點45分，星期五實驗數據的處理1：單菌株與混合菌株酶活性的比較——柱狀圖法以菌株種類為橫坐標，酶活性為縱坐標；觀察比較不同菌株同類酶的圖柱高度判斷其酶活性的大小

2：混合菌株接種比例對酶活性的影響——折線圖法以酶比為橫坐標，酶活性為縱坐標；觀察折線走向判斷各種酶的活性變化趨勢，并找出最佳接種比例第16頁，共18頁，2022年，5月20日，6點45分，星期五預期實驗結果混合菌發酵產生的各酶活性均高于單