2012.09第二節(jié)噬噬菌體載載體2噬菌體載體體（phagevectors）一、噬菌體載載體二、單鏈?zhǔn)墒删w載體體三、噬菌粒粒載體四、柯斯質(zhì)質(zhì)粒載體一、噬菌體載載體噬菌體是一一類細(xì)菌病病毒（Bacteriophage）（一）噬菌菌體的一般般特性結(jié)構(gòu)：蛋白質(zhì)外殼殼內(nèi)包裹著著DNA（雙鏈、單單鏈、線性性、環(huán)狀等等）。T4Bacteriophage71.噬菌體的生生物學(xué)特性性溶菌周期指指噬菌體將將DNA注注入寄主細(xì)細(xì)胞后很快快環(huán)化，然然后進(jìn)行自自我復(fù)制、、蛋白衣殼殼合成和新新噬菌體顆顆粒的組裝裝，最后使使寄主細(xì)胞胞破裂而釋釋放出大量量的子代噬噬菌體。溶源周期中中，注入寄寄主細(xì)胞的的噬菌體DNA是整整合到寄主主細(xì)胞染色色體上并可可以隨著寄寄主細(xì)胞的的分裂而進(jìn)進(jìn)行復(fù)制。。整合了一套套完整的噬噬菌體基因因組的細(xì)菌菌被稱為溶溶源性細(xì)菌菌。在溶源源性細(xì)菌內(nèi)內(nèi)存在的整整合或非整整合的噬菌菌體DNA被稱為原原噬菌體。。噬菌體溫和噬菌體體，具有溶溶源生長(zhǎng)周周期和溶菌菌生長(zhǎng)周期期烈性噬菌體體,只具有溶菌菌生長(zhǎng)周期期分為兩種：：（1）溶溶菌周期：：噬菌體的生生活周期烈性噬菌體體（virulentphage)（2）溶溶原周期：：感染細(xì)菌后后，將自己己的DNA整合到細(xì)細(xì)菌的染色色體DNA中。形成成這一過(guò)程程稱為溶源源化溫和噬菌體體（temperatephage)2、噬菌體的結(jié)結(jié)構(gòu)和其核核酸類型：結(jié)構(gòu)：無(wú)尾部結(jié)構(gòu)構(gòu)的二十面面體型、具尾部結(jié)構(gòu)構(gòu)的二十面面體型、線狀體型核酸類型：：最常見(jiàn)的的是雙鏈線線性DNA、雙鏈環(huán)形DNA、單鏈環(huán)形DNA、單鏈線形DNA、單鏈RNA。3、λ-DNA的物物理圖譜λ-DNA為線狀雙雙鏈DNA分子，兩兩端各有一一個(gè)12核核苷酸的互互補(bǔ)單鏈（（粘性末端端）GGGCGGCGACCT,CCCGCCGCTGGA，稱為cos區(qū)，，全長(zhǎng)48.5kb。特點(diǎn)點(diǎn)是是功功能能相相近近的的基基因因在在基基因因組組中中聚聚集集在在一一起起。。λ噬噬菌菌體體組成成特特點(diǎn)點(diǎn)：雙鏈鏈線線狀狀DNA分分子子，，全長(zhǎng)長(zhǎng)50kb，，含65個(gè)個(gè)基基因因，，在其其分分子子兩兩端端各各含含有有12個(gè)個(gè)堿堿基基的的互互補(bǔ)補(bǔ)單單鏈鏈，，是是天天然然的的粘粘性性末末端端，，被被稱稱為為COS位位點(diǎn)點(diǎn)。。λ噬菌體體感染細(xì)細(xì)菌后的的溶菌性性生長(zhǎng)和和溶源性性生長(zhǎng)溶菌性生生長(zhǎng)（lyticpathway）噬菌體感感染細(xì)菌菌后，借借助其2個(gè)COS位點(diǎn)點(diǎn)互補(bǔ)成成環(huán)，在在宿主菌菌體內(nèi)連連續(xù)復(fù)制制，合成成大量基基因產(chǎn)物物，進(jìn)而而裝配成成噬菌體體顆粒，，裂解宿宿主菌，，釋放出出來(lái)的噬噬菌體又又可感染染其他細(xì)細(xì)菌。溶源性生生長(zhǎng)(lysogenicpathway)噬菌體感感染細(xì)菌菌后，可可將自身身DNA整合到到細(xì)菌的的染色體體中去，，與之一一起復(fù)制制，并遺遺傳給子子代細(xì)胞胞，宿主主細(xì)胞不不被裂解解。噬菌體AWBDEFZJattxisNclcroOPQSR結(jié)構(gòu)區(qū)重組區(qū)調(diào)控區(qū)裂解區(qū)cos位位點(diǎn)cos位點(diǎn)ARAREcoRI目的基因因EcoRIEcoRI插入型置換型AWBCDEFZUVGHMLKIJb2cIcrocIIOPQSRattintxisgamredcIIINCOSCOS頭部基因因尾尾部基因因功功能不不明區(qū)溶源化重重組早早期期控制阻阻遏遏DNA合成溶溶菌生長(zhǎng)非必必須區(qū)段段cI基因因：溶源源過(guò)程控控制基因因。λ噬菌體體的基因因組結(jié)構(gòu)構(gòu)5‘-CGGGGCGGCGACCTCG-3’’3’-GCCCCGCCGCTGGAGC-5’’CleavageLigation(duringpackaging)(afterinfection)GGGCGGGCGACCTCG-3’5’-CG+GC-5’’3’-GCCCCGCCGCTGGAThephagecosendsCircularformLinearform（二）λλ噬菌體體載體的的主要類類型（1）插入式載載體一種只具具有一個(gè)個(gè)可供外外源DNA插入入的克隆隆位點(diǎn)的的派派生載載體。（2）替替換型型載體（（取代型型載體））具有成對(duì)對(duì)的克隆隆位點(diǎn)，，在這兩兩個(gè)位位點(diǎn)之間間的λDNA區(qū)段可可以被外外源插入入的DNA片段段所取代代。（3）凱凱倫倫噬菌體體載體（2）λλ替換換型載體體（取代代型載體體）外源DNA取代代噬菌體體染色體體中對(duì)于于噬菌體體的感染染和復(fù)制制非必要要的片段段(~20kb)高感染效效率(109轉(zhuǎn)化株/ug載載體DNA,比比質(zhì)粒高高100-倍)e.g.EMBL3,DASH替換式載載體野生型噬噬菌體染染色體的的中段對(duì)對(duì)于噬菌菌體的感感染和復(fù)復(fù)制是非非必要的的，外源源DNA可以取取代這一一片段，，例如Charon4A、、λEMBL3/4、、Charon40等等載體，，這些載載體是用用Lac5（（乳糖操操縱子的的大部分分系列，，包括完完整的LacZ）替替換入噬噬菌體的的中間區(qū)區(qū)段，同同時(shí)將Lac5作為為選擇標(biāo)標(biāo)記，使使用時(shí)用用EcoRI水水解，去去掉中間間的片段段，再與與欲克隆隆片段在在體外進(jìn)進(jìn)行重組組、包裝裝。而后后，感染染E.coli使之在在E.coli內(nèi)繁殖殖，并并裂解解E.coli，形成成空斑斑。換型噬噬菌體體λ是是使用用最廣廣泛的的載體體。（3））凱倫倫噬菌菌體載載體既有插插入型型；又又有替替換型型在基因因工程程實(shí)驗(yàn)驗(yàn)中的的用途途十分分廣泛泛承受外外源DNA的能能力：：幾個(gè)個(gè)kb到23kb（左右右臂連連接））（（三段段自身身連接接）（（插插入片片段））（三））體外外包裝裝λ噬菌菌體DNA體外外重組組后，，一般般必須須經(jīng)過(guò)過(guò)體外外包裝裝，然然后以以噬菌菌體感感染的的方式式將重重組DNA導(dǎo)入入E.coli細(xì)胞內(nèi)內(nèi)。這這是因因?yàn)橐砸愿腥救痉绞绞綄?dǎo)入入細(xì)胞胞的頻頻率可可達(dá)106~108/μgDNA，，而以以轉(zhuǎn)染染（translation）的的方式式導(dǎo)入入的頻頻率僅僅為103~105/μμgDNA。λ噬菌菌體的的包裝裝限制制為野野生噬噬菌體體DNA（（約48.5kb）的的75%~105%。由于λ噬菌體包裝時(shí)，當(dāng)DNA的長(zhǎng)度短于野生型的78%或超過(guò)105%時(shí)，噬菌體的活性就急劇下降。因此只包裝它的野生型DNA（48.5KB）的75%~105%左右的ＤＮＡ，要求λ載體DNA和外源DNA長(zhǎng)度之和在39～53kb之間。插入式載體可攜帶的外源ＤＮＡ片段較替換式為小。

◆λλ噬菌菌體載載體可可接受受15kb-23kb的的外源源DNA片片段，，它既既可作作為克克隆載載體，，也可可作為為表達(dá)達(dá)載體體，廣廣泛用用于各各類基基因庫(kù)庫(kù)的構(gòu)構(gòu)建。。篩選標(biāo)標(biāo)記：：藍(lán)白斑(LacZ)、噬菌斑等。重組噬菌體體的分子量必必須在野生型噬菌體分子量大小小的75%至105%之間。用途：b.用于構(gòu)建基基因組或cDNA文文庫(kù)。c.用于抗體庫(kù)庫(kù)或隨機(jī)肽肽庫(kù)的構(gòu)建建。a.用作一般的的克隆載體體。（四）λλ-DNA的抽提大腸桿菌培培養(yǎng)至對(duì)數(shù)數(shù)生長(zhǎng)期2)加入入λ-噬菌菌體或重組組λ-噬菌菌體懸浮液液，37℃℃培養(yǎng)1hr3)用新新鮮培養(yǎng)稀稀釋，繼續(xù)續(xù)培養(yǎng)4-12hr4)高高速速離離心心，，沉沉淀淀噬噬菌菌體體5)苯苯酚酚抽抽提提，，釋釋放放λλ-DNA6)乙乙醇醇或或異異丙丙醇醇沉沉淀淀DNA（五五））λλ-DNA作作為為載載體體的的優(yōu)優(yōu)點(diǎn)點(diǎn)體外外包包裝裝病病毒毒顆顆粒粒，，高高效效感感染染E.coli2)裝裝載載外外源源能能力力為為25kb，，大大于于質(zhì)質(zhì)粒粒3)篩篩選選方方便便4)重重組組λλ-DNA分分子子提提取取容容易易二、、單鏈鏈?zhǔn)墒删w體載載體體（一一））單鏈鏈?zhǔn)墒删w體載載體體M13、f1、fd噬菌菌體體單鏈鏈環(huán)環(huán)狀狀DNA的絲絲狀狀大大腸腸桿桿菌菌噬噬菌菌體體：：M13噬菌菌體體單鏈鏈DNA噬噬菌菌體體載載體體M13、、f1、、fd。。優(yōu)越越性性：：1.單單鏈鏈DNA噬噬菌菌體體的的復(fù)復(fù)制制，，是是以以雙雙鏈鏈環(huán)環(huán)形形的的DNA為為媒媒介介的的，，這這種種復(fù)復(fù)制制形形式式的的DNA簡(jiǎn)簡(jiǎn)稱稱RFDNA；；2.不不論論是是RFDNA還還是是ssDNA都都能能感感染染大大腸腸桿桿菌菌；；3.單單鏈鏈DNA噬噬菌菌體體顆顆粒粒的的大大小小，，是是受受其其DNA的的多多制制約約的的，，不不存存在在包包裝裝限限制制問(wèn)問(wèn)題題；；4.容容易易測(cè)測(cè)定定外外源源DNA片片斷斷的的插插入入取取向向；；5.可可產(chǎn)產(chǎn)生生含含外外源源片片斷斷的的單單鏈鏈DNA分分子子。。3.M13噬噬菌菌體體噬菌菌體體正鏈鏈復(fù)制制復(fù)制制型型DNA經(jīng)pII蛋蛋白白造缺缺口口3′′5′′經(jīng)pII蛋白剪切釋出單鏈DNA(正鏈)進(jìn)入下一循環(huán)5′3′3′5′滾環(huán)復(fù)制在細(xì)菌內(nèi)的復(fù)復(fù)制模式圖M13噬菌體體幾個(gè)重要特特點(diǎn)：1.M13噬菌體不溶解宿主細(xì)胞，只只是降低宿主細(xì)胞的生生長(zhǎng)速度。2.M13噬菌體能能以單鏈和雙鏈兩種方式存在在，因此可以以用感染(經(jīng)包裝的單單鏈DNA)和轉(zhuǎn)化(雙鏈DNA)。3.克隆的的外源基因片片段不宜大于于1000bp。M13噬菌體體載體M13是一種種含單鍵（+）DNA（（ssDNA）的絲狀大大腸桿菌噬菌菌體，其基因因組大小為6.4kb。。這類載體主主要用來(lái)獲得得大量的單鏈鏈ＤＮＡ片段段，這種單鏈鏈ＤＮＡ片段段在遺傳學(xué)研研究中主要用用來(lái)測(cè)定ＤＮＮＡ序列（sanger雙脫氧法））、基因的定定點(diǎn)突變研究究、異源雙鏈鏈DNA的分分析等。M13噬菌體體的特點(diǎn)感染Ecoli后，在宿主細(xì)細(xì)胞內(nèi)會(huì)形成成雙鏈的復(fù)制制型ＤＮＡ（（replicationformDNA,RFDNA））。可以象質(zhì)質(zhì)粒ＤＮＡ那那樣在體外進(jìn)進(jìn)行純化和操操作。成熟的噬菌體體顆粒僅能感感染E.coli的F+細(xì)胞，這是因因?yàn)檫@種噬菌菌體的感染位位點(diǎn)在性散毛毛上。但是無(wú)無(wú)論是RFDNA或ssDNA都能轉(zhuǎn)染E.coli的F+或F-細(xì)胞。噬菌體顆粒的的大小是受其其ＤＮＡ的大大小制約的，，這一點(diǎn)正好好與λ噬菌體體相反。所以以M13噬菌菌體并不存在在包裝限制的的問(wèn)題。M13單鏈DNA噬菌體體的生命周期期RFDNAPhageM13replicationinthehostcell:+RNApolDNApolIII±RFNickedbygene2protein+ss-Rollingcirclereplication,thencutandligateCoatedwithgene5proteinGene5proteinisreplacedbygene8proteinect.LinearM13phagereleasedfromthecell.（二二））M13載載體體的的構(gòu)構(gòu)建建（1））克克隆隆區(qū)區(qū)域域的的選選定定①基基因因間間隔隔區(qū)區(qū)（（intergenicregion,IG區(qū)區(qū)））J.Messing證證明明，，IG區(qū)區(qū)存存在在M13的的復(fù)制制起起點(diǎn)點(diǎn)，但但可可以以插插入入外外源源DNA而而不不影影響響M13噬噬菌菌體體的的活活力力。。在IG區(qū)區(qū)內(nèi)內(nèi)插插入入一一個(gè)個(gè)大大腸腸桿桿菌菌的的LacZ’’（-肽肽序序列列)。。利用用-肽肽序序列列中中的的三三個(gè)個(gè)單單一一酶酶切切位位點(diǎn)點(diǎn)（（BglII、、AvaII和和PvuI））。。(2)加加入入酶酶切切位位點(diǎn)點(diǎn)①在在IG區(qū)區(qū)內(nèi)內(nèi)加加入入單單一一內(nèi)內(nèi)切切酶酶位位點(diǎn)點(diǎn)第一一個(gè)個(gè)M13載載體體：：M13mp1：：M13RFBsuI不完完全全消消化化各種種長(zhǎng)長(zhǎng)度度的的線線性性片片斷斷（其其中中應(yīng)應(yīng)有有只只在在IG上上切切開(kāi)開(kāi)的的線線性性全全長(zhǎng)長(zhǎng)M13））E.colilac基因因的的HindII片斷斷(lacI、lacP、lacO、lacZ’’）連接接M13mp1JM101宿主主只有有在在IG區(qū)插插入入lacZ’’才能能存存活活并并在在Xgal上出出現(xiàn)現(xiàn)互互補(bǔ)補(bǔ)的的藍(lán)藍(lán)噬噬菌菌斑斑（三三））M13系系列列載載體體的的優(yōu)優(yōu)點(diǎn)點(diǎn)1））有MCS，，便便于于克克隆隆不不同同的的酶酶切切片片段段2））Xgal顯顯色色反反應(yīng)應(yīng)，，可可供供直直接接選選擇擇3））無(wú)無(wú)包包裝裝限限制制，，克克隆隆能能力力大大4））可可以以克克隆隆雙雙鏈鏈DNA分分子子中中的的每每一一條條鏈鏈子代代M13噬噬菌菌體體中中包包含含的的是是單單鏈鏈+DNA。。（四四））M13噬噬菌菌體體用用途途：1））DNA序序列列測(cè)測(cè)定定；；2）制制備單單鏈DNA探針針；3）用用于定定點(diǎn)突變變的研究究。M13載載體具有多克克隆位點(diǎn)點(diǎn)(MCS)，，方便克克隆。許許多M13載體體的多克克隆位點(diǎn)點(diǎn)與質(zhì)粒粒載體pUC序序列的多多克隆位位點(diǎn)是相相同的，，在克隆隆位點(diǎn)選選擇上更更為方便便。可以定向向地克隆隆DNA片段，，克隆在在M13RFDNA分子子上的雙雙鏈DNA片段段，到了了子代噬噬菌體便便成了單單鏈的形形式。所所以如果果要同時(shí)時(shí)分離ＤＤＮＡ分分子中的的雙鏈，，則需要要兩種獨(dú)獨(dú)立的克克隆。根根據(jù)M13的生生物學(xué)特特性知道道，M13子代代噬菌體體中總是是只含有有（＋））鏈，所所以M13載體體克隆的的外源DNA片片段在子子代噬菌菌體中究究竟是含含有DNA分子子中的哪哪條鏈，，則完全全取決于于外源ＤＤＮＡ克克隆時(shí)的的取向。。這樣一一來(lái)，為為分別分分離外源源ＤＮＡＡ分子的的兩條鏈鏈帶來(lái)一一定的麻麻煩，解解決這一一問(wèn)題的的一個(gè)行行之有效效的方法法就是定定向克隆隆技術(shù)。。M13克克隆載體體分子結(jié)結(jié)構(gòu)圖三、噬菌菌粒載體體噬菌粒載載體由質(zhì)粒載載體和單單鏈?zhǔn)删w載體體結(jié)合而而成的新新型的載載體系列列。它具有質(zhì)質(zhì)粒的復(fù)復(fù)制起點(diǎn)點(diǎn)、選擇擇性標(biāo)記記、多克克隆位點(diǎn)點(diǎn)等，方方便DNA的操操作，可可在細(xì)胞胞內(nèi)穩(wěn)定定存在；；又具有有單鏈?zhǔn)墒删w的的復(fù)制起起點(diǎn)，在在輔助噬噬菌體的的存在下下，可進(jìn)進(jìn)行噬菌菌體的繁繁殖，產(chǎn)產(chǎn)生單鏈?zhǔn)删］d體（（phagemidvectors）由質(zhì)粒載體與單鏈?zhǔn)删w載載體的復(fù)制起點(diǎn)結(jié)結(jié)合而成的新新型載體系列列。MCS噬菌體ori質(zhì)粒oriAmprlacZ’lacI約3000bp（比M13小）②克隆能力大大能插入10kb的外源DNA。③兩種復(fù)制形形式①分子量小1、噬菌粒載載體的特點(diǎn)既具有質(zhì)粒的的復(fù)制起點(diǎn)，，又具有噬菌菌體的復(fù)制起起點(diǎn)。既能在大腸桿桿菌中以質(zhì)粒粒的形式雙鏈鏈復(fù)制，又能能在噬菌體內(nèi)內(nèi)進(jìn)行單鏈復(fù)復(fù)制。常用的噬菌菌粒載體pUC118和p1.具有較小分子量的共價(jià)、閉合、環(huán)形的基因組DNA，可克隆10kb的外源DNA片段，并易于進(jìn)行分離與操作；2.編碼一個(gè)ampr基因作為選擇記號(hào)，因此只有攜帶pUC118或pUC119噬菌粒載體的大腸桿菌轉(zhuǎn)化子細(xì)胞，才能夠在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，便于轉(zhuǎn)化子的選擇；3.拷貝數(shù)含量高，每個(gè)寄主可高達(dá)500個(gè)，所以只要用少量的大腸桿菌細(xì)胞培養(yǎng)物，便可制備出大量的載體DNA；4.存在著一個(gè)多克隆位點(diǎn)區(qū)，因此許多種不同類型的外源DNA片段，不經(jīng)修飾便可直接插入到載體分子上；5.由于于多克隆位位點(diǎn)區(qū)阻斷斷了大腸桿桿菌lacZ基因的的5’-端端編碼區(qū)，，可按照IPTG組組織化學(xué)顯顯色反應(yīng)試試驗(yàn)，篩選選重組子；；6.lacZ基因因是置于lac啟動(dòng)動(dòng)子的控制制之下，這這樣插入的的外源基因因便會(huì)以融融合蛋白質(zhì)質(zhì)的形式表表達(dá)；7.含有質(zhì)質(zhì)粒的復(fù)制起8.帶有一個(gè)M13噬菌體的復(fù)制起點(diǎn)，在有輔助噬菌體感染的寄主細(xì)胞中，可以合成出單DNA拷貝，并包裝成噬菌體顆分泌到培養(yǎng)基中；9.在pUC118和和pUC119這兩個(gè)載載體中，多克克隆位點(diǎn)區(qū)的的核苷酸序列列取向是彼此此相反的，于于是它們當(dāng)中中的一個(gè)可轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄克隆基因因的正鏈DNA，另一個(gè)個(gè)則可轉(zhuǎn)錄出出負(fù)鏈DNA；10.可以以直接對(duì)克隆隆的DNA片片斷進(jìn)行核苷苷酸的序列測(cè)測(cè)定，免去了了從質(zhì)粒載體體到噬菌體的的這一煩瑣的的亞克隆步驟驟。pBluescript噬菌粒載體體基本結(jié)構(gòu)：1.在多克克隆位點(diǎn)的兩兩側(cè)，有一對(duì)對(duì)T3和T7噬菌體的啟啟動(dòng)子，可以以定向指導(dǎo)外外源基因的轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄活動(dòng)；2.同3.編碼有一個(gè)胺芐青霉素抗性基因，供作轉(zhuǎn)化子記號(hào)；4.含有l(wèi)acZ基因，可用Xgal-IPTG組織顯色反應(yīng)法篩選噬菌粒載體。T7T3用于體體外轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄3PCR產(chǎn)物物克隆隆載體體T載載體體pCR系列列載體體Invitrogen公公司開(kāi)開(kāi)發(fā)的的線性性噬菌菌粒粒載載體體。。①結(jié)結(jié)構(gòu)構(gòu)pUC的的質(zhì)質(zhì)粒粒部部分分、、fi噬噬菌菌體體ori、、Kanr和Ampr抗性性。。MCS的的中中部部已已經(jīng)經(jīng)切切開(kāi)開(kāi)，，各各有有一一個(gè)個(gè)3’’端端突突出出的的T。。②特特點(diǎn)點(diǎn)PCR產(chǎn)產(chǎn)物物往往往往在在3’’端端突突出出一一個(gè)個(gè)A，，所所以以能能與與這這個(gè)個(gè)載載體體直直接接連連接接。。Tvector的克克隆隆過(guò)過(guò)程程———簡(jiǎn)便便！！AATTTvectorPCRproductT4DNAligaseAA四、、柯柯斯斯質(zhì)質(zhì)粒粒載載體體柯斯斯質(zhì)質(zhì)粒粒(cosmid)一種種人人工工構(gòu)構(gòu)建建的的克克隆隆載載體體，，包包含含了了λλ噬噬菌菌體體的的cos基基因因。。柯柯斯斯質(zhì)質(zhì)粒粒能能被被包包裝裝到到λλ噬噬菌菌體體粒粒子子中中，，感感染染大大腸腸桿桿菌菌；；它它攜攜帶帶入入宿宿主主細(xì)細(xì)菌菌的的DNA片片段段（（超超過(guò)過(guò)45kb））要要比比質(zhì)質(zhì)粒粒載載體體攜攜帶帶的的要要大大（一）粘粘粒(cosmid)組成：2.抗抗性基基因；1.質(zhì)質(zhì)粒復(fù)復(fù)制的起起始位點(diǎn)點(diǎn)(ORI)；3.用用于插插入目的的基因的的單個(gè)酶酶切位點(diǎn)點(diǎn)；4.噬菌體的的cos位位點(diǎn)。可見(jiàn)，cosmid是由質(zhì)粒粒和噬菌體的的cos位位點(diǎn)構(gòu)建而成成。與噬菌體體載體和和質(zhì)粒載載體相比比具有多多個(gè)優(yōu)點(diǎn)點(diǎn)：（1）具具有cos位點(diǎn)點(diǎn)，能高高效地轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化大腸腸桿菌，，能在大大腸桿菌菌中實(shí)現(xiàn)現(xiàn)自身環(huán)環(huán)化，并并能在大大腸桿菌菌中復(fù)制制；（2）有有像質(zhì)粒粒一樣的的選擇標(biāo)標(biāo)記；（3）cosmid載載體比較較小，但但能插入入較大的的外源片片段，可可克隆外外源片段段的長(zhǎng)度度在15~45kb之間。。由于cosmid載體體的大片片段克隆隆能力，，多用于于基因組組文庫(kù)的的構(gòu)建，，而λ噬噬菌體載載體多用用于cDNA文文庫(kù)的構(gòu)構(gòu)建。已已有多種種粘粒載載體可用用于基因因克隆，，pJB8是最最常用的的粘粒載載體之一一（4)多多種單單一酶酶切位位點(diǎn)，，便于于克隆隆1、粘粘粒載載體的的優(yōu)點(diǎn)點(diǎn)柯斯質(zhì)質(zhì)粒載載體的的特點(diǎn)點(diǎn)具有λλ噬菌菌體的的特性性；具有質(zhì)質(zhì)粒載載體的的特性性；具有較較高容容量的的克隆隆能力力；具有與與同源源性序序列的的質(zhì)粒粒進(jìn)行行重組組的能能力特點(diǎn)：：可插入入長(zhǎng)達(dá)達(dá)27～～41kb的外源源基因因，方方便地地用于于克隆大大片段段DNA。加入噬菌體體頭部和和尾部部蛋白白，可可將粘粒包包裝成成類似似于噬菌體體的具感感染能能力的的顆粒粒，方方便地地進(jìn)入入大腸腸桿菌菌。粘粒進(jìn)進(jìn)入細(xì)細(xì)菌后后則完完全失失去噬菌體體的功能，而而表現(xiàn)質(zhì)粒的特性。柯斯質(zhì)粒載載體cosmid載體：也稱粘粒粒、柯斯載載體。這是是一類用于于克隆大片片段DNA的載體，，它是由λλ噬菌體的的cos（（cohesive）末端及及