1、滋補(bǔ)腎陰方藥對D-半乳糖擬衰小鼠自由基代謝及免疫功能的影響【摘要】目的研究滋補(bǔ)腎陰方藥對D-半乳糖D-gal所致衰老小鼠自由基代謝及免疫功能的影響。方法采用D-gal復(fù)制衰老小鼠模型。測定衰老小鼠血清中丙二醛(DA)含量、超氧化物歧化酶(SD)活性，胸腺指數(shù)和脾指數(shù)，脾臟T淋巴細(xì)胞增殖活性及血清中白介素-2IL-2程度，并觀察滋補(bǔ)腎陰方藥對上述指標(biāo)的影響。結(jié)果滋補(bǔ)腎陰方藥能明顯進(jìn)步血清中SD活性，降低血清中DA含量，并進(jìn)步胸腺指數(shù)、脾指數(shù)，脾臟T淋巴細(xì)胞增殖活性和血清中IL-2程度。結(jié)論抑制脂質(zhì)過氧化反響，進(jìn)步抗氧化酶活性，改善免疫功能可能是滋補(bǔ)腎陰方藥延緩衰老的作用機(jī)制之一。【關(guān)鍵詞】中醫(yī)藥

2、療法衰老模型自由基免疫Abstrat:bjetiveTexplretheeffetfinvigratingkidney-YINreipenthefreeradialetablisandiunefuntinfagingieinduedbyD-gal.ethdsalndialdehyde(DA)ntentandsuperxidedisutase(SD)ativityinseru,thyusindexes,spleenindexes,ativityfTlyphyteandthelevelfIL-2eredeterinedinagingieinduedbyD-gal.Theeffetfinvigrat

3、ingkidney-YINreipentheabveindexesasbserved.ResultsTheinvigratingkidney-YINreipeuldsignifiantlyinreaseSDativityinseru;dereaseDAntentinseru,enhanethyusindexes,spleenindexes,ativityfTlyphyteandseruIL-2ntent.nlusinTinhibitlipidperxidatin,inreaseativityfantixidaseandiprveiunefuntinightbeneftheehanissfinv

4、igratingkidney-YINreipeagainstaging.Keyrds:Therapeutisftraditinalediine;Agingdel;Freeradials;Iune自由基損傷和免疫功能低下是老化的重要機(jī)制之一。目前，中醫(yī)延緩衰老研究以補(bǔ)腎占居絕對優(yōu)勢，溫補(bǔ)腎陽延衰的研究已獲得了一些進(jìn)展1，而滋補(bǔ)腎陰抗衰老的作用研究不多2。根據(jù)中醫(yī)學(xué)陰陽互根，陰陽平衡的理論，補(bǔ)腎陰、補(bǔ)腎陽應(yīng)該具有同等重要的作用。左歸飲是中醫(yī)滋補(bǔ)腎陰的代表名方，由熟地、山藥、枸杞、炙甘草、茯苓和山茱萸組成，具有延緩衰老的成效3，現(xiàn)已被用于臨床治療一些老年性疾病如冠心并糖尿病等，效果較好。據(jù)此立滋補(bǔ)腎

5、陰法作為延緩衰老治那么，并觀察經(jīng)典方劑左歸飲對D-半乳糖擬衰小鼠自由基代謝及免疫功能有關(guān)指標(biāo)的影響?，F(xiàn)將結(jié)果報告如下。1材料和方法1.1材料1.1.1動物昆明種小鼠30只，2月齡，體重為(202.0)g，雌雄各半，由南京青龍山動物飼養(yǎng)廠提供，合格證號為SXK蘇2002-0018。1.1.2藥品左歸飲，由熟地、山藥、枸杞、炙甘草、茯苓、山茱萸按966345比例組成。以上藥物一次性購于安徽蕪湖安康大藥房，并經(jīng)鑒定。上方常規(guī)水煎3次，合并濾液濃縮至生藥含量0.5775g/l，高壓滅菌，4冷藏保存?zhèn)溆谩?.1.3試劑與儀器D-半乳糖為上海試劑二廠產(chǎn)品。DA、SD測定試劑盒為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。

6、IL-2檢測盒為晶美生物工程產(chǎn)品。刀豆蛋白AnA、四甲基偶氮唑鹽TT，華美生物工程公司出品。測定儀器為722分光光度計；550型酶聯(lián)免疫檢測儀。1.2方法1.2.1動物分組與給藥昆明種小鼠30只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為3組，即正常對照組、模型對照組、滋補(bǔ)腎陰組，每組10只，雌雄各半。除正常對照組外，其余各組每只頸背皮下注射5D-半乳糖0.5l，1次/d，連用6周，造成衰老模型。正常對照組頸背皮下注射同等劑量生理鹽水。造模的同時，正常對照組和模型對照組每只每天灌服生理鹽水0.5l，滋補(bǔ)腎陰組按5.5g/(kgd)劑量灌服左歸飲煎液相當(dāng)于成人劑量的10倍。1.2.2指標(biāo)檢測用藥6周后，停藥，禁食

7、24h，稱重。無菌取脾臟和胸腺，同時摘眼球取血2l，3000r/in，離心5in，別離血清。小鼠血清中DA含量、SD活性和IL-2程度測定均嚴(yán)格按試劑盒說明書要求進(jìn)展。丙二醛DA測定：采用硫代巴比妥酸法測定血清中DA含量。超氧化物歧化酶SD測定：采用黃嘌呤氧化酶法測定血清中SD活性。胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)測定：稱重后計算，單位g/g體重。胸腺指數(shù)%=胸腺重量小鼠重量100%脾臟指數(shù)%=脾臟重量小鼠重量100%脾臟T淋巴細(xì)胞增殖活性測定：采用TT法測定，將各組小鼠斷頭處死，無菌摘取脾臟。常規(guī)制備脾細(xì)胞懸液，用RPI-1640完全營養(yǎng)液調(diào)濃度為5106/l。于96孔培養(yǎng)板上，每孔參加100l脾細(xì)胞懸液

8、，100lnA溶液終濃度4g/l，各3復(fù)孔，置37、5%2及飽和濕度條件下，培養(yǎng)48h，終止前4h，每孔加TT10l，培養(yǎng)完畢后棄上清，每孔參加0.08l/L鹽酸異丙醇100l/孔，輕輕振蕩后，繼續(xù)孵育1h，酶標(biāo)儀測570nD值。白介素-2IL-2含量測定：采用雙抗體夾心ELISA法測定血清中IL-2含量。1.3統(tǒng)計學(xué)分析實(shí)驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)處理由本人采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件進(jìn)展計量資料組間方差分析和q顯著性檢驗。2結(jié)果2.1藥物對血清中DA含量和SD活性的影響見表1。模型對照組血清中DA含量明顯高于正常對照組P0.01、SD活性明顯低于正常對照組P0.01；滋補(bǔ)腎陰組能明顯進(jìn)步模型對照組血清

9、中SD活性，同時降低模型對照組血清中DA含量，差異具有顯著性P0.01。表1各組血清中DA含量和SD活性略2.2藥物對胸腺指數(shù)和脾指數(shù)的影響見表2。模型對照組胸腺指數(shù)和脾指數(shù)均明顯低于正常對照組P0.05；滋補(bǔ)腎陰組胸腺指數(shù)和脾指數(shù)明顯高于模型對照組P0.05。表2各組胸腺指數(shù)和脾指數(shù)略2.3藥物對T淋巴細(xì)胞活性的影響見表3。模型對照組T淋巴細(xì)胞活性明顯低于正常對照組P0.01；滋補(bǔ)腎陰組明顯高于模型對照組P0.01。表3各組T淋巴細(xì)胞活性略2.4藥物對血清中IL-2含量的影響見表4。模型對照組IL-2含量明顯低于正常對照組P0.05；滋補(bǔ)腎陰組明顯高于模型對照組P0.05。表4各組血清中IL

10、-2含量略3討論由于老齡動物難以得到和非常昂貴，本研究采用了小鼠亞急性衰老模型。其原理為小鼠長期注射D半乳糖，引起全身代謝紊亂，以致產(chǎn)生各器官、系統(tǒng)功能衰退。此模型制作方法簡便，衰老特征明顯，實(shí)驗費(fèi)用較低，是目前國內(nèi)外常用的衰老模型之一，它在研究衰老機(jī)制和抗衰老藥物作用機(jī)理中應(yīng)用非常廣泛4。SD和DA是較為公認(rèn)的衰老指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，擬衰小鼠血清SD活性明顯下降，DA含量明顯升高。這一結(jié)果反映D-半乳糖化使小鼠機(jī)體抗氧化酶活性下降，機(jī)體過氧化反響增強(qiáng)，脂質(zhì)過氧化物增多，氧化與抗氧化平衡失調(diào)，提示小鼠發(fā)生了擬老化效應(yīng)，造模成功；滋補(bǔ)腎陰方藥能明顯進(jìn)步血清SD活性，說明該方可以增強(qiáng)機(jī)體內(nèi)源性抗

11、衰老物質(zhì)活性，從而抑制自由基對細(xì)胞的損害，DA系自由基反響的最終產(chǎn)物，該方能使血清DA含量降低，其作用機(jī)制可能是本方通過進(jìn)步內(nèi)源性抗衰老物質(zhì)的活性，抑制脂質(zhì)過氧化反響，或是本方具有直接去除自由基作用之故。免疫器官衰變最明顯的是胸腺和脾，胸腺和脾重量的降低、萎縮，功能衰退可使免疫功能降低，導(dǎo)致老年人惡性疾病發(fā)生率增高，加速老化進(jìn)程。本研究結(jié)果顯示，擬衰小鼠胸腺指數(shù)、脾指數(shù)、T淋巴細(xì)胞活性及血清IL-2含量明顯下降，提示胸腺和脾臟的重量明顯下降，免疫器官老化，免疫因子分泌缺乏，免疫功能低下，進(jìn)一步驗證了擬老化效應(yīng)；滋補(bǔ)腎陰方藥明顯進(jìn)步胸腺指數(shù)、脾指數(shù)、T淋巴細(xì)胞活性及血清IL-2含量，說明該方可以

12、有效地控制和對抗免疫器官的衰老，改善機(jī)體的免疫功能，進(jìn)步抗病才能，從而對延緩衰老具有積極的意義。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，腎虛是衰老的主要原因。本研究結(jié)果證明，補(bǔ)腎陰在調(diào)節(jié)自由基代謝，進(jìn)步抗氧化才能及改善免疫功能等方面，具有明顯的作用，滋補(bǔ)腎陰方藥左歸飲是理想而有效的延緩衰老的藥物。【參考文獻(xiàn)】1付嘉，熊彬，鄭冰生，等.巴戟天對D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化系統(tǒng)作用的實(shí)驗研究J.中國老年學(xué)雜志，2022，1224：1206.2戴薇薇，金國琴，張學(xué)禮，等.左歸丸、右歸丸對老年大鼠海馬、杏仁核氨基酸類和單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量變化的影響J.中國老年學(xué)雜志，2022，268：1066.3ZhangJ，uiD，XuQ.EffetfdifferentpresriptinsfrtnifyingkidneynRNAtransriptinativityini