1、漿樣樹突狀細胞重建與單倍體相合造血干細胞移植的慢性移植物抗宿【摘要】為了討論漿樣樹突狀細胞(PD)在單倍體相合造血干細胞移植術后重建的特點及其與慢性移植物抗宿主病GVHD和患者復發的關系，采用流式細胞術對19例白血病患者移植后外周血樹突狀細胞D亞群晚期重建進展動態監測，并將其與患者GVHD和復發的關系進展分析。結果顯示：白血病患者髓樣樹突狀細胞D、D1和D百分比和絕對細胞數以及D/PD比率均低于正常對照(P0.05)，而髓樣樹突狀細胞2D2、PD百分數與對照組相比無統計學差異。患者移植后PD比例于12月時到達正常P=0.494，而PD絕對值和其余各亞群比例及數量均于移植后9月時恢復到正常程度，

2、與對照組相比無統計學差異P0.05；D/PD于移植后120天時已到達正常對照組程度P=0.602。發生GVHD患者移植后120天PD比例高于未發生組；患者復發后D1比例及數值下降，而D2和PD比例及數值略上升。結論：白血病患者單倍體相合造血干細胞移植前外周血D比例、絕對數及D/PD比率均減少；移植后D/PD比率恢復較快；各亞群比例和數量在移植后9月后根本恢復正常；且恢復情況與慢性移植物抗宿主病發生和患者復發相關。【關鍵詞】單倍體相合造血干細胞移植；漿樣樹突狀細胞；慢性移植物抗宿主病；白血病復發InvestigatinfPlasaytidDendritiellRenstitutinandItsR

3、elatinshipithGVHDandRelapseafterHaplidentialHeatpietiSteellTransplantatinAbstratTinvestigatetheharateristisandsignifianefrenstitutinfperipheralbldplasaytiddendritiell(PD)preursrsafterallgenEihuanleukyteantigenisathed/haplidentialheatpietisteelltransplantatin,anditsrelatinshipithhrnigraftversushstdis

4、easeGVHDandrelapse，19patientsithleukeiaereenrlledfrthisstudy.Peripheralblddendritiell(D)subsetsfpatientsandhealthyntrlseredetetedbyflytetry,andtherrelatinsbeteenrenstitutinfDandGVHD,relapseereanalyzed.Theresultsshedthatparedithhealthysubjets,patientsithleukeiahadasignifiantlydereasedprprtinandabslut

5、enuberfyeliddendritiell(D),D1,DandtheratifD/PD(P0.05).ThereerentstatistiallydifferentinD2andPDbeteenpatientsandhealthysubjets.Aftertransplant,alltheprprtinfBandabslutenubersfDreahedthealthyntrlslevelsat9nths(P0.05),besidestheprprtinfPDhihreahedthealthyntrlslevelsat1yearP=0.494.paredithlevelsbefrerel

6、apse,theprprtinsfD1,D,DandtheratifD/PDereler,butprprtinsfD2andPDereslightlyhigherafterrelapse.PatientsithahighPDreveryprfilehadaniprveduulativeinidenefGVHDinntrasttpatientsithalPDreveryprfilenday120aftertransplantatin(P=0.007).Itisnludedthatparedithhealthysubjets,denvleukeiapatientshaveasignifiantly

7、dereasedprprtinandabslutenuberfDandtheratifD/PDbefrehaplidentialheatpietisteelltransplantatin;hileratifD/PDanbenralizedithrelativerapidity,theprprtinsfallDsubsetsreahedtnrallevelsnthehleat9nthsaftertransplantatin,andalsreverylevelfDsisrrelatedithurrenefGVHDandrelapse.Keyrdshaplidentialheatpietisteel

8、ltransplantatin;plasaytiddendritiell;hrnigraftversushstdisease;leukeiarelapse中國實驗血液學雜志JExpHeatl2022;15(2)漿樣樹突狀細胞重建與人類白細胞抗原不合/單倍體相合造血干細胞移植慢性移植物抗宿主病/復發關系初探材料和方法對象患者從2022年2月至2022年4月間，對在北京大學人民醫院血液病研究所行HLA不完全相合單倍體移植的19位患者和12例安康親緣供者進展研究。患者男性14例，女性5例，中位年齡2112-51歲。19例患者中急性髓性白血病5例，急性B淋巴細胞白血病6例，慢性髓性白血病7例，骨髓增生

9、異常綜合癥/急性髓性白血病1例。所有患者在進入研究前均簽署知情同意書，供者標本在獲取前均得到本人同意，本研究經醫院倫理委員會審核通過。預處理方案供者發動及造血干細胞采集移植物抗宿主病預防和治療應用環孢菌素A+霉酚酸酯+短程甲氨喋呤方案。環孢菌素A2.5g/kgd靜脈滴注,移植前9天至腸道功能恢復正常后改為口服，一般用至移植后9-12月；霉酚酸酯0.5g每12小時1次，口服，移植前10天至植活后減半，后漸停藥；甲氨喋呤移植后1天15g/2，移植后3、6、11天10g/2。GVHD根據受累器官和廣泛程度分為局限型和廣泛型。局限型GVHD包括局限的皮膚損害和(或)本病所致的肝臟損害。廣泛型GVHD有

10、下述二者之一加上另外4項中任意3項:皮膚全身廣泛受損;病理證實部分皮膚病變并兼有GVHD的肝損害。另外4項包括:肝臟病理呈慢性重癥肝炎或肝硬化,眼部枯燥(Shirer試驗濕度僅5),唾液腺或口腔粘膜有本病病理,任何其他的靶器官受損。發生GVHD后根據情況加用皮質激素、sA、F、FK506、依木蘭等治療。植活監測流式細胞術檢測分析細胞外表標記每管取新穎抽取的EDTA抗凝血至少100l，分別參加各種抗體及陰性對照抗體10l,4避光孵育15分鐘；加溶血素2l室溫避光10分鐘，溶解紅細胞；然后300g離心5分鐘,棄上清,用PBS將標記細胞洗滌2次；參加含1%多聚甲醛PBS200l,固定后24小時內上流

11、式細胞儀檢測。統計學處理結果病人特點19位患者和12例安康親緣供者納入本研究，HLA配型3/6不合10例，2/6不合7例，1/6不合2例。發生GVHD11例，其中局限型7例，廣泛型4例；復發2例，死亡5例，余無病生存。詳細情況見表1。外周血D前體細胞晚期重建正常對照組和患者移植前的D及其亞群12例來源于安康供者的外周血標本被作為對照組。白血病患者預處理前D1、D及D在白細胞中所占百分比較正常對照組明顯減低，分別為D10.03%vs0.435%；D0.045%vs0.645%和D0.125%vs0.76%(P均0.01)；而D2和PD所占的百分比雖中位數亦低于對照組，分別為0.005%vs0.0

12、35%和0.07%vs0.135%,但P0.05，無統計學差異。各D亞群的絕對值與百分比相類似，分別為D11.33/lvs26.7/l；D1.52/lvs35.56/l和D7.89/lvs42.66/l,均較正常對照組明顯減低，差異具有顯著性P0.01患者移植后D亞群晚期重建患者移植后晚期移植后100天外周血D各亞群的重建根本同步，各亞群在白細胞中所占比例隨移植后時間推移逐漸恢復正常。如表2所示除移植后9月時PD在白細胞所占比例為0.08%(0.04%-0.11%)，仍略低于正常對照組，兩者有統計學差異P=0.016外，余各亞群所占比例均于移植后9月時恢復到正常對照程度，無統計學差異P0.05

13、。患者移植后晚期移植后100天外周血D各亞群數量的重建與比例重建根本相似，各亞群重建亦根本同步且亞群的數量與比例隨時間推移逐漸恢復正常。如表3所示D各亞群數量均于移植后9月時恢復到正常對照程度，與正常對照組無統計學差異P0.05。D/PD比率如前所述已于移植后30天時到達正常對照組程度，移植后晚期此趨勢未出現改變，各時間點與正常對照組相比均無統計學差異P0.05。D前體細胞晚期重建與GVHD的關系我們對移植后120天的D/PD也做了分組分析，結論和PD相似，低D/PD組GVHD的累計發生率為明顯低于高D/PD組，但無統計學差異P=0.068。患者移植后復發前后D亞群變化本研究過程中有2例患者出現復發，監測其復發前后外周血D各亞群的變化，結果顯示復發后各亞群比例及數量向患者移植前趨勢轉化。D1、D、總D的比例及數量均較移植前下降，D2和PD較復發前上升趨勢(表4，表5)。討論D是專職的抗原呈遞細胞，可以呈遞具有細胞遺傳學異常的白血病細胞，尤其是D1，通過誘導Th1發育促進抗腫瘤免疫。白血病患者D數量減少，尤其是D1數量減少，導致腫瘤細胞獲得免疫逃逸。Reddy等