1、免疫檢測常用方法及運用免疫檢測常用方法及運用這些方法所具有的特異性好、敏感性高、簡單、快速和穩(wěn)定的特點為臨床上確定診斷、分析病情、調(diào)整治療方案和判斷預(yù)后等提供有效的實驗依據(jù)，使它們在臨床的應(yīng)用進(jìn)一步普及和推廣。2免疫檢測常用方法及運用這些方法所具有的特異性好、敏感性高、簡單、快速和穩(wěn)定的特點為凝集反應(yīng)(agglutination)顆粒性抗原(細(xì)菌、細(xì)胞等)與相應(yīng)的抗體，或可溶性抗原(亦可用抗體)吸附于與免疫無關(guān)的載體形成致敏顆粒與相應(yīng)的抗體(或抗原)，在有適量電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見的凝集小塊。3免疫檢測常用方法及運用凝集反應(yīng)(agglutination)顆粒性抗原(細(xì)菌、細(xì)凝集反應(yīng)的分類直

2、接凝集反應(yīng)間接凝集反應(yīng)抗人球蛋白試驗（Coombs試驗）4免疫檢測常用方法及運用凝集反應(yīng)的分類直接凝集反應(yīng)4免疫檢測常用方法及運用直接凝集反應(yīng)顆粒性抗原(細(xì)菌、細(xì)胞等)與相應(yīng)的抗體在有適量電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見的凝集小塊。常見的應(yīng)用是血型的鑒定5免疫檢測常用方法及運用直接凝集反應(yīng)顆粒性抗原(細(xì)菌、細(xì)胞等)與相應(yīng)的抗體在有適量血型鑒定示意圖6免疫檢測常用方法及運用血型鑒定示意圖6免疫檢測常用方法及運用間接凝集反應(yīng)將可溶性抗原（或抗體）先吸附于適當(dāng)大小顆粒性載體的表面，然后與相應(yīng)抗體（或抗原）作用，在適宜的電解質(zhì)存在的條件下，出現(xiàn)特異性凝集的現(xiàn)象稱間接凝集反應(yīng)（indirectagglutin

3、ation）或被動凝集反應(yīng)（assiveagglutination）。7免疫檢測常用方法及運用間接凝集反應(yīng)將可溶性抗原（或抗體）先吸附于適當(dāng)大小顆粒性間接凝集反應(yīng)常用的載體微球有人O型血紅細(xì)胞、綿羊或家兔紅細(xì)胞、聚苯乙烯乳膠、活性炭/甲苯胺紅、明膠顆粒等8免疫檢測常用方法及運用間接凝集反應(yīng)常用的載體微球有人O型血紅細(xì)胞、綿羊或家兔紅細(xì)胞間接凝集反應(yīng)正向間接凝集反應(yīng)反向間接凝集反應(yīng)9免疫檢測常用方法及運用間接凝集反應(yīng)9免疫檢測常用方法及運用正向間接凝集反應(yīng)用抗原致敏載體以檢測標(biāo)本中的相應(yīng)抗體10免疫檢測常用方法及運用正向間接凝集反應(yīng)用抗原致敏載體以檢測標(biāo)本中的相應(yīng)抗體10免疫正向間接凝集反應(yīng) 膠

4、乳凝集試驗所用載體顆粒為羧化的聚苯乙烯膠乳，是一種直徑約為0.8m大小的圓形顆粒，帶有負(fù)電荷，可物理性吸附蛋白分子。將溶血素O 吸附在羧化的聚苯乙烯膠乳顆粒上檢測抗”O(jiān)”。將變性IgG包被于羧化的聚苯乙烯膠乳顆粒上檢測RF。11免疫檢測常用方法及運用正向間接凝集反應(yīng) 正向間接凝集反應(yīng) RPR/TRUST試驗血漿反應(yīng)素試驗(RPR) 所用載體顆粒為活性炭顆粒甲苯胺紅不加熱血清反應(yīng)素試驗 （TRUST） 所用載體顆粒為甲苯胺紅顆粒12免疫檢測常用方法及運用正向間接凝集反應(yīng) RPR正向間接凝集反應(yīng) RPR試驗13免疫檢測常用方法及運用正向間接凝集反應(yīng) RPR正向間接凝集反應(yīng) TRUST試驗14免疫檢

5、測常用方法及運用正向間接凝集反應(yīng) TRU正向間接凝集反應(yīng) 明膠顆粒凝集試驗所用載體為人工合成的惰性明膠顆粒梅毒螺旋體明膠凝集試驗（TPPA）肺炎支原體抗體檢測（MP-Ab）15免疫檢測常用方法及運用正向間接凝集反應(yīng) 明膠顆正向間接凝集反應(yīng) TPPA試驗16免疫檢測常用方法及運用正向間接凝集反應(yīng) TPP正向間接凝集反應(yīng) TPPA試驗17免疫檢測常用方法及運用正向間接凝集反應(yīng) TPP正向間接凝集反應(yīng) MP-Ab試驗18免疫檢測常用方法及運用正向間接凝集反應(yīng) MP-正向間接凝集反應(yīng) MP-Ab試驗19免疫檢測常用方法及運用正向間接凝集反應(yīng) MP-正向間接凝集反應(yīng) MP-Ab試驗20免疫檢測常用方法及

6、運用正向間接凝集反應(yīng) MP-正向間接凝集反應(yīng) MP-Ab試驗檢測肺炎支原體的總抗體（IgM, IgA IgG)以滴度的方式報告檢測結(jié)果（1:80 1:80、1：160、1:320 )21免疫檢測常用方法及運用正向間接凝集反應(yīng) MP-反向間接凝集反應(yīng)用已知特異性抗體致敏載體以檢測標(biāo)本中的相應(yīng)抗原。22免疫檢測常用方法及運用反向間接凝集反應(yīng)用已知特異性抗體致敏載體以檢測標(biāo)本中的相抗人球蛋白試驗（Coombs試驗）抗人球蛋白抗體參與的間接血凝試驗，用于檢測抗紅細(xì)胞不完全抗體分類： 直接Coombs試驗 間接Coombs試驗 23免疫檢測常用方法及運用抗人球蛋白試驗（Coombs試驗）抗人球蛋白抗體參

7、與的間接直接Coombs試驗24免疫檢測常用方法及運用直接Coombs試驗24免疫檢測常用方法及運用間接Coombs試驗25免疫檢測常用方法及運用間接Coombs試驗25免疫檢測常用方法及運用凝集反應(yīng)總結(jié)一、直接凝集反應(yīng) 血型鑒定二、間接凝集反應(yīng) 膠乳凝集試驗 ASO/RF1正向間接凝集反應(yīng) RPP/TRUST 明膠顆粒凝集 TPPA/MP2反向間接凝集反應(yīng)三、抗人球蛋白試驗 直接/間接Coombs試驗 26免疫檢測常用方法及運用凝集反應(yīng)總結(jié)一、直接凝集反應(yīng) 血型鑒定 26免疫檢測常用酶聯(lián)免疫吸附試驗 （ELISA） 使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。 使抗原或抗體與酶連接

8、成酶標(biāo)抗原或抗體，且既保留其免疫活性又保留酶的活性。 標(biāo)本中的抗原或抗體、酶標(biāo)抗原或抗體按一定的次序與固相載體表面的抗體或抗原反應(yīng)，并通過底物與酶的反應(yīng)來反映標(biāo)本中的抗原或抗體的量。 27免疫檢測常用方法及運用酶聯(lián)免疫吸附試驗 （ELISA） 使抗原或抗體結(jié)合到某酶聯(lián)免疫吸附劑試驗28免疫檢測常用方法及運用酶聯(lián)免疫吸附劑試驗28免疫檢測常用方法及運用酶聯(lián)免疫吸附試驗雙抗體夾心法雙抗原夾心法間接法競爭法 捕獲法測 IgM 抗體29免疫檢測常用方法及運用酶聯(lián)免疫吸附試驗雙抗體夾心法29免疫檢測常用方法及運用ELISA雙抗體夾心法用特異性抗體進(jìn)行包被和制備酶標(biāo)抗體，以檢測相應(yīng)的抗原。乙肝標(biāo)志物中HB

9、sAg、 HBeAg的檢測常采用本法30免疫檢測常用方法及運用ELISA雙抗體夾心法30免疫檢測常用方法及運用ELISA雙抗體夾心法31免疫檢測常用方法及運用ELISA雙抗體夾心法31免疫檢測常用方法及運用ELISA雙抗體夾心法32免疫檢測常用方法及運用ELISA雙抗體夾心法32免疫檢測常用方法及運用ELISA雙抗原夾心法用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物，以檢測相應(yīng)的抗體。抗HBs的檢測抗HCV的檢測抗HIV的檢測33免疫檢測常用方法及運用ELISA雙抗原夾心法用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合ELISA雙抗原夾心法34免疫檢測常用方法及運用ELISA雙抗原夾心法34免疫檢測常用方法及運用 E

10、LISA競爭法 標(biāo)本中的抗體和一定量的酶標(biāo)抗體競爭與固相抗原結(jié)合。如受檢標(biāo)本中無抗體，則酶標(biāo)抗體能順利地與固相抗原結(jié)合。加入酶標(biāo)抗原后就顯色深。如受檢標(biāo)本中含有抗體，則與酶標(biāo)抗體以同樣的機會與固相抗原結(jié)合，競爭性地占去了酶標(biāo)抗體與固相抗原結(jié)合的機會，使酶標(biāo)抗原與固相載體的結(jié)合量減少。加入酶標(biāo)抗原后就顯色淺或不顯色。35免疫檢測常用方法及運用 ELISA競爭法 標(biāo)本中的抗體和一定量的酶標(biāo)抗體競爭與固 ELISA競爭法 36免疫檢測常用方法及運用 ELISA競爭法 36免疫檢測常用方法及運用 ELISA競爭法 最常見的應(yīng)用：乙肝HBeAb、 HBcAb檢測37免疫檢測常用方法及運用 ELISA競爭

11、法 37免疫檢測常用方法及運用ELISA捕獲法（1）將抗人 IgM 抗體（抗人 IgM 鏈抗體）連接在固相載體上，形成固相抗人 IgM。 （2）加入標(biāo)本， IgM 抗體被固相抗體捕獲。洗滌除去其他抗體。（3）加入特異性抗原試劑，它只與固相上的特異性 IgM 結(jié)合，洗滌。 （4）加入針對特異性抗原的酶標(biāo)抗體，形成固相二抗 IgM抗體抗原 酶標(biāo)抗體復(fù)合物。（5）加底物顯色，如有顏色顯示，則表示血清標(biāo)本中的特異性 IgM 抗體存在，是為陽性反應(yīng)。38免疫檢測常用方法及運用ELISA捕獲法（1）將抗人 IgM 抗體（抗人 IgM ELISA捕獲法以優(yōu)生四項IgM抗體檢測為例39免疫檢測常用方法及運用E

12、LISA捕獲法以優(yōu)生四項IgM抗體檢測為例39免疫檢測常ELISA捕獲法甲肝IgM抗體測定40免疫檢測常用方法及運用ELISA捕獲法甲肝IgM抗體測定40免疫檢測常用方法及運ELISA總結(jié)酶免疫測定具有高度的敏感性和特異性， 幾乎所有的可溶性抗原抗體系統(tǒng)均可用以檢測。它的最小可測值達(dá) ng 甚至 pg 水平。酶免疫測定標(biāo)記試劑比較穩(wěn)定，且無放射性危害。因此，酶免疫測定的應(yīng)用日新月異，酶免疫測定的新方法、新技術(shù)不斷發(fā)展。41免疫檢測常用方法及運用ELISA總結(jié)酶免疫測定具有高度的敏感性和特異性， 幾乎所有固相膜免疫測定利用微孔膜（主要是醋酸纖維素膜）作為固相進(jìn)行免疫檢測的方法根據(jù)標(biāo)記物的不同分為

13、兩類： 酶標(biāo)固相膜免疫測定： 酶免疫斑點法 酶免疫印跡法 金標(biāo)法： 膠體金斑點滲濾試驗 膠體金免疫層析試驗42免疫檢測常用方法及運用固相膜免疫測定利用微孔膜（主要是醋酸纖維素膜）作為固相進(jìn)行免酶標(biāo)固相膜免疫測定原理43免疫檢測常用方法及運用酶標(biāo)固相膜免疫測定原理43免疫檢測常用方法及運用酶免疫斑點法常應(yīng)用于自身抗體的檢測44免疫檢測常用方法及運用酶免疫斑點法常應(yīng)用于自身抗體的檢測44免疫檢測常用方法及運用酶免疫印跡法 45免疫檢測常用方法及運用酶免疫印跡法 45免疫檢測常用方法及運用免疫檢測常用方法及運用培訓(xùn)課件膠體金斑點滲濾試驗47免疫檢測常用方法及運用膠體金斑點滲濾試驗47免疫檢測常用方法

14、及運用膠體金免疫層析試驗金標(biāo)雙抗體夾心法測抗原將試紙條下端浸入液體標(biāo)本中，下端吸水材料即吸取液體向上端移動，流經(jīng)C處時使干片上的免疫金復(fù)合物復(fù)溶，并帶動其向膜條滲移。若標(biāo)本中有待測特異抗原，其時可與免疫金復(fù)合物之抗體結(jié)合，此抗原抗體復(fù)合物流至測試區(qū)即被固相抗體所獲，在膜上顯出紅色反應(yīng)線條（T）。過剩的免疫金復(fù)合物繼續(xù)前行，至參照區(qū)與固相小鼠IgG結(jié)合（免疫金復(fù)合物中的單克隆抗體為小鼠IgG），而顯出紅色質(zhì)控線條（R）。反之，陰性標(biāo)本則無反應(yīng)線條，而僅顯示質(zhì)控線條。48免疫檢測常用方法及運用膠體金免疫層析試驗金標(biāo)雙抗體夾心法測抗原48免疫檢測常用方法膠體金免疫層析試驗49免疫檢測常用方法及運用膠

15、體金免疫層析試驗49免疫檢測常用方法及運用膠體金免疫層析試驗檢測HIVAb的雙抗原夾心法50免疫檢測常用方法及運用膠體金免疫層析試驗檢測HIVAb的雙抗原夾心法50免疫檢測金標(biāo)法的應(yīng)用HCG的檢測51免疫檢測常用方法及運用金標(biāo)法的應(yīng)用HCG的檢測51免疫檢測常用方法及運用金標(biāo)法的應(yīng)用HBs-Ag的檢測52免疫檢測常用方法及運用金標(biāo)法的應(yīng)用HBs-Ag的檢測52免疫檢測常用方法及運用金標(biāo)法的應(yīng)用大便潛血試驗（FOB）53免疫檢測常用方法及運用金標(biāo)法的應(yīng)用大便潛血試驗（FOB）53免疫檢測常用方法及運用金標(biāo)法的應(yīng)用輪狀病毒和腺病毒抗原檢測54免疫檢測常用方法及運用金標(biāo)法的應(yīng)用輪狀病毒和腺病毒抗原檢測54免疫檢測常用方法及運金標(biāo)法的應(yīng)用幽門螺桿菌（HP）抗原檢測55免疫檢測常用方法及運用金標(biāo)法的應(yīng)用幽門螺桿菌（HP）抗原檢測55免疫檢測常用方法及金標(biāo)法的應(yīng)用O1群霍亂弧菌檢測56免疫檢測常用方法及運用金標(biāo)法的應(yīng)用O1群霍亂弧菌檢測56免疫檢測常用方法及運用金標(biāo)法的應(yīng)用HCV-Ab檢測57免疫檢測常用方法及運用金標(biāo)法的應(yīng)用HCV-Ab檢測57免疫檢測常用方法及運用金標(biāo)法的應(yīng)用艾滋病抗體金標(biāo)檢測58免疫檢測常用方法及運用金標(biāo)法的應(yīng)用艾滋病抗體金標(biāo)檢測58免疫檢測常用方法及運用金標(biāo)法總結(jié)上述兩種試驗的共同特點是：