1、高效液相色譜法分離測定駱駝 刺根狀莖中的內源激素 答辯人：生科08-1班 趙曼麗1 報 告 內 容 一、研究意義二、研究內容 三、研究方法和技術路線四、研究成果五、前景與展望2研究意義 駱駝刺（Alhagi sparsifolia）屬于豆科駱駝刺屬植物，為多年生草本或半灌木，是重要的固沙植物。駱駝刺的幼嫩枝葉可作為家畜的飼料，同時也是一類具有開發潛力的蜜源植物和藥用植物資源。駱駝刺是一種根莖型的克隆植物，借以其發達的根狀莖上分布的休眠芽產生新個體而不斷擴大種群。3研究對象 本實驗通過在新疆古爾班通古特沙漠南緣以一個間隔子為單位進行駱駝刺根狀莖野外采樣的工作，再采用高效液相色譜法(HPLC)對樣

2、品進行激素的分離和測定。駱駝刺駱駝刺根狀莖4研究內容建立駱駝刺根狀莖樣品提取和純化的方法使用高效液相色(HPLC) 對駱駝刺根狀莖中的內源激素進行分離和測定5三.研究方法駱駝刺的采集和保存：2010年秋季在古爾班通古特沙漠南緣進行采樣樣品儲存在液氮罐中并編號2011年春季及夏季在古爾班通古特沙漠南緣進行采樣6 樣品處理研磨醇提抽濾減壓蒸發石油醚萃取水相醚相棄去水相pH調至6.4加PVP超聲30 min ,抽濾濾液pH調至2.9稱取樣品乙酸乙酯萃取減壓蒸發定容待測7樣品的測定篩選色譜條件： 流動相的選擇： 本實驗選用甲醇水醋酸混合液為流動相，結果發現：加入一定量的醋酸可使分離得到改善；適當增加醋

3、酸含量可使內源激素在與其它成分分離的前提下峰形尖銳，減少拖尾； 柱溫的選擇： 柱溫對色譜分析影響不顯著，當柱溫為25和30時，樣品均能得到較好的分離效果。因此選擇柱溫25。 8研究結果色譜條件色譜柱：Shim-ParkC18VP- ODS；流動相：V(甲醇):V(0.75冰乙酸溶液)=45:55 檢測波長：254nm流速：0.7ml/min進樣量：20L 柱溫：25分離測定結果如下：9標準品的圖譜圖1 HPLC法測定赤霉素標品圖圖2 HPLC法測定玉米素標品圖10標準品的圖譜圖3 HPLC法測定生長素標品圖11混標的圖譜圖4 HPLC法測定混合標準品圖12春季樣品的圖譜圖5 HPLC法測定春季

4、樣品圖13夏季樣品的圖譜圖6 HPLC法測定夏季樣品圖14秋季樣品的圖譜圖7 HPLC法測定秋季樣品圖15樣品的圖譜圖8 HPLC法測定樣品圖16回歸方程、相關系數及精密度 表1 回歸方程、相關系數及精密度激素Hormones 回歸方程 Regression equation相關系數 r2保留時間精密度RSD of retention time (%)峰面積精密度RSD of peak area (%)GA3y=1754990.76x-65055.490.990.051.1 ZRy=44822951.30 x-26001.06 0.990.10 2.2IAAy=8303173.69x-5163

5、8.32 0.990.45 13.0Table 1 Regression equation ,coefficient and relative standard deviation17回收率 表2 加標回收率 Table 2 Result of standard addition recovery test of hormones*Recovery=( Added -Background)/ Found100%18取得的成果1. 建立駱駝刺根狀莖樣品處理的方法 。2. 通過大量實驗得出了駱駝刺根狀莖 內源激素分離和測定的色譜條件。 3. 發表論文一篇。19參考文獻：許智宏,李家洋.中國植物激素

6、研究:過去、現在和未來.植物學通報.2006,23(5):433-442李雨薇,肖浪濤.植物激素檢測技術的現狀和發展.生命科學儀器.2007,5(12):10-14趙錦,劉孟軍,代麗,等.棗瘋病病樹中內源激素的變化研究.中國農業科學.2006,39(11) :2255-2260潘根生,錢利生.茶樹內源激素的分離純化與檢測.檢測分析.2006,(1):44-46閆師杰,郭李維,吳彩娥,等.高效液相色譜法同時測定鴨梨種子中3種內源激素.分析化學研究簡報.2010,38(6):843-847楊途熙,魏安智,鄭元,等.高效液相色譜法同時分離測定仁用杏花芽中8種植物激素.分析化學研究簡報.2007,35

7、(9):1359-1361郭敏敏,王清連,胡根海.利用高效液相色譜法分離和測定棉花組織培養過程中4種內源激素.生物技術通訊.2009,20(2):213-216Yi Tang, Li Wang, Chao Ma. The use of HPLC in determination of endogenous hormones in anthers of Bitter melon. Journal of Life Science. 2011,139-142Ana, E.V., J.O. Richard, F.Belen. Relationships between hormonal content

8、s and the organogenic response in Pinus pinea cotyledonsJ. Plant Physiol Biochem. 2011,(39):377-384Imtiaz,A.H., U.D.Muhammad, S.Nighat,Y.Shafqat,et al.,Direct regeneration of sugarcane plantlets: a tool to unravel genetic heterogeneityJ, Pakistan Journal of Botany.2009,41(2):498-500李甜江,李根前,賀斌,等.克隆植物中國沙棘生長對外源植物激素的響應.生態學報.2010,30(3):659-66720 據目前，針對駱駝刺的研究主要集中生物生態適應性的研究，而關于內源激素的研究尚屬空白，我們目前正在展開以下研究：駱駝刺根狀莖中植物內源激素的分離和測定的最適條件；在不同因素（溫度、流動相極性）影響下的變化規律，最終確定出駱駝刺根狀莖中植物內源激素測定的最適色譜條件；初步