1、中風芪紅利水膠囊對腦缺血大鼠腦組織的影響【摘要】目的評價中風芪紅利水膠囊對急性腦缺血大鼠腦組織中興奮性氨基酸及水含量的影響。方法采用左側大腦中動脈阻塞模型，72只清潔級雄性istar大鼠隨機分為假手術組，模型組，對照組步長腦心通膠囊組，中風芪紅利水膠囊高、中、低劑量組。造模成功12h后處死。采用高效液相色譜法測量腦組織中的谷氨酸(Glu)、天門冬氨酸(Asp)含量。通過腦組織干重與濕重之比，算出含水量。結果芪紅利水膠囊各劑量組腦組織中Glu含量較缺血組顯著降低P0.05；芪紅利水膠囊高、中、低劑量治療組腦組織中天門冬氨酸含量較缺血模型組下降顯著(P=0.000,P=0.031,P=0.05)，

2、芪紅利水膠囊各劑量組腦組織含水量較缺血模型組下降顯著(P0.01)。結論中風芪紅利水膠囊具有抗大鼠急性腦缺血損傷的作用。其作用機制與降低腦組織中谷氨基酸、天門冬氨酸及腦組織含水量有關。【關鍵詞】急性腦缺血；大鼠；興奮性氨基酸；腦水腫；中風芪紅利水膠囊Abstrat：bjetiveTassesstheeffetsftheZhngfengQihngLishuiapsule(QHLS)nexitatryainaid(EAA)andaterntentinbraintissuefratsfllingautebrainisheia.ethdsTheleftiddleerebralarterylusin(L

3、LA)delaseplyed.Seventytaleistarratsererandlydividedintthesha-peratingrup,delgrup,ntrlgrup(BuhangNaxinTnggrup)andhighdse,iddledse,ldsegrupsfQHLS.Drugsandsalineereadinisteredrespetively,tieaday,fr3nseutivedaysbefreLAandne2hursafterLA.TheratseresarifiedtelvehursafterLA.Glu(glutaate),Asp(aspartate)ereea

4、suredthrughtheethdfHPL(highperfraneliquidhratgraphy).aterntentasassessedbyparisnftheetEightagainstthedryEIght.ResultsThententsfGlu,Aspandaterinthebraintissuesfisheiagrupinreasedgreatlyparediththatftheshaperatingrup(P0.01).(2)ThententfGluinthebraintissuesfratsinthegrupstreatedithQHLSdereasedsignifian

5、tlyparediththatftheisheiagrup(P0.05);thelevelfAspinthebraintissuesfratsinthehighdsegrup,iddledsegrup,ldsegruptreatedithQHLSdereasedsignifiantlyparediththatftheisheiagrup(P=0.000,P=0.031,P=0.05respetively).ThententfaterinthebraintissuefratsinthegrupstreatedithQHLSdereasedsignifiantlyparediththatfthei

6、sheiagrup(P0.01).nlusinQHLShasbenefiialeffetsnauteisheibraininjury.ItsehanisrelatedtthatQHLSanreduethententsfglutaate,aspartateandater.Keyrds：Autebrainisheia;Rats;Exitatryainaid;Brainedea;QHLS谷氨酸、天門冬氨酸可以強烈興奮神經元，因此被稱為興奮性氨基酸。左旋谷氨酸如今被認為是中樞神經系統中主要的興奮性神經遞質之一。谷氨酸等氨基酸的興奮毒作用已公認在腦缺血急性期的細胞死亡以及灌注后神經元損害和遲發性神經元死

7、亡中起主要作用。目前認為它們可能經凋亡途徑啟動細胞死亡過程，興奮性氨基酸的濃度可能決定了神經元死亡的類型、程度和進程1。AsitaS.Sarrafzadeh2認為微量滲析技術中的谷氨酸參數能最好地反映由正電子體層掃描所發現的部分腦血流量降低。此外，一些抑制性氨基酸被認為對缺血性腦損傷有重要的神經保護作用。然而，如今仍然缺乏有顯著治療效果的藥物。而傳統中醫藥有顯著的治療作用。中風芪紅利水膠囊具有突出的臨床療效。它是在中醫理論指導下組成的純中藥復方制劑，具有益氣、活血、利水的成效。本實驗采用左側大腦中動脈阻塞模型，用高效液相儀測量腦組織中谷氨酸、天門冬氨酸的含量，并且通過比擬腦組織干重與濕重測定腦

8、組織含水量，從而評價中風芪紅利水膠囊的療效。1材料與方法1.1藥品中風芪紅利水膠囊，0.5g/粒，由河南中醫學院第一附屬醫院制劑室提供。不同組所用中藥來源一樣，制作加工過程完全一樣。步長腦心通膠囊，咸陽步長制藥中藥廠消費，每粒含藥量為0.4g。谷氨酸Glu，天門冬氨酸AspSiga公司消費。1.2動物安康istar大鼠72只，普通級，雄性，體質量280320g，由河南省實驗動物中心提供。常規飼料喂養，自由飲水，按時通風沖刷糞便，保持環境安靜。1.3分組72只清潔級雄性istar大鼠隨機分為假手術組，模型組，對照組步長腦心通膠囊組，中風芪紅利水膠囊高、中、低劑量組。灌胃前配置為相應濃度的混懸液。

9、中風芪紅利水膠囊分別制成相當于每毫升含0.054g原藥低劑量組，相當于每毫升含0.108g原藥中劑量組，相當于每毫升含0.162g原藥高劑量。步長腦心通膠囊灌胃前配置濃度為0.044g/l的混懸液，置4冰箱備用。在大腦中動脈阻塞造模前，中風芪紅利水膠囊低劑量組的中風芪紅利水膠囊混懸液，按每天每100g體質量0.054g灌胃，兩次/d，連續3d，造模成功2h灌胃一次。類似地，中風芪紅利水膠囊中劑量組按每天每100g體質量0.108g給藥，中風芪紅利水膠囊高劑量組按每天每100g體質量0.162g給藥,步長腦心通組按每天每100g體質量0.054g給藥。用一樣體積的生理鹽水對缺血模型組和假手術組灌

10、胃。相應的藥物和生理鹽水均分別于造模后2h灌胃1次。1.4模型制備3造模前縫合線在肝素中浸泡10in。大鼠用10%水合氯醛(0.35l/100g)腹腔注射麻醉后，頸部正中偏左切口，別離肩胛舌骨肌動脈，頸外動脈(externalartidartery,EA)從周圍筋膜和神經中別離，用電凝器將EA分支燒斷甲狀腺上動脈、枕動脈，在距EA起始處1結扎并電凝EA主干。將圓頭的縫合線直徑為0.3長約5插入頸外動脈，并推進到頸內動脈直到感到細微的抵抗。抵抗說明栓線已經到達illis環。拴線進入深度距頸內動脈分叉處約1820。操作過程中通過紅外線燈保持大鼠體溫約37。假手術組，頸外動脈作插栓線的準備程序結扎并

11、灼斷，但沒有插入栓線，不阻塞大腦中動脈。1.5高效液相紫外探測系統及谷氨酸、天門冬氨酸的測定4左側大腦中動脈造模12h時后將大鼠處死，迅速剝離左側部分缺血腦的腦組織，放入液氮內保存。組織置于1%的冰凍磺基水楊酸勻漿，之后組織勻漿被離心(15000r/in，10in)。然后，堿性條件下用2,4二硝基氟苯柱前衍生。色譜條件：Agilent-18，2,4二硝基氟苯前置柱。流速為1lin-1，測定波長為360n。流動相：流動相A，0.04lL-1六亞甲基四胺水溶液用磷酸調pH=6.3。流動相B，50%乙腈，50%水。線性洗脫：當時間為0，12，20，40，48in時，流動相中的B的濃度為0%，15%，

12、25%，45%，98%。1.6含水量的測定腦組織經電子天平稱重后放入105枯燥箱中枯燥4h，再稱重腦含水量%=腦濕重-腦干重/腦濕重100%。1.7統計分析實驗數據以s表示，所有數據作ne-ayANVA，運用SPSS11.5軟件。轉貼于論文聯盟.ll.2結果在制作左側大腦中動脈阻塞模型過程中，由于造模不成功，或者死于麻醉藥過量，或者死于血管破裂，共有14只大鼠脫失。2.1中風芪紅利水膠囊對急性腦缺血大鼠腦組織中Glu、Asp含量的影響結果見表2。表1對急性腦缺血大鼠腦組織中Glu、Asp含量的影響略結果說明：與假手術組比擬，急性腦缺血模型組腦組織中Glu、Asp均極顯著升高P=0.000；與缺

13、血模型組相比，中風芪紅利水膠囊高、中、低劑量組在降低腦組織中Glu含量方面效果極顯著P=0.000,P=0.001,P=0.018；與缺血模型組比擬，中風芪紅利水膠囊高、中、低劑量組在降低腦組織中Asp含量方面效果極顯著P=0.000,P=0.031,P=0.05；與步長腦心通組比擬，中風芪紅利水膠囊高、中劑量組在降低腦組織中Glu含量方面效果明顯優于步長腦心通膠囊組P=0.000，P=0.045；中風芪紅利水膠囊低劑量組在降低腦組織中Glu含量方面與步長腦心通組比擬無顯著性差異P=0.933；與步長腦心通組比擬，中風芪紅利水膠囊各劑量組在降低腦組織中Asp含量方面與步長腦心通膠囊組無顯著性差

14、異(P0.05)。2.2中風芪紅利水膠囊對急性腦缺血大鼠腦組織含水量的影響結果見表2。表2對急性腦缺血大鼠腦組織含水量的影響略表2結果說明：與假手術組比擬，急性腦缺血模型組大鼠腦組織含水量顯著升高P=0.000；與急性腦缺血模型組比擬，中風芪紅利水膠囊高、中、低各劑量組能極顯著降低腦組織含水量P0.01；中風芪紅利水膠囊高、中劑量組較步長腦心通組能顯著降低腦組織含水量P=0.000,P=0.015,中風芪紅利水膠囊低劑量組降低腦組織含水量與步長腦心通組相比無顯著性差異P=0.054。3討論興奮性氨基酸的積累在急性腦缺血中起著樞紐性作用。在缺血區，興奮性刺激觸發炎癥反響，凋亡性或壞死性細胞死亡。

15、興奮毒性通過N-甲基-D-天(門)冬氨酸受體介導的鈣內流被認為是腦缺血后導致對神經元產生毒性的原因5。大量的Glu激活代謝型Glu受體，從而激活了與Gq蛋白相耦聯的磷脂酰肌醇信號轉導途徑，最終導致細胞通透性發生改變，使大量的Na+和l-進入細胞內，水被動進入胞內引起細胞腫脹，誘導細胞壞死和凋亡6。在腦缺血的過程中，EAA的神經毒性作用既是損傷腦組織的啟動者又是執行者7。王繼生等8認為興奮性氨基酸的降低對遭受缺血的神經元有益。在我們的實驗中，遭受急性腦缺血的大鼠腦組織中谷氨酸、天門冬氨酸程度和含水量較假手術組顯著升高(P0.01)。該結果與其他觀察者一致4。該結果顯示腦缺血導致谷氨酸、天門冬氨酸

16、顯著升高，支持上述興奮性毒性假說。此外，當給予中風芪紅利水膠囊后，缺血腦組織中谷氨酸、天門冬氨酸、水含量均顯著降低，說明中風芪紅利水膠囊可以降低興奮毒性所致的腦損傷。總之，由此可推斷出中風芪紅利水膠囊對缺血腦損傷具有保護作用。該保護機制與中風芪紅利水膠囊能降低缺血腦組織中谷氨酸、天門冬氨酸、水含量相關。【參考文獻】1Phillisj,ReganH.Therlefphsphlipases,ylxygenasesandlipxygenasesinerebralishei/trauatiinjuriesJ.rit-Rev-Neurbil,2022,I5(1):61.2AsitaS.Sarrafzad

17、eh,DanielHaux,LutzLudeann,etal.erebralIsheiainAneurysalSubarahnidHerrhage:Arrelativeirdialysis-PETStudyJ.Strke,2022,353:638.3李小鳳,孫圣剛,童萼塘.大鼠可逆性局灶性腦缺血模型復制方法的改良J.中華中醫學雜志,2000,24(4):192.4HangHuiXin,ZhangjianXin,LiLanFang,etal.EffetfnitrixidesynthaseinhibitrainguanidinenainaidntentsfisheibraininratJ.hinPharalTxil，2022,19(2):87.5BanD,YungK,GuerinJ,leavageftheplasaebraneNa+/a2+exhangerinexittxiityJ.