1、選修一專題五課題1DNA的粗提取和鑒定L1一.DNA的理化特性 DNA為白色纖維狀固體，微溶于水，其鈉鹽在水中的溶解度較大。但不溶于乙醇、乙醚和氯仿等一般有機溶劑。（用乙醇從溶液中沉淀核酸）L2二.RNA的理化特性RNA為白色粉末狀固體，微溶于水，其鈉鹽在水中的溶解度較大。但不溶于乙醇、乙醚和氯仿等一般有機溶劑。（用乙醇從溶液中沉淀核酸）L3在鹽溶液中的溶解度比較DNA和RNA在細胞中常以核蛋白形式存在，兩種核蛋白在鹽溶液中的溶解度不同。 DNA核蛋白 RNA核蛋白 0.14mol/LNaCl - + 1-2mol/LNaCl + -L4鹽析(SaltingOut) 在蛋白質溶液中加入大量的中

2、性鹽以破壞蛋白質的膠體穩定性而使其析出，這種方法稱為鹽析。常用的中性鹽有硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等。各種蛋白質鹽析時所需的鹽濃度及pH不同，故可用于對混和蛋白質組分的分離。例如用半飽和的硫酸銨來沉淀出血清中的球蛋白，飽和硫酸銨可以使血清中的白蛋白、球蛋白都沉淀出來，鹽析沉淀的蛋白質，經透析除鹽，仍保證蛋白質的活性。調節蛋白質溶液的pH至等電點后，再用鹽析法則蛋白質沉淀的效果更好。三 蛋白質的鹽析L5四 提取生物大分子的基本思路選用一定的物理或化學方法分離具有不同物理和化學特性的生物大分子。篩選生物大分子L6五 .DNA的提取原理1和RNA和蛋白質等其他的生物大分子在不同濃度的NaCl溶液中溶解度

3、不同。通過改變NaCl溶液的濃度，將DNA析出或溶解，進而將之分離出來類比：微生物的篩選和分離通過添加或減少培養基的組成，有利于培養微生物的生長同時抑制其他微生物的生長。L7DNA在不同濃度NaCl溶液中的溶解特點高容低析過低溶L8DNA提取原理2不溶于酒精，而細胞中的某些蛋白質則溶于酒精。用95%的冷卻酒精溶解蛋白質，而不溶解DNA，實現除去部分蛋白質雜質的目的。L9L10DNA的提取原理3蛋白酶，高溫（60-80），洗滌劑等，會影響蛋白質，細胞膜等，但是不影響DNAL11L12總結：雜質的去除：1 鹽析法通過改變鹽溶液的濃度使其溶解或析出，分別除去析出或溶解的雜質。L13雜質的去除：2 酶

4、解法L14雜質的去除：3變性法加熱至60-75C，可以使蛋白質變性而DNA保持穩定。L15六 DNA的鑒定原理沸水浴，遇二苯胺呈蘭色L16對照組實驗組L17七 實驗流程析出和鑒定材料選取獲得DNA濾液去雜質L18L19八 廚房式實驗： DNA的提取選材：番石榴，白色洋蔥，白蘿卜等。用具和試劑：食鹽，洗滌劑，冰冷95%酒精，蒸餾水，二苯胺溶液，0。2%的乙醛溶液，2M食鹽溶液。研缽，小刀，濾紙，燒杯，試管，玻璃棒，三角架，石棉網，酒精燈，試管夾，火柴。L20問題思考洗滌劑的作用是什么？加食鹽的作用是什么？冰冷酒精的作用是什么？需要設置對照實驗嗎？如何設置？L21實驗步驟：取番石榴約1/4，加兩藥

5、勺食鹽，約10毫升洗滌劑，在研缽中充分研磨，用濾紙過濾濾液至燒杯中。在燒杯中加入酒精，用玻璃棒將白色絮狀物挑出，溶解到2M食鹽溶液中。加二苯胺試劑，沸水浴加熱5分鐘，冷卻后觀察溶液顏色變化。L22L23九 核酸的紫外吸收在核酸分子中，由于嘌呤堿和嘧啶堿具有共軛雙鍵體系，因而具有獨特的紫外線吸收光譜，一般在260nm左右有最大吸收峰，可以作為核酸及其組分定性和定量測定的依據。L24鞏固練習1.在制備雞血細胞液的過程中，加入檸檬酸鈉的目的是（ ） A 防止凝血 B. 加快DNA析出 C. 加快DNA溶解 D. 加速凝血 L25鞏固練習 2.去除DNA雜質時，可直接在濾液中加入（ ），反應1015m

6、in嫩肉粉 B. 蒸餾水 C. 2mol/lNaCl D. 酒精 L26鞏固練習例3 DNA在NaCl溶液中溶解度有二重性，隨著NaCl溶液的變化而變化。（1）請在下列NaCl溶液中選出溶解度能使DNA析出最徹底的一種（ ）和溶解度最高的一種（ ）A. 0.14mol/l B. 2mol/l C. 0.15mol/l D. 0.3mol/l（2）DNA不溶于酒精溶液，但細胞中的某些物質卻可以溶于酒精溶液，利用這一原理可以_，可以推測溶于酒精中的物質可能有_。（3）利用DNA與_變藍色的特性，將該物質作為鑒定_的試劑。其實驗過程要點是向放有_的試管中加4ml的_。混合均勻后，將試管置于_5min

7、，待試管_，觀察試管中溶液顏色的變化，這個實驗也說明DNA耐_溫。 L27鞏固練習4 關于DNA在NaCl溶液中的溶解度，下面敘述中正確的時（ ）A. 隨著NaCl溶液濃度的增大，DNA在NaCl溶液中的溶解度也增大B. 隨著NaCl溶液濃度的減少，DNA在NaCl溶液中的溶解度也減少C. DNA在NaCl溶液中的溶解度與NaCl溶液的濃度無關當NaCl溶液的濃度為0.14mol/l時，DNA的溶解度最低 L28鞏固練習5. 下列關于DNA粗提取與鑒定的說法正確的是（ ） A、氯化鈉的濃度越低，對DNA的溶解度越大 B、人血也可代替雞血進行實驗 C、檸檬酸鈉的主要作用是加速血細胞破裂D、DNA

8、不能溶于酒精 L29鞏固練習6.在破碎雞血細胞時，要先加入20ml的蒸餾水，其作用是（ ）A. DNA溶解于水B. 血細胞破裂，DNA釋放C. 稀釋血液，防止凝固有利于攪拌 L30鞏固練習 7若選擇的實驗材料為植物細胞，破碎細胞時要加入一定量的洗滌劑和食鹽，加入食鹽的目的是（ ）A. 利于DNA的溶解B. 分離DNA和蛋白質C. 溶解細胞膜D. 溶解蛋白質 L31鞏固練習8 DNA不溶于（ ） A. NaCl溶液 B. KCl溶液 C. C2H5OH溶液 D. MgCl溶液 L32鞏固練習9 如果在除去雜質時選擇方案三，為什么要將濾液放在6075的恒溫水浴箱中保溫1015min（ ）A. 使D

9、NA變性B. 使蛋白質變性C. 使DNA和蛋白質變性D. 分解蛋白質 L33鞏固練習以花椰菜為實驗材料進行DNA的粗提取實驗： （1） 準備材料：將新鮮的花椰菜和體積分數為95的酒精溶液放入冰箱冷卻24h。（2） 研磨細胞，獲取含DNA的濾液：將花椰菜中加入一定的洗滌劑和食鹽，進行成分的攪拌和研磨，過濾后收集濾液 加入洗滌劑的作用是什么？ 加入食鹽的作用是什么？ 這一步是實驗成功與否的關鍵，如果研磨不充分，會對實驗結果產生怎樣的影響？ 此步驟獲得的濾液中可能會有哪些細胞成分？（3） 去除溶液中的雜質，也就是DNA的純化 DNA的純化利用了DNA的哪些特性？L34鞏固練習 根據實際情況，寫出你去除雜質的設計方案并寫出方案依據的原理？（2） DNA的析出與鑒定 常溫下的酒精溶液也可使DNA析出，可實驗一般要求采用預冷的體積分數為95的酒精溶液，從理論上分析，冷卻的酒精溶液有什么特點？ DNA鑒定的方法有哪些？L35鞏固練習11下列操作中，對DNA的提取量影響較小