1、TRUST試驗討論問題參考答案試驗中VDRL抗原包含哪些成分各起什么作用心磷脂：與反應素結合；卵磷脂：加強心磷脂的抗原性；膽固醇：增強抗原的敏感性。三者按適當比 例配制的乙醇溶液。EDTA防止抗原變性（半年內），氯化膽堿滅活待檢血清中補體。什么是反應素，反應素是如何產生的其有什么免疫學特性反應素為抗類脂質（心磷脂）抗原的抗體。由螺旋體本身釋放的脂蛋白樣物質和心磷脂或病損細胞 釋放的類脂誘導產生。非特異性抗體，具有廣泛的交叉反應性，可與200多種抗原反應。試驗陽性，即患者血清中檢出反應素就能診斷為梅毒嗎為什么TRUST試驗陽性不能確診為梅毒。TRUST試驗檢測的反應素為梅毒螺旋體非特異性抗體，除

2、梅毒外， 自身免疫病（SLE、RA、SS等）、惡性腫瘤、動靜脈血栓、心血管病、妊娠、反復流產、瘧疾、結核、麻風、 HIV感染、其它性傳播疾病、其它螺旋體感染、多種皮膚病、發熱疾病、多次輸血、新近免疫接種、靜脈 注射毒品者等有一定的陽性率（生物學假陽性），但反應素效價通常1:8，生物學假陽性反應中約23在6 個月或更短時間內消失。反應素陽性需結合臨床綜合考慮才能作出診斷。一期梅毒初發時反應素陽性率 70%90% （很多患者初次測定反應素可能為陰性，間隔2周后再測定）；二期梅毒患者陽性率可達100%； 晚期梅毒患者陽性率顯著下降，為40%95%。試驗陽性，為什么還要進一步做TPPA試驗TRUST試

3、驗檢測的反應素為梅毒螺旋體的非特異性抗體，在低危人群篩查時假陽性率較高，故陽性結 果需用密螺旋體抗體實驗（如TPPA等）確認。ELISA檢測HBsAg討論問題參考答案請從測定操作方面討論ELISA試驗結果的影響因素。標本采集與保存：溶血、長菌、貯存時間過長、血凝固不全、反復凍融等；試劑準備：用前將試 劑盒平衡至室溫；儀器設備：加樣槍、酶標儀、洗板機、保溫箱和溫度計等性能、質量、校準和準確性; 加血清標本及試劑：加到孔底，不可太快、濺出和產生氣泡；溫育：溫度和時間要準確、足夠；洗 板：用試劑盒內配的洗滌液，洗滌液加滿，洗滌次數和每次洗滌的浸泡時間要夠，拍干；顯色：溫度和 時間要準確、足夠；終止反

4、應：酶標儀比色，必須加終止劑，終止酶促反應和轉換吸收峰；結果判斷: 以試劑盒說明書為準；酶標儀比色：最好用雙波長法，并在儀器設定時不設空白。雙抗體夾心一步法檢測HBsAg時，若樣品中HBsAg濃度太高會發生什么后果為什么遇到此現象應如何處 理若樣品中HBsAg濃度過高會發生鉤狀效應導致實驗結果出現假陰性或假低值。血清標本中HBsAg濃度太高，一部分HBsAg完全飽和固相抗HBs，反應液中剩余游離HBsAg與酶標抗 HBs結合，導致固相抗HBsHBsAg酶標抗HBs復合物形成減少甚至未形成，洗滌時反應液中的HBsAg酶標 抗HBs復合物被洗掉，留在固相載體上的酶減少甚至沒有，加入底物后，顯色淺或

5、不顯色。血清標本作1:1000稀釋后再測定。如何做ELISA試驗的室內質控其目的是什么每次實驗應同時設置：已知含有待測物的陽性對照、不含有待測物的陰性對照、空白對照和弱陽性質 控血清。陽性對照監測反應條件和試劑等，陰性對照監測非特異性吸附、洗滌等，空白對照監測底物是否 變質，在無酶的條件下是否顯色，弱陽性質控血清監測試驗的檢測下限。|ANA試驗討論問題參考答案什么是ANA目前臨床上篩檢ANA的最常用方法是什么抗核抗體（ANA）是一組以真核細胞的各種核成分為靶抗原的自身抗體的總稱。主要為IgG，也有IgM、IgA和IgD,無器官和種屬特異性。目前臨床上篩檢ANA的最常用方法是間接免疫熒光法。在固

6、相膜免疫測定試驗中，ANA檢測對照線和HCG檢測對照線各是如何形成的ANA檢測對照線：對照上包被的人IgG與膠體金標記的抗人IgG抗體結合，使大量膠體金顆粒聚集在 對照線上，對照線出現紅色。HCG試驗討論問題參考答案在固相膜免疫測定試驗中，HCG檢測對照線各是如何形成的*HCG檢測對照線：對照線上包被的抗鼠Ig抗體與金標單克隆抗體結合，使大量膠體金顆粒聚集在對照 線上，對照線出現紅色。免疫印跡法檢測ENA抗體試驗討論問題參考答案什么是ENAENA抗體譜包括哪些自身抗體ENA抗體的檢測方法ENA（extracable nuclear antigens,可提取性核抗原）為細胞核中可用鹽水提取的一組

7、靶抗原的總稱。ENA 抗體譜包括抗 Sm、抗核 RNP、抗 SS-A/Ro、抗 SS-B/La Jo-1抗 Scl-70 等。目前ENA抗體檢測的最常用方法：免疫印跡法（IBT）。免疫印跡法檢測ENA抗體試驗，酶標記什么物質，檢測過程中其與什么物質反應ENA抗體檢測對照線 是如何形成的酶標記抗人IgG的抗體。酶標記抗人IgG的抗體與印跡膜條上ENA-抗ENA-IgG復合物（10分）中IgG Fc段特異結合。ENA抗體檢測對照線：對照線上包被的人IgG與HRP標記的抗人IgG抗體結合，加入酶底物，酶催化 底物反應生成不溶性有色產物，使印跡膜上對照線著色。免疫印跡法檢測ENA抗體試驗，若免疫印跡膜

8、洗滌不干凈和反應槽內有液體殘留，各會引起什么后果印跡膜洗滌不干凈，殘留的血清IgG與后續加入的酶標抗人IgG抗體結合，或殘留的酶標抗人IgG抗 體，二者可導致非特異性顯色，使膜條背景色加深。反應槽內有液體殘留，殘留液中的血清IgG可與印跡膜條上ENA-抗 ENA-IgG復合物中的IgG競爭結合 后續加入的酶標抗人IgG，降低試驗靈敏度；殘留液中的酶標抗人IgG中的酶可催化底物顯色，使膜條背 景色加深，掩蓋抗ENA抗體顯色條帶，干擾結果判斷。試分析反應溫度和時間對免疫印跡法檢測ENA抗體結果的影響反應溫度不夠使抗原抗體反應速度和酶活性降低，反應時間不夠使抗原抗體反應和酶催化底物顯色反 應不完全，

9、實驗敏感性降低，甚至導致假陰性。但反應溫度過高降低抗原、抗體和酶的活性，同時會增加 印跡膜非特異性吸附，導致非特異性顯色，膜條背景色加深。反應時間過長也會增加印跡膜非特異性吸附。免疫印跡試驗，在顯色前，為什么要將底物（顯色劑）平衡至室溫顯色反應是一種酶促反應，與反應溫度和時間有關。如果底物剛從冰箱取出就參與酶促顯色反應，反 應溫度只有4C，會使顯色弱而影響靈敏度。讓底物溶液平衡至室溫，使其溫度接近37r，以減少溫度對 酶催化底物顯色反應的影響?？笶NA抗體的臨床意義抗Sm： SLE的血清標志性抗體。對SLE的特異性為99%，敏感性為20%40%?？筍m陰性不能排除 SLE。抗Sm抗體水平與SL

10、E疾病的活動性和臨床表現無相關性。對早期、不典型的SLE或治療后的回顧性 診斷具有很大幫助?？筊NP抗體：抗U1-RNP抗體。高效價抗RNP抗體是診斷MCTD的重要血清學依據，陽性率95%。但無疾病特異性，其它AID也可檢出：SLE 30%40%，SS 20%、RA 15%50%、進行性系統性硬皮?。≒SS） 10%15%、皮肌炎（DM） /多發性肌炎（PM）10%。SSA/Ro抗體和SSB/La抗體：SS患者中最常見的自身抗體，二者的陽性率均為40%95%, 一般同時 出現。SS-A抗體在SLE、新生兒狼瘡、RA、原發性膽汁性肝硬化（PBC）中的檢出率分別為20%60%、100%、 3%10

11、%、20%。SS-B抗體對SS的特異性高于SS-A抗體（可達50%60%）, SS的標志性抗體，SLE中陽性 率為10%20%。抗J01抗體：最常見于PM,為PM標志性抗體。在PM、PM/DM、單獨DM、硬皮病中的檢出率分別 為 40%50%、25%、10%、2%5%。抗Scl70抗體：特異性地出現于PSS病人，陽性率為25%70%。局限性硬皮病為陰性。實驗原理檢測HBsAg的原理在微孔上包被純化乙肝表面抗體（抗HBs） （5分），加入待檢血清和酶標抗HBs（抗HBs-HRP），血清 中HBsAg與微孔上的抗HBs和酶標抗HBs結合（5分），洗滌分離后（5分），加入酶底物系統進行顯色反 應（5

12、分）。顯色為陽性，不顯色為陰性（5分）。檢測AFP的原理在微粒上包被純化AFP抗體（5分），加入待檢血清和ALP標記的AFP抗體，血清中AFP與微粒上的 AFP抗體和ALP標記的AFP抗體結合（5分），洗滌分離后（5分），加入ALP底物，ALP催化底物進行化學 發光反應（5分）。發光強度與血清中AFP濃度呈正相關（5分）。實驗原理將VDRL抗原致敏的甲苯胺紅顆粒與待檢血清混合（5分），若待測血清中存在反應素（5分），其與 甲苯胺紅顆粒表面VDRL抗原結合（5分），使甲苯胺紅顆粒凝集（5分），出現粉紅色凝塊（5分）。金免疫層析實驗檢測HCG的原理金標記的抗HCG a McAb干片粘貼在近下端，抗

13、HCG B單克隆抗體和抗小鼠IgG抗體分別固定在NC膜 反應區的檢測線和對照線上（5分）。當試紙條下端浸入液體標本中，下端吸水材料即吸取液體，液體向上 端移動，流經金標抗HCG a McAb干片時使其復溶，若標本中有HCG，可與金標抗HCG a McAb結合（5分）。 此抗原抗體復合物移動至檢測線時即被固相抗HCGB所捕獲（5分），在膜上顯出紅色檢測線（5分）。過 剩的金標抗HCG a McAb繼續前行，至對照線與固相抗小鼠IgG結合，出現紅色對照線（5分）。免疫印跡法檢測ENA抗體的原理先將ENA進行SDS，使混合ENA多肽抗原按分子量大小分離為不同區帶，然后轉移至NC膜上， 制成ENA印跡

14、膜條（5分）。讓ENA印跡膜條與稀釋后的患者血清共同溫育進行第一步反應，如標本中含 有ENA抗體，則該抗體（IgG）與印跡膜上相應ENA特異結合（5分）。為檢測結合的抗體，用酶標記抗人 IgG進行第二次溫育反應（5分），最后加入酶底物，酶催化底物進行氧化還原反應生成不溶性有色產物， 使印跡在膜上的抗原條帶著色（5分）。根據膜上顯色區帶的位置，對照ENA抗體標準圖譜，判斷有無某 種抗ENA抗體（5分）。間接免疫熒光法檢測ANA的原理固定在生物薄片反應區上的Hep-2細胞核抗原與稀釋后的患者血清（第一抗體）溫育反應（5分）， 如血清中含有ANA，其與細胞核成分特異結合（5分）。洗滌分離后（3分），加入熒光素標記的抗人IgG 與結合在核抗原上的ANA-IgG Fc段特異性反應（5分），洗滌分離后（2分），在