1、 PAGE 977十七(sh q) 常用培養(yǎng)基配方17.1 營養(yǎng)(yngyng)瓊脂培養(yǎng)基成分(chng fn) 蛋白胨 10g 牛肉膏 3g氯化鈉 5g瓊脂 1520g蒸餾水 1000mL制法：將除瓊脂以外的各成分溶解于蒸餾水內(nèi)，加入15%氫氧化鈉溶液約2ML，校正PH7.27.4，加入瓊脂，加熱煮沸，使瓊脂溶化。分裝在三角錐瓶中，在121下高壓滅菌15分鐘。 17.2 乳糖膽鹽發(fā)酵管培養(yǎng)基（單料） 成分蛋白胨 20g豬膽鹽 5g乳糖 10g0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL 蒸餾水 1000ml PH7.4 制法將蛋白胨，膽鹽及乳糖溶于水中，校正PH值，加入指示劑分裝，每支管10ml，并放

2、入一個小倒管（產(chǎn)氣管），在115下高壓滅菌15分鐘。注：雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管培養(yǎng)基除蒸餾水外，其他成分加倍。17.3 乳糖發(fā)酵管培養(yǎng)基（單料）成分蛋白胨 20g乳糖 10g0.04%溴甲酚紫水溶液 25ml 蒸餾水 1000mlPH7.4制法將蛋白胨及乳糖溶于水中，校正PH，加入指示劑分裝，每支管3ml，并放入一個小倒管（產(chǎn)生氣），在115下高壓滅菌15分鐘。注：雙料乳糖發(fā)酵管培養(yǎng)基除蒸餾水外，其他成分加倍。17.4 伊紅美瓊脂(qingzh)（EMB）培養(yǎng)基成分(chng fn)蛋白(dnbi)胨 10g乳糖 10g磷酸氫二鉀 2g瓊脂 2g2%伊紅溶液 20ml0.65%美蘭溶液 10 ml

3、蒸餾水 1000mlPH7.1制法將蛋白胨，磷酸鹽和瓊脂溶解于蒸餾水中，校正PH，分裝于三角錐瓶內(nèi)，在121下高壓滅菌15分鐘后備用。臨用時加入乳糖并加熱熔化瓊脂，冷卻至5060，加入伊紅和美藍(lán)溶液搖勻，澆注平板。17.5 遠(yuǎn)藤氏培養(yǎng)基配方：蛋白棟 10.0g乳糖 10.0g磷酸氯二鉀 3.5g亞硫酸氫鈉 2.5g堿性品紅 0.4g瓊脂 10.0g蒸餾水 100ml制備：配料放入蒸餾水中，攪拌15分鐘，使其溶解，分裝到三角瓶或試管，121滅菌20分鐘， 冷卻后貯于暗處，最佳溫度為48以保持淺粉紅色。17.6 UBA培養(yǎng)基酵母浸膏 6.1g蛋白胨 15g番茄汁（244ml） 12.2g葡萄糖 1

4、6gK2HPO4 0.31gKH2PO4 03.1gMgSO7H2O 0.12gNaCl 0.006gFeSO47H2O 0.006gMnSO4H2O 0.006g瓊脂12g蒸餾水 750ml啤酒(pji) 250g將上述配料加入水中，加熱至沸，攪拌至完全溶解，趁熱加入未脫氣(tu q)的啤酒，輕輕攪拌混合，用HCI或NaOH調(diào)pH為6.0+0.1，分裝于三角瓶中，121蒸汽滅菌(mi jn)20min。待冷卻后，放置在36培養(yǎng)24h小時備用。17.7 乳酸桿菌培養(yǎng)基UBA+ABP抑制劑溶液（UBA見前）ABP抑制劑溶液配料放線菌酮 0.1g溴甲酚綠 0.15g無離子水 80ml2-苯乙醇 2

5、0ml配制把溴甲酚綠放入50毫升水中，煮沸至完全溶解，把放線菌酮溶于30毫升水中，將兩種溶液混合，分裝于帶螺旋蓋的瓶中，每瓶20毫升，在121蒸汽滅菌10分鐘，冷卻后，每個瓶內(nèi)加5毫升2-苯乙醇，并擰緊瓶蓋。該溶液會分成兩層，使用前須用力搖勻。17.8 KOT培養(yǎng)基配方胰朊酶蛋白胨 5.0g麥汁浸出生 2.5g酵母浸出物 2.5g肝濃縮物 1.0g麥芽糖 5.0g葡萄糖 5.0gL-蘋果酸 0.5g吐溫-80 1mlK2HPO4 0.5gMgSO47H2O 0.125gMnSO45H2O 0.025g鹽酸半光氨酸 0.5g胞苷 0.2g胸苷 0.2g啤酒 800ml放線菌酮 100mlNaN3

6、 50mg瓊脂 20g蒸餾水至 100mlPH25.417.9 日本(r bn)KL-2B培養(yǎng)基配方(pi fng)：胰蛋胨 20.0g麥汁浸生物(shngw) 10.0g酵母浸出生 5.0g麥芽糖 10.0gK2HPO4 3.0g MgSO47H2O 1.0gMnSO45H2O 0.25g檸檬酸 2.75g吐溫-80 100mgNaN3 50mg瓊脂 20g蒸餾水至 1000mlPH5.217.10 MRS麥芽糖瓊脂培養(yǎng)基沒有一種單獨的方法能夠檢測所有的乳酸細(xì)菌，這些細(xì)菌對各種糖的利用能力是有差別的，許多菌株能在好氧條件下在瓊脂培養(yǎng)基上生長，而另一些菌株則更容易在厭氧條件下生長。下面列出的培

7、養(yǎng)基，能檢測出許多種的乳酸細(xì)菌。但是，這些培養(yǎng)基不是絕對的，使用者可根據(jù)自己的經(jīng)驗進(jìn)行修正后采用。原理：液體樣品培養(yǎng)在含有合適的不同種類瓊脂培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，計算活菌落數(shù)。麥芽糖 5.0g蛋白胨 10.0g牛肉浸膏粉 8.0g酵母浸出物 4.0g葡萄糖 20.0g吐溫-80 1.0mlK2HPO4 2.0g醋酸鈉 5.0g檸檬酸銨 2.0gMnSO45H2O 0.2gMgSO47H2O 0.05g瓊脂 15g在蒸餾水中溶解，并定容至1L。用1.0NHCl或0.1NNaOH調(diào)至4.7。蒸汽滅菌121，20分鐘。17.11 Ra-Ray培養(yǎng)基NBB培養(yǎng)基是德國進(jìn)行啤酒有害菌檢查常用培養(yǎng)基，正如大家

8、所知德國在有害菌研究領(lǐng)域(ln y)處于領(lǐng)先地位，所以很多文獻(xiàn)中提到使用NBB培養(yǎng)基有必要講清楚。NBB培養(yǎng)基是Prof.Back專門(zhunmn)為檢查啤酒有害菌而開發(fā)的。NBB培養(yǎng)基分三種，NBB-A（瓊脂型）、NBB-B（試液型）、NBB-C（濃縮型），最近(zujn)又推出NBB-Am，是在NBB-A的基礎(chǔ)上開發(fā)的。NBB培養(yǎng)基是專利產(chǎn)品，由德國Doher公司制造銷售。NBB-A適用于刷洗水、啤酒為樣品的細(xì)菌檢查。NBB-B適用于酵母（回收酵、培養(yǎng)酵母）的細(xì)菌檢查。NBB-C適用于有酵母的混濁啤酒（發(fā)酵液、未過濾啤酒）。培養(yǎng)溫度：25-28培養(yǎng)時間：嚴(yán)重污染樣品，1天可以檢出。污染輕

9、微或生長緩慢的菌5天左右。培養(yǎng)條件：厭氧二氧化碳充氣下。注：雖然NBB有很高的檢出率，但由于樣品過濾或殘有空氣都可能使Pectinatus菌、Megashaera菌不能檢出。17.12 LMDA培養(yǎng)基 番茄汁固形物蛋白胨 2%泛酸鈣 0.2%酵母浸膏 1%葡萄糖 1%碳酸鈣 0.5%檸檬酸 0.11%磷酸氫二鉀 0.05%磷酸二氫鉀 0.05%硫酸鎂 0.02%硫酸錳 0.001%氯化鈉 0.001%硫酸鐵 0.001%溴甲酚紅綠 0.0022%吐溫-80 0.05%放線菌酮 0.0007%瓊脂 1.5%配制加水溶解，分裝三角瓶，121蒸汽滅菌10分鐘，冷卻后，避光保存。17.13 日本Pec

10、tinatus屬菌檢出培養(yǎng)基 配方：蛋白胨 10.0g麥芽(mi y)浸出物 8.0g酵母(jiom)浸出物 4.0gK2HPO4 2.0gNaCl 5.0gMgSO47H2O 0.2gMnSO45H2O 0.05g吐溫-80 1mlL-Cystine-HClCMonnhydrate 0.5gResazurin鈉鹽 1mgErythromycin 5mg瓊脂(qingzh) 20g蒸餾水至 1000mlPH6.017.14 麥汁液體培養(yǎng)基取原麥汁（頭濾麥汁），用單層濾紙過濾后，冷卻至40以下。過濾后的原麥汁8001000ml中加一個蛋清，（加蛋清之前，往蛋清里加少許蒸餾水或麥汁充分?jǐn)噭颍a(chǎn)沫為

11、止，然后加入麥汁里）混勻。加熱煮沸（最好間接加熱）2030分鐘，然后冷卻至70左右后用雙層濾紙過濾。把過濾后的麥汁冷卻至20后，測糖度，然后稀釋至糖度為12P。調(diào)整PH值為5.45.7，然后分裝（試管加6ml，小三角錐瓶加50ml，中三解瓶加200ml），用牛皮紙包扎。在高壓滅菌鍋里110壓力下，滅菌20分鐘。17.15 麥汁固體培養(yǎng)基步驟同上調(diào)整PH值為5.45.7后，加1.52.0%的瓊脂粉，加熱（最好間接加熱）溶化瓊脂，分裝，包扎。在高壓滅菌鍋里110下，滅菌20分鐘，冷卻至60左右后，擺斜面或倒平板。17.16 WLN瓊脂培養(yǎng)基酵母浸膏 4.0g干酷素酮 5.0g葡萄糖 50.0g磷酸

12、二氫鉀 0.55g氯化鉀 0.425 g氯化鈣 0.124g氯化鐵 0.0025g 硫酸鎂 0.125g硫酸錳 0.0025g瓊脂(qingzh) 20.0g溴甲酚綠 0.022g蒸餾水 1.0L上述組分除瓊脂外溶解于蒸餾水中，調(diào)整溶液PH為5.5，加瓊脂，很好混合，加熱(ji r)，使瓊脂溶解，高壓斧121蒸汽滅菌(mi jn)不少于15min，冷卻至4045，分裝于無菌培養(yǎng)皿中。17.17 YPD培養(yǎng)基配方：酵母浸出物 10g蛋白胨 20g葡萄糖 20g瓊脂 20g蒸餾水 1000ml溶解后121滅菌15分鐘，冷卻，制成平皿固體培養(yǎng)基。17.18 TTC瓊脂培養(yǎng)基溶液A：三苯基四唑氯2.0g磷酸緩沖液100.0ml（磷酸緩沖液濃度為0.134mol/L，PH7.2）（無水NaH2PO41.26g，無水Na2HPO41.16g加水溶解至100ml）溶液B：瓊脂20.0g蒸餾水100