1、動物實驗基本操作一固定、性別判定、標識【實驗目的】在做動物試驗時，為確保給藥、實驗順利進行，防止被動物咬傷、準確區分動物性別、準確標識動物，要學會用正確方法捉拿實驗動物、掌握區分動物性別的方法以及掌握標識動物的方法。【實驗對象】SD大鼠，KM小鼠，雌雄各半，體重180-250g。【實驗器材和藥品】器材：鼠籠、大小鼠固定器、方木板、美式圖釘、細繩、防護手套藥品：苦味酸80%90酒精飽和溶液、20%；拉坦【實驗步驟】一、小鼠的捉拿1、徒手固定：用右手提起尾巴中部，放在鼠籠蓋或其他粗糙面上。向后上方輕拉，此時，小鼠前肢緊緊抓住粗糙外表。左手拇指和食指迅速捏住小鼠頸背部皮膚，再置小鼠于左手心，并以左手

2、掌心和中指夾住小鼠背部皮膚，無名指壓住小鼠尾根部，將其固定于手中。右手可行注射或其它操作。2、固定器固定：尾靜脈注射或給藥時，將小鼠放進固定器中或者大小和重量適當的容器如燒杯，只露出尾巴，該類容器能夠壓住尾部，防止其活動。勿固定過緊造成窒息死亡。進行腹腔手術或心臟采血時，先準備一個15-20cm的方木板，邊緣釘入五顆釘子。將小鼠四肢分別用20-30cm的線繩捆綁，線的另一頭分別綁在方木板的釘子上，并且在頭部上顆切齒牽引一根線繩，也固定在釘子上，到達完全固定。二、大鼠的捉拿4-5周內的大鼠，方法同小鼠。周齡較大的，貝U:1、首先戴好防護手套。2、用右手拇指和食指抓住大鼠尾巴中部將大鼠提起，放在大

3、鼠飼養盒的面罩上。3、左手順勢按、卡在大鼠軀干背部，稍加壓力向頭頸部滑行。4、以左手拇指和食指捏住大鼠兩耳后部的頭頸皮膚，其余三指和手掌握住大鼠背部皮膚，完成抓取保定。三、性別判定小鼠、大鼠性別判定1幼鼠夕卜生殖器與肛門間隔短的是旱，夕卜生殖器與肛門間隔長的是8。2成年動物可直接肉眼識別，雄性有膨起的陰囊和陰莖，雌性動物有陰道口。四、動物的標記小鼠的短期標記法：苦味酸80%90斕精飽和溶液黃色，標出屬于自己的編號【注意事項】1、實驗人員要有精神準備：掌握方法，膽大心細，做好防護。2、動物興奮的時候不要抓取，待其安靜下來。3、根據受試動物的給藥部位或采血方法的不同，事先選擇徒手固定還是固定器固定

4、。4、固定時把握好力度，過分用力會使小鼠頸椎脫臼或窒息死亡，假設用力過輕頭部能反轉過來咬傷實驗者的手。1. 【思考題】在固定實驗動物時如何才能快、準、穩？動物實驗基本操作二給藥途徑、采血【實驗目的】在做動物試驗時，為確保給藥、采血實驗順利進行，要掌握根據不同的情況進行動物給藥以及采血的正確方法。【實驗對象】SD大鼠180-250g，KM小鼠18-22g，雌雄各半。【實驗器材和藥品】器材：鼠籠、大小鼠固定器、方木板、長釘、細繩、防護手套，灌胃針，注射器1ml,5ml、棉球，剪毛剪、手術剪、手術刀、采血管、彎頭鑲子藥品：生理鹽水、75%酒精棉球，一次性采血管，一次性EP管【實驗步驟】一、給藥途徑1

5、、大、小鼠的灌胃法用左手固定鼠，右手持灌胃器（安好灌胃針并已吸好藥物），將灌胃針從鼠的嘴角插入口腔，壓迫鼠的頭部，使口腔和食管成一直線，輕輕轉動針頭刺激鼠的吞咽，將灌胃針沿咽后壁慢慢插入食管，如果動物掙扎厲害，退出灌胃針，待動物安靜下來，重新插入。灌胃針前端到達膈肌水平，即可慢慢推灌藥液，如很通暢，則說明已進入胃內。如不通將注射針刺入皮下，假稍微用手指壓片刻針刺暢，且動物掙扎厲害，須拔出重新操作。2、皮下注射左手拇指和食指輕輕提起動物皮膚，右手持注射器，設針頭容易擺動則證明針頭已在皮下，推送藥液，緩慢拔出注射針，部位，以防藥物外漏。肌肉注射比皮下和常采用肌3、肌肉注射選用肌肉發達，無大血管經過

6、的部位，如臀部或股部。腹腔注射用得較少，但當給動物注射不溶于水而混懸于油或其他溶劑中的藥物時,肉注射4、腹腔注射A、左手抓取并固定好動物，將腹部朝上。B、右手持注射器將針頭在下腹部腹白線稍左或偏右的位置，從下腹部朝頭方向幾乎平行地刺入皮下，進針3-5mniG再使針頭與皮膚呈45。角斜穿過腹肌，當針尖穿過腹肌進入腹腔時，有落空感，然后固定針頭，保持針尖不動，回抽，無回血，無腸液、尿液，便可緩緩推入藥液。5、靜脈注射尾靜脈注射A、大、小鼠尾靜脈共有3根（左、中、右），一般常選用兩側的靜脈。注射前，先把動物固定在暴露尾部的鼠尾固定器內（可用燒杯、鐵絲罩或粗試管等物代替）.B、拔去尾部靜脈走向的毛，用

7、75%酒精棉球反復擦拭鼠尾，以到達消毒、血管擴張及軟化表皮角質的目的。C、盡量從靜脈的遠心端刺入血管，回一下血，將藥液緩慢注入。以注射完畢，用棉球壓住針眼，拔去針頭，繼續壓迫數分鐘。二、采血1、心臟采血將動物仰臥固定在鼠板上，剪去胸前區部位的被毛，消毒。在左側第3-4肋間，用左手食指摸到心搏處，右手持注射器選擇心搏最強處穿刺。當針穿刺入心臟時，血液由于心臟搏動的力量自動進入注射器。如不需保留動物存活時，也可麻醉后切開動物胸膛，直接用注射器刺入心臟內采血，也可剪破心臟直接用注射器或吸管吸血。2、摘眼球采血用左手抓住動物頸部皮膚，并將動物輕壓在實驗臺上，稍微側臥，左手拇指盡量將動物眼周圍皮膚往眼后

8、壓，使動物眼球突出并充血，用彎頭鑲子迅速摘除眼球，眼眶內很快流出血液。3、眶靜脈叢竇采血將動物麻醉，采用側眼向上固定體位，用左手拇指和食指從背部較緊地握住大小鼠頸部。取血時，左手拇指及食指輕輕壓迫動物的頸部兩側，是頭部靜脈血液回流困難，眼球充分外突，眶靜脈叢充血。【注意事項】1、掌握方法，膽大心細，做好防護。2、常用灌胃量：小鼠：0.21ml,大鼠14ml3、摘取眼球采血法一般可取約為小鼠體重4-5%的血液量。1. 【思考題】如何熟練掌握大小鼠的給藥途徑和采血方法？動物實驗基本操作三安樂死【實驗目的】在科學應用和教學實驗中，因實驗終結、研究所需提供血液或其他組織臟器、不適合繁殖或者是當動物的疼

9、痛與窘迫程度超過預期等情況下，需要我們以人道的方式使動物死亡，使動物在最低程度的疼痛、恐懼，并在最短的時間內失去知覺和痛覺。【實驗對象】KM小鼠，雌雄各半，體重18-22g。【實驗器材和藥品】器材：鼠籠、大小鼠固定器、注射器1ml、棉球，剪毛剪、手術剪、手術刀、采血管、彎頭鑲子、燒杯100ml、方木板藥品：吸入性麻醉劑、注射型麻醉劑、75%酒精棉球【實驗步驟】1、頸椎脫臼法用拇指和食指用力往下按住鼠頭，另一只手抓住鼠尾鼠尾根部，用力往后上方一拉，使頸椎脫臼，造成脊髓與腦髓斷離，動物立即死亡。2、放血法麻醉動物后，將動物股、頸動脈、靜脈全切斷，血液立即噴出；用一塊濕紗布不斷擦去股動脈切周圍處的血

10、液和血凝塊，同時不斷的用自來水沖洗流血，使股動脈切口處保持暢通，動物35分鐘內即可致死。3、藥物致死法A、藥物吸入藥物吸入是將有毒氣體或揮發性麻醉劑，被動物經呼吸道吸入體內而致死，將KM小鼠放入含有乙酰的密封燒杯中，3-5分鐘后可死亡8藥物注射將藥物腹腔注射硫酸鎂通過注射的方式注入動物體內，使動物死亡【注意事項】1、實驗人員要有精神準備：掌握方法，膽大心細，做好防護、克服心理緊張等因素1. 【思考題】安樂死的意義是什么？1. 實驗二家兔的氣管及動脈插管實驗目的學習捉拿家兔的正確方法和固定。2. 掌握常用手術器械的正確使用方法。學習動物實驗的基本操作技術，包括麻醉、切口與止血、氣管插管術、頸動脈

11、插管術實驗對象健康家兔，雌雄均可，體重2.02.5Kg實驗內容家兔的捉拿、麻醉與固定頸總動脈、神經等的別離技術氣管插管動脈插管器材與藥品器材：兔手術臺、哺乳類動物手術器械一套、三通、動脈夾、動脈插管、氣管插管、紗布、棉線、注射器、綁腿帶、污物杯。20%氨基甲酸乙酯溶液(烏拉坦，4-5ml/kg體重，麻醉用)步驟和方法一、家兔的捉拿與稱重1、家兔的捉拿：右手抓住家兔頸背部皮膚，輕輕將家兔提起，迅速以左手托住其臀部，使家兔體重主要落左掌心上，以免損傷動物頸部。一、/A汪息點：家兔一般不咬人，但腳爪銳利，在掙扎易抓傷捕捉者，所以捕捉時要特別注意其四肢。2、家兔的稱重：將家兔放在嬰兒秤上，待家兔安靜的

12、時候觀察體重并記錄。一、/A汪息點：(1)調零(2)切勿使勁按壓稱面二、家兔的麻醉1、麻醉藥的注射如圖1:助手的一側上肢彎曲與同側的軀干夾住家兔的后半部位，同時該側的手托住家兔的腹部，另一只向上抓住家兔的頸背部，充分暴露耳背外緣耳緣靜脈。實驗者的左食指、中指輕夾耳根部使靜脈充盈，從遠心端以30C角度進針刺入靜脈后順血管平行方向深入1cm,左手拇指、食指在刺入部位將針頭與兔耳固定，即可注入麻醉藥。2、麻醉效果判定：可以通過觀察動物呼吸平穩深慢、角膜反射退鈍或消失、肢體肌肉松弛、皮膚夾捏反射消失四方面來判定是否到達理想的麻醉效果三、家兔的氣管與動脈插管1、仰臥固定：頭部用一根粗棉線拉住兔的兩只門齒

13、后栓在兔板的鐵柱或固定于鉤上。兩前肢平直放在胸腰部兩側，用粗棉繩的一端縛扎腕關節以上部位，縛繩從背后左右交叉穿過，壓在對側前肢的前臂上，再緊扎于兔板兩側的木鉤上，兩后肢左右分開，縛繩扎踝關節以上部位，另一端分別固定于兔板后兩側的木鉤上，如下列圖2。2、氣管插管操作要點1）用手術刀時，先用手或器械使兩側組織牽拉緊張情況下，以刀刃作垂直的輕巧的切開，不要作刮削的動作。2）氣管插管術操作要點: 頸部正中切開皮膚，鈍性別離暴露氣管、穿線備用。 于氣管中段第三或第四軟骨環上向頭端作一縱向倒“T”形切口。 將氣管導管由切口向胸部方向插入氣管腔內。 在氣管軟骨環之間進行結扎，并將棉線固定于插管分叉處。3、動

14、脈插管操作要點 于氣管一側小心別離頸總動脈約3cm穿兩線備用。 遠心端結扎、近心端用動脈夾夾緊。 用眼科剪與血管呈45C的角度從遠心端開始在向心一側剪開管壁的1/3。 插管前導管和壓力換能器的肝素化。 插管后結扎固定。注意事項1、麻醉動物時，注射速度先快后慢，邊注射邊觀察動物麻醉指征。如麻醉過淺，動物掙扎時可適量追加麻醉藥，切忌麻醉過深引起家兔死亡；2、手術過程中操作應輕柔，盡量防止不必要的損傷和出血；3、手術時，切開頸部皮膚后，盡量鈍性別離，以免損傷血管；4、氣管插管前，應注意止血，并將氣管分泌物清理干凈；5、動脈導管的插入端要光滑，不能過尖，以防刺破動脈壁，引起大出血。6、未扎緊動脈插管前

15、不要松動動脈夾。實驗三、實驗性肺水腫【實驗原理與目的】肺水腫是臨床上常見的危重癥之一，肺水腫是指過多的液體積聚在肺間質或溢入肺泡腔內的病理狀態。當肺毛細血管流體靜脈壓增高、血漿膠體滲透壓降低，肺微細管壁通透性增高、肺淋巴回流障礙等因素的某個或多個同時或相繼作用，一般水腫液先在組織間隙中積聚，形成間質性肺水腫，然后發展為肺泡性肺水腫。肺水腫發生后，可引起氣體彌散障礙以及肺泡通氣與血流比例失調如果氣道內存在水腫液，還會引起通氣障礙，最終導致呼吸功能不全。大劑量腎上腺素可引起機體血液重新分布，外周血管廣泛收縮，血液由體循環急速轉移到肺循環，使左心房壓力和肺毛細血管有效濾過壓增高，液體流入肺間質增多而

16、出現肺水腫。本實驗的目的是用大劑量腎上腺素復制肺水腫模型，觀察急性肺水腫的表現，分析發病機理。【實驗對象】SD大鼠，雌雄不限，體重180-250g。【實驗器材和藥品】器材：彈簧磅秤，電子天平，手術器械1套，2ml，5ml注射器，聽診器1具，濾紙。藥品：生理鹽水，0.1%鹽酸腎上腺素注射液，20%氨基甲酸乙酯溶液（烏拉坦，4-5ml/kg體重，麻醉用）。1. 【實驗步驟和觀察指標】取180-250g左右體重相近的大鼠兩只，做好標記甲鼠、乙鼠，稱重，觀察動物的一般情況、呼吸和膚色。甲鼠腹腔注射0.1%鹽酸腎上腺素注射液1.52ml;乙鼠腹腔注射同體積生理鹽水。觀察動物變化如活動情況、呼吸、膚色并做肺部聽診肺呼吸音，注意口鼻有無泡沫液體流出。如動物死亡，記錄時間；假設注射藥物20min后動物未死亡，可按0.3%戊巴比妥鈉溶液1ml/100g腹腔注射，帶麻醉成