1、編輯課件1阿司匹林與可待因的阿司匹林與可待因的聯合鎮痛作用研究聯合鎮痛作用研究編輯課件2聯系效果美國藥典收載有復方阿司匹林膠囊，由阿司匹林、可待因和咖啡因組成，其中的阿司匹林和磷酸可待因的比例為25：1，臨床用于各種疼痛和發燒，療效較好。相同鎮痛效果降低兩藥的使用劑量減輕了兩藥的副作用背景鄭惠玲鄭惠玲編輯課件3、編輯課件4是美國政府對藥品質量標準和檢定方法作出的技術規定，也是藥品生產、使用、管理、檢驗的法律依據。NF收載了美國藥典(USP)尚未收入的新藥和新制劑。美國藥典正文藥品名錄分別按法定藥名字母順序排列，各藥品條目大都列有藥名、結構式、分子式、CAS登記號、成分和含量說明、包裝和貯藏規格

2、、鑒定方法、干燥失重、熾灼殘渣、檢測方法等常規項目，正文之后還有對各種藥品進行測試的方法和要求的通用章節及對各種藥物的一般要求的通則。美國藥典編輯課件5一個國家記載藥品標準、規格的法典，一般由國家藥品監督管理局主持編纂、頒布實施，國際性藥典則由公認的國際組織或有關國家協商編訂。藥典由國家藥品監督管理局主持編纂、頒布實施，國際性藥典則由公認的國際組織或有關國家協商訂。制定藥典是從本草學、藥物學以及處方集的編著演化而來。藥典的重要特點是它的法定性和體例的規范化。特點編輯課件6編輯課件7我們根據國外上市品種的處方比例設計了復方阿司匹林片，并通過幾種動物模型對阿司匹林與磷酸可待困的鎮痛協同作用進行了研

3、究。阿司匹林可待因編輯課件8阿司匹林的鎮痛機制阿司匹林的鎮痛機制唐廣博唐廣博編輯課件9 阿司匹林主要是通過抑制前列腺素及其他能使痛覺對機械性或化學性刺激敏感的物質(如緩激肽、組胺)的合成，屬于外周性鎮痛藥。PG是一族含有一個五碳環和兩條側鏈的二十碳不飽和脂肪酸，多種細胞都可合成。 細胞中的花生四烯酸以磷脂的形式存在于細胞膜中。多種刺激因素可激活磷脂酶A，使花生四烯酸從膜磷脂中釋放出來。 游離的花生四烯酸經細胞微粒體內環氧酶（COX)的催化生成各種PG，其中PGE2主要參與疼痛的調節。編輯課件10 COX是前列腺素類化合物生物合成的關鍵酶，在體內有兩種同工酶：COX-1與COX-2，COX-1是

4、結構酶，正常生理情況下即存在，主要介導生理性前列腺素類物質形成。COX-2是誘導酶，在生理狀態下基本不表達，在炎性刺激（如發熱）的刺激下大量生成，介導花生四烯酸轉化產生的PGE2和PGI2，具有很強的制痛作用。編輯課件11可待因的鎮痛機制可待因的鎮痛機制編輯課件12 在體內存在有“抗痛系統”，它由腦啡肽神經元、腦啡肽及阿片受體共同組成。去極化或刺激腦啡肽神經通路可引起腦啡肽釋放，并依賴于鈣離子。在正常情況下約有20%30%的阿片受體與腦啡肽結合，起著疼痛感覺的調控作用，維持正常痛閾，發揮生理性止痛機能，可待因的作用是激動阿片受體，激活了腦內“抗痛系統”，阻斷痛覺傳導，產生中樞性鎮痛作用。編輯課

5、件13 脊髓水平上的網狀結構、丘腦、大腦皮層等均參與疼痛的調節機制，其通路復雜，也需要多種神經遞質傳遞信號，在這些部位，阿片受體極為豐富，是可待因參與調節疼痛的重要基礎。編輯課件14熱板致痛原理熱板致痛原理于帆于帆編輯課件15痛反應閾值：又稱痛閾值，是疼痛刺激引起應激組織反應的最低值，為臨界值的意思。也就是刺激生物體系時，雖然對小刺激不反應，但當超過某限度時就會激烈反應的界限值。是機體對外力刺激最大的承受能力，痛閾值越高，承受疼痛的能力越強，反之越弱。間接測量編輯課件16痛閾值提高是身體的正常調節機制，是合理的、有益的調節。痛閾值的提高，并不表示刺激也要相應增強。如果刺激量超出了正常范圍，但尚

6、未達到痛閾值，很有可能會在感覺不痛的情況下受傷。不可盲目用藥編輯課件17將小鼠置于一定溫度的熱板上，熱刺激小鼠足部產生痛反應，即舔足反應。以小鼠出現舔足的時間作用為痛反應指標，判斷藥物鎮痛作用好壞。熱板致痛法控溫精確控溫精確計時精確計時精確發熱均勻發熱均勻編輯課件18選取生長狀況相近且適于實驗的小鼠并分組測定給藥前各組動物的痛反應閾值分別給予不同劑量的阿司匹林、磷酸可待因和復方混合物熱板測痛儀測其用藥后痛閾值（指標）記錄并分析思路編輯課件19實驗動物、器材和藥品實驗動物、器材和藥品肖健林肖健林編輯課件20實驗動物：實驗動物：雌性昆明小鼠雌性昆明小鼠（18g22g)編輯課件21一般實驗選擇小鼠的

7、原因：一般實驗選擇小鼠的原因：1.哺乳動物，解剖和生理結構與人較相似2.體型小，飼養管理方便3.生長期短，成熟早，繁殖力強4.性情溫順，膽小怕驚，對環境變化敏感5.種系純，容易作比較，可以排除不同種系的干擾因素 編輯課件22選擇昆明小鼠選擇昆明小鼠（Kunming mice，KM小鼠）的原因：的原因：來源：來源：1926年美國Rockfeller研究所從瑞士引入白化小鼠培育成Swiss小鼠 。1944年3月17日由湯飛凡教授湯飛凡教授從印度Hoffkine研究所引進Swiss小鼠，飼養在昆明中央防疫處。由于該小鼠起初引入地是昆明，故稱之為昆明小鼠。解放后中央防疫處遷回北京天壇，更名為衛生部生物

8、制品研究所。1950年小鼠隨之引到北京天壇（檢定所現址），當時保種9對。1953年10月移至北京東郊，1954年擴種，相繼引到其他單位，現已遍布全國各地。編輯課件23主要特性：主要特性：KM小鼠是我國生產量、使用量最大的遠交群小鼠。基因庫大，基因雜合率高，我國學者已從KM小鼠遠交群中先后培育出不少近交系小鼠。經50多年的選育，現在KM小鼠腫瘤自發率極低。不同地飼養的昆明小鼠封閉群的生長發育與繁殖性能存在一定差異，但其共同特點是抗病力和適應力很強，繁殖率和成活率高。它在我國生物醫學動物實驗中約為小鼠總用量的70%。編輯課件24選擇雌性小鼠的一般原因選擇雌性小鼠的一般原因1.雌鼠性情溫順，公鼠易打

9、斗2.雌鼠免疫反應強本實驗選擇雌性小鼠的原因是？本實驗選擇雌性小鼠的原因是？編輯課件25實驗器材實驗器材YLS-6B智能熱板儀、1mL注射器、12號灌胃針頭三個關鍵三個關鍵 1.表面的導熱性和光潔度表面的導熱性和光潔度 2.溫度控制溫度控制 3.計時的準確程度計時的準確程度編輯課件26藥品藥品配制75mg/mL阿司匹林溶液、3mg/mL磷酸可待因溶液，兩者按1：1 體積比配制混合溶液（25:1）、生理鹽水編輯課件27實驗步驟與分組實驗步驟與分組宋毅涵宋毅涵編輯課件28實驗步驟與分組實驗步驟與分組1 1）先測定給藥前各組動物的痛反應閾值，選取體）先測定給藥前各組動物的痛反應閾值，選取體重在重在1

10、8g18g一一22 g22 g，痛閾值在，痛閾值在5 530 s30 s的雌性小鼠，隨的雌性小鼠，隨機分成機分成1515組組, ,并編號并編號120120，每組，每組2020只小鼠。實驗室只小鼠。實驗室溫度控制在溫度控制在20202525。編輯課件292 2）1-51-5組、組、5-105-10組、組、11-1511-15組、組、15-2015-20組分別注射組分別注射0.10mL0.10mL 、0.20mL0.20mL 、0.300.30mLmL、0.40mL0.40mL 、0.50mL0.50mL的阿司的阿司匹林溶液（匹林溶液（50mg/mL50mg/mL）、）、 磷酸可待因溶液（磷酸可待

11、因溶液（2mg/mL 2mg/mL ） 、混合溶液（混合溶液（2525：1 1）和生理鹽水）和生理鹽水3 3）于給藥后）于給藥后1 h1 h分別將各組小鼠置于分別將各組小鼠置于55550 055的熱板測痛儀的金屬板上，以舔后足作為痛反應指的熱板測痛儀的金屬板上，以舔后足作為痛反應指標，記錄小鼠投入熱板至舔后足的時間作為痛反廟標，記錄小鼠投入熱板至舔后足的時間作為痛反廟閨值，以痛反應閾值超過閨值，以痛反應閾值超過60 S60 S作為有效指標，計數作為有效指標，計數痛反應時間超過痛反應時間超過60 s60 s的動物數，的動物數，編輯課件30小鼠捉拿小鼠捉拿從籠盒內將小鼠尾部捉住并提起，放在籠蓋從籠

12、盒內將小鼠尾部捉住并提起，放在籠蓋( (或表面或表面粗糙的物體粗糙的物體) )上，輕輕向后拉鼠尾，在小鼠向前掙脫上，輕輕向后拉鼠尾，在小鼠向前掙脫時，用左手時，用左手( (熟練者也可用同一只手熟練者也可用同一只手) )拇指和食指抓拇指和食指抓住兩耳和頸部皮膚，無名指，小指和手掌心夾住背住兩耳和頸部皮膚，無名指，小指和手掌心夾住背部皮膚和尾部，并調整好動物在手中的姿勢。部皮膚和尾部，并調整好動物在手中的姿勢。編輯課件31 小鼠灌胃小鼠灌胃 1. 準備灌胃針頭。一般可以從市場上面買到，實在沒有的話，可以用12號的針頭，剪去針尖，用砂紙將頭端磨平，也可以用。但是買的灌胃針頭的頭端用錫或者適宜的方法處

13、理了針頭的銳口，自己用砂紙不可能將所有的銳口都磨掉，用這樣的針頭灌胃，損失小鼠食道的可能性比較大。編輯課件32 2. 抓住小鼠，使其頭、頸和身體呈一直線。抓小鼠的動作很簡單，左手的小指和無名指抓住小鼠的尾巴，另外三個手指抓住小鼠的頸部即可。因為小鼠始終在活動中，若一次抓的感覺不是很順手，要放開重新抓，不要逞強進行下一步操作。編輯課件33 3. 抓好小鼠就可以灌胃了，一般用1 ml的注射器配灌胃針頭。灌胃針頭從小鼠的嘴角進入，壓住舌頭，抵住上顎，輕輕向內推進，進入食管后會有一個刺空感，進入食道后就可以推注藥液了。 4. 灌胃容積一般是0.10.2 ml/10 g，最大0.35 ml/10 g，每

14、只小鼠的灌胃最大容積不超過0.8 ml。編輯課件34結果分析結果分析張敏潔張敏潔編輯課件35結果分析生理鹽水（mg/kg）痛反應時間超過60S的動物數（只）鎮痛有效率（%）表表1.生理鹽水灌胃小鼠熱板致痛反應（生理鹽水灌胃小鼠熱板致痛反應（n=20）編輯課件36結果分析阿司匹林（mg/kg）痛反應時間超過60S的動物數（只）鎮痛有效率（%）表表2.阿司匹林對小鼠熱板致痛反應的鎮痛作用（阿司匹林對小鼠熱板致痛反應的鎮痛作用（n=20）編輯課件37結果分析磷酸可待因（mg/kg）痛反應時間超過60S的動物數（只）鎮痛有效率（%）表表3.磷酸可待因對小鼠熱板致痛反應的鎮痛作用（磷酸可待因對小鼠熱板致

15、痛反應的鎮痛作用（n=20）編輯課件38結果分析復方混合物（阿司匹林：磷酸可待因=25：1）（mg/kg）痛反應時間超過60S的動物數（只）鎮痛有效率（%）表表4.復方混合物對小鼠熱板致痛反應的鎮痛作用復方混合物對小鼠熱板致痛反應的鎮痛作用（n=20）編輯課件39對比對比表表1. 表表2.&表表3.若復方混合物的鎮痛有效率大于阿司匹林、磷酸可待因的鎮痛有效率，則兩種藥物之間具有協同鎮痛作用。若復方混合物的鎮痛有效率小于阿司匹林、磷酸可待因的鎮痛有效率，則兩種藥物之間具有拮抗鎮痛作用。若復方混合物的鎮痛有效率等于阿司匹林、磷酸可待因的鎮痛有效率，則兩種藥物之間無相互作用。 在對應 藥物劑

16、量 比條件下， 比較鎮痛 有效率。編輯課件40結果分析受試藥品名ED50（mg/kg）95%可倍限（mg/kg）阿司匹林磷酸可待因復方混合物生理鹽水表表5.阿司匹林、磷酸可待因以及兩者的復阿司匹林、磷酸可待因以及兩者的復方對小鼠熱板致痛反應的鎮痛方對小鼠熱板致痛反應的鎮痛ED50EDED5050：半數有效量。在量反應中指能引起：半數有效量。在量反應中指能引起50%50%最大反應強度的藥最大反應強度的藥量，在質反應中指引起量，在質反應中指引起50%50%實驗對象出現陽性反應時的藥量。實驗對象出現陽性反應時的藥量。LDLD5050：半數驚厥量或半數致死量。：半數驚厥量或半數致死量。（藥物的（藥物的

17、ED50ED50越小，越小， LD50 LD50越大說明藥物越安全。）越大說明藥物越安全。）95%95%可倍限：在此劑量范圍內可倍限：在此劑量范圍內95%95%的實驗對象出現陽性反應。的實驗對象出現陽性反應。編輯課件41注意事項選擇雌性小鼠以避免雄性小鼠陰囊與Woolfe 熱板接觸而影響實驗結果為盡量減少個體差異，應事先篩選痛閾小于30秒的小鼠作為實驗鼠實驗室室溫應在15左右，Woolfe熱板溫度55左右；痛閾超過60秒的小鼠應立即取出以免燙傷各組給藥后觀察痛閾的時間要一致吳紫薇吳紫薇編輯課件42可行性分析可行性分析羅欣然羅欣然編輯課件431.本實驗操作簡單，不需要過多的專業操作技術；通過舔后

18、足、扭體反應和痛反應時間作為效應指標，直觀、易測；2.熱板測痛儀能較精確地調定溫度，且溫度較恒定，不會因為溫度過高而使小鼠提前死亡，同時能較少實驗誤差；3.阿司匹林和可待因有較好的鎮痛作用，效果明顯，而且有明顯的濃度梯度差異，在本實驗中能在較短時間內觀察到隨著濃度變化而變化的鎮痛有效率。技術可行性技術可行性編輯課件441.本實驗用的昆明種小鼠和Wistar大鼠容易購得、繁殖能力強，個體差異相對較小，適合用于本實驗；2.阿司匹林和可待因是常用鎮痛藥，價格低廉，容易獲得，可購置充足藥品用于實驗；經濟可行性經濟可行性編輯課件45討論討論&小結小結閆睿閆睿編輯課件46 熱板致痛模型主要用于篩選中樞性鎮痛熱板致痛模型主要用于篩選中樞性鎮痛藥，對于解熱鎮痛藥的篩選可使用化學性藥，對于解熱鎮痛藥的篩選可使用化學性致痛模型致痛模型-扭體反應模型。扭體反應模型。