1、培養(yǎng)基適用性驗(yàn)證方案江蘇瑞陽(yáng)醫(yī)療科技有限公司培養(yǎng)基適用性驗(yàn)證方案編制：審核：批準(zhǔn)：1of5培養(yǎng)基適用性驗(yàn)證方案江蘇瑞陽(yáng)醫(yī)療科技有限公司1 .驗(yàn)證目的：本次驗(yàn)證的目的是確認(rèn)無(wú)菌檢查、微生物限度檢查、控制菌檢查用培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基的適用性檢查，符合靈敏度要求。2 .參照標(biāo)準(zhǔn)2010版中國(guó)藥典二部附錄：XIIA無(wú)菌檢查法和XIG微生物限度檢查法。3 .驗(yàn)證項(xiàng)目無(wú)菌檢查、微生物限度檢查、控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查。4.驗(yàn)證小組人員及職責(zé)：小組人員職務(wù)職責(zé)王志鳳負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的審批，確認(rèn)所有的驗(yàn)證項(xiàng)目均已完成，并按方案執(zhí)行。李晨負(fù)責(zé)驗(yàn)證日常管理工作，負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的審核。郭月負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案及報(bào)告的起草，負(fù)

2、責(zé)該方案的實(shí)施，對(duì)實(shí)施過(guò)程中資料和數(shù)據(jù)進(jìn)行匯總并完成報(bào)告。5.前提條件確認(rèn)5.1 所有本次驗(yàn)證實(shí)施過(guò)程中用到的儀器都已經(jīng)過(guò)計(jì)量并且在計(jì)量有效期內(nèi)。5.2 所有參與本次驗(yàn)證的公司人員均進(jìn)行相關(guān)培訓(xùn)6.接受標(biāo)準(zhǔn)6.1. 液體培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力檢查：被檢培養(yǎng)基與對(duì)照培養(yǎng)基管比較，被檢培養(yǎng)基管試驗(yàn)菌應(yīng)生長(zhǎng)良好。6.2. 液體培養(yǎng)基指示能力檜查：與對(duì)照培養(yǎng)基管比較，被檢培養(yǎng)基管試驗(yàn)菌生長(zhǎng)情況、指示劑反應(yīng)等應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基一致。6.3. 固體培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力檢查：被檢培養(yǎng)基與對(duì)照培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落大小、形態(tài)特征應(yīng)一致。6.4. 固體培養(yǎng)基指示能力檢查：被檢培養(yǎng)基上試驗(yàn)菌生長(zhǎng)的菌落大小、形態(tài)特征、指示劑反應(yīng)情況

3、等應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基一致。6.5. 培養(yǎng)基抑制能力檢查：試驗(yàn)菌應(yīng)不得生長(zhǎng)。6.6. 無(wú)菌性檢查：應(yīng)不得有菌生長(zhǎng)。6.7. 適用性檢查：被檢培養(yǎng)基上的菌落數(shù)不小于對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的70%,且生長(zhǎng)的菌落大小、形態(tài)特征應(yīng)一致2of5培養(yǎng)基適用性驗(yàn)證方案江蘇瑞陽(yáng)醫(yī)療科技有限公司7.驗(yàn)證實(shí)施7.1.試驗(yàn)用儀器和物料所用培養(yǎng)皿、移液管、工器具均應(yīng)嚴(yán)格按照相關(guān)的滅菌程序滅菌；生物安全柜、滅菌器、霉菌培養(yǎng)箱、生化培養(yǎng)箱、水浴鍋、電熱鼓風(fēng)干燥箱等。7.2.驗(yàn)證用培養(yǎng)基及試劑名稱(chēng)批號(hào)配制（稱(chēng)樣量一體積）pH營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基2015012232.0g-1000ml7.2±0.2營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基201408

4、2618.0g1000ml7.2±0.2改良馬丁培養(yǎng)基2014121128.5.0廠1000ml6.4±0.2大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)埴2015032340g1000ml7.3±0.2沙氏葡錮糖瓊胎培喬基2015111600165.1g-1000ml5.6±0.2玫瑰紅鈉瓊脂培喬基2014070731.5g-1000ml6.0±0.2硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基2015010429.2501000ml7.1±0.2乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基2015110500135g1000ml7.4±0.2乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基20160615-0030g1000ml

5、7.4±0.2伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基2015110600137.5g-1000ml7.1±0.2SCDLP液體培養(yǎng)基2015110600138g1000ml7.2±0.2哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)2015110500144.0g-1000ml7.3±0.2十六烷三甲基澳化俊培養(yǎng)基2015110200138.3g-1000ml7.52±0.20.9%無(wú)菌氯化鈉溶液0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液（含0.05%聚山梨酯）7.3.驗(yàn)證用菌株名稱(chēng)CMCC編號(hào)名稱(chēng)CMCC編號(hào)大腸埃希菌(B)44102生抱梭困(B)64941金黃色葡穩(wěn)球菌(B)26003乙型副傷寒沙口菌(B)

6、50094枯草芽抱桿菌(B)63501白色念珠菌(F)98001銅綠假單胞菌(B)10104黑曲霉菌(F)980037.4.測(cè)試菌懸液菌液制備接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿菌、銅綠假單胞菌的新鮮培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于3035c培養(yǎng)1824小時(shí)。分別取上述新鮮培養(yǎng)物3of5培養(yǎng)基適用性驗(yàn)證方案江蘇瑞陽(yáng)醫(yī)療科技有限公司用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)50100cful的菌懸液。接種生抱梭菌至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，3035c培養(yǎng)1824小時(shí)。上述新鮮培養(yǎng)物用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)10100cfu的菌懸液。接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中，于

7、2328c培養(yǎng)2448小時(shí)。取上述培養(yǎng)物用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)50100cfu的菌懸液。接種黑曲霉菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上，于2328c培養(yǎng)57天，加入35ml含0.05%(ml/ml)聚山梨脂80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將抱子洗脫。然后，用適宜方法吸出抱子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用含0.05%(ml/ml)聚山梨脂80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml含抱子數(shù)50100cfu的菌懸液。備注：控制菌項(xiàng)檢查用工作菌液濃度為10100cfu/ml,無(wú)菌項(xiàng)檢查用工作菌液濃度小于100cfu/mlo7.5.檢查液體培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力檢查：分別接種不大于100cfu的試驗(yàn)

8、菌于被檢培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基中，在相應(yīng)規(guī)定的培養(yǎng)溫度及最短培養(yǎng)時(shí)間下培養(yǎng)。液體培養(yǎng)基指示能力檢查：分別接種不大于100cfu的試驗(yàn)菌于被檢培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基中，在相應(yīng)規(guī)定的培養(yǎng)溫度和最短時(shí)間下培養(yǎng)。固體培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力檢查：取0.1ml(含菌數(shù)50100cfu/ml)的試驗(yàn)菌分別涂布于被檢培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基平板上，在相應(yīng)規(guī)定的培養(yǎng)溫度及最短時(shí)間下培養(yǎng)。固體培養(yǎng)基指示能力檢查：取不大于100cfu的試驗(yàn)菌分別涂布于被檢培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基平板上，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及時(shí)間下培養(yǎng)。培養(yǎng)基抑制能力檢查：接種不大于100cfu的試驗(yàn)菌于被檢培養(yǎng)基中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及最長(zhǎng)時(shí)間下培養(yǎng)

9、。無(wú)菌性檢查：每批培養(yǎng)基隨機(jī)取不少于5支(瓶)/傾注相應(yīng)數(shù)量的平皿，按規(guī)定條件培養(yǎng)。適用性檢查：取50100cfu/ml的試驗(yàn)菌1ml,分別注入無(wú)菌平皿中，立即傾注被檢培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，混勻，凝固，按規(guī)定條件培養(yǎng)，4of5培養(yǎng)基適用性驗(yàn)證方案江蘇瑞陽(yáng)醫(yī)療科技有限公司計(jì)數(shù)。同時(shí)，用相應(yīng)的對(duì)照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進(jìn)行上述試驗(yàn)空白對(duì)照：被檢培養(yǎng)基同時(shí)做空白對(duì)照，按上述規(guī)定條件培養(yǎng)。7.6.各培養(yǎng)基檢查信息被檢培養(yǎng)埴名稱(chēng)檢查用菌種檢查能力培養(yǎng)時(shí)間培養(yǎng)溫度營(yíng)養(yǎng)瓊脂金黃色葡穩(wěn)球菌、枯草芽抱桿菌、大腸埃希菌適用性檢查不超過(guò)3天3035c營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基沙門(mén)菌促生長(zhǎng)1824h3035c改良馬丁

10、培養(yǎng)基白色念珠菌、黑曲霉促生長(zhǎng)5天2025c無(wú)菌14天大豆酪蛋白瓊胎培養(yǎng)埴金黃色葡穩(wěn)球菌、枯草芽抱桿菌、銅綠假單胞菌適用性檢查不超過(guò)3天3035c白色念珠菌、黑曲霉不超過(guò)5天沙氏葡錮糖瓊胎培喬基白色念珠菌促生長(zhǎng)、指示24h3035c白色念珠菌、黑曲霉適用性檢查不超過(guò)5天2328c玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)埴白色念珠菌、黑曲霉適用性檢查不超過(guò)5天2328c硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基金黃色葡穩(wěn)球菌、枯草芽抱桿菌、銅綠假單胞菌、生抱梭菌適用性檢查3天3035c無(wú)菌檢查14天乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基大腸埃希菌促生長(zhǎng)18h35±2C金黃色葡穩(wěn)球菌抑制24h乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基大腸埃希菌促生長(zhǎng)、指示24h35±2C伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基大腸埃希菌促生長(zhǎng)、指示24h35±2CSCDLP液體培養(yǎng)基金黃色葡穩(wěn)球菌、大腸塊他困、沙門(mén)困、銅綠假單胞菌促生長(zhǎng)24h35±2C哥倫