1、生物安全柜介紹1.    概述生物安全柜是生物實驗室的一級隔離屏障設備。所謂生物安全柜，實質就是一種負壓過濾排風柜（見有關標準：YY0569、JG170、ANSI/NSF49、EN12469對生物安全柜作出的定義），其本身可分為部分隔離和完全隔離。生物危害的隔離措施通常由一次隔離和二次隔離措施實現。采用生物安全柜的目的是為了把生物實驗室污染區域及污染風險降到最低，以實現一次隔離目的。為防止生物危害從實驗室漏到外部環境，把實驗室和外界隔斷，即為二次隔離，二次隔離的目的是防止實驗室外的人被生物感染。由于生物危險的事例幾乎都發生在實驗室內，一次隔離措施越嚴格、

2、充分，則可降低實驗室污染的風險，從源頭上抑制生物危害的發生。由于目前生物實驗室以及醫院臨床醫學檢驗和研究應用最廣的是級生物安全柜，本文將著重對級生物安全柜進行闡述。 2.    依據GB 194892007實驗室生物安全通用要求 ；實驗室生物安全手冊（WHO）；ISO 151902003醫學實驗室安全要求 ；YY0569-2005  生物安全柜；JG170-2005    生物安全柜；JGxxx-xxxx    潔凈工作臺（報批稿）。 

3、3.  生物安全柜的特殊防護設計3.1  生物安全柜的級別類型和適用范圍生物安全柜分成、共三個等級，其中：級生物安全柜又細分為A1、A2、B1、B2四個類型，A1、A2、B1分別為循環氣流結構，B2為氣流100%直接排放結構。實驗領域對于A1類生物安全柜應用極少，其流入氣流流速相對較低，對人員防護隔離能力相對較低，不能滿足生物危害的高風險場合應用。通常，A1類生物安全柜僅用于醫學教學或對已知的低風險病原體操作。B1類生物安全柜的排風氣流流量是系統總風量的70%，尚有30%循環氣流，這樣的特性決定了它仍然不能用于化學毒性場合。常用的是級生物安全柜中的A2、

4、B2類生物安全柜。生物安全柜應用氣流圍場、空氣負壓、物理過濾、風險預警及聯鎖控制等綜合隔離技術，實現生物危害防護，實現保護人員或保護人員、保護實驗對象、保護環境目的。級生物安全柜級生物安全柜從前部操作口吸入空氣，經排風口高效空氣過濾器濾除病原體顆粒后排出空氣。它依賴吸入空氣實現生物隔離，其應用目的是保護人員免遭病原體感染。注：級生物安全柜不對樣本保護。適用范圍：僅適用于對第1、2、3、4類病原體的操作時的人員保護場合。 級生物安全柜級生物安全柜是微生物學領域應用最廣的機型，它與級生物安全柜相同的是從前部操作口吸入空氣，以防止氣溶膠外逸。但是，在操作區內部則通過高效空氣過濾器提供垂直下

5、降流動的潔凈空氣（通常稱垂直層流）。經排風口高效空氣過濾器濾除病原體顆粒后排出空氣。適用范圍：適用于對第1、2、3、4類病原體的操作時的人員、實驗樣本、實驗室環境或大氣環境作保護的場合。級生物安全柜級生物安全柜適用于病原病毒、病原細菌、病原寄生蟲及重組遺傳基因等實驗領域具有最高危險度的操作。操作人員通過完全密閉在負壓柜體的手套在密閉操作區進行感染動物解剖、組織材料處理、病原體培養、顯微觀察和離心操作。由于級生物安全柜的柜體具有較高的耐負壓結構強度，又采用不銹鋼作為柜體，當前部透視窗采用含鉛玻璃且外排氣流的過濾采用化學過濾器（必要時，再加焚燒處理）時，級生物安全柜是放射性或毒性藥物配置的理想設備

6、，可滿足醫務人員免遭射線或毒性的危害。注：不銹鋼對X射線的衰減作用明顯于其它材料。級生物安全柜的高效空氣過濾器應當采用國標級過濾器，比普通高效空氣過濾器的過濾效率高一個檔次，當排風過濾僅以空氣過濾為手段時，應當采用兩級ULPA過濾器串聯技術。適用范圍：適用于對第1、2、3、4類病原體操作時的人員、實驗樣本、實驗室環境或大氣環境都作保護的場合。 3.2  REYA生物安全柜特殊的設計技術生物安全柜是通過物理技術實現生物危害隔離的一種裝備。它應用氣密性結構設計及內部負壓過濾通風技術，達到防止病原體氣溶膠擴散污染的目的。 特殊的密封設計 過濾完整性生

7、物安全柜所用的高效空氣過濾器都由供貨商檢測后提供，進貨交收檢驗仍采用“PAO”法作掃描撿漏以確定該高效空氣過濾器的透過率。然而，安裝的過濾器，其與柜體的吻合縫隙以及柜體結構的材料沙眼都足以導致病原氣溶膠泄漏。據國際統計數據報道，生物安全柜經運輸后的掃描撿漏合格率僅30%。本公司采用我國著名專家國家建筑科學院空氣調節研究所許鐘麟教授的專利技術成功地達到了“零”泄漏設計目的。  柜體密封性生物安全柜是空氣負壓裝置，正常運行中的生物安全柜不會導致病原氣溶膠泄漏。為什么還要對生物安全柜柜體密封性作出規定？為什么密封性條件試驗規定為正壓？其實是風機故障條件下病原氣溶膠受正壓擴散的防護

8、需要。正壓條件下的柜體密封不能依賴密封膠圍堵措施。異種金屬材料不可能加料連續焊接達到柜體密封目的，本公司對鈑金工藝設計的不斷探索，解決了柜體承受500Pa正壓下維持30min后剩余壓力達到450Pa的要求。REYA全不銹鋼結構的升級換代型生物安全柜即將進入市場。該生物安全柜完全由加料連續氬弧焊接工藝制成。產品工藝技術完全與美國同類產品先進工藝技術水平持平。成為國內領先工藝水平。該工藝技術是高危害病原體操作的衛士，對我國生物安全柜產品技術趕上國際先進水平具有現實意義。  更精細的過濾技術國際、國內對于生物安全柜用過濾技術都規定相對0.3m顆粒的過濾效率99.99%。然而，已知

9、的病原病毒顆粒僅幾十納米，如：小顆粒SARS病毒40nm。考慮懸浮顆粒的直徑可小于0.1m。小顆粒病原微生物寄生于小顆粒塵埃，仍存在穿透高效空氣過濾器的概率。特別是這種概率的存在對于排風口的危害將是不可低估的。現有的超級高效空氣過濾器技術的應用可滿足需要。REYA生物安全柜的送風過濾、排風過濾已全部應用。該ULPA feilter相對0.12m顆粒的過濾效率99.9995%。  優化的氣流匹配設計級生物安全柜的氣流設計不能簡單的符合YY0569規定，垂直下降氣流設計流速0.5m/s時與流入氣流流速下限值0.5m/s就不能匹配。反之，流入氣流平均流速在允許波動范圍內取下限值，

10、則產生操作區正壓而導致病原氣溶膠外逸。前部操作口流入氣流平均流速與垂直下降氣流平均流速間存在匹配關系，且流入氣流并不因為流速高而保護因子獲得提高，經5年余研究發現，垂直氣流在標準規定條件下提高流入氣流流速時，前部操作口保護因子卻適得其反。穩定可靠的前窗保護因子，是柜體結構、回風負壓和流體力學、空氣動力學等諸多設計綜合體現。  抑制交叉感染的氣流組織結構設計內部交叉感染可能是人員手臂運動和下降氣流組織結構的綜合結果，本公司通過CFD手段研究內部交叉感染，揭開了樣本污染的奧秘。并通過數十萬例現場實驗數據統計，證實了設計措施有效。2006年通過德華創生公司血液干細胞50000例移

11、植實驗操作0感染的記錄；2007年通過寶諾科技（北京）有限公司10000例實驗操作0感染的記錄；2009年通過和記黃埔藥業公司100000例實驗操作0感染的記錄。  正壓污染區被負壓包圍的結構A2型生物安全柜的送風靜壓箱內空氣為流入與循環部分氣流的混合體，屬于被污染氣流，該靜壓箱設計為負壓包圍結構。B2型生物安全柜的排風為負壓設計，污染氣流直接由負壓風道直接排空。生物安全柜操作區左右后三側為雙板型結構設計的負壓污染區。負壓結構設計的目的是可靠防護病原氣溶膠逸出。  定向氣流定向氣流是一個俗稱，技術術語稱為“層流”，即單向的氣流。經高效空氣過濾器過濾的操作

12、區垂直下降層流，被用以保護實驗樣本免遭內部交叉感染。因為，操作區回風口分布及回風負壓使垂直氣流未到達操作臺面已經分流，如前后、左右，由氣流漸變線圍成非期望的三角形區域。三角形區域內覆蓋的工作臺面氣流流速明顯降低。在人員手臂伸入情況下，受下降氣流撞擊，手臂下部形成氣流漩渦，且漩渦直徑大于手臂直徑并形成連續狀態。這就是內部交叉感染的動態影響。在交叉污染靜態試驗條件下，由于三角形區域氣流降低，側壁細菌噴射口射出的細菌輕而易舉地到達遠距離培養皿，這種現象用向量函數可解析（垂直下降流速、細菌噴口流速、沉降均著落地與噴口距離位置關系）。這是靜態試驗條件下交叉污染的成因。無論在動態條件下還是在靜態試驗條件下

13、，垂直下降氣流不能側彎是關鍵。因為，垂直方向量的提高是抑制噴口細菌前移的關鍵。回風負壓口分布的設計在滿足垂直下降氣流不側彎的前提下，動態時手臂下方的氣流漩渦沒有生成的條件，也就有效抑制了交叉污染的發生。該設計獲得國家發明專利，專利號：  氣流活塞效應結構優勢目前，生物安全柜市場推出的產品款式不外乎前部直立式和前部斜面兩款。斜面式設計相對人機工程學原理而言是有益的，可提高人員作業舒適度。但從生物防護目的出發，過渡的斜面結構對保護樣本卻有不足之處。前部直立式生物安全柜的送風過濾器有效面積比較接近操作區橫截面積。從理論而言，生物安全柜的設計應當使送風過濾器面積與操作區橫截面積的比

14、值等于1，以使垂直下降氣流完全覆蓋操作區橫截面，氣流類似活塞沿整個內壁板推進，由于不留結構死角且整個操作臺面被送風氣流覆蓋，氣溶膠沒有上揚、殘留的機率。而斜面設計的缺點正相反，送風過濾器的寬度比操作臺面窄，隨設計斜率升高而過濾器寬度尺寸降低，于是在前部格柵處氣流降低，甚至出現前部局部區域無下降氣流。氣流擴散能夠彌補這一不足，但最大氣流擴散角小于10°。斜面設計不利樣本保護應當引起足夠重視。獲得國家發明專利，專利號：  微機控制的氣流恒設計長期運行下，生物安全柜高效空氣過濾器表面吸附顆粒不斷堆積，阻抗隨之升高。過濾器阻抗升高演變過程中風機靜壓跟隨升高，但氣流輸出流量

15、卻逐步降低。這種變化直接影響生物安全柜對人員、樣本的保護，甚至導致直接的危害。為此，YY05692005生物安全柜標準以及美國ANSI/NSF49級（層流）生物安全柜標準都對風機性能規定了最低要求。REYA生物安全柜運用微機原理，分別對生物安全柜的垂直下降氣流送風機和排風風機伺服設計，它能在氣流下降狀態下自動補償風機流量，且動態范圍大，能在過濾器壽命周期內始終保持生物安全柜垂直下降和排風的設計流速（流量）。以達到壽命周期氣流穩定目的。REYA生物安全柜排風風機的另一個設計特點是由主機直接供電，并彼此控制信號交換。它無需獨立供電。排風風機與送風風機間互鎖控制，當排風風機故障或流量波動大于20%時

16、，聯鎖關閉送風風機，以迫使系統不會正壓導致病原體外逸。  不銹鋼大容量集液槽大量的設計案例獲得證實，集液槽不應有污染液體清除或清洗的結構障礙。由于設計結構的障礙存在，在用生物安全柜不能獲得有效清洗，實驗中試劑殘留物長年淤積導致結構涂層起翹、脫落，金屬板材受到嚴重腐蝕。試劑殘留物持久存在的最大危害是導致微生物繁敷或實驗樣本污染。不銹鋼大容量且無結構障礙的集液槽有效解除了實驗人員的清潔困惑。 生物安全柜應用選型生物安全柜應用選型選型要素級生物安全柜用于第一、二、三病原微生物實驗操作時對人員的保護。不保護實驗樣本。級生物安全柜作業樣本的生物危害類別：第一、二、三和四類病

17、原微生物；保護人員、樣本、環境；其它，如：是否涉及到揮發性、放射性核素或化學品；注：II級A2型生物安全柜具有部分氣流循環特點，適用于有微量化學添加劑的操作場合。注：II級B2型生物安全柜的氣流100%外排至大氣層，適用于有化學添加劑的應用場合。注：兩種類型生物安全柜都滿足痕量放射性操作場合的使用。 質量認證生物安全柜應用于高風險場合，國家食品藥品監督管理局將其列入三類醫療器械的管理目錄內，實施產品市場準入制度。按現行國家法規規定，生物安全柜進入醫療臨床應用由國家食品藥品監督管理局授權的檢測機構按YY0569生物安全柜進行注冊檢驗。產品注冊由注冊檢驗、臨床試驗、按ISO13485要求

18、建立的產品質量保證體系審核及產品風險設計報告共四部分構成。批準注冊后，由國家食品藥品監督管理局頒發證書。美國對生物安全柜的認證由NSF組織實施，認證試驗按ANSI/NSF 49Class II (laminar flow) biosafety cabinetry執行。歐洲執行EN12469標準。中國醫療器械行業強制性標準YY0569 生物安全柜 與美國ANSI/NSF 49及歐洲EN12469標準，在生物防護性能要求部分保持了高度一致，無論技術要求、試驗方法、還是試驗結果的表述，均完全等同。并與美國ANSI/NSF 49在過濾器掃描撿漏、柜體密封性能、氣流模式、垂直下降氣流

19、流速、流入氣流流速、振動幅值、照度等參數要求保持一致。報警提示及聯鎖控制要求也保持了高度一致。但我國YY0569標準對結構要求比美國ANSI/NSF 49標準規定得更嚴格。作為國家注冊的三類醫療器械生物安全柜產品標準與美國同類產品的差異主要是：中國的電氣安全符合GB4793.1，等效采用國際電工委員會IEC10101，而美國則符合UL標準。 4. 生物安全柜使用、維護及檢測生物安全柜放置l       五個遠離點（氣流）門；風扇；空調；開著的窗戶；人員活動頻繁的區域。l   

20、    擺放要求穩固的平臺或支架；兩側、后面和上端留30cm。  生物安全柜的使用要求個人防護要求柜內物品的擺放紫外燈明火工作前準備工作中操作及溢出處理工作結束后處理 個人防護要求使用生物安全柜時必須穿個人防護服，戴手套（手套應套在隔離衣的外面），最好帶口罩和帽子，根據需要帶防護眼罩或者面罩。生物安全柜內物品擺放原則按照從潔凈區到污染區的方向擺放；所有物品盡可能放在工作臺后部；將廢棄物袋、盛放廢棄吸管的盤子以及吸濾瓶等體積較大的物品放在柜內某一側；前部流入氣流格柵不能被紙、儀器設備或者其他物品阻擋。  對

21、紫外燈的三點要求每周進行清潔，除去可能影響殺菌效果的灰塵和污垢；每次生物安全柜的認證，要檢查紫外線強度，以確保有適當的光發射量；房間中有人時一定要關閉紫外燈，以保護眼睛和皮膚，避免因不慎暴露而造成傷害；避免使用明火，因為：明火可造成生物安全柜的氣流紊亂，干擾氣流模式；可損壞HEPA過濾器；處理揮發性物品和易燃物品時易造成危險。 工作前需要準備的內容首先紫外燈照射30分鐘；關紫外燈，打開安全柜的日光燈和風機，用消毒劑對生物安全柜的內表面進行消毒擦拭；將實驗中需要用到的物品集中用消毒劑擦拭后放在臺面相應位置上（切記勿阻擋風口！）；等待5min，凈化工作區的空氣污染物。 工作時操

22、作規范雙臂垂直緩慢進入前面的開口，在生物安全柜中等待大約一分鐘，以使安全柜調整完畢后才可對物品進行處理；所有操作應在離前窗10cm以外的工作區進行；廢棄物應丟棄在生物安全柜內的處理容器中。 操作時注意事項避免胳膊在前開口處快速移動和頻繁進出。盡量避免污染的物品進入潔凈區。在生物安全柜內進行操作時，不能進行文字工作。盡量減少操作者身后的人員活動。 溢出處理 按GB194892007實驗室生物安全通用要求中生物安全柜內溢出時的處理方法執行：滴狀溢出或體積不足1 mL 的，可簡單地用消毒劑擦洗。大量溢出時的特殊處理：使生物安全柜保持開啟狀態；在溢出物上覆蓋浸有

23、消毒劑的吸水材料，作用大約10分鐘，以發揮消毒作用。在安全柜內對污染的手套消毒后，脫下手套。如果衣服已經污染，也要先脫下消毒。穿戴干凈的手套和衣服作如下進一步的清潔工作。用消毒劑噴灑或擦拭安全柜內壁、工作表面以及透視窗的內側。作用20 min后，擦干消毒劑并將擦拭物置于生物危害袋中。如果溢出情況需要浸泡接液槽，則不得現場清理接液槽。應報告實驗室主管后采用適當的氣體消毒方式。將所有清理用物品以及防護服進行高壓消毒。用消毒肥皂和水洗手和暴露皮膚。立即通知實驗室主管。如果溢出物流入安全柜內，可能需要對安全柜進行更為廣泛的消毒處理。工作結束后的要求將安全柜繼續運行至少3min完成“凈化”過程。將柜內物

24、品移出前，應使用有效的消毒劑擦拭每天實驗結束后，對生物安全柜的內壁和臺面進行擦拭。等待5分鐘后，關閉前窗，關燈，關風機，紫外燈照射30分鐘。生物安全柜的維護生物安全柜的維護保持生物安全柜表面清潔和無污染狀態用70%酒精或者合適的消毒劑擦拭內壁和工作臺面；如果使用漂白劑等腐蝕性消毒劑后，需要用無菌水再次進行擦拭除去殘余的消毒劑；定期抬起工作臺面對其下面的區域進行清潔；消毒后，用玻璃清潔器對前窗玻璃和紫外燈進行清潔。 定期保養用濕布擦拭內壁和工作臺面；每年按需要更換紫外燈和日光燈；每年至少認證一次    醫學實驗室安全要求  &

25、#160; YY0569-2005  生物安全柜    實驗室生物安全手冊（第三版，2004） 生物安全柜的污染清除甲醛、過氧化氫熏蒸等應由有資質的專業人員來進行。在以下情況下需要進行熏蒸：     在檢查和維修之前；     在更換HEPA濾器之前；     在移動安全柜之前；     安全柜被嚴重地污染； 

26、;    變換使用目的；     長時間未用；     需要熏蒸的其它時間。 甲醛熏蒸步驟之一-準備電爐兩個；福爾馬林；氨水；100mL燒杯4個；膠帶；透明塑料薄膜、75%酒精等。使用75%酒精對生物安全柜內、外表面進行消毒清潔；將生物安全柜和放置在同一房間內的冰箱、CO2培養箱等儀器用膠帶紙進行密封處理。甲醛熏蒸步驟之二-熏蒸將電爐放在生物安全柜中，連接電源；用兩個燒杯分取福爾馬林20mL、水50mL，置電爐上；關閉透視窗，用膠帶封嚴窗門；開啟

27、電源，水和福爾馬林同時被加熱，待福爾馬林揮發完畢時，關閉電源, 保持密閉狀態，過夜。甲醛熏蒸步驟之三-中和取氨水36mL、水50mL，分放于2個燒杯中，置電爐上；再次將生物安全柜門密封；開啟電源，待氨水揮發完后，關閉電源；密閉過夜。 生物安全柜的檢測生物安全柜檢測的情況發生在：最初的購買安裝完畢；年檢；移動；修理。 生物安全柜的檢測應由有資質的單位實施在美國必須有美國NSF授權的單位。沒有NSF授權，也得有以下經歷：有過檢測經驗；參加過技術課程或者廠商培訓會；檢測設備擁有校準證書。我國有檢測資質的單位：國家食品藥品監督管理局授權的醫療器械質量監督檢驗中心。

28、0;安全柜防護效果的評估涉及到以下內容     安全柜的完整性；     人員、產品及交叉污染保護；     HEPA過濾器的泄漏；     垂直下降氣流平均流速；     前部工作窗口流入氣流流速；     壓差（級）；      

29、60;     負壓換氣次數；     氣流的煙霧模式；            警報和互鎖系統；     電氣安全；                  

30、; 還包括紫外線強度、光照度、噪聲、振動、集液槽泄漏、柜體穩定性（包括柜體抗翻倒、柜體抗變形、工作臺面抗變形、柜體抗向前傾倒）、溫升、電機與風機等性能的測試。 搬動生物安全柜比較高大，把它搬進室內需要沿途足夠寬敞。搬動過程中不準許橫倒放置，更不準許拆卸，最好等搬入實驗室后再拆開包裝箱。生物安全柜的使用生物安全柜的使用正常使用為維持生物安全柜對柜的正常運行，必須定期檢查高效空氣過濾器是否有堵塞、泄漏等情況，風量及其平衡情況，以及聯鎖控制、報警裝置的完好性。為對柜內的污染充分稀釋，并保持下次正常運行，操作完畢后至少應空轉10min。基于使用安全目的，前部開口高度不能超過額定值，

31、不能隨意改變其面積和形狀。應特別注意使手、材料、器具等通過前部開口部位的次數最少，在操作開始前就把必要的器具和材料放到適當的位置上。控制平行于開口部位的室內風速很重要，如果超過開口部位平均風速將影響生物安全柜回風能力，使前窗開口處的隔離效果很快下降，手背能感覺的風速通常已有0.5m/s，而人步行導致的風速很容易達到m/s，所以應特別控制人員走動引起的干擾氣流。吸附墊在操作臺面放一層貼有吸附材料的塑料薄膜，每日更換，可使操作臺面的污染減少到最低限度。回收容器在安全柜內應配置回收污染物質的容器。其中吸球（即吸管）用的容器23個，污染的玻璃器具和廢棄物等用的容器至少45個。容器中必須盛足消毒液，如：

32、有效含量為500ppm以上的雅妍酸鈉，把污染物質完全浸沒。這些回收容器至少每天操作完畢后蓋好以防污染。再用時應重新清洗容器或者用新的容器。柜內實驗器材和材料的取出凡廢棄的污染性材料、使用過的包裝材料、容器、紙張等廢棄物統統收裝好或者經高壓滅菌器滅菌后拿到緩沖區。在實驗中或完畢后，必須從生物安全柜內取出非活滅的病原體時，應裝好放在藥液槽中，使容器外側被消毒后取出，消毒液種類因病原體不同而異。高效過濾器更換1）  高效過濾器更換前，一定要將柜內表面及原高效過濾器采用甲醛滅菌。2）  過濾器更換時，讓使用的試驗人員在場，以便詢問實驗時使用的細菌。3） 

33、; 手和身體有外傷者不得進行操作，操作人員一定要戴防毒面具和橡膠手套。4）    取出的過濾器應立即密封放入塑料袋內，再放入紙箱內，使用過的面具、手套也同樣處理，然后一起燒毀。5）  安裝新過濾器時，不要隨便將頭和身體伸到柜內，并高度謹慎操作。瓶蓋在生物安全柜內使用的瓶子不用橡膠塞，而應使用螺旋蓋，開啟時可減少氣溶膠的發生。消毒火焰用火焰消毒是古典的微生物學方法，但是會產生氣溶膠，并使柜內氣流紊亂，應盡量不使用，而可以用最近研制成功的小型電加熱器、無焰管口加熱器進行消毒。在不得已使用火焰消毒時，美國建議在安全柜內用手動燈頭，

34、日本建議用腳踏式燈頭，首先用小火點燃，然后在腳下將腳蹬開關一踏，主要火焰就被點著。腳蹬開關一旦停止踏時，主要火焰立即熄滅，并且采用不開通風機則不點火的聯鎖氣閘方式，因而也比較安全。溢出處理    GB194892007實驗室生物安全通用要求對生物安全柜內溢出時的處理給出了方法：滴狀溢出或體積不足1 mL 的，可簡單地用消毒劑擦洗。大量溢出，則要做特殊的處理1） 使生物安全柜保持開啟狀態。2） 在溢出物上覆蓋浸有消毒劑的吸水材料，作用大約10分鐘以發揮消毒作用。3） 在安全柜內對污染的手套消毒后，脫下手套。如果衣服已經污染，也要先脫下消毒。穿戴干

35、凈的手套和衣服作如下進一步的清潔工作。4） 用消毒劑噴灑或擦拭安全柜內壁、工作表面以及前視窗的內側。作用20 min后，擦干消毒劑并將擦拭物置于生物危害袋中。5) 如果溢出情況需要浸泡接液槽，則不得現場清理接液槽。應報告實驗室主管后采用適當的氣體消毒方式。6）將所有清理用物品以及防護服進行高壓消毒。用消毒肥皂和水洗手和暴露皮膚。7） 立即通知實驗室主管。如果溢出物流入安全柜內，可能需要對安全柜進行更為廣泛的消毒處理。 工作結束后的要求將安全柜繼續運行至少3min來完成“凈化”過程。將柜內物品移出前，應使用有效的消毒劑擦拭每天實驗結束后，對生物安全柜的內壁和臺面進行擦拭。等待5分鐘后，

36、關閉前窗，關燈，關風機，紫外燈照射30分鐘。 生物安全柜的現場檢查現場檢驗的時間在以下時間需要對在用生物安全柜進行現場檢查。1）  安裝之后或初次使用之前；2）  移動后，包括在實驗室內移動；3）  定期檢查，至少每年1次或2次；4）  更換高效空氣過濾器后；5）  高濃度的病原體實驗完畢，這些實驗材料被大量散落時；6）  中途變更實驗時；7）  實驗中斷后又長時間不使用時；8）  其它必要時候。 現場檢查的內容1）

37、  氣密性；2）  高效空氣過濾器完整性；3）  垂直下將其溜溜平均流速及其均勻性；4）  前部流入氣流平均流速及其均勻性；5）  氣流模式；6）  振動；7）  接地電阻；8）  噪聲；9）  照度；10）              紫外線強度（操作臺面40w/cm2以上；11

38、）              生物安全性能；12）              風機性能。上述各項檢查中的15為必須檢查項目，根據美國的經驗，沒有實行這種檢查時，常有60%的生物安全柜發生問題。實行檢查后，仍然可檢出10%20%的生物安全柜不合格。 清掃和滅菌內部清掃生物安全柜內部清掃是使用環節的重要工作之一。

39、每天作業完成后，吸附墊、移管、回收容器等物件都要拿到安全柜外面去，柜內應為全空狀態。然后對操作臺內表面用加入含碘界面活性劑的消毒劑檫拭。用于檫拭過的物料要作為污染廢棄物處理，安滅菌燈的生物安全柜不要在柜內形成陰影，因為紫外線照射不到的陰影區沒有殺菌效果。甲醛氣體的熏蒸消毒針對生物安全柜自身污染消毒時，一般采用甲醛氣體熏蒸。將生物安全柜密閉起來，日、美標準建議用10000ppm的甲醛氣體熏悶2小時，英國標準給出的甲醛濃度只有500ppm，相差如此懸殊的原因還不太明確。但有一點是清楚的，就是采用過多的甲醛會因聚合而析出白色粉末附著在裝置內表面，對滅菌后實驗研究帶來不良影響。當相對濕度在65%以上，

40、溫度在2440時，甲醛氣體消毒的效果最好。當生物安全柜內沒有吸濕物質時，最大必要水量約為20gm3。干燥時，甲醛在濃度為7.75%時爆炸，著火點為430。由于甲醛的環境標準只有12ppm，所以即使稍有泄漏也會超過標準值很多，故應絕對重視，采取措施。具體做法：1）  計算生物安全柜的容積，按10gm3的比例稱出仲甲醛。2）  在臺面放好加熱盤或燒杯，盛入仲甲醛，然后放好加濕用水及其熱源，并放置好溫度計。3）  把生物安全柜的前部開口和排風口用嚴實的蓋板堵好，在蓋板周邊最好貼上寬50mm左右的橡膠條。4）  從外面對加

41、熱與加濕用熱源進行控制，并具有防止溫度過高的控制，隨時觀察溫度計。5）  當仲甲醛分解掉50%及全部分解完后，為使氣體擴散到各個角落，各開動柜內風機35s。6）  當第二次開過風機之后切斷加熱電源，最少薰悶2小時。推薦的薰悶時間為一晚上。7）  然后打開排風口，開送風機，最后打開前部開口，取出滅菌器材。8）  熏蒸后的生物安全柜應空運行24小時之后再使用。生物安全柜的檢測柜體泄漏測試目的測試安全柜柜體的防泄漏性能。儀器使用的主要儀器有：a) 壓力計，最小量程為-600P a,精確士5P a；b) 

42、;肥皂溶液，由25g /L的軟肥皂的微溫蒸餾水溶液組成。壓力衰減法壓力衰減法的步驟為：a) 封好安全柜的前窗和排氣孔，使安全柜成為一密封系統；b) 必要時，移開裝飾嵌板和通道上的其他障礙物，將要測試的壓力通風系統露出來；c) 在測試區連接壓力計或壓力傳感器系統以顯示內壓；d) 給安全柜增壓到500P a，封閉加壓空氣，30m in后測定壓力。允許初始壓力下降10%肥皂泡法肥皂泡法的步驟為:a) 封好安全柜的前窗和排氣孔，使安全柜成為一密封系統；b) 必要時，移開裝飾嵌板和通道上的其他障礙物，將要測試的壓力通風系統露

43、出來；c) 在測試區連接壓力計顯示內壓；d) 對安全柜用空氣增壓，使其壓力持續實測值為500P a士10%；e) 沿安全柜壓力通風系統所有焊縫、襯墊、套接處和封口處的外表面噴或涂刷檢漏肥皂溶液，小的泄漏會出現氣泡，如果從孔中吹出檢測液體而未形成泡，則可能發生大的泄漏，可通過輕微的氣流感覺和聲音來發現。高效過濾器完整性目的測定安全柜過濾器安裝結構(包括下降氣流高效過濾器、排氣高效過濾器、過濾器外罩和框架)的完整性。試劑鄰苯二甲酸二辛醋(DOP)或與之相當的液體即可以產生與DOP氣溶膠顆粒尺寸分布相同氣溶膠顆粒的液體，例如:聚一烯烴(PAO) ,癸二酸二(2一乙基己)

44、酉旨、聚乙二醇以及藥物級的輕礦物油。儀器線性或對數刻度的氣溶膠光度計，可以將過濾器上游氣流中濃度為10I g/L DOP(或相當液體 )多分散氣溶膠微粒標示為100%,能檢測0.0 01%同一氣溶膠微粒。光度計應按其生產商的使用說明進行校準；將氣溶膠發生器，壓力調至最小140k Pa，使用DOP或與之相當的液體發生氣溶膠。發生器噴嘴浸人液體的深度應不超過25m m。氣溶膠發生器的壓力計最大量程為550k Pa，分辨率和精確度為7 k Pa。發生器壓力計由生產廠家校準或按照廠家的使用說明校準。方法可以掃描檢測的過濾器掃描檢測過濾器的檢測按下列步驟進行：a) 運行安全

45、柜的風機和燈，去掉過濾器的散流裝置和保護蓋(如果有)。安放氣溶膠發生器，將氣溶膠導人安全柜，按廠商的說明，產生均勻分布的高效過濾器上游氣流。廠商未規定氣溶膠的導人位置時，導人氣溶膠的方式應確保其在安全柜的氣流中均勻分布；b) 打開氣溶膠光度計，按廠商使用說明進行調整；c) 對含有氣溶膠的高效過濾器上游氣流進行測試，證實該濃度氣溶膠的光散射強度至少應等于由10 u g /L D OP 產 生的光散射強度；如果是線性刻度的光度計，將讀數調整為100；如果是對數刻度的光度計，將上游氣流濃度的讀數調整在一個分度對應濃度的1x10以上；d) 光度計探頭在過濾器下游

46、距過濾器表面不超過25m m,以小于50m m/s的掃描速率移動，使探頭掃測過濾器的整個下游一側和每個組合過濾片的邊緣，掃測路線應略微重疊。圍繞整個過濾器外圍、沿組合過濾片和框架的連接處以及圍繞過濾器和其他部件之間的密封處仔細檢查。不能掃描檢測的過濾器對于經管道排氣的安全柜，不能進行排氣過濾器的掃描檢測，過濾器下游氣流中氣溶膠濃度的檢測是在下游氣流的管道上鉆一直徑大約10 mm的孔，將帶有硬管光度計探針播人孔中進行檢測。生物安全柜測試噪聲 目的 測試安全柜在其氣流流速在標稱值士0.0 15m /s范圍內運行時的噪聲。測試可以在普通聲學條件的房間中進行，房

47、間墻壁既不吸收又不完全反射聲音。 儀器 聲級計，測量范圍50d B-100d B,精確度為士1d B，分辨率為1d B，有“A”計權模式。 方法 噪聲測試按下列步驟進行： a) 將聲級計設置為“A”計權模式；b) 打開安全柜的風機和照明燈，在安全柜前面中心水平向外300m m、工作臺面上方380m m處測量噪聲(見圖1)；c) 關閉安全柜的風機和照明燈，如果有室外排氣風機，讓其繼續運行，在相同位置測量背景噪聲；d) 當背景噪聲大于57d B時，實測值參照儀器操作手冊提供的曲線或表進行修

48、正，如果不適用，則用標準校正曲線或表1進行修正。 圖 1 噪聲測試  測量總噪聲和背景嗓聲的差值/ d B從測量總噪聲中減去的數0- 2背景 噪聲值334-526- 1 01> 100 表1 噪聲測f值修正表 照度目的本試驗是測試安全柜工作臺面的照度。儀器照度計，精確度士10%，應能滿1000 l x以下照度的測量，并按廠商使用說明進行校準。方法照度測試按下列步驟進行：a) 在工作臺面上，沿工作臺面兩內側壁中心連線設置照度測量點，測量點之間的距離不超過300mm，與側壁最小距離為150m&

49、#160;m(見圖2)；b) 關掉安全柜的燈，從一側起依次在測量點進行背景照度測量。平均背景照度應在110 lx±50 lx；打開安全柜的燈，啟動安全的風機，從一側起依次在測量點進行安全柜的照度測量。c) 打開安全柜的燈，啟動安全的風機，從一側起依次在測量點進行安全柜的照度測量。   圖 2 照度 測 試   振動目的測試安全柜氣流流速在標稱值士0.015m /s范圍內運行時的振動。儀器振動儀，最小可靠讀數為2.5 m(rms)振幅，儀器的校準按廠商說明書進行。方法

50、a) 用夾鉗、螺釘、帶有凡士林凝膠薄膜的磁鐵或雙面膠帶將振動儀的傳感元件固定到工作臺面的幾何中心(見圖3)；b) 測定安全柜正常工作時的總振動振幅；c) 關閉安全柜的風機(如果有室外風機，室外風機工作)，測定背景振動振幅；d) 從總振動強度中減去背景振動振幅，為安全柜的凈振動振幅。  圖3 振動測試  人員、產品和交叉污染保護目的這些測試確定氣溶膠是否保留在安全柜內、外部的污染物是否未進人安全柜的工作區域，以及安全柜中裝置之間的氣溶膠污染是否減到最小。安全柜以測試時要求的氣流流速運行。在試驗開始前安全柜啟

51、動并運行至少30 min，并連續運行至所有測試完成。材料和儀器材料按YY0569中附錄C制備的枯草芽胞桿菌黑色變種芽抱懸浮液和無菌稀釋液。儀器人員、產品和交叉污染保護試驗中主要使用以下儀器：a) 培養皿(100mm×15mm或150mm×22mm)，含營養瓊脂培養基、胰蛋白膝大豆瓊脂培養基或其他無抑制劑和添加劑的培養基。營養瓊脂培養基配方：蛋白胨10g，牛肉膏5g ，氛化鈉5g ，瓊脂15g ,蒸餾水1L ,除瓊脂外其他成分溶解于蒸餾水中，pH值調至7.2-7.4，加人瓊脂，加熱溶解，分裝，于121壓力蒸汽滅菌20min備用

52、。胰蛋白胨大豆瓊脂培養基配方：胰蛋白胨 1.5 %，大豆蛋白胨0.5%，氯化鈉0.5%，瓊脂1.6%；用蒸餾水配制而成，pH值調節為7.2±0.2，經121 高壓蒸汽滅菌后備用。b) 撞擊采樣器，采樣流量在12.3L /min-12.6L /min之間，盛有20m L無菌稀釋劑；c) 狹縫采樣器，采樣流量為28L /min±1.4L /min；d) 噴霧器，符合下列要求：1) 能在5min內釋放出1×108-8×108個枯草芽抱桿菌芽胞；2) 能釋放出94

53、%±6%的單細胞芽胞；3) 氣溶膠噴射速率為0.50m /s±0.05m /s；噴霧器的校驗按YY0569中附錄D進行。e) 干擾圓筒，以下稱圓筒，為一外徑63m m兩端封閉的圓筒，長度由安全柜前后尺寸決定，材質為不銹鋼或鋁。圓筒用于模擬手臂對安全柜氣流的干擾。人員保護概述人員保護測試用微生物法或碘化鉀法，仲裁時用微生物法。微生物法人員保護試驗的微生物法步驟為：a) 安全柜的氣流流速設置為標稱值；b) 噴霧器盛有55mL濃度為5×108mL-8×108/mL芽抱懸浮液。噴霧器位于安全柜

54、內兩側壁之間，噴霧器噴嘴的軸線在工作臺面上方360 mm處，噴嘴前端在前窗操作口內100 mm處，噴射方向平行于工作臺面且正對前窗操作口(見圖4)；c) 圓筒固定在安全柜工作臺面上中心位置，一端貼著安全柜的后壁，另一端從安全柜的前窗操作口伸出安全柜至少150mm。圓筒軸線距工作臺面70mm(見圖5)；6個撞擊采樣器呈左右對稱放置在安全柜前，采樣口正對安全柜。其中2個撞擊采樣器的采樣口軸線相距150mm，與圓筒上沿平齊，采樣口前端距安全柜63mm；2個撞擊采樣器采樣口軸線相離50mm，位于距圓筒下沿30mm的水平面上，采樣口前端距安全柜63 mm；2個撞擊采樣器的采樣口水平面在工作臺面

55、上方360mm處，采樣口前端距安全柜50mm，采樣口軸線距安全柜中線150mm(見圖6、圖7) ；一個陽性對照瓊脂培養皿放在圓筒下，位于前窗進氣格柵上方或下方10mm，使其對進氣氣流的干擾最小(見圖5)； 圖4 人員保護試驗 圖 5 人 員 保 護 試 驗 d) 2個狹縫采樣器的采樣口平面與安全柜工作臺面平齊，采樣口的垂直軸線在安全柜前方150mm處，各距內側壁200 mm(見圖7)；e) 測試持續30 min，順序如表2所示；f)用一直徑47 mm的孔徑。22 um濾膜過濾所有撞擊采樣器的采樣液體，于無菌條件下取

56、出濾膜，置于合適的培養基上。有濾膜的培養皿、對照培養皿和狹縫采樣器的培養旺在37培養。當培養到24 h-28 h時檢查計數。若呈陰性，繼續培養至總培養時間達44 h-48 h時檢查計數；g) 新型和重大改型設計的安全柜，將流人氣流的流速設置為低于標稱值0. 050 m/s±0.0 15m /s，下降氣流的流速設置為高于標稱值0.050m /s±0.0 15m /s (應拆除對安全柜運行不必要的可拆卸設備，以便設置下降氣流流速)，重復上述試驗步驟；h) 新型和重大改型設計的安全柜，將流人氣流和下降氣流的流速設置為低于標稱值0. 050 m/s&#

57、177;0.015 m/s (應拆除對安全柜運行不必要的可拆卸設備，以便設置下降氣流流速)，重復上述試驗步驟。 圖6 人員保護試驗  圖7 人員保護試驗表2 人員保護試驗操作順序時間/ mi n試驗操作0啟動狹縫采樣器s啟動噴霧器e啟動撞擊采樣器11停止撞擊采樣器11 .5停止噴霧器30停止狹縫采樣器 碘化鉀法氣流流速與微生物試驗相同，按YY0569中附錄E試驗。 生物安全柜的產品保護產品保護 方法 產品保護試驗的微生物法按以下步驟進行： a) 安全柜的氣流流速設置為其標稱值

58、； b) 在安全柜的工作臺面上排滿敞開的瓊脂培養皿(見圖8)；  圖 8 產品 保 護 試 驗  c) 圓筒固定在安全柜工作臺面上的中心區，一端貼住工作區的后壁，另一端從前窗操作口伸出安全柜至少150 mm，圓筒的軸線高于工作臺面70 mm(見圖9) ;d) 將盛有55m L濃度為5X 1 06/m L-8X l Os /m L芽抱懸浮液的噴霧器放在安全柜外，噴霧器噴射軸在安全柜中心并與前窗操作口上沿平齊，噴霧器的噴嘴前端位于前窗操作口外100 mm，噴霧方向平行于工作臺面，正對前窗操

59、作口(見圖9)； e) 一個陽性對照瓊脂培養皿放在圓筒下，并位于前窗進氣格柵上方或下方10 mm，使其對進氣氣流的干擾最小(見圖9)；f) 啟動噴霧器，運行5 min后關閉。噴霧器關閉5 min后蓋上瓊脂培養皿的蓋子；g) 將培養皿在37.0培養。當培養到24 h-28 h時檢查計數。如果呈陰性，繼續培養至總培養時間達44 h-48 h時檢查計數；h) 對于新型和重大改型設計的安全柜，將流人氣流的流速設置為高于標稱值0.050 m/s±0.015m /s，將下降氣流的流速設置為低于標稱值0.050m /s±

60、;0.015m /s(應拆除對安全柜運行不必要的可拆卸設備，以便設置下降氣流流速)，重復上述試驗步驟。 圖 9 產 品 保 護 試 驗 交叉污染保護方法a) 安全柜的氣流流速設置為其標稱值；b) 將盛有55ml濃度為5×108/mL-8×108/mL的芽抱懸浮液的噴霧器置于安全柜內，緊靠左側內壁的中心，噴霧器噴射軸線在工作臺面上76mm-130mm處，噴射方向平行于工作臺面正對 面的側壁(見圖10)；c) 按下列方式，將敞開的瓊脂培養皿從前至后排列在工作臺面上(見圖10)：1) 兩排對

61、照培養皿位于噴霧器噴嘴下方；2) 距噴霧器所在側壁360mm處放一排培養皿；3) 距噴霧器所在側壁360mm外放一排培養皿，如果空間允許則放兩排；d) 啟動噴霧器，5min后關閉噴霧器；e) 15min后蓋上培養皿，37.0培養。當培養到24 h-28 h時檢查計數如果呈陰性，繼續培養至總培養時間達44h -48h 時檢查計數；f) 將噴霧器放于靠右側內壁中央執行上述步驟。 圖 10 防交 叉 污 染 試 驗下降氣流流速目的本試驗測定安全柜內下降氣流的流速。儀器檢測安全柜下降氣流流速的儀器為：熱式風速儀，精度為&#

62、177;0.015m/s或示值的±3%(取較大值)，按廠商的用法說明進行校正。當測試點的氣壓和溫度偏離熱式風速儀上列出的標準情況時，應按熱式風速儀廠商手冊中的修正因子進行修正；風速儀探針夾具，可準確的定位風速儀探針并且不影響氣流模式(如環狀夾和鉗夾都可以使用)。方法均勻下降氣流安全柜按下列方式在工作區上方高于前窗操作口上沿100m m 的水平面上確定測量點位置，多點測量穿過該平面的下降氣流流速(見圖11)：a) 測量點等距分布，形成的正方形柵格不大于150mm×150mm，測試點最少應有3排，每排最少應有7個測量點；b) 測試區域邊界

63、與安全柜的內壁及前窗操作口的距離應為150mm。用夾具將風速儀探針準確定位在各測量點進行測量。記錄所有測量點說明書的測量值并根據測量值計算出平均值。非均勻下降氣流安全柜在工作區上方高于前窗操作口上沿100mm的水平面上多點測量穿過該平面各區域的氣流流速，各區域由測試機構驗證。按照廠商的使用說明的區域界限、在每一區域的測量點數和所用等間距柵格的大小測試。對安全柜運行不重要的可拆卸元件(可選擇的部件)應在設置標稱值前拆除。用夾具將風速儀探針準確定位在各測量點進行測量。記錄所有測試點的測量值并根據測量值計算出各區域的平均值。  圖 11 下降 氣 流 流 速

64、測 試 驗  流入氣流流速目的本試驗用風量計法直接讀取前窗操作口流人氣流流量，計算平均流人氣流流速，確認安全在柜標稱值風速運行。流人氣流流速測定后，再用生產廠商推薦的計算或測定流人氣流流速的替代方法測量。儀器檢測安全柜流人氣流流速的儀器主要有：熱式風速儀，精確度為±0.015m/s 或示值的±300(取較大值)；風速儀探針夾具，可將風速儀探針精確定位在測量點并且不影響氣流模式(如環狀夾和鉗夾都可以使用)。風速儀法排氣氣流流速確定流入氣流流速(適于級A2型安全柜)用風速儀測試級A1和A2型安全柜的排氣速率計算流人氣流流速的步驟為：a) 用熱式風速儀多點測量穿過排氣過濾器面的氣流流速，測量