1、專題15現代生物科技專題1.(【百強校】2016屆遼寧省錦州市錦州中學高三上期中生物試卷)下圖是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的技術路線。 圖中tet R表示四環素抗性基因，am6表示氨茉青霉素抗性基因，BamH太Hindlll Sma I直線所示為三種限制酶的酶切位點。據圖回答：(1)圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用 限制酶同時酶切載體和人乳鐵蛋白基因。篩選 含有重組載體的大腸卞f菌首先需要在含 的培養基上進行。能驅動人乳鐵蛋白基因在乳腺細胞 中特異性表達的調控因子是圖中的 。過程采用的操作方法通常是 。(2)過程代表的生物技術是 。對早期胚胎進行切割，經過程可獲得多個新個體。目前最常

2、見的是經分割產生的同卵 胎。(3)為檢測人乳鐵蛋白是否成功表達，可采用 技術。(4)對代孕牛的要求是 。【答案】(1) Hindin和BamH氨茉青霉素 啟動子顯微注射(2)胚胎移植雙(3)抗原一抗體雜交(4)有健康體質和正常繁殖能力【解析】1)由圖中信息可知，載體上有HindUI和煦吸,油切位點，目的基因上也有它們的酶切位點， 應用此2種酶切.當人乳鐵蛋白基因和質粒隹接成重蛆質粒后，思&基因被人乳鐵蛋白基因隔開，不是完 整的，而飄既基因是完整的，所以篩選含有重蛆載體的大朧桿菌首先需要含氨王青毒素的培養基上進行， 能讓目的基因開始表達的是啟動子，啟動子是俄也聚合或特異性識別和結合的Dg

3、序列，是基因的一個組 成部分，控制基因表達轉錄的起始時間和表達的程度，過程將目的基因導入到動物中常用顯微注射 法.(2)過程早期胚胎移入代孕牛的體內利用的是胚胎移植的技術，對早期胚胎進行切割，經過程胚胎移植 過程可獲得多個新個體都發育成了個體，目前最常見的是經分割產生的同卵雙胎。(3) 一般檢測目的基因是否表達里用抗原-抗體雜交的方法。(4)對代孕牛的一般要求是有健康的體質以及能正常繁殖后代。【考點定位】基因工程的原理及技術；胚胎分割移植【名師點睛】總結胚胎分割的相關知識點：(1)概念：是指采用機械方法將早期胚胎切割2等份、4等份等，經移植獲得同卵雙胎或多胎的技術。(2)意義：來自同一胚胎的后

4、代具有相同的遺傳物質，屬于無性繁殖。(3)材料：發育良好，形態正常的桑棋胚或囊胚，桑棋胚至囊胚的發育過程中，細胞開始分化，但其全能性仍很高，也可用于胚胎分割。(4)操作過程：對囊胚階段的胚胎分割時，要將內細胞團均等分割，否則會影響分割后胚胎的恢復和進一步發展。2.(【百強校】2016屆吉林省長春外國語學校高三上學期期末生物試卷)轉基因生物可用于生產人類所需要的藥用蛋白，如激素、抗體、疫苗、酶等。下圖甲是通過生物工程培育能產生人胰島素的煙草的過程。請據圖回答下列問題：甲Gene II(1)基因工程的核心步驟是 (填字母)。此過程所需的工具酶是 (2)下圖乙是載體和反轉錄得到的胰島素基因的片段，已

5、知限制酶I的識別序列和切點是一GJ GATC6,限制酶n的識別序列和切點是一J GATC-oGene I和Gene n為質粒上的標記基因，根據圖示分析，應用限制酶 切割質粒，用限制酶 切割目的基因。構建的重組質粒中，除含有 外源基因、標記基因外，還必須含有 和GGATCC目的基因GATCCCTAGGCTAG注：Gene I和Ge碇U表示兩種標記基因;。表示限制醉僅有的識別序列放大C(3) B過程中，常用 處理使細菌成為感受態細胞，從而利于重組質粒的導入。(4) 如果從分子水平檢測人胰島素基因是否表達成功，可以采用 方法。(5) 】(1) A限制酶和DNA1接酶(6) I n啟動子終止子(7)

6、Ca2+(8) 抗原一抗體雜交【解析】(1)基因工程的核心步驟是基因表達載體的構建，即A過程，該過程首先需要限制酶切割含 有目的基因的外源DNA分子和運載體，還需用D貼隹接能將目的基因與運載體連接形成重組DNA分子.(2)用限制的II切割質粒時會符兩個標記基因都破壞，因此只能選用限制酶I切割質粒，而切割含有 目的基因的外源及加分子時，只需用限制施II即可.構建的重組質粒中，除含有外源基因、標記基因外， 還必須含有啟動子和終止子.(3)將目的基因導入微生物細胞時，常用感受態細胞法，即常用Ca2+理使細菌成為感受態細胞，從而利于重組質粒的導入。(4)從分子水平上檢測目的基因是否表達成功，可以采用抗

7、原-抗體雜交方法。【考點定位】基因工程的原理及技術【名師點睛】基因工程的基本工具：1、“分子手術刀”-限制性核酸內切酶(限制酶)(1)來源：主要是從原核生物中分離純化出來的。(2)功能：能夠識別雙鏈 DNA分子的某種特定的核甘酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核昔 酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性。(3)結果：經限制酶切割產生的DNA片段末端通常有兩種形式：黏性末端和平末端。2、“分子縫合針” -DNA連接酶(1)兩種DNA!接酶(E?coliDNA連接酶和T4DNA1接酶)的比較：相同點：都縫合磷酸二酯鍵。區別：E?coliDNA連接酶來源于大腸桿菌， 只能將雙鏈DNA片段互補的黏

8、性末端之間的磷酸二酯鍵連 接起來；而T4DNA連接酶來源于T4噬菌體，可用于連接粘性末端和平末端，但連接效率較低.(2)與DNA聚合酶作用的異同：DNA聚合酶只能將單個核甘酸加到已有的核甘酸片段的末端，形成磷酸二酯鍵.DNA1接酶是連接兩個 DNM段的末端，形成磷酸二酯鍵。3、“分子運輸車”-載體(1)載體具備的條件：能在受體細胞中復制并穩定保存。具有一至多個限制酶切點，供外源DNA片段插入。具有標記基因，供重組 DNA的鑒定和選擇。(2)最常用的載體是質粒，它是一種裸露的、結構簡單的、獨立于細菌染色體之外，并具有自我復制 能力的雙鏈環狀 DNA子。(3)其它載體：噬菌體的衍生物、動植物病毒。

9、3.(【百強校】2016屆天津市一中高三上學期第三次月考生物試卷)GDN陛一種神經營養因子，對損傷的神經細胞具有營養和保護作用。研究人員構建了含GDN雄因的表達載體(如圖 1所示)，并導入到大反向連接注:bp表示版基對;載體和基因片段上的小箭號 表示相關限制醉的醐切位點圖1(1)構建含GDN雄因的表達載體時，需選擇圖鼠神經干細胞中，用于干細胞基因治療的研究。請回答: 6 (XH) hp 6 吧邛 6(NHlbp71M) hp2"!即黑網沏電泳分析圖譜注:一表示電泳條帶1 Y2, 3表示電泳泳道圖21中的 限制酶進行酶切。(2)經酶切后的載體和 GDNFi因進行連接，連接產物經篩選得到

10、的載體主要有3種：單個載體自連、GDNF基因與載體正向連接、GDNFi因與載體反向連接(如圖 1所示)。為鑒定這3種連接方式，選擇 Hpal酶和BamHI酶對篩選得到的載體進行雙酶切，并對酶切后的DNM段進行電泳分析，結果如圖 2所示。圖中第泳道顯示所鑒定的載體是正向連接的。(3)將正向連接的表達載體導入神經干細胞后， 為了檢測GDNF1因是否成功表達，可用相應的 與 提取的蛋白質雜交。當細胞培養的神經干細胞達到一定密度時產生接觸抑制，換瓶后進行 培養以 得到更多數量的細胞，用于神經干細胞移植治療實驗。(4)對于神經干細胞可以來源于胚胎干細胞的誘導分化，胚胎干細胞來源于 ,在培養時可以只分 裂

11、不分化，但是通過誘導可以分化成各種不同的組織細胞，胚胎干細胞的這個特性稱為 。(5)胚胎干細胞也可以來自于核移植的重組細胞，一般體細胞核移植要比胚胎細胞核移植難度大，原因 是,而取自卵巢的卵母細胞需要培養到 期，才可進行核移植。【答案】(1) Xhol(3)抗體傳代(4)原始性腺和早期胚胎發育的全能性(5)細胞分化程度大，細胞核不易實現全能性M n中期【解析】根據題意和圖示分析可知：由于GDUF基因兩邊都有醺限制55識別序列，所以構建含 GCDNF基因的表達載體時，需選擇圖1中的馳【限制葩進行酶切。(2)選擇瞬工魏E犯II期篩選得到的載體進疝型嬲，并對酶切后的D陋片遨皎電泳分析， 結果如圖2所

12、示，由于GD蝦基因中有8g乩嬲酶烈，所以圖中第泳道顯示所鑒定的載體是正向連接 的.(3)為了檢測GDN雄因是否成功表達，可利用抗原 -抗體雜交技術，用相應的抗體與提取的蛋白質雜交，當培養的神經干細胞達到一定密度時，需進行傳代培養以得到更多數量的細胞，用于細胞干細胞 移植治療實驗。(4)胚胎干細胞來源于原始性腺和早期胚胎，在培養時可以只分裂不分化，但是通過誘導可以分化成 各種不同的組織細胞，說明細胞具有全能性。(5)由于體細胞分化程度高，不容易表達全能性，因此利用體細胞進行核移植技術的難度明顯高于利用胚胎細胞進行核移植。采集的卵母細胞一般要培養到減數第二次分裂中期，才能具備受精作用的能力，才能用

13、于實驗，核移植實驗中要用微型吸管吸出供體細胞的細胞核，植入去核的卵母細胞中，與之融合形 成重組細胞。【考點定位】基因工程的原理及技術、胚胎干細胞的研究與應用【名師點睛】總結：1、基因工程技術的基本步驟：(1)目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成.(2)基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和 標記基因等。(3)將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣.將目的基因導入植物細胞 的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法； 將目的基因導入微生物細胞的方法

14、是感受態細胞法。(4)目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：檢測轉基因生物染色體的DN蝠否插入目的基因-DNA分子雜交技術；檢測目的基因是否轉錄出了mRNA-分子雜交技術；檢測目的基因是否翻譯成蛋白質-抗原-抗體雜交技術.個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。2、動物細胞培養的過程：取動物組織塊一剪碎組織一用胰蛋白酶處理分散成單個細胞一制成細胞懸液一轉入培養液中(原代培養)一放入二氧化碳培養箱培養一貼滿瓶壁的細胞用酶分散為單個細胞，制成細 胞懸液一轉入培養液(傳代培養)一放入二氧化碳培養箱培養。)胰島素A、B鏈分別4.(【百強校】2016屆江蘇常州第一中學江陰南菁高中高三兩校聯考

15、生物試卷表達法是生產胰島素的方法之一。圖1是該方法所用的基因表達載體，圖2表示利用大腸桿菌作為工程菌生產人胰島素的基本流程(融合蛋白A、B分別表示3-半乳糖昔酶與胰島素A、B鏈融合的蛋白)。請回答下列問題：M軻睡點門動腆島素或13進端碼區蟆節許碓素抗性底因 圖i導入族段 澳化保_ w晚化 "Aw * 3她化大曲桿曲澳化軾_ 獨化.一中舞一融合蛋白H5 腆用素A施(2)圖1中啟動子是(1)圖1基因表達載體中沒有標注出來的基本結構是酶識別和結合的部位，有了它才能啟動目的基因的表達；氨茉青霉素抗性基因的作用是(3)構建基因表達載體時必需的工具酶有(4) 3 -半乳糖甘酶與胰島素 A鏈或B鏈

16、融合表達，可將胰島素肽鏈上蛋白酶的切割位點隱藏在內部,其意義在于(5)澳化鼠能切斷肽鏈中甲硫氨酸竣基端的肽鍵，用澳化氟處理相應的融合蛋白能獲得完整的或B鏈，且3 -半乳糖甘酶被切成多個肽段，這是因為你的推測結果(6)根據圖2中胰島素的結構，請推測每個胰島素分子中所含游離氨基的數量。(1)終止子(2) RNA聚合作為標記基因，將含有重組質粒的大腸桿菌篩選出來(3)限制酶和DNAdI接酶(4)防止胰島素的 A B鏈被菌體內蛋白酶降解(5) 3 -半乳糖甘酶中含多個甲硫氨酸，而胰島素A、B鏈中不含甲硫氨酸(6)至少2個兩條肽鏈的一端各有一個游離的氨基，氨基酸的R基中可能還含有游離的氨基【解析】C1)

17、基因表達載體必須具有啟動子、終止子、標記基因、目的基因，在圖中已經標出來的有臺子、 標記基因(氨主青霉毒抗性基因)、目的基因f胰島素也或B窿編碼區)，所以圖中沒有標注出來的基本結 構是終止子；(2)啟動子是RNA聚合酶識別和結合的部位，啟動基因的轉錄，進而進行目的基因的翻譯，氨茉青霉素抗性基因是標記基因，其作用是作為標記基因，將含有重組質粒的大腸桿菌篩選出來；(3)構建基因表達載體時先用同種限制酶切割目的基因和載體，再用DNA1接酶使切割下來的目的基因和載體縫合在一起；(4) 3 -半乳糖甘酶與胰島素 A鏈或B鏈融合表達,可將胰島素肽鏈上蛋白酶的切割位點隱藏在內部防止胰島素的 A B鏈暴露，進

18、而被菌體內蛋白酶降解；(5)澳化鼠能切斷肽鏈中甲硫氨酸竣基端的肽鍵，用澳化氟處理相應的融合蛋白能獲得完整的A鏈或B鏈，且3 -半乳糖甘酶被切成多個肽段 ，這是因為3-半乳糖甘酶中含多個甲硫氨酸，而胰島素A、B鏈中不含甲硫氨酸。2個，可能有其他的氨青蒿素是治療瘧疾的重要藥,并且發現酵母細胞也能(6) 一條肽鏈的一端各有一個游離的氨基，氨基酸的R基中可能還含有游離的氨基，根據圖 2中胰島素的結構，胰島素含兩條肽鏈，所以每個胰島素分子中所含游離氨基的數量至少是 基在R基上。【考點定位】基因工程5.(【百強校】2016屆黑龍江省哈爾濱三中高三上第三次檢測生物試卷)物。研究人員已經弄清了青蒿細胞中青蒿素

19、的合成途徑(如圖中實線方框內所示)夠產生合成青蒿素的中間產物FPP (如圖中虛線方框內所示)。結合所學知識回答下列問題:酵母細胞固醇.ERG9.FPP合成能基因 一® mKNAI吉蒿細胞單糖一 ipp FPP 合叫 FPP小穌音高眼前體一*當蒿素(1)瘧疾俗稱“打擺子”，是由瘧原蟲引起的寒熱往來癥狀的疾病。當瘧原蟲寄生在人體中時，會引起人的免疫反應，使 細胞產生淋巴因子。同時 B細胞在受到刺激后，在淋巴因子的作用下增殖分化成 細胞，產生抗體。(2)根據圖示代謝過程，科學家在培育能產生青蒿素的酵母細胞過程中，要向中導入的基因是,具體操作中可利用 技術檢測轉基因生物的 DNA上是否插入目

20、的基因。(3)構建基因表達載體時，用不同類型的 切割DN所，可能產生 末端，也可能產生 末端。(4)實驗發現，酵母細胞導入相關基因后，該基因能正常表達，但酵母菌合成的青蒿素仍很少，根據 圖解分析原因可能是 。【答案】(1) T 漿(2)酵母細胞 ADS 酶基因 DNA 分子雜交(3)限制酶 黏性 平(4)酵母細胞中部分 FPP用于合成固醇【解析】(1)當瘧原蟲寄生在人體中時，會引起人的免疫反應，使T細胞產生淋巴因子。同時 B細胞在受到刺激后，在淋巴因子的作用下增殖分化成漿細胞，產生抗體。(2)由于酵母細胞中也能合成 FPP, FPP形成青蒿素過程還需要 ADSB和CYP71AV11參與，所以需

21、要 導入ADS酶基因、CYP71AV11基因，RNA聚合酶參與 DNA勺轉錄過程。(3)構建基因表達載體時， 用不同類型的限制酶切割 DNA,可能產生黏性末端， 也可能產生平末端。(4)由圖可知，酵母細胞中部分 FPP用于合成固醇，使合成青蒿素的量減少。【考點定位】基因工程6.(【百強校】2016屆海南省海口中學高三第四次月考生物試卷)基因工程和植物細胞工程技術在科 研和生產實踐中有廣泛應用，請據圖回答:與載體結合篩選 萌發獲取目的基因 一重組載體一受體細胞一*重組體一愈傷組織一胚狀體一植物體(1)圖中過程是利用了植物的 技術，其原理是 ,該過程須在無菌條件下 進行，培養基中除加入營養物質外，

22、還需添加 等物質，作用是 。(2)若要獲取轉基因植物人工種子，需培養到 階段，再進行人工種皮的包裹；如用植物細胞實現目的基因所表達的蛋白質類藥物的工廠化生產，培養到 階段即可。(3)目前可采用莖尖組織培養技術來進行作物脫毒，原因是 。【答案】(1)植物組織培養植物細胞的全能性植物激素(植物生長調節劑)促進細胞分裂、生長、分化(2)胚狀體愈傷組織(3)植物分生區附近(如莖尖)的病毒極少，甚至無病毒3【解析】(1)圖中表示植物組織培養過程，其原理是植物細胞的全能性,該過程須在無菌條件下 進行，培養基中除加氏營養物質外，還需添加細胞分裂素和生長素等物質，作用是促進細胞分裂、生長、 分化.(2)人工種

23、子是指通過植物組織培養得到的丘狀體、不定芽、頂芽和腋芽等為材料，通過人工薄膜包 裝得到的種子.所以要茯取轉基因植物人工種子，需培養到跖狀體階殷，再進行人工種皮的包裹；如用植 物細胞實現目的基因所表達的蛋白質類藥物的工廠化生產，培養到愈傷組織階殷即可.(3)植物的莖尖、根尖分生區附近病毒極少，或無病毒，切取植物分生區(莖尖)組織培養技術進行作物 脫毒。【考點定位】基因工程的原理及技術；植物培養的條件及過程7.(【百強校】2016屆黑龍江省牡丹江一中高三上學期期末生物試卷)回答下列問題：(1)若想利用植物組織培養技術獲得突變體，應用物理誘變或化學誘變的方法處理 (填相應結構)。若番茄細胞內有 m條

24、染色體，馬鈴薯細胞含 n條染色體，則植物體細胞雜交技術獲得的“番茄-馬鈴薯”細胞內含 條染色體(2) SR-PC幅對移植前的人胚胎進行性別鑒定的技術，需從被測胚胎的 中取出幾個細 胞，以Y染色體上SRY基因(性別決定基因)的一段序列作引物，用被測胚胎DNA作模板進行PCRT增。如果某早期胚胎檢測結果為陽性，則可判斷該胚胎發育成的個體性別是 。(3)生物技術是一把雙刃劍，由于科學發展水平的限制，在轉基因生物中，有時候會出現一些人們意想不到的后果，引發了人們在食物安全、生物安全和 安全三個方面發生了激烈的爭論。2002年，英國一對夫婦通過設計試管嬰(4)為解決不孕夫婦的生育問題而出現了試管嬰兒技術

25、，而兒，利用新生兒臍帶血中造血干細胞，挽救患地中海貧血癥的男孩。這兩項技術的區別是設計試管嬰兒技 術。(5)生態工程所遵循的基本原理有物質循環再生原理、 、物種多樣性原理、整體性原 理及。【答案】(1)愈傷組織 m+n(2)滋養層 男性(3)環境(4)胚胎移植前需要進行遺傳學診斷(5)協調與平衡原理、系統學和工程學原理【解析】(1)若想利用植物組織培養技術獲得突變體，應用物理誘變或化學誘變的方法處理愈傷組織。若番茄細胞內有 m條染色體，馬鈴薯細胞含 n條染色體，則植物體細胞雜交技術獲得的“番茄-馬鈴薯”細胞內含m+n條染色體(2) SR-PC幅對移植前的人胚胎進行性別鑒定的技術，需從被測胚胎的

26、滋養層中取出幾個細胞，以Y染色體上SRY基因(性別決定基因)的一段序列作引物，用被測胚胎DNA作模板進行PCFT增。如果某早期胚胎檢測結果為陽性，則可判斷該胚胎發育成的個體性別是男性。(3)生物技術是一把雙刃劍，由于科學發展水平的限制，在轉基因生物中，有時候會出現一些人們意想不到的后果，引發了人們在食物安全、生物安全和環境安全三個方面發生了激烈的爭論。(4)為解決不孕夫婦的生育問題而出現了試管嬰兒技術，而 2002年，英國一對夫婦通過設計試管嬰兒，利用新生兒臍帶血中造血干細胞，挽救患地中海貧血癥的男孩。這兩項技術的區別是設計試管嬰兒技 術胚胎移植前需要進行遺傳學診斷。(5)生態工程所遵循的基本

27、原理有物質循環再生原理、協調與平衡原理、物種多樣性原理、整體性原理及系統學和工程學原理。【考點定位】植物組織培養；生態工程；基因工程8.(【百強校】2016屆湖北省荊門市高三元月調考生物試卷)下圖為利用現代生物技術治療遺傳性糖尿病的流程示意圖，據圖回答相關問題。去核卵去細胞*體細胞重組細胞A蟲組細悒H述拄艮有1E常曲電出細胞上空叫白4附的,定向飾號功能的璃島樣拙胞聯好任冽掘(1)圖中過程表示 技術。(2)圖中過程核心步驟是 ,需要用到的酶是 （3）重組細胞在體外培養時，培養液中除了加入誘導物和水、無機鹽、維生素、葡萄糖、氨基酸等必需的營養成分外，往往需要特別加入 ,同時在含 的無菌、恒溫培養箱

28、中進行培養。（4）胚胎干細胞一般是從 中分離出來的一類細胞，在功能上具有 。（5）定向誘導使重組細胞 B發生,從而形成功能專一的胰島樣細胞。【答案】（1）核移植（2）基因表達載體的構建限制性內切酶（或限制酶）、DNA1接酶（3）（動物）血清 5% 的CO（4）早期胚胎或原始性腺發育的全能性（5）細胞分化（或基因選擇性表達）【解析】C1）圖中是體細胞的細胞核，過程表示核移植技術，以形成重蛆細胞.（2）圖中過程是基因工程，其核心步驟是基因表達載體的構建，需要用到的酶是限制能和D岫連接 時（3）重組細胞在體外培養時，培養液中除了加入誘導物和水、無機鹽、維生素、葡萄糖、氨基酸等心 需的營養成分外，往往

29、需要特別加入動物血清等天然成分，同時在含5%的CO：的無菌、恒溫培養箱中進行 培養.（4）胚胎干細胞一般是從早期胚胎或原始性腺中分離出來的一類細胞，在功能上具有發育的全能性.<5）定向誘導使重蛆細胞B發生細胞分化（或基因選擇性表達），從而形成功能專一的胰島樣細胞.【考點定位】基因工程、細胞工程、胚胎工程9.（【百強校】2016屆寧夏銀川市第二中學高三元月份月考生物試卷）甲型流感（HN）病毒在世界各地大面積蔓延，有些國家還出現了死亡病例。科學家已分離出甲型H1N1病毒（一種RNA病毒）。某制藥廠根據下面流程圖生產預防和治療甲型流感的抗體，請據圖回答有關問題。現用甲*細眼丙細包乙后定培養基單

30、孑師程（1）進行過程a之前，必須對小鼠注射 ,使小鼠產生免疫反應。 若細胞甲是小鼠骨髓瘤細胞，則細胞乙是從小鼠體內提取的 細胞。（2）促進b過程常用的化學誘導劑是 。假設僅考慮某兩個細胞的融合，則可形成 種類型的細胞丙，因此需要特定的選擇培養基篩選出 細胞用于培養。選出此細胞后，還需進行克隆化培養和 檢測，經多次篩選，就可獲得足夠數量的能分泌所需抗體的細胞。（3）理論上，注射了該抗體的人群不能長期具有對甲型流感的免疫能力，試分析原因。 （至少寫出兩點）。【答案】（1）滅活的甲型流感（HN）病毒B淋巴（2）聚乙二醇 三雜交瘤抗體（3）抗體存留時間較短、 HN病毒變異【解析】（1）由于本題的目的是

31、制備用于預防和治療甲型流感的單克隆抗體，B細胞只能是取自感染HINi病毒的動物或人體內的 B淋巴細胞，所以在進行過程 a之前，必須對小鼠注射滅活的甲型流感（HINi）病毒，使小鼠產生免疫反應。（2）促進b過程常用的化學誘導劑是聚乙二醇，僅考慮兩個細胞的融合，則可形成乙細胞-乙細胞、甲細胞-甲細胞、乙細胞-甲細胞3種類型的丙細胞，為了從中篩選出乙細胞-甲細胞即雜交瘤細胞，必須用特定的選擇培養基進行篩選，選出此細胞后，還需進行克隆化培養和抗體檢測，經多次篩選，就可獲得足 夠數量的能分泌所需抗體的細胞，篩選出的細胞（雜交瘤細胞）既能無限增殖又能產生特異性抗體。（3）理論上，注射了該抗體的人群不能長期

32、具有對甲型流感的免疫能力，原因是HINi病毒易發生變異，而抗原抗體的結合具有特異性，且抗體的存活有一定的時間。【考點定位】本題考查單克隆抗體相關知識，意在考查考生識記所列知識點，并能運用所學知識做出 合理的判斷或得出正確的結論的能力。【名師點睛】單克隆抗體制備過程中的兩次篩選第一次篩選：利用特定選擇培養基篩選，獲得雜交瘤細胞，即AB型細胞（A為B淋巴細胞，B為骨髓瘤細胞），不需要 A B、AA BB型細胞。第二次篩選：利用多孔板法和抗原一抗體雜交法篩選，獲得產生特定抗體的雜交瘤細胞。10.（【百強校】2016屆山東省濟南外國語學校高三 1月模擬測試生物試卷） 科學家通過誘導黑鼠體細胞去分化獲得

33、誘導性多能干細胞（iPS）,繼而利用iPS細胞培育出與黑鼠遺傳特性相同的克隆鼠，流程如下:黑鼠（體加曲供體）透導因子LP片細捌體細胞特殊處理*2 細胞胚胎胚胎供體C內細胞團不發育）重組囊胚4代孕母鼠）（1）從黑鼠體內獲得體細胞后，對其進行的初次培養稱為 ,培養的細胞在貼壁成長至充鏈滿培養皿底時停止分裂，這種現象稱為（2）圖中2細胞胚胎可用人工方法從灰鼠輸卵管內獲得，該過程稱為 ,也可從灰鼠 體內取出卵子，通過 后進行早期胚胎培養獲得。（3）圖中重組囊胚通過 技術移入白鼠子宮內繼續發育，暫不移入的胚胎可使用 方法保存。（4）小鼠胚胎干細胞（ES）可由囊胚的 分離培養獲得，iPS與ES細胞同樣具有

34、發育全 能性，有望在對人類iPS細胞進行定向 后用于疾病的細胞治療。【答案】（1）原代培養接觸抑制（2）沖卵體外受精（3）胚胎移植 冷凍（或低溫）（4）內細胞團細胞誘導分化【解析】（1）原代培養指將動物組織用能處理成單個細胞后進行的初次培養，接觸抑制指貼壁的細胞 分裂生長到表面相互接觸時，細胞就會停止分裂噌殖的現家.<2）將早期胚胎從母牛子宮中;1中洗出來的方法叫沖卵.（3）暫不進行胚胎移植的胚胎可放入-196C的液氮中冷凍保存.（4）胚胎干細胞簡稱ES或EK細胞，是由早期胚胎或原始性腺分離出來的一類細胞，藏與ES細胞一 樣，可通過定向誘導分化修補某些功能異常的細胞來治療疾病0【考點定位

35、】動物細胞與組織培養過程；胚胎移植；胚胎干細胞的來源及分化【名師點睛】原代培養指將動物組織用酶處理成單個細胞后進行的初次培養，接觸抑制指貼壁的細胞 分裂生長到表面相互接觸時，細胞就會停止分裂增殖的現象；將早期胚胎從母牛子宮中沖洗出來的方法叫 沖卵；暫不進行胚胎移植的胚胎可放入-196 C的液氮中冷凍保存；胚胎干細胞簡稱ES或EK細胞，是由早期胚胎或原始性腺分離出來的一類細胞，iPS與ES細胞一樣，可通過定向誘導分化修補某些功能異常的細胞來治療疾病。11.（【百強校】2016屆西藏自治區拉薩中學高三上第四次月考生物試卷）抗凝血酶出蛋白是一種血漿糖蛋白，臨床上主要用于血液性疾病的治療。下圖為培育轉

36、基因奶牛獲得抗凝血酶出蛋白的流程。回答問題:抗凝血酶m蛋白牛奶其他蛋白(i)過程是,該過程常用的方法是 。擴增抗凝血酶 出蛋白基因經常采用 技術。(2)過程包括 技術和 技術；可用 技術獲得多只與該轉基因奶牛遺傳物質相同的牛犢。(3)若要檢測牛奶中是否含有抗凝血酶出蛋白，可采用 技術。(4)如果檢測發現抗凝血酶出蛋白基因被導入了受精卵，但卻沒有檢測到抗凝血酶出蛋白的存在，那應該考慮分別位于目的基因首端和末端的 沒有設計好，應從這方面考慮改善。【答案】(1)將目的基因導入受體細胞顯微注射法 PCR(2)早期胚胎培養胚胎移植胚胎分割(3)抗原-抗體雜交(4)啟動子和終止子【解析】(1)過程是將目的

37、基因導入受體細胞，常用的方法是顯微注射法.利用PC叱術能擴增抗凝血酶ID蛋白基因。(2)過程是受精卵需要經過早期胚胎培養技術和胚胎移植技術，可用胚胎分割技術獲得多只與該轉 基因奶牛遺傳物質相同的牛犢。(3)若要檢測牛奶中是否含有人血清白蛋白，這屬于翻譯水平的檢測，可采用抗原-抗體雜交技術。(4)基因表達載體由啟動子、終止子、標記基因和目的基因組成.啟動子位于首端，終止子位于尾端。【考點定位】胚胎移植；基因工程的原理及技術【名師點睛】知識拓展：1、PCFT增技術與自然條件下的 DN限制相比，不同之處在于，需要引物， 需要耐高溫的熱穩定性 DN咪合酶。2、基因工程的操作步驟中，在導入目的基因之前，

38、需要構建基因表達 載體，即將血清白蛋白基因與奶牛乳腺蛋白基因的啟動子等調控組件重組在一起。12.(【百強校】2016屆云南師范大學附屬實驗中學高三12月月考生物試卷) 利用胚胎工程培育“試 管牛”的基本過程如圖所示。據圖回答問題: 狼差I良林母牛眄細副-I攜羔. 芬坤4毒 -*受蔣卵 三工 早期胚胎 普福母牛子宮上里) 優管牛圍.公牛I旦，器干|-1 (1)受精卵是胚胎發育的開端，圖中的卵細胞達到 期，才具備受精的能力，而精子需經過 過程才能和卵細胞結合。(2)在體外培養受精卵時，除了給予一定量的Q以維持細胞呼吸外，還需要提供CG氣體以維持(3)圖中過程 A稱為,它在胚胎工程中的意義在于 。(

39、4)若要獲得遺傳物質完全相同的兩個新個體，可對發育到 階段的早期胚胎進行胚胎分割。同時，可以通過取樣 進行分子水平的早期胚胎性別鑒定；也可以在細胞水平上通過對 的分析進行性別鑒定。【答案】(1)減數第二次分裂中精子獲能(2)培養液(基)的 pH(3)胚胎移植 提高優良母畜的繁殖率(4)桑棋胚期或囊胚期DNA染色體(或性染色體)【解析】(1)卵細胞直到調教第二次分裂中期時，才具備受精能力；精子必須經過精子獲能的過程才 能和卵細胞結合.(外二氧化碳的作用是維持培養液的pH.(3)圖中過程上稱為胚胎移植，它在胚胎工程 中的意義在于提高優良母畜的繁殖率.(4)胚胎分割一般選擇桑根胚期或囊胚期階段的早期

40、胚胎二可以通 過取樣D悔進行分子水平的早期胚胎性別鑒定、也可以在細胞水平上通過對染色體的分析進行性別鑒定。【考點定位】胚胎工程【名師點睛】早期胚胎發育注意的問題(1)起點是受精卵分裂，在輸卵管內完成受精作用時即已開始，直至發育成為成熟的胎兒。(2)卵裂期的特點：細胞有絲分裂使細胞數目增加，但胚胎總體積并不增加或略縮小，因此每個細胞 的體積會隨分裂的進行不斷縮小，但核內遺傳物質并未減少。(3)桑棋胚至囊胚的發育過程中，細胞開始分化，但其全能性仍很高，也可用于胚胎分割。(4)原腸胚的特點：個體發育中分化能力最強，細胞已分化形成外、中、內三個胚層。(5)個體發育過程中從桑棋胚階段開始初步分化，分化出

41、內細胞團和滋養層細胞。13.(【百強校】2016屆天津南開中學高三第一次月考生物試卷)下面兩幅圖分別是單克隆抗體制備過程和克隆羊培育過程示意圖，請據圖回答下列問題：IB淋巴細病向 骨筋瘤細胞廠$)雜交痛細胞一選出能產生特定抗體 的細胞群，繼續培養圖甲黑面綿羊白面綿羊去核卵細胞乳腺細胞核，細細胞|電腓相朝激期胚胎.儂.另一母綿羊子宮|妊娠、出生克隆羊塞利"(1)圖甲和圖乙所示的過程中，都必須用到的動物細胞工程技術手段是 。進行(2)圖甲中過程常在促融劑 誘導下完成，過程中至少涉及兩次篩選：第一次是利用初步篩選，第二次是利用的方法篩選出既能大量增殖，又能產生單一性抗體的雜交瘤細胞。(3)

42、單克隆抗體結合上抗癌藥物能定向攻擊癌細胞，這一應用可形象地稱為 。(4)若不考慮環境因素影響，克隆羊的性狀會完全像白面綿嗎？ 。原因是。(5)圖乙過程的技術具有多種用途，但是不能。A.有選擇地繁殖某一性別的家畜B.繁殖家畜中的優良個體C.用于保存物種D.改變動物的核基因(6)在現有技術條件下，還不能將從動物體內分離出來的成熟的體細胞直接培養成一個新個體，而是必須將體細胞的細胞核移植到去核的卵細胞中才能發育成新個體，你認為原因最可能是。A.卵細胞大，便于操作B.卵細胞含有的營養物質多C.卵細胞的細胞質可使體細胞核全能性得到表達D.重組細胞才具有全能性【答案】(1)動物細胞培養(2)聚乙二醇(或

43、PEG選擇性培養基抗體檢測和克隆化培養(3)生物導彈(4)不會卵細胞細胞質的遺傳物質也能控制某些性狀(5) D(6) C【解析】（1）圖甲單克隆抗體制備過程，圖乙克隆羊培育過程，都必須用到的動物細胞工程技術手段 是動物細胞培養.（2）語導動物細胞融合最常用的誘導方法是滅活的病毒:第一次是利用選擇性培養基狂艘篩選，第 二次是利用抗體檢測的方法篩選.（3）單克隆抗體能定向攻擊癌細胞，主要是利用其特異性，這一應用可形象地稱為生物導彈.（4）若不考慮環境因素影響，克隆羊的性狀不是全部像白面揭羊，因為卵細胞細胞質中的線粒體遺傳 物質也能控制某些性狀.（5）動物體細胞核移植技術的應用：加速家畜遺傳改良進程

44、，促進良畜群繁育；保護瀕危物種，增大 存活數量；生產珍貴的醫用蛋白；作為異種移植的供體；用于組織器官的移植等.只有通過可遺傳 變異改變動物的核基因。（6）由于卵細胞的細胞質可使體細胞胞核全能性得到表達，所以選擇卵細胞作為核移植的供體細胞。【考點定位】單克隆抗體的制備過程；動物體細胞克隆14 .（【百強校】2016屆陜西省西安中學高三重點班上學期第四次檢測生物試卷）單純皰疹病毒I型（HSV-I）可引起水泡性口唇炎。利用雜交瘤技術制備出抗HSV-1的單克隆抗體可快速檢測 HSV-1。請回答下列問題：（1）在制備抗HSV-I的單克隆抗體的過程中，先給小鼠注射一種純化的HSV-1蛋白，一段時間后，若小

45、鼠血清中抗 的抗體檢測呈陽性，說明小鼠體內產生了 （體液免疫/細胞免疫）反應， 再從小鼠的 中獲取B淋巴細胞。將該 B淋巴細胞與小鼠的 細胞融合，再經過篩選、檢測， 最終可獲得所需的雜交瘤細胞。（2）若要大量制備抗該蛋白的單克隆抗體，可將該雜交瘤細胞注射到小鼠的 中使其增殖，再從 中提取、純化獲得。（3）通過上述方法得到的單克隆抗體可準確地識別這種HSV-I蛋白，其原因是該抗體具有 （至少答出兩點）等特性。【答案】（1） HSV-1蛋白體液免疫 脾臟 骨髓瘤（2）腹腔腹水（3）純度高、靈敏度高 特異性強【解析】（1）若小鼠血清中抗 HSV-I的抗體檢測呈陽性，則小鼠體內產生了相應的抗體，而抗體

46、是體 液免疫過程中產生的，說明小鼠發生了體液免疫反應，再從小鼠的脾臟中獲取B淋巴細胞.將該 B淋巴細胞與小鼠的骨髓瘤細胞融合，再經過篩選、檢測，最終可獲得所需的雜交瘤細胞，該細胞具有雙親的特點,即既能在體外培養條件下無限增值，又能產生專一抗體。(2)克隆化培養時，將雜交瘤細胞注射到小鼠的腹腔中(體內培養)或培養基中(體外培養)使其增 殖，再從腹水中或培養液中提取、純化獲得大量制備抗該蛋白的單克隆抗體。(3)單克隆抗體可準確地識別這種HSV-I蛋白，其原因是單克隆抗體具有純度高和特異性強等特性。【考點定位】單克隆抗體的制備過程【名師點睛】解題方法點撥：HSV-1蛋白作為抗原引起免疫反應生成抗HS

47、V-1蛋白的抗體，單克隆抗體的制備過程是從小鼠的骨髓中取B細胞，與小鼠的骨髓瘤細胞融合，篩選既能無限增殖又能產生抗體的細胞，植入小鼠腹腔中增殖，從腹水中提取，單克隆抗體具有特異性強和靈敏度高的特點。人組織纖溶酶原激活物(htPA)15 .(【百強校】2016屆寧夏固原市一中高三上學期適應性訓練生物一卷)是一種重要的藥用蛋白，可在轉htPA基因母羊的羊乳中獲得。流程如下:(1) htPA基因與載體用 切割后，通過 DNA1接酶連接，以構建重組表達載體。檢測目的基因是否已插入受體細胞 DNA可采用 技術。(2)為獲取更多的卵(母)細胞，要對供體母羊注射促性腺激素，使其 。采集的精子需要 經過,才具

48、備受精能力。(3)將重組表達載體導入受精卵常用的方法是 。為了獲得母羊，移植前需對已成功轉入目 的基因的胚胎進行 。利用胚胎分割和胚胎移植技術可獲得多個轉基因個體，這體現了早期胚胎 細胞的。(4)若在轉ht-PA基因母羊的羊乳中檢測到 ,說明目的基因成功表達。【答案】(1)同種限制性核酸內切酶(或同種限制酶)；DNA子雜交(或核酸探針)(2)超數排卵；獲能(處理)(3)顯微注射法； 性別鑒定；全能性(4) htPA (或人組織纖溶酶原激活物)t解析】（1）/地基因與載體需要用同種限制性核酸內切酶E或同種限制施）切割，形成相同的黏性 末端，然后再通過d岫連接的連接，以構建重組表達載體.檢測目的基

49、因是否已插入受體細胞Dia可采用 D岫分子雜交（或核酸探畀）技術，原理是堿基互補配對.（2）為獲取更多的卵（母）細胞，要對供體母羊注射促性腺激素，使其超敵排卵口采集的精子需要經 過獲能，才具備受精能力。（3）為獲取更多的卵（母）細胞，要對供體母羊注射促性腺激素，使其超數排卵.采集的精子需要經過獲 能（處理），才具備受精能力.利用胚胎分割和胚胎移植技術可獲得多個轉基因個體，這體現了早期胚胎細 胞的全能性。（4）基因表達成功時可獲得目的基因的產物，既在轉htPA基因母羊的羊乳中檢測到 htPA （或人組織纖溶酶原激活物），說明目的基因成功表達。【考點定位】基因工程的原理及技術【名師點睛】知識拓展：

50、 DNA1組技術至少需要三種工具：限制性核酸內切酶（限制酶）、DNA1接酶、運載體。目的基因分子水平上的檢測： 檢測轉基因生物染色體的 DNA是否插入目的基因-DNA分子雜交技 術；檢測目的基因是否轉錄出了 mRNA-分子雜交技術；檢測目的基因是否翻譯成蛋白質 -抗原-抗體雜 交技術。16.（【百強校】2016屆黑龍江省大慶實驗中學高三上學期期末生物試卷）某研究小組欲將已知抗除草劑基因導人原生質體培育抗除草劑大豆。請回答下列問題：（1）為獲得大量抗除草劑基因，可通過 技術進行擴增，也可將其連接到 上，通過大腸 桿菌培養擴增。（2）制備葉片原生質體的酶混合液中，一般含較高濃度的甘露醇，其目的是避

51、免制備的原生質體。酶混合液需通過 滅菌，才能用于無菌原生質體的制備，整個無菌操作過程需在 中進行。（3）可通過 方法，直接將抗除草劑基因導入原生質體的細胞核。此外，還可用聚乙二醇融合、電擊等方法導入。導入后的原生質體需再生出 ,經持續分裂獲得愈傷組織，進一步分化 獲得再生植株并擴大繁殖。（4）利用帶有標記的抗除草劑基因特殊片段與從轉基因植株提取的RNAiS行,驗證抗除草劑基因是否被整合到受體的細胞中并轉錄。【答案】（1） PCR 質粒（2）吸水脹破過濾（G6玻璃砂漏斗） 超凈臺(3)顯微注射細胞壁(4)分子雜交【解析】(1)應用PCR技術可以對除草劑基 因進行體外大量擴增，并通過運載體質粒，轉

52、運 到大腸桿菌培養擴增。(2)含較高濃度的甘露醇，能夠進來到細胞中，防止細胞過度吸水而細胞破裂。酶是大分子蛋白質， 用過濾方法可以滅菌，整個無菌操作過程需在超凈臺中進行，防止雜菌污染。(3)用顯微注射的方法，可以直接將抗除草劑基因導入原生質體的細胞核中，用聚乙二醇和電擊方法 可以增加細胞膜的通透性，導入后的原生質體需再生出細胞壁。(4)利用帶有標記的抗除草劑基因特殊片段與從轉基因植株提取的RNA進行分 子雜交，可以驗證抗除草劑基因是否被整合到受體的細胞中。【考點定位】基因工程的應用17.(【百強校】2016屆天津南開中學高三第一次月考生物試卷)下圖為植物體細胞雜交過程示意圖。據圖回答：(1)步

53、驟是 ,最常用的方法是 。若將得到的細胞置于 30%勺蔗糖溶液中， 則會發生的現象是 。(2)植物體細胞雜交的理論基礎是 ,從理論上講，雜種植株是否可育 。若運用 傳統有性雜交方法不能得到該雜種植株的原因是 。(3)利用植物體細胞雜交的方法培育作物新品種過程中，遺傳物質的傳遞是否遵循孟德爾的遺傳規律? 為什么？ 。【答案】(1)去掉細胞壁，分離出有活力的原生質體酶解法 皺縮(2)細胞膜的流動性和植物細胞的全能性可育存在生殖隔離(相關答案均可)(3)不遵循因為在生物進行有性生殖的過程中，才遵循孟德爾的遺傳定律【解析】fl)步驟是去掉細胞壁，分離出有活力的原生質體.常用酶解法的，即用纖維素酶和果膠

54、 酶處理，細胞置于前%的蔗糖溶液中會失水而皺縮，發生質變質壁分離現象.(2)植物體細胞雜交的理論基礎是細胞膜的流動性和植物細胞的全能性，雜種植株含有植株A和植株 R的全部遺傳物質，從理論上講是可育的，不同種生物之間存在生殖隔離，所以運用傳統有性雜交的方法不 能實現.可見，植物體細胞雜交技術能克服遠緣雜交不親和的障礙.(3)生物在進行有性生殖的過程中才遵循孟德爾的遺傳規律，而植物體細胞雜交育種的過程不屬于有性生殖，因此不遵循孟德爾遺傳規律。【考點定位】植物體細胞雜交的過程【名師點睛】植物體細胞雜交技術：1、植物體細胞雜交技術：就是將不同種的植物體細胞原生質體在一定條件下融合成雜種細胞，并把雜 種

55、細胞培育成完整植物體的技術。2、過程：植物細胞植物細胞B(1)誘導融合的方法：物理法包括離心、振動、電刺激等.化學法一般是用聚乙二醇(PEG作為誘導劑。(2)細胞融合完成的標志是新的細胞壁的生成。(3)植物體細胞雜交的終點是培育成雜種植株，而不是形成雜種細胞就結束。(4)雜種植株的特征：具備兩種植物的遺傳特征，原因是雜種植株中含有兩種植物的遺傳物質。3、意義：克服了遠緣雜交不親和的障礙。18.（【百強校】2016屆海南海口湖南師大附中海口中學高三上三次月考生物試卷）已經甲種農作物因受到乙種昆蟲危害而減產，乙種昆蟲食用某種原核生物分泌的丙種蛋白質后死亡。因此，可將丙種蛋白質 基因轉入到甲種農作物體內，使甲種農作物獲得抗乙種昆蟲危害的能力。回答下列問題：（1）為了獲得丙種蛋白質的基因， 在已知丙種蛋白質氨基酸序列的基礎上，推測出丙種蛋白質的 序列，據此可利用 方法合成目的基因。獲得丙種蛋白質的基因還可用 和方法。（2）在利用上述丙種蛋白質基因和質粒載體構建重組質粒的過程中，常需要使用 酶和酶。（3）將含有重組質粒的農桿菌與甲種農作物的愈傷組織共培養，篩選出含有丙種蛋白質的愈傷組織