1、1薄層色譜基礎知識黔中翁人及斑點異常的原因和克服及斑點異常的原因和克服2 薄層色譜操作的流程操作的流程3薄層板的制備v什么是固定相？v固定相4薄層板的制備薄層板的制備v常用固定相1、聚酰胺2、硅膠3、硅澡土4、氧化鋁5、纖維素6、其他5薄層板的制備薄層板的制備v聚酰胺1、什么是聚酰胺？2、聚酰胺適合那些化合物的分離？聚酰胺適用于多元酚類化合物分離，如黃酮，醌類，酚酸，含羰基的化合物等 6薄層板的制備薄層板的制備v硅膠1、什么是硅膠2、硅膠適合酸性和堿性等化合物的分離7 薄層板的制備硅硅膠膠硅膠G硅膠H/硅膠N硅膠GF245硅膠HF2543、實驗室硅膠有哪些型號 硅膠S8v硅膠G和硅膠S薄層板的

2、制備1.硅膠G是指硅膠粉+15%煅石膏。2.硅膠S是指硅膠粉+15%淀粉。9v硅膠H或硅膠N薄層板的制備是指純硅膠粉，沒有添加任何粘合劑10v硅膠H和硅膠G的應用薄層板的制備1物質是有色的，在日光看2物質沒有顏色但可以利用顯色劑顯色3.可以熒光顯色11v硅膠HF254和硅膠GF254薄層板的制備1.是指添加了熒光劑，如硫化鎘等。 2.應用范圍：物質有熒光，在254波長紫外下看其熒光；物質沒熒光，在254波長紫外下看暗斑（熒光淬滅）12薄層板的制備無黏合劑自制板自制板含黏合劑13薄層板的制備黏合劑cmc-na溶液的配制先將稱好的CMC-Na加入所需水量的8/10,讓其充分溶漲后,再加熱煮沸,然后

3、將剩余水慢慢加入.這樣在煮沸過程中不易形成顆粒,煮沸時間短. 14薄層板的制備黏合劑cmc-na溶液的濃度溶液的濃度0.3-0.7%比較合適，實際操作中0.40.5最為實用，濃度高了將來顯色時如果有加熱過程稍不小心板子容易發黑，濃度低了鋪出來的板子不結實，不好保存 15薄層板的制備黏合劑cmc-na溶液的存放注意放置時間太長的CMC-Na溶液可能會發黃，而且可能有霉菌出現，最好不要使用。 16薄層板的制備操作：除另有規定外，是指將1份固定相和3份水溶液，研磨混合，置玻璃板上使涂布均勻，平臺上于室溫下晾干，活化后，置有干燥器中備用。制板17 注意點 1.沿同一方向研磨混合，避免產生氣泡 2.厚度

4、為0.20.3mm，涂層薄，點樣容易過載；涂層厚，顯色不那么明顯 3.室溫下在水平位置放置，待薄層發白近干 薄層板的制備18注意點5.研磨時間6.鋪板用的勻漿不宜過稠或過稀：過稠，板容易出現拖動或停頓造成的層紋；過稀，水蒸發后，板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠G:水=1：23，硅膠G:羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。勻漿的稀稠除影響板的平滑外，也影響板涂層的厚度，進一步影響上樣量 。 薄層板的制備19活化2.在105110度活化30分鐘。3.一般檢識水溶性成分或一些極性大的成分時，所用薄層板只在空氣中自然干燥，不經活化即可貯存備用 。 薄層板的制備1.薄層板為何要進行“活化”？20薄層色譜的點樣

5、v點樣器21薄層色譜的點樣潔凈 、干燥v點樣環境22薄層色譜的點樣v點樣的形狀1、圓點2、條帶狀23薄層色譜的點樣v點樣的距離1015mm810mm5mm直徑不大于2mm寬度48mm8mm直徑不大于4mm寬度510mm自制板高效板24薄層色譜的點樣v 點樣的注意點1.不要弄破薄層板2.點樣量大時，少量多次，3.點好樣的薄層板用電吹風吹干或放入干燥器里晾干 25薄層色譜的展開v展開將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，浸入展開劑的深度為距原點5mm為宜，密封26薄層色譜的展開v展開劑配制2.混合展開劑要求新鮮配制，不要多次反復使用,如需分層，則按要求放置分層后取需要的一相（上層或下層），備用

6、1.把各組成溶劑移入分液漏斗，強烈振搖使混合液充分混勻，放置，如果分層，取用體積大的一層作為展開劑。最好不要把各組成溶液倒入展開缸，振搖展開缸來配制展開劑。 27薄層色譜的展開v預飽和、預平衡展開缸如需預先用展開劑預平衡，可在缸中加入適量的展開劑，密閉，一般保持1530分鐘28薄層色譜的展開v展開距離展開至規定距離（一般為815cm）29薄層色譜的顯色v顯色與檢視1.供試品含有可見光下有顏色的成分可直接在日光下檢視，也可用噴霧法或浸漬法以適宜的顯色劑顯色，或加熱顯色，在日光下檢視。2.有熒光的物質或遇某些試劑可激發熒光的物質可在356nm紫外光燈下觀察熒光色譜。3.對于可見光下無色，但在紫外光

7、下有吸收的成分可用帶有熒光劑的硅膠板（如GF254板），在254nm紫外光燈下觀察熒光板面上的熒光猝滅物質形成的色譜30 1、拖尾現象2、邊緣效應3、S形及波形斑點 4、念珠狀斑點 5、斑點與對照品對不上 薄層色譜中斑點的異常異常現象6、其它31 拖尾原因拖尾原因斑點異常1.點樣量過載2.點樣圓點未重合3.展開劑4.薄層析5.其他32拖尾斑點異常與克服1.點樣量過載任何吸附劑，它們的負載化合物的能力是有一定限度的，因此點樣過量而超載后，過剩的化合物被拋在后面，形成拖尾現象 克服方法：A.點樣時可以點成條帶狀B.選用稍厚一點的板33拖尾斑點異常與克服2.點樣圓心未重合樣點雖然在同一垂直線上但樣點

8、上下圓心沒有重合，致使樣點呈近橢圓形，也是形成拖現象的原因之一 克服方法：點樣位置要準確，預先設計好點樣的位置，然后用鉛筆作好標記，每次點樣對準圓點34拖尾斑點異常與克服3.展開劑的配制35拖尾斑點異常與克服4.薄層板為了提高樣品的分離度和減少斑點的拖尾，鋪板時在硅膠中加入某些酸（如硼酸，草酸），堿（如氫氧化鈉），鹽（如磷酸二氫鈉，磷酸氫二鈉）等將硅膠板改性 克服方法：硅膠預制板可用浸板的辦法改性 36 邊緣效應2、薄層板3、展開劑未預飽和斑點異常1、點樣邊距4、其他37邊緣效應斑點異常與克服1.點樣邊距38邊緣效應斑點異常與克服2.薄層板薄層板厚薄不均勻，兩邊厚或者兩邊薄都是形成邊邊緣效應的

9、原因之一克服方法：選用符合要求的薄層板。（符合要求的薄層板應該在反射光下板面平滑均勻，無氣泡，灰塵或顆粒，透射光下薄層紋理均勻細膩）39邊緣效應斑點異常與克服3.預飽和在薄層板上一般是邊緣上的展開劑較容易揮發,如果這幾個有機溶劑的揮發性能差異比較大,那么就會造成薄層板上邊緣和中間展開劑比例的差異而產生展開速度不一致的現象 克服方法：展開前要充分飽和 40波形斑點S形斑點斑點異常vS形及波形斑點 41vS形斑點 斑點異常S形斑點是指含多咱成分的樣品層析時，其斑點不是順次分布于原點至展開前沿的垂直線上，而是呈S形分布于垂直線兩側。42v波形斑點 斑點異常波形斑點：是指某些含多種成分的樣品液，順次點

10、于同一起始線上，展開后，這些成分相同的斑點不吃不開直線狀平行于起始線，而是呈波浪形。43vS形及波形斑點斑點異常2.為避免上述現象的出現，應選用厚薄均勻的薄層板1.產生原因：多數是因為薄層板厚薄不勻。44v念珠狀斑點 斑點異常念珠狀斑點是指化合物斑點之間距離小，相互連接呈念珠狀 45念珠狀斑點異常與克服產生原因及克服方法1.樣品中成分過多，在下定長度的薄層板上，排布不開，彼此重疊。可適當增加層析板長度，使斑點距離加大或采用雙向層析，使所含成分向兩個方向展開可以避免念珠狀斑點的出現。 2.多次點樣時，點樣中心不重合，形成復斑。應以適當濃度供試液一次點樣，若多次點樣，點樣中心必須重合。46vRf值

11、不穩定 斑點異常1.溫度2.濕度3.手工制板4.溶劑質量47vRf值不穩定斑點異常與克服1.溫度溫濕度對薄層影響都很大。不凍結的前提下，通常溫度越低分離越好，較難的分離需在低溫下分離，例如人參皂苷。 48vRf值不穩定斑點異常與克服2.濕度49vRf值不穩定斑點異常與克服2.濕度濕度的影響，主要是影響薄層板的吸附能力，導致選擇性（容量因子）的變化，濕度應根據實際情況確定。溫度控制使用空調器或冰柜，濕度控制是通過在另一展開槽放置相應濃度的硫酸 50vRf值不穩定斑點異常與克服濕度的控制51vRf值不穩定斑點異常與克服手工制板由于手工制的板的技巧不同，所制備的薄層板的質量不同造成重現性差52v樣品