1、 自然界的水可分為地下水和地面水，除了地下深層水外，如湖泊，河流，海洋等各種地面水中都存在著各種各樣的微生物。但它們所含的微生物種類(lèi)，數(shù)量和分布都不相同。其中有些是“土生土長(zhǎng)”的。另一些水生細(xì)菌是外來(lái)的，它們來(lái)自土壤，空氣，垃圾，工廠(chǎng)廢物或城市下水道污水。而來(lái)自下水道的微生物中，很可能含有人體腸道致病菌，例如霍亂，傷寒，副傷寒和痢疾等病原菌。 水質(zhì)的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)主要包括兩個(gè)常規(guī)項(xiàng)目：細(xì)菌總數(shù)和總大腸菌群。 多管發(fā)酵法多管發(fā)酵法 濾膜法濾膜法 糞大腸菌群糞大腸菌群是總大腸菌群的一部分，主要來(lái)自糞便。在44.5溫度下能生長(zhǎng)并發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的大腸菌群稱(chēng)為糞大腸菌群。用提高培養(yǎng)溫度的方法，造成不利于來(lái)

2、自自然環(huán)境的大腸菌群生長(zhǎng)的條件，使培養(yǎng)出來(lái)的菌主要為來(lái)自糞便中的大腸菌群，從而更準(zhǔn)確地反映出水質(zhì)受糞便污染的情況。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于地表水，地下水及廢水中糞大腸菌群的測(cè)定。 多管發(fā)酵法多管發(fā)酵法是以最可能數(shù)（most probable number），簡(jiǎn)稱(chēng)MPN 來(lái)表示試驗(yàn)結(jié)果的。實(shí)際上它是根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)理論，估計(jì)水體中的大腸桿菌密度和衛(wèi)生質(zhì)量的一種方法。如果從理論上考慮，并且進(jìn)行大量的重復(fù)檢定，可以發(fā)現(xiàn)這種估計(jì)有大于實(shí)際數(shù)字的傾向。不過(guò)只要每一稀釋度試管重復(fù)數(shù)目增加，這種差異便會(huì)減少，對(duì)于細(xì)菌含量的估計(jì)值，大部分取決于那些既顯示陽(yáng)性又顯示陰性的稀釋度。因此在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)上，水樣檢驗(yàn)所要求重復(fù)的數(shù)目，要根

3、據(jù)所要求數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確度而定。 本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑除另有說(shuō)明，均為符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的分析純化學(xué)試劑；實(shí)驗(yàn)用水為新制備的去離子水。 單倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液?jiǎn)伪度樘堑鞍纂伺囵B(yǎng)液： 將10g 蛋白胨、3g 牛肉寖膏、5g 乳糖和5g 氯化鈉加熱溶解于1000mL 蒸餾水中，調(diào)節(jié)溶液pH 為7.27.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混勻，分裝于試管中，于115高壓滅菌器中滅菌20min，貯存于冷暗處備用。 三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液： 按上述乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的制備方法配制。除蒸餾水外，各組分用量增加至三倍。（即按上述配方比例三倍（除蒸餾水外），配成三倍濃縮的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液） E

4、C培養(yǎng)液：培養(yǎng)液： 成分： 胰胨 20克， 乳糖 5克， 膽鹽三號(hào) 1.5克，磷酸氫二鉀（K2HPO4）4克，磷酸二氫鉀（KH2PO4）1.5克，氯化鈉5克，蒸餾水1000毫升。 制法：將上述成分加熱溶解，然后分裝于含有 玻璃倒管的試管中。置高壓蒸氣滅菌器中，115高壓滅菌器中滅菌20min，滅菌后pH應(yīng)為6.9。 在密封瓶中的脫水培養(yǎng)基成品要存放在大氣濕度低，溫度低于30攝氏度的暗處，存放時(shí)應(yīng)避免陽(yáng)光直接照射，并且要避免雜菌傾入和液體蒸發(fā)。當(dāng)培養(yǎng)液顏色變化，或體積變化明顯時(shí)應(yīng)廢棄不用。 1. 水樣接種量的選擇水樣接種量的選擇 將水樣充分混勻后，根據(jù)水樣污染的程度將水樣充分混勻后，根據(jù)水樣污染

5、的程度確定水樣接種量。每個(gè)樣品至少用三個(gè)不確定水樣接種量。每個(gè)樣品至少用三個(gè)不同的水樣量接種。同一接種水樣量要有五同的水樣量接種。同一接種水樣量要有五管。管。 相對(duì)未受污染的水樣接種量為相對(duì)未受污染的水樣接種量為10ml、1 ml、0.1 ml。受污染水樣接種量根據(jù)污染程度接。受污染水樣接種量根據(jù)污染程度接種種1 ml、0.1 ml、0.01 ml、或、或0.1 ml、0.01 ml、0.001 ml等。等。 培養(yǎng)液的濃度和量的選擇：培養(yǎng)液的濃度和量的選擇： 如接種體積為10 ml，則試管內(nèi)應(yīng)裝有三倍濃度乳糖蛋白胨培養(yǎng)液5mL；如接種量為1mL或少于1mL，則可接種普通濃度的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液1

6、0mL中。 2. 初發(fā)酵試驗(yàn)初發(fā)酵試驗(yàn) 將水樣分別接種到盛有乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的發(fā)酵管中。在370.5下培養(yǎng)24h2h。產(chǎn)酸和產(chǎn)氣的發(fā)酵管表明試驗(yàn)陽(yáng)性。入在倒管內(nèi)產(chǎn)氣不明顯，可輕拍試管，有小氣泡升起的為陽(yáng)性。 注意：注意： 加入水樣時(shí)，先將培養(yǎng)管管口用酒精燈消毒一次，加入水樣后再用酒精燈消毒一次，封口。 陽(yáng)性的判別陽(yáng)性的判別：既產(chǎn)酸又產(chǎn)氣： 觀察觀察：24h小時(shí)后取出觀察培養(yǎng) 管，顏色由紫色變?yōu)辄S色和有 氣泡產(chǎn)生兩個(gè)方面才能判為陽(yáng)性3. 復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)復(fù)發(fā)酵試驗(yàn) 輕微震蕩初發(fā)酵試驗(yàn)陽(yáng)性結(jié)果的發(fā)酵管，用3mm接種環(huán)或滅菌棒將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到EC培養(yǎng)液中。在44.50.5下培養(yǎng)24h2h（水浴箱的水面應(yīng)高于

7、試管中培養(yǎng)基液面）。接種后所有發(fā)酵管必須在30分鐘內(nèi)放進(jìn)水浴中。培養(yǎng)后立即觀察，發(fā)酵管產(chǎn)氣則證實(shí)為糞大腸菌群陽(yáng)性。 根據(jù)不同接種量的發(fā)酵管所出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果的數(shù)目，從表2或表3中查得每升水樣中的糞大腸菌群。 接種水樣為100ml 2份，10ml 10份，總量300ml 時(shí)，查表2可得每升水樣中糞大腸菌群； 接種5份10ml 水樣，5份1ml水樣，5份0.1ml水樣時(shí)，查表3求得MPN指數(shù)，MPN值再乘10，即為1升水樣中的糞大腸菌群； 舉例舉例： 某水樣接種10mL 的5 管均為陽(yáng)性；接種1mL 的5 管中有2 管為陽(yáng)性；接種1：10 的水樣1mL 的5 管均為陰性。從最可能數(shù)（MPN）表中查檢驗(yàn)

8、結(jié)果5-2-0，得知100mL 水樣中的總大腸菌群數(shù)為49 個(gè)，故1L 水樣中的總大腸菌群數(shù)為4910=490 個(gè)。 如果接種的水樣量不是10mL、1mL 和0.1mL，而是較低或較高的三個(gè)濃度的水樣量，也可查表求得MPN 指數(shù)，再經(jīng)下面公式換算成每100mL 的MPN 值。1838 滅菌 初發(fā)酵后以有陰、有陽(yáng)稀釋效果最好。 水樣一定要搖均。 每個(gè)稀釋倍數(shù)要求做5管。 接種環(huán)要求用酒精燈灼燒消毒，復(fù)發(fā)酵接種時(shí)每一管都要在酒精燈上灼燒消毒。 配制好的培養(yǎng)基保存多少時(shí)間？存放時(shí)應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？ 答：配制好的培養(yǎng)基不宜保存過(guò)久，以少量勤配為宜。已滅菌的培養(yǎng)基可在4100C存放一個(gè)月。存放時(shí)應(yīng)避免陽(yáng)光直射，并且避免雜菌侵入和液體蒸發(fā)。 1. 細(xì)菌采樣玻璃瓶洗滌干燥后，要在 0C干熱滅菌 或高壓蒸汽 0C滅菌 min。 2. 對(duì)受污染嚴(yán)重的水體，可選擇 方法測(cè)定其總大腸菌群數(shù)。 3. 總大腸菌群測(cè)定過(guò)程的復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)中，接種完菌落后，應(yīng)將發(fā)酵管置于 0C溫度下培