1、微生物學檢驗微生物學檢驗微生物學檢驗微生物學檢驗國家衛生和計劃生育委員會規劃教材國家衛生和計劃生育委員會規劃教材 第 七 章 需氧和兼性厭氧球菌鑒定返回總目錄返回總目錄本 章 內 容第一節 葡萄球菌屬2第二節 鏈球菌屬3第三節 腸球菌屬4第四節 奈瑟菌屬5概述1學習目標及重點學習目標： 1.掌握：葡萄球菌屬、鏈球菌屬、腸球菌屬和奈瑟菌屬的主要生物學特性和微生物學檢驗，尤其是它們的鑒定依據和鑒別要點2.熟悉葡萄球菌屬、鏈球菌屬、腸球菌屬和奈瑟菌屬的臨床意義本章重點： 1.葡萄球菌屬、鏈球菌屬、腸球菌屬和奈瑟菌屬的主要生物學特性和微生物學檢驗2.葡萄球菌屬、鏈球菌屬、腸球菌屬和奈瑟菌屬的臨床意義

2、概述 球菌的種類很多，根據革蘭染色性不同分為革蘭陽性和革蘭陰性球菌。 致病性球菌稱病原性球菌主要引起化膿性炎癥又可稱為化膿性球菌第一節 葡萄球菌屬 葡萄球菌屬細菌為一類觸酶陽性的革蘭染色陽性球菌，因常堆聚成葡萄串狀而得名。廣泛分布于自然界并構成人體的正常菌群。大多非致病，有少部分引起化膿性感染。主要包括金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性葡萄球菌等35個種，17個亞種 一、生物學特性 1.形態與染色 本屬菌多為球形，直徑0515um。葡萄球菌無鞭毛，無芽胞、無莢膜 （1）在液體培養基上：呈單個、成雙或短鏈狀排列 （2）在固體培養基上：呈葡萄串狀排列 （3）膿汁標本中：呈單個散在或

3、少數呈葡萄串狀排列 第一節 葡萄球菌屬金黃色葡萄球菌（膿汁）鏡下形態金黃色葡萄球菌純培養鏡下形態第一節 葡萄球菌屬 2.培養特性 營養要求不高，在普通營養瓊脂（普皿）上生長良好。在20%CO2中有利于毒素形成 （1）在液體培養基：呈均勻混濁生長 （2）在普皿上：形成12mm、圓形、光滑、邊緣整齊、不透明、有色菌落。不同菌株產生不同的脂溶性色素，如：金黃色、白色、檸檬色 金黃色葡萄球菌金黃色脂溶性色素第一節 葡萄球菌屬表皮葡萄球菌在普通瓊脂平皿上的白色色素表皮葡萄球菌在血平板上的白色色素2.培養特性第一節 葡萄球菌屬 （3）在血皿上 金黃色葡萄球菌和溶血性葡萄球菌，能產生溶血毒素，在血平板上產生

4、-溶血。其他葡萄球菌無此現象 金黃色葡萄球菌在血平板上24h菌落 2.培養特性 （4）在高鹽甘露醇平板上：大多數葡萄球菌耐鹽性強（10%15%g/L NaCl培養基中生長）。此平板常作為選擇性培養基，菌可分解甘露醇使指示劑呈淡黃色。G-菌在此平板上不生長 金黃色葡萄球菌在高鹽甘露醇平板上的淡黃色菌落 2.培養特性第一節 葡萄球菌屬第一節 葡萄球菌屬 （5）卵黃高鹽瓊脂平板：金黃色葡萄球菌產生卵磷脂酶，在此培養基上，菌落周圍可形成白色沉淀環。表皮葡萄球菌亦可生長，但無白色沉淀環。 2.培養特性金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌在卵黃平板上生長現象第一節 葡萄球菌屬 3.生化反應：葡萄球菌的生化活性強，

5、能分解多種糖類，蛋白質和氨基酸，觸酶陽性。觸酶陽性陰性對照發酵葡萄糖第一節 葡萄球菌屬 4.細胞壁抗原 主要類型有下列兩種 蛋白抗原 *又稱為葡萄球菌A蛋白（SPA），具有種、屬特異性的完全抗原。 SPA可與人類的IgG的Fc段非特異性結合，而不影響Fab段與特異性抗原結合的功能， 它作為檢測多種微生物抗原的實驗室技術的重要試劑，可進行簡單、快速的協同凝集試驗多糖抗原 具有型特異性的半抗原。金黃色葡萄球菌-核糖醇磷壁酸；表皮葡萄球菌等凝固酶陰性葡萄球菌-甘油磷壁酸。檢測磷壁酸抗體有助于金黃色葡萄球菌感染的診斷和預后判斷第一節 葡萄球菌屬 5. 分類 葡萄球菌屬可根據DNA的同源性、色素、生化反

6、應及是否產生凝固酶等不同方法進行分類。 6.抵抗力 葡萄球菌是抵抗力最強的無芽胞細菌。*根據是否產生凝固酶分凝固酶陽性凝固酶陰性 葡萄球菌二、臨床意義第一節 葡萄球菌屬第一節 葡萄球菌屬微生物檢驗程序標本膿汁，血液，剩余食物，嘔吐物等直接涂片鏡檢革蘭陽性球菌分離培養生長現象色素、溶血鑒定毒素測定藥物敏感試驗生化反應：血漿凝固酶、甘露醇、耐熱核酸酶幼貓試驗報告形態染色：革蘭陽性球菌第一節 葡萄球菌屬 1.標本：主要有血液、尿液、痰液、腦脊液、穿刺液和濃液等。三、微生物學檢驗 2.直接涂片：標本或增菌液直接涂片，革蘭染色鏡檢見革蘭陽性呈葡萄串狀排列球菌，即可做出 “查見革蘭陽性球菌，葡萄串狀排列，

7、疑為葡萄球菌”的初步報告。 第一節 葡萄球菌屬 3. 增菌培養 血液標本增菌培養，24h培養后每日觀察增菌液變化。如無變化，需培養7d，其中盲目傳代2次，如無細菌培養可報“血液標本經7d培養無菌生長”。如發生混濁、內有膠胨樣凝塊等現象可進行進一步分離培養和革蘭染色專家提示 正常情況下無菌狀態的體液標本如腦脊液，漿膜腔積液和關節腔抽出液等，直接涂片檢查具有重要價值，其他體液標本伴有炎癥細胞也有參考價值4.分離培養（1）血平板：351824h （2）高鹽甘露醇平板或高鹽卵黃平板(*進行葡萄球菌菌落特征復習)第一節 葡萄球菌屬5.生化反應： （1）觸酶試驗：陽性。 （2）凝固酶試驗：玻片法和試管法。

8、第一節 葡萄球菌屬 5.生化反應 （3）耐熱DNA試驗 表皮葡萄球菌耐熱DNA試驗 (-)性金黃色葡萄球菌耐熱DNA試驗 (+)性第一節 葡萄球菌屬 5.生化反應 陽性反應 陰性反應Slidex Staph Plus可快速鑒定金黃色葡萄球菌（4）乳膠凝集試驗此試驗不僅可檢測金黃色葡萄球菌凝固酶，還可檢測葡萄球菌A蛋白（SPA）第一節 葡萄球菌屬乳膠凝集試驗原理在紙板或玻片上滴加包被有人類纖維蛋白原和抗金黃色葡萄球菌單克隆IgG抗體的藍色膠乳顆粒，然后用接種環挑取待鑒定葡萄球菌的新鮮培養物與之混勻，待檢葡萄球菌如能產生結合的凝固酶，可作用于包被在藍色膠乳顆粒上的纖維蛋白原成為纖維蛋白，沉積在葡萄

9、球菌上使它們發生凝集；或待檢菌菌體（A蛋白）與吸附在藍色膠乳顆粒IgG的Fab結合，引起藍色膠乳顆粒被動凝集，出現肉眼可見凝集團塊為乳膠凝集試驗陽性 第一節 葡萄球菌屬 5.生化反應 （6）腸毒素試驗：現多采用免疫學方法快速檢測腸毒素，主要以ELISA為主。 （7）其他鑒定試驗：臨床上常用商品化鑒定系統如 API葡萄球菌鑒定試劑盒。 API STAPH可鑒定試劑盒（5）甘露醇發酵試驗：金黃色葡萄球菌陽性。第一節 葡萄球菌屬5.生化反應（8）其它非培養鑒定或檢查方法： 1）免疫學方法：用ELISA或對流免疫電泳方法檢測金黃色葡萄球菌磷壁酸抗體 2）分子生物學方法：用商品化Accu探針對培養物進行

10、鑒定，用脈沖場凝膠電泳法（PFGE）對葡萄球菌的質粒和染色體進行限制性核酸內切酶分析等 第一節 葡萄球菌屬6.藥敏試驗 （1）藥敏鑒別試驗-新生霉素敏感試驗 金黃色葡萄球菌 S 表皮葡萄球菌 S 腐生葡萄球菌 R 第一節 葡萄球菌屬6.藥敏試驗（2）藥敏試驗（臨床上按CLSI選擇抗菌藥物進行試驗）第一節 葡萄球菌屬 （3）耐甲氧西林的葡萄球菌藥敏試驗MRSA和非MRSA專家提示 當臨床上檢測出MRSA，即使對頭孢菌素類的體外藥敏試驗表現為“敏感”時，也不宜將這種假象向臨床報告，以免造成錯誤導向。第一節 葡萄球菌屬 7.鑒定 按科屬種的順序 （1）科間鑒別 微球菌科、鏈球菌科和奈瑟菌科鑒別要點第

11、一節 葡萄球菌屬 7.鑒定 按科屬種的順序 （2）屬間鑒別 葡萄球菌屬與微球菌屬鑒別要點第一節 葡萄球菌屬菌名血漿凝固酶耐熱DNA酶脲酶甘露糖氧化新生霉素耐藥多粘菌素B耐藥金黃色葡萄球菌D表皮葡萄球菌溶血葡萄球菌腐生葡萄球菌人葡萄球菌d:不定 （3）種間鑒別 引起臨床感染的最常見的5種葡萄球菌鑒別要點第一節 葡萄球菌屬 金黃色葡萄球菌系毒力很強的致病菌，無論從任何標本中分離出均應及時鑒定，進行藥敏試驗和盡快報告臨床。 從輸液導管、人工植入組織中分離出表皮葡萄球菌和從尿液標本中分離出腐生葡萄球菌應視為病原菌 （葡萄球菌的尿液培養菌落計數應考慮103104為陽性菌尿標準）。 其它凝固酶陰性葡萄球菌

12、引起感染流行或臨床治療失敗時，應考慮將其鑒定到種。當MRSA對頭孢菌素類的體外藥敏試驗表現為“敏感”時，不能將這種假象向臨床報告，以免造成錯誤導向。因為體內活性試驗已證實頭孢菌素類對MRSA無效。 專家提示返回章內容返回章內容第一節 葡萄球菌屬 第二節 鏈球菌屬 鏈球菌屬細菌為一類觸酶陰性的革蘭染色陽性球菌，廣泛分布于自然界、人及動物腸道和健康人鼻咽部鏈球菌在光鏡下形態（革蘭染色）鏈球菌在電鏡下形態 1.形態與染色 G+球菌，直徑0.51um （1）液體培養基中鏈狀排列，長短不一。短由48個菌組成，長者可達2030個細菌組成 （2）在固體培養基或膿汁標本中，呈短鏈、成雙或單個散在排列一、生物學

13、特性A群鏈球菌肺炎鏈球菌B群鏈球菌 第二節 鏈球菌屬 鏈球菌幼齡時可見莢膜，繼續培養莢膜消失 肺炎鏈球菌常常呈雙排列，故又稱為肺炎雙球菌。在動物體內它可形成較厚的莢膜 鏈球菌屬無鞭毛、無芽胞肺炎鏈球菌莢膜 第二節 鏈球菌屬 2.培養特性 營養要求高，在5%10%CO2環境下生長更好 （1）液體培養基（血清肉湯）：沉淀生長（上清液澄清/微混） （2）血平板：菌落小，灰白色，半透明，不同菌種的溶血現象不同，有-溶血、-溶血和-溶血（不溶血） -溶血 -溶血 -溶血 第二節 鏈球菌屬 3.生化反應 生化活性較活躍：觸酶陰性，葡萄糖+，菊糖 （1）A群鏈球菌：桿菌肽 S A、B和D群鏈球菌桿菌肽試驗

14、A群桿菌肽 S 第二節 鏈球菌屬 3. 生化反應 （2）B群鏈球菌：CAMP+，馬尿酸鈉+ （3）D群鏈球菌：PYR+，七葉苷+B群CAMP+D群鏈球菌七葉苷+（上）A群鏈球菌七葉苷-（下）思考：CAMP原理？ 第二節 鏈球菌屬 3. 生化反應 （4）肺炎鏈球菌：Optochin S，膽汁溶菌+，菊糖+肺炎鏈球菌Optochin S膽汁溶菌（平板法）膽汁溶菌（試管法） 第二節 鏈球菌屬 4.分類 根據下述鏈球菌的溶血特征和Lancefield血清學等傳統的分類法，目前仍然是臨床實驗室鑒定鏈球菌的常規使用方法。 （1）根據培養基上溶血特性分類：分類菌落特征甲型（）溶血性鏈球菌灰色、針尖狀菌落、周

15、圍有草綠色溶血環（ 溶血）乙型（）溶血性鏈球菌灰白色細小菌落、周圍有寬大透明溶血環（ 溶血 ）丙型（）鏈球菌灰白色小菌落、無溶血環 第二節 鏈球菌屬（2）根據抗原結構分類：鏈球菌Ag結構較復雜，含多種抗原，主要有：多糖抗原 *為群特異性抗原：位于細胞壁上，Lancefield將乙鏈（溶血性）分成A、B、C、D等20個群。蛋白抗原 *型特異性抗原：位于菌體表面，有M、T、R和S蛋白。 鏈球菌Ag群中，對人類致病者90%屬A群，B、C、D、F、G群也常感染致化膿性疾患。 第二節 鏈球菌屬（4）綜合溶血性、抵抗力、生化反應性狀分類（3）根據鏈球菌對氧的需求 分為三類：需氧、厭氧、微需氧鏈球菌 第二節

16、 鏈球菌屬二、臨床意義 第二節 鏈球菌屬 溶血毒素O：耐熱，含-SH基的蛋白質，對氧敏感，易被氧化成-S-S，失去溶血能力 溶血毒素S：多肽，分子量少，對氧穩定，血平板上的溶血現象由它引起 檢測抗“O”抗體，可輔助診斷鏈球菌性疾病如風濕熱及鏈球菌感染后的腎小球腎炎 友情提示 第二節 鏈球菌屬 第二節 鏈球菌屬微生物檢驗程序標本血液、尿液、創傷標本、膿性分泌物等 直接涂片鏡檢分離培養*注意與葡萄球菌屬、腸球菌屬鑒別，鏈球菌分群鑒定生長現象溶血類型生化反應：觸酶、PYR、七葉苷、菊糖、膽汁溶菌等形態染色：革蘭陽性球菌藥敏試驗報告血清學試驗抗“O”試驗Lancefield分群 第二節 鏈球菌屬 1.

17、 標本采集：標本類型有血液、尿液、創傷標本、膿性分泌物等 三、微生物學檢驗 2.直接涂片：標本或增菌液直接涂片，革蘭染色鏡檢見革蘭陽性呈鏈狀排列球菌，或見革蘭陽性矛頭狀球菌成雙排列，菌體周圍有透明環，即可做出 “查見革蘭陽性球菌，鏈狀排列，疑為鏈球菌”；或“查見革蘭陽性矛頭狀球菌，成雙排列，疑為肺炎鏈球菌”的初步報告 第二節 鏈球菌屬三、微生物學檢驗3增菌培養：下列生長現象有助于區別不同鏈球菌一般菌培養7天，無現象則要盲目傳代2次亞急性細菌性心內膜炎血培養4周，每周移種平板一次。如有生長，轉種血瓊脂平板 第二節 鏈球菌屬 4.分離培養 培養條件：需加血清、血液等營養物質。 需氧、厭氧各一塊培養

18、經37培養12天。觀察菌落特征、溶血現象。注意要點培養條件培養基溶血性檢查初代分離應置510的CO2環境下，可用二氧化碳孵箱或燭缸。血平板羊血平板：有助于其溶血特征的識別和進一步鑒定。A群鏈球菌大多產生溶血毒素“S”，一般鏈球菌只產生溶血毒素“O”。 第二節 鏈球菌屬 5鑒定實驗 鏈球菌屬細菌的鑒定應根據其菌體形態、菌落形態和溶血特征，結合以下鑒定試驗進行。 （1）與其他革蘭氏陽性球菌鑒別： 檢查溶血毒素“O”時，要降低氧分壓如厭氧培養，傾注倒板或穿刺接種，這樣可使只產生溶血毒素“O”的鏈球菌也表現出-溶血現象 第二節 鏈球菌屬 5鑒定實驗 （2）屬內鑒定： 1）分類（復習） 2）生化反應 3

19、）多糖抗原分群（群特異性抗原） Lancefield 分群試劑盒 第二節 鏈球菌屬LancefieldLancefield血清學凝集試驗血清學凝集試驗 第二節 鏈球菌屬甲型溶血性鏈球菌和丙型鏈球菌鑒定到肺炎鏈球菌、D群鏈球菌，其他的統稱為草綠色鏈球菌。 乙型溶血性鏈球菌鑒定到抗原群（A、B、C、G）。 1類：乙型溶血性鏈球菌：A、B、C、D、F、G群 第二節 鏈球菌屬 青霉素 6.5%NaCL肉湯生長 D群鏈球菌 S - 腸球菌 R + 3類：其它草綠色溶血性鏈球菌 2類：膽汁七葉苷水解陽性 鳥鏈：Q群+，其它D群+ 第二節 鏈球菌屬 （3）其他鑒定試驗 1）鏈激酶 A群+ 2）牛乳美藍試驗

20、糞鏈、乳鏈不被抑制 3）馬尿酸鈉水解試驗 B群+ 4）肺炎鏈球菌 莢膜腫脹試驗+ 抗“O”試驗原理：中和試驗方法：間接凝集結果：效價大于400單位意義：風濕熱及其活動性的輔助診斷6.血清學診斷 第二節 鏈球菌屬 鏈球菌侵入體內產生SLO，刺激機體產生相應抗體ASO，當兩者中和后，在加入SLO乳膠試劑，因病人血清中ASO量很多，未被中和掉的抗體ASO與乳膠試劑反應，產生清晰凝集，為抗“O”試驗陽性；無凝集，為陰性。 7. 藥敏試驗 （1）藥敏鑒別試驗 （2）藥敏試驗 抗“O”試驗原理返回章內容返回章內容 第二節 鏈球菌屬 第三節 腸球菌屬 腸球菌屬原屬于鏈球菌D群（血清學分類），1984年從鏈球

21、菌屬分離出，成為獨立的菌屬，廣泛分布在自然界，是人類、動物腸道和女性生殖道的正常菌群，既往認為腸球菌對人類無致病作用，但近年研究已證實了腸球菌是需氧和兼性厭氧球菌中僅次于葡萄球菌的重要醫院內感染致病菌，多見于尿路感染、腹腔感染和菌血癥 一、生物學特性 1.形態與染色 G+球菌，呈單、成雙或短鏈狀排列。無芽胞，無莢膜，無鞭毛 2.培養特性 營養要求高，某些菌株在選擇性培養基如麥康凱平板上可生長。在高鹽（6.5%NaCl）、堿性（pH9.6）、高膽汁（40%）培養基上能生長。在10和45均能生長腸球菌血平板24小時培養物鏡下染色 第三節 腸球菌屬 一、生物學特性 在血瓊脂平板上經35培養1824h

22、后，可形成灰白色、直徑0.51.0mm大小的圓形、不透明、表面光滑的菌落，不溶血或-溶血，少數出現-溶血 不同菌株的腸球菌在血平板上生長現象不溶血-溶血 第三節 腸球菌屬 3.生化反應 觸酶-、多種糖+ ，膽汁七葉苷試驗+、PYR試驗+ 4.抵抗力 弱，是天然耐藥菌株，對氨基糖苷類、萬古霉素、替考拉寧耐藥呈獲得性耐藥 5.分類 腸球菌屬歸類鏈球菌科，在Lancefield血清分類上屬于D群。臨床標本分離的多屬于腸球菌屬群，分離率最高的是糞腸球菌，其次是屎腸球菌膽汁七葉苷試驗腸球菌陽性，陰性對照 第三節 腸球菌屬 二、臨床意義。 第三節 腸球菌屬微生物檢驗程序標本血液、尿液、創傷標本、膿性分泌物

23、等 直接涂片鏡檢分離培養鑒定生長現象溶血類型、溫度生長試驗生化反應：觸酶、PYR、膽汁七葉苷、6.5%NaCl形態染色：革蘭陽性球菌，短鏈狀排列藥敏試驗報告Lancefield分群 第三節 腸球菌屬 1. 標本采集：根據臨床癥狀及體征采集標本，標本類型有血液、尿液、創傷標本、膿性分泌物等 三、微生物學檢驗 2.直接涂片：形態與染色 膿性標本、創傷標本或增菌液直接涂片，革蘭染色鏡檢見革蘭陽性呈單、成雙或短鏈狀排列球菌，做出“查見革蘭陽性球菌”的初步報告 第三節 腸球菌屬三、微生物學檢驗 3.增菌培養：24h培養后，每日觀察增菌液變化。如無變化，培養至7d。如發生混濁生長現象可進一步轉種，進行分離

24、培養 4.分離培養 （1）血平板：3518-24h （2）選擇性培養基 疊氮鈉膽汁七葉苷平板 麥康凱（MAC）平板腸球菌在MAC上生長現象 第三節 腸球菌屬 6. 血清學試驗 Lancefield分群屬D群觸酶PYR膽汁七葉苷6.5%NaCl10生長45生長+5.生化反應 7.藥敏試驗 根據CLSI選擇抗菌藥物專家提示 頭孢菌素類、氨基糖苷類（除高水平篩選耐藥外），克林霉素、甲氧芐啶/磺胺甲噁唑（TMP/SMZ）在體外顯示活性，但臨床上無效，注意報告！返回章內容 第三節 腸球菌屬 奈瑟菌屬是一群專性需氧革蘭陰性球菌，奈瑟菌屬中對人致病的只有腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌，引起流行性腦脊髓膜炎和性病淋

25、病。 第四節 奈瑟菌屬奈瑟菌電鏡下形態 一、生物學特性腦膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌1. 形態與染色G雙球菌G雙球菌革蘭染色美蘭染色 第四節 奈瑟菌屬腦膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌2. 培養特性營養要求高營養要求高，初次培養需供給510%CO2及濕潤的環境才能生長。最適生長溫度35 37， 40均不能生長培養時間過長，本菌可產生自溶酶 最適生長溫度3537。37均不能生長 巧克力平板血平板卵黃雙抗平板（EPV）血清肉湯 MNYC平板T-M平板（國外常用）巧克力平板血平板卵黃雙抗平板（EPV）血清肉湯 第四節 奈瑟菌屬巧克力平板上的腦膜炎奈瑟菌MNYC上的淋病奈瑟菌 2.培養特性 奈瑟菌菌落 第四節 奈瑟菌屬腦

26、膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌3. 生化反應（1）氧化酶和觸酶試驗 + + 氧化酶試驗（平板法）觸酶試驗（試管法） 第四節 奈瑟菌屬 腦膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌 3. 生化反應 （2）糖分解試驗葡萄糖 麥芽糖 乳糖 蔗糖 指示劑：酚紅 腦膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌葡萄糖+、麥芽糖+、蔗糖-、乳糖-，其他糖-，蛋白質-。葡萄糖+、麥芽糖-、蔗糖-、乳糖-，其他糖-。 第四節 奈瑟菌屬腦膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌4. 抗原結構與分類根據莢膜多糖抗原分為13個血清群。較重要的是A、B、C、W-135和Y群。我國流行的菌株以A群為主。抗原：菌毛、外膜蛋白、LPS、H8蛋白分解酶、主要鐵調節蛋白等。分型：表型分類法、A/S分類

27、法（自學為主）弱。對溫度極為敏感，對青霉素敏感。5. 抵抗力弱。對溫度極為敏感，對各種消毒劑敏感。 第四節 奈瑟菌屬 二、臨床意義 1.致病性腦膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌致病物質內毒素、莢膜、菌毛菌毛、外膜蛋白、內毒素、IgA1蛋白酶 傳染源攜帶者、病人攜帶者、病人傳播途徑呼吸道傳播性接觸傳播、產道流行季節冬春季節無明顯季節性2.所致疾病流行性腦脊髓膜炎（流腦）淋病新生兒急性眼結膜炎 第四節 奈瑟菌屬 單純淋病（男） 單純淋病（女） 2.所致疾病新生兒淋球菌性結膜炎淋球菌性眼結膜炎（膿漏眼） 第四節 奈瑟菌屬 三、微生物學檢驗 第四節 奈瑟菌屬 （1）標本采集 根據臨床癥狀和體征不同采集不同標本，

28、如血液、瘀斑滲出液、腦脊液、鼻咽分泌物。 1. 腦膜炎奈瑟菌微生物學檢驗用藥前采集無菌生理鹽水沖洗采菌部位，禁用消毒藥采集分泌物時應避免碰到粘膜，以免正常菌群污染床邊接種，立即培養，培養基應預溫，送檢時注意保溫注意事項 第四節 奈瑟菌屬 （2）直接涂片，染色鏡檢：腦脊液離心沉淀涂片，或刺破瘀斑血或組織液印片，革蘭染色鏡檢，發現中性粒細胞內、外革蘭陰性雙球菌，呈腎形成雙排列，可做出“查見革蘭陰性球菌”的初步報告 （3）增菌培養：血液或腦脊液先在葡萄肉湯增菌，24h培養后每日觀察增菌液變化。如無變化，培養至第7d。如發生混濁生長現象可轉種巧克力平板進行分離培養 第四節 奈瑟菌屬 （4）分離培養：其

29、他標本直接分離于血瓊脂平板、巧克力平板或EPV平板，置5%10% CO2環境中，經3537培養18h24h后觀察菌落特征（5）鑒定： 推測性鑒定：主要根據選擇性和非選擇性培養基上菌落特征、結合涂片中的菌體形態，氧化酶+、觸酶+ 第四節 奈瑟菌屬腦膜炎奈瑟菌A群單價血清凝集試驗左側為陽性反應，右側生理鹽水對照 確定性鑒定：通過糖發酵試驗和菌群凝集試驗，再參考普通瓊脂上不生長，血瓊脂平板放置22 不生長等特點作出確定性鑒定。 第四節 奈瑟菌屬青霉素 S、利福平 S、磺胺 R青利磺（6）藥敏試驗 結果報告 應重視腦脊液和瘀點穿刺物的直接涂片染色鏡檢，這是最快速確證腦膜炎奈瑟菌感染的簡便方法。 第四節 奈瑟菌屬 三、微生物學