1、第二十章第二十章高效液相色譜法高效液相色譜法High performance liquid chromatography陳睿婷陳睿婷液相色譜液相色譜1、按流動相與固定相的分子聚集狀態(tài)分類、按流動相與固定相的分子聚集狀態(tài)分類 流動相流動相固定相固定相氣體氣體(gas,G)液體液體(liguid,L)超臨界流體超臨界流體(supercrttical fluid,SF)固體固體(solid,S)GSCLSCSFSC液體液體(liguid,L)GLCLLCSFLC化學鍵合相化學鍵合相(bonded phase,BP)GBPCLBPCSFBPC氣相色譜氣相色譜液相色譜液相色譜超臨界色譜超臨界色譜高效液相

2、色譜高效液相色譜 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC) 高效液相色譜法（高效液相色譜法（HPLC）是）是20世紀世紀60年代末年代末70年代初發(fā)年代初發(fā)展起來的一種新型分離分析技術，隨著不斷改進與發(fā)展，目前展起來的一種新型分離分析技術，隨著不斷改進與發(fā)展，目前已成為應用極為廣泛的化學分離分析的重要手段。它是在經(jīng)典已成為應用極為廣泛的化學分離分析的重要手段。它是在經(jīng)典液相色譜基礎上，引入了氣相色譜的理論，在技術上液相色譜基礎上，引入了氣相色譜的理論，在技術上采用了高采用了高壓泵、高效固定相和高靈敏度檢測器，壓泵、高效固定相和高靈敏度檢測器，因

3、而具備因而具備分離效率高、分離效率高、選擇性好、分析速度快、檢測器靈敏度高、操作自動化和應用選擇性好、分析速度快、檢測器靈敏度高、操作自動化和應用范圍廣范圍廣的特點。的特點。高分離效率的核心高分離效率的核心速率方程（速率方程（van Deemter方程）：方程）： 渦流擴散項渦流擴散項 分子擴散項分子擴散項傳質阻抗項傳質阻抗項H= A + B/u + C.u小顆粒小顆粒填料填料高柱效高柱效高壓高壓流動相流動相高柱壓高柱壓100m mm5m mm一、一、HPLC與經(jīng)典與經(jīng)典LC區(qū)別區(qū)別經(jīng)典經(jīng)典LCHPLC柱內(nèi)徑柱內(nèi)徑13cm 210mm填料粒徑填料粒徑100m 10m常壓流動相常壓流動相高壓高壓

4、 (40-50MPa)可在線檢測可在線檢測柱效低（柱效低（H，n）分析周期長分析周期長柱效高（柱效高（H，n）分析時間大大縮短分析時間大大縮短 二、二、HPLC與與GC差別差別分析對象：分析對象：GC：熱穩(wěn)定，低沸點樣品（占有機物：熱穩(wěn)定，低沸點樣品（占有機物20%） HPLC：能溶解的樣品（占有機物：能溶解的樣品（占有機物20%）GCHPLC流動相：流動相：GC：氣體，：氣體，N2、H2、He，與組分無作用力。，與組分無作用力。 HPLC：溶液，流動相與組分間有親合作用力，：溶液，流動相與組分間有親合作用力， 對提高柱的選擇性、改善分離起很大作用對提高柱的選擇性、改善分離起很大作用操作條件：

5、操作條件：GC：常壓，高溫（程序升溫）。：常壓，高溫（程序升溫）。 HPLC：高壓，常溫（梯度洗脫）：高壓，常溫（梯度洗脫）本章內(nèi)容本章內(nèi)容高效液相色譜法的主要類型高效液相色譜法的主要類型1固定相和流動相固定相和流動相2速率理論和分離方法選擇速率理論和分離方法選擇3高效液相色譜儀高效液相色譜儀4超高效液相色譜法超高效液相色譜法5定性與定量分析定性與定量分析6分配色譜分配色譜吸附色譜吸附色譜液固色譜法液固色譜法液液色譜法液液色譜法根據(jù)固定根據(jù)固定相的不同相的不同根據(jù)分離的根據(jù)分離的原理不同原理不同高效液相色譜法高效液相色譜法親和色譜親和色譜手性色譜手性色譜分子排阻色譜分子排阻色譜離子交換色譜離子

6、交換色譜第一節(jié)、高效液相色譜法的主要類型第一節(jié)、高效液相色譜法的主要類型HPLC固定相固定相液固吸附色譜固定相液固吸附色譜固定相(吸附劑）吸附劑）液液液分配色譜固定相液分配色譜固定相固定相分類固定相分類涂漬（幾乎不用）涂漬（幾乎不用）化學鍵合相（常用）化學鍵合相（常用）涂漬：易流失，液膜厚涂漬：易流失，液膜厚化學鍵合：牢固，單分子層化學鍵合：牢固，單分子層 利用化學反應將固定液的官能團鍵合在載體表面。利用化學反應將固定液的官能團鍵合在載體表面。 鍵合反應：目前使用的化學鍵合相主要為硅氧烷（鍵合反應：目前使用的化學鍵合相主要為硅氧烷（Si-O-Si-C)型鍵合，以氯硅烷與硅膠進行硅烷化反應制得。

7、型鍵合，以氯硅烷與硅膠進行硅烷化反應制得。 以以C18為例：為例：化學鍵合相化學鍵合相 化學鍵合色譜法：化學鍵合色譜法：以化學鍵合相為固定相的色譜法，簡稱鍵以化學鍵合相為固定相的色譜法，簡稱鍵合色譜法合色譜法(bond phase chromtography，BPC)。化學鍵合相類型化學鍵合相類型正相化學鍵合相色譜法、反相化學鍵合相色譜法正相化學鍵合相色譜法、反相化學鍵合相色譜法非極性鍵合相、極性鍵合相、極性鍵合相非極性鍵合相、極性鍵合相、極性鍵合相1、正相鍵合相色譜法、正相鍵合相色譜法固定相：固定相：如氰基（如氰基（CN）、氨基（）、氨基（NH2）或二羥基鍵合硅膠。）或二羥基鍵合硅膠。流動相

8、：流動相：非極性或弱極性溶劑（烴類）加極性調(diào)整劑（醇類）非極性或弱極性溶劑（烴類）加極性調(diào)整劑（醇類）適用范圍：適用范圍：溶于有機溶劑的溶于有機溶劑的極性至中等極性極性至中等極性的分子型化合物。的分子型化合物。分離選擇性：分離選擇性：鍵合相種類、流動相種類、試樣性質。鍵合相種類、流動相種類、試樣性質。u分離機制？分離機制？ 有的認為是分配作用，有的認為是吸附作用。有的認為是分配作用，有的認為是吸附作用。分配：分配：把有機鍵合層作為一個液膜看待，溶質在兩相間進行分把有機鍵合層作為一個液膜看待，溶質在兩相間進行分配，極性強的成分，配，極性強的成分，K大，大，tR大大 吸附：吸附：溶質與鍵合極性基團

9、間的誘導、氫鍵和定向作用。溶質與鍵合極性基團間的誘導、氫鍵和定向作用。2、反相鍵合相色譜法、反相鍵合相色譜法固定相固定相： 非極性鍵合相，如十八烷基硅烷（非極性鍵合相，如十八烷基硅烷（C18，ODS）、辛烷）、辛烷基鍵合硅膠基鍵合硅膠 （C8） 、苯基、芘基、苯基、芘基流動相流動相： 水水為基礎溶劑，加入一定量與水混溶的極性調(diào)整劑，常為基礎溶劑，加入一定量與水混溶的極性調(diào)整劑，常用甲醇水、乙腈水等用甲醇水、乙腈水等 應用應用： 最廣，最廣，非極性至中等極性非極性至中等極性的組分，（還有有機酸、堿及的組分，（還有有機酸、堿及鹽等）鹽等）分離機理：分離機理：分子中的非極性部分與分子中的非極性部分與

10、固定相表面上的疏水烷固定相表面上的疏水烷基產(chǎn)生基產(chǎn)生締合作用締合作用，使它，使它保留在固定相中；而另保留在固定相中；而另一方面，被分離物質的一方面，被分離物質的極性部分受到極性流動極性部分受到極性流動相的作用，促使它離開相的作用，促使它離開固定相，并減小其保留固定相，并減小其保留作用。作用。保留行為的主要影響因素：保留行為的主要影響因素：1、樣品的分子結構（極性）、樣品的分子結構（極性） 極性越弱，疏水性越強，極性越弱，疏水性越強，k越大，越大，tR也越大。也越大。 同系物碳數(shù)越多，極性越弱，同系物碳數(shù)越多，極性越弱，k越大；越大； 引入極性取代基，降低疏水性，引入極性取代基，降低疏水性，k值

11、變小。值變小。 2、固定相、固定相 鍵合烷基的疏水性隨碳鏈的延長而增加，溶質的鍵合烷基的疏水性隨碳鏈的延長而增加，溶質的k也增大。也增大。C18分離效果好，分離效果好，C8，C1用于快速分離。用于快速分離。 硅膠表面鍵合烷基的濃度越大，則溶質的硅膠表面鍵合烷基的濃度越大，則溶質的k越大。越大。3、流動相、流動相 極性越強，洗脫能力越弱，使樣品的極性越強，洗脫能力越弱，使樣品的k越大越大 溶劑種類溶劑種類：水為弱溶劑，醇為強溶劑：水為弱溶劑，醇為強溶劑 溶劑比例溶劑比例：水的比例增加，使：水的比例增加，使k增大增大 中性鹽的加入中性鹽的加入：使中性樣品的：使中性樣品的k增大增大 pH：影響弱酸、

12、弱堿的離解程度，解離程度越高，與流動相作：影響弱酸、弱堿的離解程度，解離程度越高，與流動相作用越強，用越強，k越小。越小。（離子抑制色譜）（離子抑制色譜）離子抑制色譜：分離離子抑制色譜：分離3pKa 7的弱酸及的弱酸及7pKa 8的弱堿的弱堿流動相的流動相的pH降低，弱酸降低，弱酸k增大，增大，tR增大；弱堿增大；弱堿k變小。變小。反相高效液相色譜法測定枸杞中有機酸的含量反相高效液相色譜法測定枸杞中有機酸的含量色譜柱：色譜柱：C18柱柱 分離堿類：分離堿類：用烷基磺酸鹽用烷基磺酸鹽為離子對試劑。如十二烷為離子對試劑。如十二烷基磺酸鈉，正戊基磺酸鈉，正戊/己己/庚庚/辛辛磺酸鈉磺酸鈉(PIC-B

13、5/6/7/8)等。等。3、反向離子對色譜法、反向離子對色譜法固定相固定相流動相流動相3333RSOBHRSOBHRSONaNaRSOBHH)B(堿中性離子對以分離堿類物質為例，用離子對模式說明分離機理以分離堿類物質為例，用離子對模式說明分離機理3、反向離子對色譜法、反向離子對色譜法 分離酸類：分離酸類：用四丁基季銨鹽用四丁基季銨鹽(PIC-A) ，如四丁基胺磷酸，如四丁基胺磷酸鹽鹽(TBA)和溴化十六烷基三甲基銨（和溴化十六烷基三甲基銨（CTAB）等。）等。 當中性離子對在固定相和流動相之間分配平衡之后，分當中性離子對在固定相和流動相之間分配平衡之后，分配系數(shù)與離子對試劑碳鏈長度及被分離組配

14、系數(shù)與離子對試劑碳鏈長度及被分離組 分極性等因素有關。分極性等因素有關。離子對試劑碳鏈長度越長，分配系數(shù)越大，保留時間越長。離子對試劑碳鏈長度越長，分配系數(shù)越大，保留時間越長。 影響保留因子因素影響保留因子因素（1）離子對試劑的種類和）離子對試劑的種類和濃度濃度 與與R的鏈長有關：的鏈長有關：R，極性極性，tR，k。 濃度：離子對試劑濃度濃度：離子對試劑濃度增大，增大，k先增大，后趨于恒先增大，后趨于恒定，長鏈甚至下降，形成定，長鏈甚至下降，形成膠束膠束 （2）流動相的）流動相的pH：傾向：傾向解離，易形成離子對，解離，易形成離子對，k增增大。大。主要用途主要用途 有機酸堿鹽的分離，有機酸堿鹽

15、的分離，避免流動相避免流動相(酸堿酸堿)對泵和流路的腐蝕；對泵和流路的腐蝕；藥物分析，如生物堿、有機酸、磺胺類藥物、某些抗生素和維生藥物分析，如生物堿、有機酸、磺胺類藥物、某些抗生素和維生素，體內(nèi)藥物分析等。素，體內(nèi)藥物分析等。 分離原理分離原理 利用被分離組分離子交換能力的差別而實現(xiàn)分離。利用被分離組分離子交換能力的差別而實現(xiàn)分離。 分為陽離子交換色譜法和陰離子交換色譜法。分為陽離子交換色譜法和陰離子交換色譜法。 陽離子交換陽離子交換： 陰離子交換陰離子交換： 離子交換通式：離子交換通式： 33RSO HNaRSO NaH 33RNR OHClRNR ClOH RBARAB 4、離子色譜、離

16、子色譜 把離子交換基團鍵合在薄把離子交換基團鍵合在薄殼型和全多孔微粒硅膠上。可殼型和全多孔微粒硅膠上。可用于用于HPLC中的固定相。中的固定相。 特點特點：機械強度高、耐高壓、：機械強度高、耐高壓、不溶脹、傳質快、柱效高不溶脹、傳質快、柱效高化學鍵合離子交換劑化學鍵合離子交換劑離子交換色譜離子交換色譜：分離無機有機陰陽離子，氨基酸，糖，：分離無機有機陰陽離子，氨基酸，糖，DNA，RNA檢測器檢測器：電導檢測器（無機離子無紫外吸收）：電導檢測器（無機離子無紫外吸收）分類分類：抑制性（雙柱型）、非抑制性（單柱型）：抑制性（雙柱型）、非抑制性（單柱型）抑制型離子色譜法抑制型離子色譜法電導電導離子抑制

17、原理離子抑制原理分離柱分離柱抑制柱抑制柱X-3NROH3SOH3333332NROHNaXNRXNaOSOHNaXSONaHXSOHNaOHSONaH OH 分離柱：分離柱：抑制柱：抑制柱：消除消除OH-帶來的高本底帶來的高本底無抑制時無抑制時:基線：基線：NaOH樣品：樣品：NaX抑制后抑制后:基線：基線：H2O樣品：樣品：HX有機酸及無機酸在陰離子分析柱上的分離有機酸及無機酸在陰離子分析柱上的分離5、手性色譜、手性色譜手性分子手性分子沙利度胺沙利度胺 對映異構體由于具有相近的物對映異構體由于具有相近的物理化學性質，一般方法較難分離。理化學性質，一般方法較難分離。 手性色譜法是利用手性固定相

18、、手性色譜法是利用手性固定相、或手性流動相添加劑分離分析手性或手性流動相添加劑分離分析手性化合物的對映異構體的色譜法。化合物的對映異構體的色譜法。手性藥物（手性藥物（579579）天然和半合成天然和半合成藥物（藥物（556556）合成藥物（合成藥物（14361436）非手性藥物（非手性藥物（857857）單一異構體（單一異構體（7373）外消旋體（外消旋體（506506）手性藥物（手性藥物（547547）非手性藥物（非手性藥物（9 9）單一異構體（單一異構體（537537）外消旋體（外消旋體（1010）研制有手性中心的藥物研制有手性中心的藥物,必須對其各個對映體進行測定和評價必須對其各個對映體

19、進行測定和評價手性藥物種類手性藥物種類手性色譜原理手性色譜原理 在一對對映體和手性選擇劑在一對對映體和手性選擇劑之間，為了形成穩(wěn)定性不同的非之間，為了形成穩(wěn)定性不同的非對映體分子絡合物，而達到手性對映體分子絡合物，而達到手性分離的目的，至少需要三個同時分離的目的，至少需要三個同時發(fā)生的分子之間的相互作用力起發(fā)生的分子之間的相互作用力起作用。作用。 如如-氫鍵型固定相有氫鍵型固定相有-相互相互作用力、氫鍵作用和偶極作用作用力、氫鍵作用和偶極作用，且至少一個受立體構型影響。且至少一個受立體構型影響。三點相互作用模型三點相互作用模型手性固定相法手性固定相法手性流動相添加劑法手性流動相添加劑法手性衍生

20、化試劑法手性衍生化試劑法環(huán)糊精手性柱環(huán)糊精手性柱硅膠鍵合環(huán)糊精固定相硅膠鍵合環(huán)糊精固定相內(nèi)疏水空腔大小內(nèi)疏水空腔大小多手性中心作用多手性中心作用6、親和色譜、親和色譜 原理：原理：利用生物大分子和固定相表面存在的某種特異性親和利用生物大分子和固定相表面存在的某種特異性親和力，進行選擇性分離。力，進行選擇性分離。抗原抗原-抗體；酶抗體；酶-底物；激素底物；激素-受體；受體；DNA-互補互補DNA把其中之一固定在載體上（酶，把其中之一固定在載體上（酶，抗原）這種固載化的配基將只能抗原）這種固載化的配基將只能和具有親和力特性吸附的生物大和具有親和力特性吸附的生物大分子作用而被保留。分子作用而被保留。

21、 改變淋洗液后洗脫。改變淋洗液后洗脫。用于生物大分子的分離。用于生物大分子的分離。親和色譜純化過程親和色譜純化過程親和色譜應用范圍親和色譜應用范圍抗原抗原-抗體；酶抗體；酶-底物；藥物底物；藥物-受體；受體；DNA-互補互補DNA具有特異性結合的生物大分子具有特異性結合的生物大分子液固吸附色譜固定相液固吸附色譜固定相(吸附劑）吸附劑）液液液分配色譜固定相液分配色譜固定相固定相分類固定相分類第二節(jié)、固定相和流動相第二節(jié)、固定相和流動相多孔型硅膠多孔型硅膠高分子微球高分子微球化學鍵合固定相化學鍵合固定相1、非極性鍵合相：、非極性鍵合相： C18柱柱(ODS) 、C8柱、柱、C1柱、柱、苯基柱、芘基

22、柱等苯基柱、芘基柱等2、弱極性鍵合相：、弱極性鍵合相： 醚基鍵合相、二羥基鍵合醚基鍵合相、二羥基鍵合3、極性鍵合相：、極性鍵合相： 強極性氨基鍵合相；強極性氨基鍵合相； 中強極性氰基鍵合相。中強極性氰基鍵合相。化學鍵合相類型化學鍵合相類型正相化學鍵合相色譜法、反相化學鍵合相色譜法正相化學鍵合相色譜法、反相化學鍵合相色譜法硅膠鍵合硅膠鍵合C18柱填料柱填料 化學鍵合相一般用硅膠作載體，具有分配作用和一定的吸附作用。化學鍵合相一般用硅膠作載體，具有分配作用和一定的吸附作用。吸附作用的大小視吸附作用的大小視覆蓋度覆蓋度或或含碳量含碳量而定。用化學反應方法將載體表而定。用化學反應方法將載體表面上殘存的

23、硅醇基除去，稱為面上殘存的硅醇基除去，稱為封尾封尾。特點：特點：、化學穩(wěn)定性好，使用過程不易流失，柱壽命長；、化學穩(wěn)定性好，使用過程不易流失，柱壽命長；、均一性和重現(xiàn)性好、均一性和重現(xiàn)性好、柱效高，分離選擇性好；、柱效高，分離選擇性好；、適于作梯度洗脫。、適于作梯度洗脫。、載樣量大；、載樣量大；注意事項：注意事項：、在在pH28的溶液不變質，過酸過堿，硅膠溶解；的溶液不變質，過酸過堿，硅膠溶解；、不同廠家不同批次性質可能略有不同。、不同廠家不同批次性質可能略有不同。2.2 流動相流動相 依據(jù)依據(jù)分離方程式分離方程式討論溶劑系統(tǒng)對分離度的影響討論溶劑系統(tǒng)對分離度的影響22141knRkn：由色譜

24、柱填充質量決定：由色譜柱填充質量決定：溶劑種類影響：溶劑種類影響k：溶劑配比影響：溶劑配比影響流動相選擇流動相選擇根據(jù)接收質子，給予質子和偶極作用，根據(jù)接收質子，給予質子和偶極作用，常用溶劑分為八類。常用溶劑分為八類。同一組的溶劑作用力類同一組的溶劑作用力類型相似，在色譜中具有型相似，在色譜中具有相似的選擇性，不同組相似的選擇性，不同組的溶劑，選擇性差異較的溶劑，選擇性差異較大。大。流動相的洗脫方式流動相的洗脫方式等度洗脫（等度洗脫（isocratic):樣品的組成較簡單，各組分的分配系數(shù)樣品的組成較簡單，各組分的分配系數(shù)值相差不大。在同一分析周期內(nèi)流動相的組成保持恒定。值相差不大。在同一分析

25、周期內(nèi)流動相的組成保持恒定。梯度洗脫（梯度洗脫（gradient)：樣品的組成較復雜，各組分的分配系數(shù)樣品的組成較復雜，各組分的分配系數(shù)值相差大，即寬分配比的組分值相差大，即寬分配比的組分梯度洗脫操作方法：梯度洗脫操作方法：在同一個分析周期內(nèi)按一定的程序改變在同一個分析周期內(nèi)按一定的程序改變流動相的組成，從而改變流動相流動相的組成，從而改變流動相極性、離子強度、極性、離子強度、pH，來調(diào)，來調(diào)整組分的整組分的k值，改變分離因子值，改變分離因子值，以達到最短時間內(nèi)得到最值，以達到最短時間內(nèi)得到最佳分離的目的。佳分離的目的。與程序升溫比較與程序升溫比較溶劑配比對保留時間的影響溶劑配比對保留時間的影

26、響例：例：C18柱檢測甲硝唑含量柱檢測甲硝唑含量溶劑：水：甲醇溶劑：水：甲醇水水 ：甲醇：甲醇50 : 5070 : 3080 : 203min5min 6min反向色譜：反向色譜：溶劑極性越小，溶劑極性越小，洗脫力越強，洗脫力越強，保留時間約短。保留時間約短。梯度洗脫梯度洗脫 梯度洗脫的實質：梯度洗脫的實質：是通過不是通過不斷地變化流動相的濃度配比，斷地變化流動相的濃度配比，來調(diào)整混合樣品中各組分的來調(diào)整混合樣品中各組分的K值。值。用于分離組分性質差用于分離組分性質差別較大的復雜樣品。別較大的復雜樣品。 優(yōu)點：優(yōu)點：縮短分析周期；縮短分析周期；提高分離效果；改善峰形，提高分離效果；改善峰形，

27、很少拖尾；增加檢測靈敏很少拖尾；增加檢測靈敏度。度。甲醇：水甲醇：水 30 : 70甲醇：水甲醇：水 80 : 20時間時間 甲醇甲醇 水水0 0 10020 80 20 高效液相色譜中流動相是液體，它對組高效液相色譜中流動相是液體，它對組分有親和力，并參與固定相對組分的競分有親和力，并參與固定相對組分的競爭。流動相溶劑的選擇將直接影響組分爭。流動相溶劑的選擇將直接影響組分的分離度的分離度.1. 基本要求基本要求 溶劑必須具有合適的極性和良好的選溶劑必須具有合適的極性和良好的選擇性擇性(相對于待測樣品相對于待測樣品)， 溶劑要與檢測器匹配，對于紫外吸收溶劑要與檢測器匹配，對于紫外吸收檢測器，應

28、注意選用檢測波長檢測器，應注意選用檢測波長比溶劑的比溶劑的紫外截止波長要長紫外截止波長要長；溶劑名稱溶劑名稱紫外截止紫外截止波長波長/nm正己烷正己烷190二硫化碳二硫化碳380四氯化碳四氯化碳265苯苯210氯仿氯仿245二氯甲烷二氯甲烷233四氫呋喃四氫呋喃212丙酮丙酮330乙腈乙腈190甲醇甲醇205水水187流動相溶劑的選擇流動相溶劑的選擇第三節(jié)、速率理論和分離條件的選擇第三節(jié)、速率理論和分離條件的選擇 HPLC與經(jīng)典與經(jīng)典LC和和GC在基本原理、概念和方法基本上在基本原理、概念和方法基本上相同，主要差別是流動相的性質不同。因此，某些公式的相同，主要差別是流動相的性質不同。因此，某些

29、公式的表現(xiàn)形式或參數(shù)的含意有些差別。表現(xiàn)形式或參數(shù)的含意有些差別。速率理論速率理論1分離條件選擇分離條件選擇222()mpsmsmDdCCCu根據(jù)色譜速率理論方程式：根據(jù)色譜速率理論方程式：渦流擴散項渦流擴散項分子擴散項分子擴散項傳質阻抗項傳質阻抗項H= A + B/u + Cu液相色譜速率理論液相色譜速率理論產(chǎn)生原因產(chǎn)生原因：載氣攜樣品進柱，遇到來自固定相顆粒的阻力：載氣攜樣品進柱，遇到來自固定相顆粒的阻力路路 徑不同徑不同渦流擴散渦流擴散 影響因素影響因素：固體顆粒越小，填充越實，：固體顆粒越小，填充越實，A項越小，柱效越高。項越小，柱效越高。3.2.1 渦流擴散項渦流擴散項A2;:ppA

30、dd填充物的填充不規(guī)則因子填充物的平均直徑提高柱效方法：提高柱效方法：、降低固定相粒徑、降低固定相粒徑dp (3-10m)、降低不規(guī)則因子、降低不規(guī)則因子(RSD5%,球形填料球形填料)產(chǎn)生原因產(chǎn)生原因：待測組分在柱中存在著濃度差，從而產(chǎn)生縱向擴散。：待測組分在柱中存在著濃度差，從而產(chǎn)生縱向擴散。3.2.2 分子擴散項分子擴散項B/u（縱向擴散）（縱向擴散）2/:mmDB uuD彎曲因子彎曲因子擴散系數(shù)擴散系數(shù)擴散系數(shù)擴散系數(shù)Dm與流動相黏度與流動相黏度成反比，與溫度成正比，成反比，與溫度成正比，HPLC中，中，分子擴散項很小，可忽略。分子擴散項很小，可忽略。3.2.3 傳質阻抗項傳質阻抗項C

31、u()smsmCuCCCu 液相傳質過程指組分從氣液界面擴散進入固定液，擴散至液相傳質過程指組分從氣液界面擴散進入固定液，擴散至固定液深部，達到分配平衡，再回到界面的過程。固定液深部，達到分配平衡，再回到界面的過程。固定相粒度越小，傳質阻力越小。固定相粒度越小，傳質阻力越小。流動相黏度越小，組分擴散系數(shù)越大，傳質阻力越小。流動相黏度越小，組分擴散系數(shù)越大，傳質阻力越小。固定相固定相傳質阻抗傳質阻抗靜態(tài)流動相靜態(tài)流動相傳質阻抗傳質阻抗0SC 流動相流動相傳質阻抗傳質阻抗2mmdpCD2smmdpCDTDm1）Cs固定相傳質阻抗固定相傳質阻抗 由試樣分子從固定液表面進入固定液內(nèi)并回到由試樣分子從固

32、定液表面進入固定液內(nèi)并回到表面，進行質量交換的傳質過程產(chǎn)生。表面，進行質量交換的傳質過程產(chǎn)生。Cs為一常數(shù)，與容量因子有關，為一常數(shù)，與容量因子有關，df為液膜的厚度為液膜的厚度，Dl試樣分試樣分子在固定相中的擴散系數(shù)。子在固定相中的擴散系數(shù)。改善方法：采用改善方法：采用薄薄的固定相液膜，且固定液的固定相液膜，且固定液粘度小粘度小。在液液分配色譜中，由于在液液分配色譜中，由于多用化學鍵合固定相多用化學鍵合固定相，固定液只是，固定液只是在載體表面的一單分子層，因此在載體表面的一單分子層，因此Cs可忽略可忽略 223(1)fsldkCkD2）流動相傳質阻抗）流動相傳質阻抗 當流動相攜帶樣品分子流過

33、色譜柱的填充物時，處于流路邊當流動相攜帶樣品分子流過色譜柱的填充物時，處于流路邊緣的流動相（即靠近填充物顆粒），流動得較慢，而流路中心緣的流動相（即靠近填充物顆粒），流動得較慢，而流路中心的流動相流動較快，還未與固定相達到平衡就被沖出，在柱內(nèi)的流動相流動較快，還未與固定相達到平衡就被沖出，在柱內(nèi)流動相的流速不均勻，組分分子遷移速率不同，引起峰擴展。流動相的流速不均勻，組分分子遷移速率不同，引起峰擴展。2mpmmdCDm由色譜柱填充情況決定。由色譜柱填充情況決定。填料顆粒越小，擴散系數(shù)越大，則填料顆粒越小，擴散系數(shù)越大，則Cm越小。越小。3）靜態(tài)流動相傳質阻抗）靜態(tài)流動相傳質阻抗 由于固定相中擔

34、體的多孔性，在固定相中微孔內(nèi)流動相稱為由于固定相中擔體的多孔性，在固定相中微孔內(nèi)流動相稱為滯流流動相滯流流動相，一般是停滯不動。，一般是停滯不動。 當組分的部分分子進入滯留流動相，再進行分配，相對較晚當組分的部分分子進入滯留流動相，再進行分配，相對較晚回到流路，引起峰展寬。回到流路，引起峰展寬。 由于孔有一定深度，擴散到孔中的路徑由于孔有一定深度，擴散到孔中的路徑不同，微孔小而深，傳質阻力就大，對峰不同，微孔小而深，傳質阻力就大，對峰擴展的影響就越大。擴展的影響就越大。 Csm與固定相結構粒與固定相結構粒度和流動相擴散系數(shù)有關。度和流動相擴散系數(shù)有關。2psmmdCD速率方程在速率方程在GC中

35、的表現(xiàn)形式中的表現(xiàn)形式速率方程在速率方程在HPLC的表現(xiàn)形式：的表現(xiàn)形式：流動相流速提高，柱效降低。但是柱效變化不如氣相大。流動相流速提高，柱效降低。但是柱效變化不如氣相大。BHACuuBHCuu填充柱：填充柱：毛細管柱：毛細管柱：無渦流擴散，無渦流擴散，A=0不同色譜下的速率方程不同色譜下的速率方程msmHACuAC uC u分析型柱子（內(nèi)徑分析型柱子（內(nèi)徑4.6mm)：流速一般為：流速一般為1mL/min3145uHPLCGCH圖圖202 流動相的流速對流動相的流速對GC與與HPLC板高影響對比板高影響對比2流動相流速提高，柱效降低。流動相流速提高，柱效降低。但是柱效變化不如氣相大。但是柱

36、效變化不如氣相大。分析型柱子（內(nèi)徑分析型柱子（內(nèi)徑4.6mm)：流速一般為流速一般為1mL/min內(nèi)徑越大，流速越大內(nèi)徑越大，流速越大GC和和HPLC固定相粒度：固定相粒度：A,Cs,Csm隨隨粒度邊小而變小，且粒度越粒度邊小而變小，且粒度越小，柱效受流速影響越小，小，柱效受流速影響越小，因此采用小顆粒填料。因此采用小顆粒填料。根據(jù)速率理論，根據(jù)速率理論，HPLC的實驗條件為：的實驗條件為：、小顆粒、均勻的球形化學鍵合相。、小顆粒、均勻的球形化學鍵合相。、低粘度流動相，流速不宜過快。、低粘度流動相，流速不宜過快。、柱溫適當，多為室溫。、柱溫適當，多為室溫。填料粒徑影響填料粒徑影響HPLC分離方

37、法選擇分離方法選擇分子量分子量極性極性分子結構分子結構第四節(jié)、高效液相色譜儀第四節(jié)、高效液相色譜儀液相液相色譜的基本流程圖色譜的基本流程圖流動相流動相 泵泵色譜柱色譜柱檢測器檢測器 泵泵輸輸液液分離分離 檢測檢測 計算機計算機AEGBCDF進樣閥進樣閥進樣進樣預備柱預備柱 高效液相色譜儀高效液相色譜儀流動相流動相脫氣裝置脫氣裝置泵泵檢測器檢測器六通閥六通閥美國美國Agilent美國美國Waters日本島津日本島津常用的高效液相色譜儀常用的高效液相色譜儀雙柱塞往復泵雙柱塞往復泵消除脈動，恒流量消除脈動，恒流量1.1 泵輸液系統(tǒng)泵輸液系統(tǒng)1.1.1 高壓輸液泵高壓輸液泵壓力可達壓力可達40MPa，

38、有的可達，有的可達100MPa。1.1.2 梯度淋洗裝置梯度淋洗裝置混合和加壓的順序混合和加壓的順序先加壓后混合先加壓后混合兩臺高壓輸液泵兩臺高壓輸液泵先混合后加壓先混合后加壓一臺高壓泵一臺高壓泵1.2 進樣裝置進樣裝置 流路中為高壓力工作狀態(tài)，通常使用耐高壓的流路中為高壓力工作狀態(tài)，通常使用耐高壓的六通閥六通閥 其結構如下：其結構如下：loadinject1.2.1 手動進樣：手動進樣：注射器吸取的樣品量必須大于定量環(huán)的量。注射器吸取的樣品量必須大于定量環(huán)的量。1.2.2 自動進樣：自動進樣：用于大量在同樣操作條件下分離的類似樣品用于大量在同樣操作條件下分離的類似樣品自動進樣器自動進樣器（3

39、）色譜柱）色譜柱色譜柱規(guī)格制備柱、半制備柱、分析柱色譜柱規(guī)格制備柱、半制備柱、分析柱（3）色譜柱）色譜柱不銹鋼管不銹鋼管PEEK管管預備柱預備柱保護色譜柱，預防不保護色譜柱，預防不可逆吸附等可逆吸附等反相反相HPLC 極性極性:固定相固定相 流動相流動相 固定相固定相 - 極性強極性強 流動相流動相(己烷己烷, 庚烷庚烷)- 極性弱極性弱 極性小物質先出峰極性小物質先出峰正相正相色譜色譜 20%反相色反相色譜譜80%正相正相色譜色譜 20%反相色反相色譜譜80%主流主流（3）色譜柱）色譜柱分離的分離的核心部分核心部分鍵合類型鍵合類型碳覆蓋率碳覆蓋率封端封端 化學性質化學性質鍵合固定相的化學性質

40、鍵合固定相的化學性質通用型通用型示差折光檢測器示差折光檢測器蒸發(fā)光散射檢測器蒸發(fā)光散射檢測器電導檢測器電導檢測器專屬型專屬型熒光檢測器熒光檢測器固定波長固定波長可變波長可變波長光電二極管陣列光電二極管陣列安培檢測器安培檢測器質譜檢測器質譜檢測器紫外紫外/可見光檢測器可見光檢測器1. 要求要求 靈敏度高、噪音低、靈敏度高、噪音低、線性范圍寬、響應快、線性范圍寬、響應快、死體積小、對溫度和死體積小、對溫度和流速變化不敏感流速變化不敏感（4）、檢測器）、檢測器 目前應用最廣泛的檢測器目前應用最廣泛的檢測器 測量通過溶液后的紫外或可見光光強度的損失測量通過溶液后的紫外或可見光光強度的損失 吸光度與樣品

41、濃度呈線性關系吸光度與樣品濃度呈線性關系 在被測物的最大吸收波長處檢測時靈敏度最大在被測物的最大吸收波長處檢測時靈敏度最大 1. 紫外檢測器紫外檢測器(UVD)朗伯朗伯比爾定律比爾定律AEcl優(yōu)點優(yōu)點缺點缺點這種檢測器簡單、可靠這種檢測器簡單、可靠可以作梯度實驗并且是可以作梯度實驗并且是非破壞性的非破壞性的大多數(shù)有機化合物有一大多數(shù)有機化合物有一定程度的吸光度定程度的吸光度一般來說靈敏度還可以，一般來說靈敏度還可以，線性范圍較寬；線性范圍較寬； 對流動相的流速和對流動相的流速和溫度變化不敏感溫度變化不敏感 波長可選，易于操波長可選，易于操作作 不是所有化合物都有吸光度，不不是所有化合物都有吸光

42、度，不是通用檢測器是通用檢測器 對某些化合物的檢測靈敏度不及對某些化合物的檢測靈敏度不及其他檢測器其他檢測器 樣品中不同化合物的最大吸收波樣品中不同化合物的最大吸收波長不同時，需要使用多波長檢測，長不同時，需要使用多波長檢測，或使用折衷的波長或使用折衷的波長受流動相組成的影響：受流動相組成的影響： 用截止波長以上至少用截止波長以上至少510nm作為工作波長作為工作波長 緩沖鹽、離子對試劑、胺改性緩沖鹽、離子對試劑、胺改性劑也會有影響劑也會有影響背景吸收的影響背景吸收的影響背景吸收降低了線性范圍背景吸收降低了線性范圍多數(shù)流動相有紫外吸收多數(shù)流動相有紫外吸收實實際際濃度濃度理想理想10吸光度吸光度

43、210背景吸收背景吸收溶劑名稱溶劑名稱紫外截止紫外截止波長波長/nm正己烷正己烷190二硫化碳二硫化碳380四氯化碳四氯化碳265苯苯210氯仿氯仿245二氯甲烷二氯甲烷233四氫呋喃四氫呋喃212丙酮丙酮330乙腈乙腈190甲醇甲醇205水水1872、光電二極管陣列檢測器光電二極管陣列檢測器(PDA) 80年代出現(xiàn)的一種新型檢測器。單晶硅上密集排列一系列光年代出現(xiàn)的一種新型檢測器。單晶硅上密集排列一系列光電二極管，一個光電二極管對應接受光譜上一個譜帶寬度的單色電二極管，一個光電二極管對應接受光譜上一個譜帶寬度的單色光。例如，安捷倫光。例如，安捷倫1100 HPLC光電二極管陣列檢測器，波長范

44、圍光電二極管陣列檢測器，波長范圍為為200900nm對應對應1024個光電二極管，平均個光電二極管，平均0.7nm譜帶寬度由一譜帶寬度由一個光電二極管接收。個光電二極管接收。三維紫外圖三維紫外圖時間時間波長波長吸光度吸光度光學分辨率（帶寬）光學分辨率（帶寬）好的光譜分辨率可得到高質量的光譜信息好的光譜分辨率可得到高質量的光譜信息230.00250.00270.00nmBenzene 3.0nm vs 1.0nm 損失分辨率，損失分辨率，UV最大波長移動最大波長移動 1.0nm3.0nm190nm5.0nmS2*S1*S0T1*紫外紫外可見可見吸吸收收發(fā)發(fā)射射熒熒光光發(fā)發(fā)射射磷磷光光體系間體系間

45、跨越跨越內(nèi)轉換內(nèi)轉換振動弛豫振動弛豫能能量量 2 1 4 4 外外轉轉換換 3 3振動振動能級能級電子電子能級能級熒光熒光：電子由第一激發(fā)單重態(tài)的最低振動能級：電子由第一激發(fā)單重態(tài)的最低振動能級基態(tài)（基態(tài)（ 多為多為 S1 S0躍遷躍遷），），發(fā)射波長為發(fā)射波長為 2的熒光；的熒光；10-710 -9 s 。3. 熒光檢測器熒光檢測器(FD) 特點：特點： 高靈敏度，高選擇性高靈敏度，高選擇性。 對多環(huán)芳烴，維生素對多環(huán)芳烴，維生素B，黃曲霉素，卟啉類化，黃曲霉素，卟啉類化合物，農(nóng)藥，藥物，氨合物，農(nóng)藥，藥物，氨基酸，甾類化合物等有基酸，甾類化合物等有響應。響應。定量關系：定量關系：02.3F

46、QKIcl熒光檢測器的應用熒光檢測器的應用 環(huán)境中的污染物環(huán)境中的污染物 多環(huán)芳烴多環(huán)芳烴(PAH)，多酚，多酚，氨基甲酸酯等氨基甲酸酯等 食品、飲料食品、飲料 食品中的毒素；例如：食品中的毒素；例如：黃曲霉毒素黃曲霉毒素 染料染料 維生素及衍生氨基酸維生素及衍生氨基酸 生物技術及制藥生物技術及制藥氨基甲酸酯類殺蟲劑氨基甲酸酯類殺蟲劑OOOOOOCH3黃曲霉毒素黃曲霉毒素多環(huán)芳烴（多環(huán)芳烴（PAH）OHCH3CH3CH3CH3CH3維生素維生素OOONHCH3CH3CH3應用實例多環(huán)芳烴（應用實例多環(huán)芳烴（PAHs）檢測）檢測(紫外紫外)(熒光熒光)紫外陣列檢測器紫外陣列檢測器(樣品濃度樣品濃

47、度0.5-5mg)熒光檢測器熒光檢測器(樣品濃度樣品濃度1-5m mg)熒光檢測器的特點熒光檢測器的特點 優(yōu)點：優(yōu)點：高靈敏度、低檢測限、低背景。高靈敏度、低檢測限、低背景。 缺點：缺點： 不是所有化合物都有熒光，有的需要衍生化不是所有化合物都有熒光，有的需要衍生化 檢測器對溶解氣體及其他淬滅物質敏感檢測器對溶解氣體及其他淬滅物質敏感 對對Ex及及Em的最佳的最佳 ，易受溫度、溶劑的極性和粘，易受溫度、溶劑的極性和粘度、溶劑的度、溶劑的pH值及樣品濃度影響值及樣品濃度影響 多數(shù)儀器的批次間差異較大，同一型號的不同熒多數(shù)儀器的批次間差異較大，同一型號的不同熒光檢測器會得到不同的結果。光檢測器會得

48、到不同的結果。4、安培檢測器、安培檢測器(ECD)適用于：氧化還原活性的物質，如：胺、酚、羰基、巰基化合物適用于：氧化還原活性的物質，如：胺、酚、羰基、巰基化合物原理原理：電極施加：電極施加恒電位恒電位，當電活性成分經(jīng)過時，發(fā)生氧化，當電活性成分經(jīng)過時，發(fā)生氧化還原反應，產(chǎn)生電流。還原反應，產(chǎn)生電流。QnFNdNInFdt流速一定時，流速一定時， 與流動相中的濃度有關。與流動相中的濃度有關。dNdt特點：靈敏度高，適合痕量物質檢測特點：靈敏度高，適合痕量物質檢測代表性化合物有：代表性化合物有： 胺基酚類、苯胺類、聯(lián)苯胺類、胺基酚類、苯胺類、聯(lián)苯胺類、硝基化合物、亞硝胺類、偶氮化合物、硝基化合物

49、、亞硝胺類、偶氮化合物、麻醉生物堿類、氨基甲酸酯類、苯甲麻醉生物堿類、氨基甲酸酯類、苯甲醚類、酚類、醌類、噻吩嗪類、抗壞醚類、酚類、醌類、噻吩嗪類、抗壞血酸、羥基醌類、雌性激素類、巰基血酸、羥基醌類、雌性激素類、巰基化合物、吲哚類、尿酸、色氨酸及其化合物、吲哚類、尿酸、色氨酸及其衍生物及香草醛等。衍生物及香草醛等。已被廣泛地用于環(huán)境污染物、活體代已被廣泛地用于環(huán)境污染物、活體代謝的分析、食品衛(wèi)生檢查、臨床化學謝的分析、食品衛(wèi)生檢查、臨床化學和生物醫(yī)學研究等各個方面。和生物醫(yī)學研究等各個方面。5、蒸發(fā)光散射檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD);lglglgbIkmIbmk 用氮氣流動相混合噴霧形

50、用氮氣流動相混合噴霧形成小液滴，成小液滴， 通過一個加熱的腔體除去通過一個加熱的腔體除去流動相，溶質的揮發(fā)性小流動相，溶質的揮發(fā)性小于流動相，因此產(chǎn)生氣溶于流動相，因此產(chǎn)生氣溶膠，進入檢測室膠，進入檢測室 光照后，氣溶膠發(fā)生光散光照后，氣溶膠發(fā)生光散射射 散射光由光電倍增管檢測散射光由光電倍增管檢測 散射光強度與溶質的存在散射光強度與溶質的存在量呈比例關系量呈比例關系 應用領域：應用領域： 碳水化合物碳水化合物 油脂及脂肪酸油脂及脂肪酸 未衍生的氨基酸未衍生的氨基酸 制藥行業(yè)制藥行業(yè) 表面活性劑表面活性劑 天然產(chǎn)物天然產(chǎn)物 蒸發(fā)光散射檢測器是通用型質量檢測器。能檢測任何揮蒸發(fā)光散射檢測器是通用

51、型質量檢測器。能檢測任何揮發(fā)性低于流動相的化合物，被廣泛應用于藥物包括中成藥組發(fā)性低于流動相的化合物，被廣泛應用于藥物包括中成藥組分以及其它紫外不吸收或弱吸收化學組分的分析檢測。分以及其它紫外不吸收或弱吸收化學組分的分析檢測。優(yōu)點優(yōu)點缺點缺點不能使用不揮發(fā)性的流動相（例如：不能使用不揮發(fā)性的流動相（例如：磷酸鹽）磷酸鹽）要求使用霧化氣源（典型的是氮氣）要求使用霧化氣源（典型的是氮氣）不同的色譜條件下霧化及除溶劑的不同的色譜條件下霧化及除溶劑的參數(shù)需要重新優(yōu)化參數(shù)需要重新優(yōu)化蒸發(fā)出的溶劑要通到戶外或通風櫥蒸發(fā)出的溶劑要通到戶外或通風櫥里里對揮發(fā)性化合物的檢測不理想對揮發(fā)性化合物的檢測不理想一般得

52、到的是非線性校正曲線一般得到的是非線性校正曲線某些化合物的檢測靈敏度不如其他某些化合物的檢測靈敏度不如其他檢測器檢測器通用型通用型 比流動相比流動相揮發(fā)性小的物質都揮發(fā)性小的物質都能被檢測能被檢測可以作梯度實驗；可以作梯度實驗；檢測下限可到納檢測下限可到納克級水平克級水平對環(huán)境條件不敏對環(huán)境條件不敏感；可以使用有感；可以使用有強紫外吸收的溶強紫外吸收的溶劑作流動相劑作流動相6. 示差折光檢測器示差折光檢測器(RI)除紫外檢測器之外應用最多的檢測器。除紫外檢測器之外應用最多的檢測器。可連續(xù)檢測參比池和樣品池中流動相之間的折可連續(xù)檢測參比池和樣品池中流動相之間的折射率差值。差值與濃度成正比。射率差

53、值。差值與濃度成正比。 通用型檢測器（每種物質具有不通用型檢測器（每種物質具有不同的折光指數(shù)）。同的折光指數(shù)）。 靈敏度低，對溫度敏感，不能用靈敏度低，對溫度敏感，不能用于梯度洗脫。于梯度洗脫。 偏轉式、反射式和干涉型三種。偏轉式、反射式和干涉型三種。應用范圍：應用范圍：碳水化合物、聚合物、脂肪酸及碳水化合物、聚合物、脂肪酸及油脂類油脂類 蒸發(fā)光散射檢測器是通用型質量檢測器。能檢測任何揮蒸發(fā)光散射檢測器是通用型質量檢測器。能檢測任何揮發(fā)性低于流動相的化合物，被廣泛應用于藥物包括中成藥組發(fā)性低于流動相的化合物，被廣泛應用于藥物包括中成藥組分以及其它紫外不吸收或弱吸收化學組分的分析檢測。分以及其它

54、紫外不吸收或弱吸收化學組分的分析檢測。7、色質聯(lián)用、色質聯(lián)用HPLC-MSm/z+/-電離源電離源質量分析器質量分析器色質聯(lián)用儀器色質聯(lián)用儀器色譜色譜質譜質譜 以高效液相色譜為分離手段，以質譜為鑒定和測定方法，以高效液相色譜為分離手段，以質譜為鑒定和測定方法，通過適當接口通過適當接口(interface) 連接。連接。從從HPLC到到MS的轉變：的轉變：物態(tài)轉變物態(tài)轉變: 液態(tài)液態(tài) 氣態(tài)氣態(tài)帶電狀態(tài)帶電狀態(tài): 中性分子中性分子 離子離子真空變化真空變化: 大氣壓大氣壓 高真空高真空ESI APCI APPI HPLC-MS的接口技術的接口技術大氣壓電離源大氣壓電離源(API)，包括電噴霧離子化

55、（，包括電噴霧離子化（ESI）、大氣壓化學）、大氣壓化學離子化離子化(APCI)和大氣壓光噴霧離子化和大氣壓光噴霧離子化(APPI)等技術等技術 ，ESI和和APCI是液質聯(lián)用的常用的接口。是液質聯(lián)用的常用的接口。接口直角交叉接口設計接口直角交叉接口設計+Heated nitrogen drying gasDielectric capillary entranceNebulizer gasSolvent sprayElectrospray Ions-5,000 V、提高靈敏度、提高靈敏度、減少污染、減少污染、降低毛細管被堵塞、降低毛細管被堵塞、對非揮發(fā)性緩沖液的忍、對非揮發(fā)性緩沖液的忍耐強耐強

56、直線型的設計容易使大量直線型的設計容易使大量溶劑進入質譜中，降低系溶劑進入質譜中，降低系統(tǒng)真空度，影響檢測。統(tǒng)真空度，影響檢測。1、電噴霧離子源、電噴霧離子源(ESI)液滴液滴小液滴小液滴M+ESI是近年來出現(xiàn)的一種新的電離方式。它主要應用于液相色譜是近年來出現(xiàn)的一種新的電離方式。它主要應用于液相色譜-質譜聯(lián)用儀。質譜聯(lián)用儀。液滴崩塌，樣品離子濺射液滴崩塌，樣品離子濺射ESI源的內(nèi)部構造源的內(nèi)部構造ESI是一種軟電離方式，即便是分子量大，穩(wěn)定性差的化合物，是一種軟電離方式，即便是分子量大，穩(wěn)定性差的化合物，也不會在電離過程中發(fā)生分解，它適合于分析極性強的有機化也不會在電離過程中發(fā)生分解，它適合

57、于分析極性強的有機化合物。合物。福建醫(yī)科大學福建醫(yī)科大學典型的典型的ESI質譜圖質譜圖2002503003501000020000 189.2 259.3 M + H+338.2 M + Na+ 360.3SNNH2NN H2SNNH2SOON H2法莫替丁法莫替丁(Famotidine)的的ESI質譜圖質譜圖譜圖特征：譜圖特征：、譜圖以準分子、譜圖以準分子離子峰離子峰M+H+和和M+Na+為主。為主。 、熱不穩(wěn)定的樣、熱不穩(wěn)定的樣品會有碎片峰信號。品會有碎片峰信號。2、大氣壓化學電離源、大氣壓化學電離源(APCI)主要構造：主要構造：噴霧針、加熱爐腔、電暈針噴霧針、加熱爐腔、電暈針 APCI

58、主要用來分析主要用來分析中等極性中等極性和弱極性和弱極性的化合物。有些分析的化合物。有些分析物用物用ESI不能產(chǎn)生足夠強的離不能產(chǎn)生足夠強的離子，可以采用子，可以采用APCI方式電離，方式電離，可以認為可以認為APCI是是ESI的補充。的補充。是液質聯(lián)用的常用電離源。是液質聯(lián)用的常用電離源。APCI的正負離子模式的正負離子模式電荷轉移過程：電荷轉移過程：針尖針尖 N2、H2O 溶劑溶劑 樣品樣品APCI源的內(nèi)部構造源的內(nèi)部構造APCI主要產(chǎn)生的是單電荷離子，很少有碎片離子，主要是分子主要產(chǎn)生的是單電荷離子，很少有碎片離子，主要是分子離子峰和準分子離子峰。離子峰和準分子離子峰。720.1-MS,

59、 65.0-66.3min #(3895-3976)0.000.250.500.751.001.251.506x10Intens.2505007501000125015001750 m/z720.1-MS, 65.0-66.3min #(3895-3976)0.000.250.500.751.001.251.506x10Intens.715720725730m/z富勒烯富勒烯C60的的APCI質譜圖及同位素分布質譜圖及同位素分布典型的典型的APCI質譜圖質譜圖3、大氣壓光電離源、大氣壓光電離源(APPI)結構和結構和APCI非常相似，電非常相似，電暈針的位置被暈針的位置被紫外燈紫外燈取代，取代

60、，適合用于電離適合用于電離非極性非極性的樣品。的樣品。適合用于易光電離的樣品，適合用于易光電離的樣品，如多環(huán)芳烴、富勒烯等如多環(huán)芳烴、富勒烯等主要構造：主要構造：噴霧針、加熱爐腔、紫外燈噴霧針、加熱爐腔、紫外燈典型的典型的APPI質譜圖質譜圖C16Cl10的的APPI譜圖譜圖458.7492.7526.60123454x10Intens.350400450500550600m/z大氣壓電離源的選擇大氣壓電離源的選擇ESI、APCI、APPI可檢測樣品的可檢測樣品的質量范圍和極性質量范圍和極性 ESI：中等極性到強極性化合物：中等極性到強極性化合物 APCI：弱極性或中等極性化合物：弱極性或中等