1、*制藥股份有限公司文件編號：文件編號：題目題目*原料有關物質分析方法驗證方案原料有關物質分析方法驗證方案第第 1 頁頁 共共 12 頁頁8*原料有關物質分析方法驗證方案原料有關物質分析方法驗證方案20*年*月*制藥股份有限公司文件編號：文件編號：題目題目*原料有關物質分析方法驗證方案原料有關物質分析方法驗證方案第第 2 頁頁 共共 12 頁頁驗證方案的起草與審批驗證方案的起草與審批驗證小組成員驗證小組成員部門人員職責驗證小組組長驗證小組組長部門人員職責負責組織起草驗證方案并按批準方案組織實施；督促驗證人員做好記錄；負責各階段驗證結果匯總及評價、組織起草驗證報告；組織相關培訓 方案審核方案審核審

2、核簽名及日期驗證委員會方案批準方案批準批準人批準日期方案實施日期：方案實施日期：*制藥股份有限公司文件編號：文件編號：題目題目*原料有關物質分析方法驗證方案原料有關物質分析方法驗證方案第第 3 頁頁 共共 12 頁頁目目 錄錄1.驗證目的驗證目的.42.方法簡介與確認范圍方法簡介與確認范圍.43.標準品、供試品標準品、供試品.44.風險評估風險評估.45.驗證的可接受標準驗證的可接受標準.46.驗證步驟驗證步驟.46.1 系統適應性系統適應性.46.2 專屬性專屬性.66.3 檢測限與定量限檢測限與定量限.86.4 線性線性.96.5 準確度準確度.96.6 精密度精密度.106.6 范圍范圍

3、.106.7 耐用性耐用性.106.8 樣品測定樣品測定.117.偏差偏差.118.風險的接收與評審風險的接收與評審.119.再驗證再驗證.1110.確認結果評審和結論確認結果評審和結論.1111.更改歷史更改歷史.1212. 附錄附錄.12*制藥股份有限公司文件編號：文件編號：題目題目*原料有關物質分析方法驗證方案原料有關物質分析方法驗證方案第第 4 頁頁 共共 12 頁頁1. 驗證目的驗證目的根據法規的要求，采用非藥典或其它法規未收載的分析方法應進行驗證，證明采用的方法適合于相應的檢測要求。這個驗證方案的目的是為驗證提供具體方法參數、可接受標準和研究步驟。2. 方法簡介與確認范圍方法簡介與

4、確認范圍*原料有關物質檢測方法為自行開發的液相室色譜方法。為確保方法的準確性和可行性，為日常檢測方法提供依據，現對該方法進行驗證。方法驗證必須按照驗證方案進行，此次驗證方案提供*原料含量分析方法驗證驗證，包括：專屬性、精密度、線性、范圍、準確度、檢測限&定量限、耐用性。3. 標準品、供試品標準品、供試品3.1 標準品 名稱批號來源3.2 供試品 名稱批號來源4. 風險評估風險評估按照質量風險管理規程 ，質量控制部和質量管理部共同對分析方法進行了風險評估，確定了需進行方法確認的項目。具體見下表：風險因素風險可能影響效應現有控制措施SPDRPN風險級別建議采取措施專屬性不具有專屬性分離度不

5、好，影響雜質定量每次試驗測試分離度33327中首次使用前，對專屬性進行驗證定量限 定量限 小的雜質不能無33327中對該方法的定*制藥股份有限公司文件編號：文件編號：題目題目*原料有關物質分析方法驗證方案原料有關物質分析方法驗證方案第第 5 頁頁 共共 12 頁頁與檢測限高被檢出量限進行驗證。精密度精密度差不同時間或人員測定的結果不一致每次測試前進行系統適用性測試33327中首次使用前，對精密度進行驗證準確度回收率低雜質結果不準確無33327中首次使用前，對準確度進行驗證線性線性不好雜質結果不準確無33327中首次使用前，對線性進行驗證范圍范圍窄濃度超過范圍后結果不準確無33327中首次使用前

6、，對范圍進行驗證耐用性耐用性差參數微小變化對結果影響很大無33327中首次使用前，對耐用性進行驗證風險評估人：評估日期：5. 驗證的可接受標準驗證的可接受標準項目可接受標準專屬性空白無干擾，主峰與相鄰峰之間的分離度不小于1.5，峰純度應不小于 0.990.檢測限與定量限0.05%線性R0.999準確度回收率在 0.05%質量指標的 140%范圍內精密度重復性 RSD%10.0%中間精密度 RSD%10.0%精密度：兩組數據平均檢測結果的相對偏差20.0%*制藥股份有限公司文件編號：文件編號：題目題目*原料有關物質分析方法驗證方案原料有關物質分析方法驗證方案第第 6 頁頁 共共 12 頁頁范圍應

7、至少為指標的 80%120%耐用性評估柱溫、流速、色譜柱、緩沖鹽 pH、有機相比例、流動相比例、溶液放置時間對檢測結果的影響6. 驗證步驟驗證步驟6.1 系統適應性系統適應性分離度測試液：取*產品分離度標準品 5mg，置于一比色管中，加稀釋液 10ml 溶解，在 95下水浴加熱 30 分鐘，放冷。標準液：取*產品標準品25mg，精密稱定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度；精密移取1ml，置于一100ml量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度。取分離度測試液進樣，記錄色譜圖，*產品與*-3異構體之間的分離度應不小于2.0。取標準液進樣，記錄色譜圖，*產品主峰拖尾因子應不大

8、于 2.0，理論塔板數應不低于 3000；標準液連續進樣 6 次，主峰面積的相對標準偏差應不大于 5.0%，保留時間的相對標準偏差應不大于 1.0%。6.2 專屬性專屬性a) 溶劑空白：取空白進樣，記錄色譜圖，溶劑對測定應無干擾。b) 樣品液：取本品25mg，精密稱定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。進樣分析，主峰與相鄰雜質之間的分離度應不小于1.5，主峰峰純度應不小于0.990。c)雜質1定位溶液：取雜質1約25mg，精密稱定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻度

9、。主峰峰純度應不小于0.990。d)雜質2定位溶液：取雜質2約25mg，精密稱定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻度。主峰峰純度應不小于0.990。e)雜質3定位溶液：取雜質3約25mg，精密稱定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻度。主峰峰純度應不小于0.990。*制藥股份有限公司文件編號：文件編號：題目題目*原料有關物質分析方法驗證方案原料有關物質分析方法驗證方案第第 7 頁頁 共共 12 頁頁f)雜質4定

10、位溶液：取雜質4約25mg，精密稱定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻度。主峰峰純度應不小于0.990。i)雜質5定位溶液：取雜質5約25mg，精密稱定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻度。主峰峰純度應不小于0.990。j)雜質6定位溶液：取雜質6約25mg，精密稱定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻度。主峰峰純度應

11、不小于0.990。k)雜質7定位溶液：取雜質7約25mg，精密稱定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻度。主峰峰純度應不小于0.990。l)雜質8定位溶液：取雜質8約25mg，精密稱定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻度。主峰峰純度應不小于0.990。m)雜質9定位溶液：取雜質9約25mg，精密稱定，置于一25ml量瓶中，用乙腈5ml溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取5.0ml至25ml容量瓶中，用稀釋液

12、溶解并稀釋至刻度。主峰峰純度應不小于0.990。n)雜質 10 定位溶液：取雜質 10 約 25mg，精密稱定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈5ml 溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。移取 5.0ml 至 25ml 容量瓶中，用稀釋液溶解并稀釋至刻度。主峰峰純度應不小于 0.990。o) 高溫破壞試驗：取在 60加熱 10 天的樣品 25mg，精密稱定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度，即得高溫破壞樣品溶液。進樣分析，主峰與相鄰雜質之間的分離度應不小于 1.5，主峰峰純度應不小于 0.990,記錄各雜質的變化。p) 高濕破壞實驗：取在相對濕度為

13、90%5%的條件下放置 10 天的樣品 25mg，精密稱定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度，即得高濕破壞樣品溶液。進樣分析，主峰與相鄰雜質之間的分離度應不小于 1.5，主峰峰純度應不小于 0.990,記錄各雜質的變化。q) 強光破壞試驗：取經取經總照度不低于1.2106Lux.hr 強白光,近紫外能量不低于200w.hr/m2破壞的的樣品 25mg，精密稱定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后*制藥股份有限公司文件編號：文件編號：題目題目*原料有關物質分析方法驗證方案原料有關物質分析方法驗證方案第第 8 頁頁 共共 12 頁頁用稀

14、釋液溶解并稀釋至刻度，即得強光破壞樣品溶液。進樣分析，主峰與相鄰雜質之間的分離度應不小于 1.5，主峰峰純度應不小于 0.990,記錄各雜質的變化。r) 酸破壞試驗：取樣品 25mg，置于 25ml 量瓶中，加入 0.1mol/L 鹽酸溶液1.00ml，25下放置 24 小時，然后用 0.1mol/L 氫氧化鈉溶液 1.00ml 中和，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度，即得酸破壞樣品溶液。進樣分析，主峰與相鄰雜質之間的分離度應不小于 1.5，主峰峰純度應不小于 0.990,記錄各雜質的變化。s) 堿破壞試驗：取樣品 25mg，置于 25ml 量瓶中，加入 0.1mol/L 氫

15、氧化鈉溶液1.00ml，25下放置 24 小時，然后用 0.1mol/L 鹽酸溶液 1.00ml 中和，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度，即得堿破壞樣品溶液。進樣分析，主峰與相鄰雜質之間的分離度應不小于 1.5，主峰峰純度應不小于 0.990,記錄各雜質的變化。t) 氧化破壞試驗：取樣品 25mg，置于 25ml 量瓶中，加入 10%過氧化氫溶液 1ml，25下放置 24 小時，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度，即得氧化破壞樣品溶液。進樣分析，主峰與相鄰雜質之間的分離度應不小于 1.5，主峰峰純度應不小于0.990,記錄各雜質的變化。i)根據雜質 110 的

16、定位溶液和*標準品溶液的主峰峰面積，計算響應因子，以*標準品為 1.0 計，計算各雜質的相對響應因子。6.3 檢測限與定量限檢測限與定量限a) 定量限：取*產品標準品 25mg，精密稱定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度；用稀釋液分步稀釋成一定濃度的溶液，進樣，獲得的色譜圖中，信噪比(S/N)為(1020):1 時，相應的濃度即為定量限濃度。定量限精密度：配制 6 個相同濃度的定量限溶液進樣，主峰保留時間的相對標準偏差應不大于 2.0%，峰面積的相對標準偏差應不大于 5.0%。定量限應不大于 0.05%。定量限準確度：LOQ 儲備溶液：根據 LOQ

17、測試結果配制 LOQ 儲備溶液，濃度為 LOQ 濃度的 5 倍。LOQ 濃度雜質標準溶液：移取雜質標準儲備溶液 5.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流動相稀釋至刻度。計算雜質的單位濃度峰面積。同法配制 3 個。供試液：取*產品 25mg，精密稱定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。同法配制 3 個。LOQ 回收率測試液：取*產品 25mg，精密稱定，置于一 25ml 量瓶中，精密加入 LOQ儲備液 5.0ml，用稀釋液稀釋至刻度(相當于雜質的 LOQ 濃度)。同法配制 3 個。分別取 LOQ 濃度雜質標準溶液、供試液進樣，計算雜質標準的單位濃度峰面

18、積和供*制藥股份有限公司文件編號：文件編號：題目題目*原料有關物質分析方法驗證方案原料有關物質分析方法驗證方案第第 9 頁頁 共共 12 頁頁試液中所含雜質的單位濃度峰面積。LOQ 回收率測試液各進樣 3 針，計算回收率，每個回收率及平均回收率應為 80120%，各回收率的相對標準偏差應不大于 15%。回收率(%)=計算濃度100%/實際濃度。b) 檢測限：取*產品標準品 25mg，精密稱定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度；用稀釋液分步稀釋成一定濃度的溶液，進樣，獲得的色譜圖中，信噪比(S/N)為(35):1 時，相應的濃度即為檢測限濃度。6.4

19、線性線性a)雜質標準儲備溶液：取雜質 1 約 10mg，雜質 2 約 50mg,雜質 3 約 15mg, 雜質 4 約75mg，雜質 5 約 10mg,雜質 6 約 50mg, 雜質 7 約 15mg，雜質 8 約 10mg,雜質 9 約 50mg, 雜質 10 約 50mg 至 100ml 容量瓶中，精密稱定，加乙腈 5ml 溶解后用流動相稀釋至刻度，再移取 2.0ml 至 20ml 容量瓶中，流動相稀釋至刻度。b)線性 L1 溶液：取檢測限與定量限項下的 LOQ 濃度雜質標準溶液。c)線性 L2 溶液：移取雜質標準儲備溶液 3.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流動相稀釋至刻度。計算雜質的

20、單位濃度峰面積。 （相當于 60%雜質限度，也可以不做，但至少保證有5 個點）d)線性 L3 溶液：移取雜質標準儲備溶液 4.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流動相稀釋至刻度。計算雜質的單位濃度峰面積。 （相當于 80%雜質限度）e)線性 L4 溶液：移取雜質標準儲備溶液 5.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流動相稀釋至刻度。計算雜質的單位濃度峰面積。 （相當于 100%雜質限度）f)線性 L5 溶液：移取雜質標準儲備溶液 6.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流動相稀釋至刻度。計算雜質的單位濃度峰面積。 （相當于 120%雜質限度）g)線性 L6 溶液：移取雜質標準儲備溶液 7.0ml

21、至 25ml 容量瓶中，用流動相稀釋至刻度。計算雜質的單位濃度峰面積。 （相當于 140%雜質限度）進樣，記錄色譜圖，以樣品濃度(g/ml)為橫坐標，以峰面積為縱坐標進行線性回歸計算，得出線性回歸方程及相關系數。線性范圍為雜質的定量限濃度至約 1.4 倍最大允許雜質限度濃度，相關系數 R 應不小于 0.990，Y 軸截距應在 100%響應值的 25%以內，響應因子的相對標準偏差應不大于 10%。6.5 準確度準確度a)雜質標準儲備溶液：取雜質 1 約 10mg，雜質 2 約 50mg,雜質 3 約 15mg, 雜質 4 約75mg，雜質 5 約 10mg,雜質 6 約 50mg, 雜質 7 約

22、 15mg，雜質 8 約 10mg,雜質 9 約 50mg, *制藥股份有限公司文件編號：文件編號：題目題目*原料有關物質分析方法驗證方案原料有關物質分析方法驗證方案第第 10 頁頁 共共 12 頁頁雜質 10 約 50mg 至 100ml 容量瓶中，精密稱定，加乙腈 5ml 溶解后用流動相稀釋至刻度，再移取 2.0ml 至 20ml 容量瓶中，流動相稀釋至刻度。b)LOQ 儲備溶液：根據 LOQ 測試結果配制 LOQ 儲備溶液，濃度為 LOQ 濃度的 5 倍。c)雜質標準溶液：移取雜質標準儲備溶液 5.0ml 至 25ml 容量瓶中，用流動相稀釋至刻度。同法配制 3 個。計算雜質的單位濃度峰

23、面積。 （相當于雜質限度溶液）d)供試液：取*產品 25mg，精密稱定，置于一 25ml 量瓶中，用乙腈 5ml 溶解，然后用稀釋液溶解并稀釋至刻度。同法配制 3 個。計算樣品中各雜質的單位濃度峰面積，用于扣除回收率測試中扣除空白的依據。e)回收率測試液 1：取*產品 25mg，精密稱定，置于一 25ml 量瓶中，精密加入上述雜質標準液儲備液 5.0ml，用稀釋液稀釋至刻度(相當于雜質的限度)。f)回收率測試液 2：取*產品 25mg，精密稱定，置于一 25ml 量瓶中，精密加入上述雜質標準液儲備液 7.0ml，用稀釋液稀釋至刻度(相當于雜質的限度的 1.4 倍)。i)回收率測試液 3：取*產

24、品 25mg，精密稱定，置于一 25ml 量瓶中，精密加入 LOQ儲備液 5.0ml，用稀釋液稀釋至刻度(相當于雜質的 LOQ 濃度)。(也可以配制相當于雜質限度的 0.8 倍的溶液，但是為了減少工作量，還是最好做 LOQ 點的回收率)。分別取雜質標準溶液、供試液、回收率測試液 1、回收率測試液 2、回收率測試液 3各連續進樣 3 次，按外標法以峰面積計算*產品的量，并計算回收率，每個回收率及平均回收率應為 80120%，各回收率的相對標準偏差應不大于 15%。回收率(%)=計算濃度100%/實際濃度。6.6 精密度精密度a)重復性：稱取*產品樣品適量，照有關物質檢查方法配制樣品溶液，同法配制

25、 6份樣品溶液，進樣測試，各雜質測定結果的相對標準偏差均應不大于 10%。b) 中間精密度：不同儀器(Agilent 1200)、不同檢驗人員(另一位化驗員)、新配制的流動相、新配制的樣品液及標準液，與重復性測試測同一批樣品，各雜質測定結果的相對標準偏差均應不大于 10%。c) 精密度測試結果：重復性測定結果的平均值與中間精密度測定結果的平均值之間的相對偏差不大于 20%。6.6 范圍范圍 根據線性、精密度和準確度確定方法的范圍，在該濃度范圍內，方法具有良好的精*制藥股份有限公司文件編號：文件編號：題目題目*原料有關物質分析方法驗證方案原料有關物質分析方法驗證方案第第 11 頁頁 共共 12

26、頁頁密度、線性和準確度。范圍至少在 0.05%質量指標的 140%范圍內。6.7 耐用性耐用性a) 色譜條件的影響：在其他條件不變情況下，單獨改變柱溫、流速、色譜柱、緩沖液 pH 值、有機相比例、流動相比例等其中一個色譜條件，取分離度測試液分別進樣，*產品與*雜質之間的分離度應不小于 2.0。改變項目柱溫流速(ml/分鐘)色譜柱緩沖液pH 值甲醇、乙腈比例A、B 相初始比例設定值20300.851.05另一支2.803.2055:4545:5580:2070:30b) 溶液穩定性：按本方法配制標準溶液、供試品溶液和分離度溶液，供試品溶液分別放置 0h，4h，8h，24h，48h，36h 后進樣

27、測定，考察溶液的穩定性。要求標準品溶液的峰面積相對 0h 的增長率在5%范圍內，供試品中各雜質的增長相對 0h 不超過20%，且無新的雜質產生，分離度溶液分離度不小于 2.0。則表明溶液在這段時間內穩定，否則說明溶液不穩定，需根據溶液穩定性結果考慮配制和進樣時間。6.8 樣品測定樣品測定應用本方法，對 3 批樣品進行測定，樣品各雜質均應能夠符合限度要求。7.偏差偏差驗證過程中如果出現偏差應及時進行調查和上報，并且采取適當的措施進行處理，并及時記錄。如經調查確定偏差的性質會對驗證結果產生實質影響，應確定原因并采取必要措施后重新進行驗證。8.風險的接收與評審風險的接收與評審經分析，對上一步判斷的風

28、險采取的控制措施，若經檢查確認符合要求，則其相應的風險可降至為可接受風險。否則，需采取進一步的措施降低風險。9.再驗證再驗證發生下列情形之一時，需進行再驗證。（1）生產工藝發生改變。 （2）檢驗方法發生改變。10.確認結果評審和結論確認結果評審和結論驗證小組負責收集各項驗證、試驗結果記錄，根據驗證、試驗結果起草驗證報告，*制藥股份有限公司文件編號：文件編號：題目題目*原料有關物質分析方法驗證方案原料有關物質分析方法驗證方案第第 12 頁頁 共共 12 頁頁報驗證委員會。驗證委員會負責對驗證結果進行綜合評審，做出驗證結論，確認再驗證周期。對驗證結果的評審應包括：確認試驗是否有遺漏？確認試驗過程中對驗證方案有無修改，修改原因、依據以及是否經過批準？確認記錄是否完整？確認試驗結果是否符合標準要求？偏差及對偏差說明是否合理？是否需要進一步補充試驗？11.更改歷史更改歷史12. 附錄附錄附錄 1 *原料有關物質分析方法guideline on the limits of genotoxic impurities版本號生效日期主要變更描述第 1 版本文檔為新訂*制藥股份有限公司附錄附錄 1 *原料有關物質分析方法原料有關物質分析方法1 儀器：LC-2010AHT高效液相色譜儀（日本島津公司） ，紫外檢測器。2 標準品及試劑 *標準品 來源:U