1、微生物學(xué)微生物學(xué)(wi shn w xu)(wi shn w xu)檢驗(yàn)檢驗(yàn)第一頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)第二頁(yè)，共六十八頁(yè)。第五章第五章 細(xì)菌檢驗(yàn)細(xì)菌檢驗(yàn)(jinyn)(jinyn)技術(shù)技術(shù) 第三頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)本本 章章 內(nèi)內(nèi) 容容第一節(jié)第一節(jié) 細(xì)菌形態(tài)檢驗(yàn)技術(shù)細(xì)菌形態(tài)檢驗(yàn)技術(shù)1第二節(jié)第二節(jié) 細(xì)菌接種與培養(yǎng)技術(shù)細(xì)菌接種與培養(yǎng)技術(shù)2第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)菌生化鑒定技術(shù)細(xì)菌生化鑒定技術(shù)3第四節(jié)第四節(jié) 微生物檢驗(yàn)的自動(dòng)化與微型化微生物檢驗(yàn)的自動(dòng)化與微型化4第五節(jié)第五節(jié) 細(xì)菌的其他鑒定技術(shù)細(xì)菌的其他鑒定技術(shù)5第四頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)本章本章(bn zhn)(bn zhn)內(nèi)容內(nèi)容學(xué)

2、習(xí)目標(biāo)學(xué)習(xí)目標(biāo)： 掌握：掌握：革蘭染色的原理(yunl)、操作及結(jié)果判斷；細(xì)菌接種技 術(shù)、培養(yǎng)方法、細(xì)菌在不同培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象、生化反應(yīng)的原理(yunl)。 熟悉：熟悉：細(xì)菌染色標(biāo)本檢查的基本程序，細(xì)菌培養(yǎng)常用培養(yǎng)基和器材。 了解：了解：細(xì)菌不染色標(biāo)本的檢查方法和用途；免疫學(xué)技術(shù)、分子生物學(xué)技術(shù)及自動(dòng)化檢測(cè)技術(shù)等鑒定微生物。 本章重點(diǎn)本章重點(diǎn)：革蘭染色的原理、操作方法及意義 細(xì)菌培養(yǎng)及生長(zhǎng)現(xiàn)象 細(xì)菌生化反應(yīng)及臨床應(yīng)用第五頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 細(xì)菌形態(tài)檢驗(yàn)細(xì)菌形態(tài)檢驗(yàn)(jinyn)(jinyn)技術(shù)技術(shù)一、染色一、染色(rns)(rns)標(biāo)本鏡檢標(biāo)本鏡檢 （一）染色標(biāo)本檢查

3、的一般程序（一）染色標(biāo)本檢查的一般程序第六頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 細(xì)菌形態(tài)細(xì)菌形態(tài)(xngti)(xngti)檢驗(yàn)技術(shù)檢驗(yàn)技術(shù)1.單染色法 細(xì)菌標(biāo)本(biobn)經(jīng)涂片、干燥固定后，滴加染液染色1分鐘，水洗后待玻片燥后即可鏡檢（二）常用（二）常用(chn yn)的染色方法的染色方法第七頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 細(xì)菌細(xì)菌(xjn)(xjn)形態(tài)檢驗(yàn)技術(shù)形態(tài)檢驗(yàn)技術(shù)（二）常用（二）常用(chn yn)的染色方法的染色方法 2.革蘭染色法 【方法】 第八頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 細(xì)菌形態(tài)細(xì)菌形態(tài)(xngti)(xngti)檢驗(yàn)技術(shù)檢驗(yàn)技術(shù)（二）常用的

4、染色方法（二）常用的染色方法(fngf) 2.革蘭染色法【結(jié)果】紫色革蘭陽(yáng)性菌（1000）紅色革蘭陰性菌（1000）第九頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 細(xì)菌形態(tài)檢驗(yàn)細(xì)菌形態(tài)檢驗(yàn)(jinyn)(jinyn)技術(shù)技術(shù)（二）常用的染色（二）常用的染色(rns)方法方法 3.抗酸染色法 【結(jié)果】 抗酸染色結(jié)果（1000）：紅色(hngs)為抗酸桿菌，藍(lán)色為非抗酸桿菌第十頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 細(xì)菌形態(tài)細(xì)菌形態(tài)(xngti)(xngti)檢驗(yàn)技術(shù)檢驗(yàn)技術(shù)（三）其他（三）其他(qt)染色法染色法 1.特殊結(jié)構(gòu)染色法 （1）莢膜染色法莢膜染色(rns)結(jié)果，1000第十一頁(yè)，共六

5、十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 細(xì)菌細(xì)菌(xjn)(xjn)形態(tài)檢驗(yàn)技術(shù)形態(tài)檢驗(yàn)技術(shù)（三）其他（三）其他(qt)染色法染色法 1.特殊結(jié)構(gòu)染色法 （2）鞭毛染色法鞭毛染色(rns)結(jié)果，1000第十二頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 細(xì)菌形態(tài)檢驗(yàn)細(xì)菌形態(tài)檢驗(yàn)(jinyn)(jinyn)技術(shù)技術(shù)（三）其他（三）其他(qt)染色法染色法 1.特殊結(jié)構(gòu)染色法 （3）芽孢染色法芽孢染色(rns)結(jié)果，1000第十三頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 細(xì)菌形態(tài)細(xì)菌形態(tài)(xngti)(xngti)檢驗(yàn)技術(shù)檢驗(yàn)技術(shù)（三）其他染色法（三）其他染色法1.特殊結(jié)構(gòu)(jigu)染色法 （4）異染顆粒

6、染色法 異染顆粒亞甲藍(lán)染色結(jié)果：白喉(bihu)棒狀桿菌，1000第十四頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 細(xì)菌細(xì)菌(xjn)(xjn)形態(tài)檢驗(yàn)技術(shù)形態(tài)檢驗(yàn)技術(shù)（三）其他（三）其他(qt)染色法染色法 2.負(fù)染色法 墨汁莢膜染色（腦脊液中的新型(xnxng)隱球菌，400）第十五頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 細(xì)菌形態(tài)檢驗(yàn)細(xì)菌形態(tài)檢驗(yàn)(jinyn)(jinyn)技術(shù)技術(shù)二、不染色二、不染色(rns)(rns)標(biāo)本鏡檢標(biāo)本鏡檢 1.壓滴法 壓滴法鏡檢結(jié)果(ji gu)：尿涂片，400第十六頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 細(xì)菌形態(tài)檢驗(yàn)細(xì)菌形態(tài)檢驗(yàn)(jinyn)(jinyn

7、)技術(shù)技術(shù)二、不染色二、不染色(rns)(rns)標(biāo)本鏡檢標(biāo)本鏡檢 2.懸滴法 第十七頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 細(xì)菌形態(tài)檢驗(yàn)細(xì)菌形態(tài)檢驗(yàn)(jinyn)(jinyn)技術(shù)技術(shù)二、不染色二、不染色(rns)(rns)標(biāo)本鏡檢標(biāo)本鏡檢 3.毛細(xì)管法 第十八頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)三、其他三、其他(qt)(qt)顯微鏡檢查顯微鏡檢查第一節(jié)第一節(jié) 細(xì)菌細(xì)菌(xjn)(xjn)形態(tài)檢驗(yàn)技術(shù)形態(tài)檢驗(yàn)技術(shù)第十九頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)第二節(jié)第二節(jié) 細(xì)菌接種與培養(yǎng)細(xì)菌接種與培養(yǎng)(piyng)(piyng)技術(shù)技術(shù)一、基本一、基本(jbn)條件條件 接種接種(jizhng)環(huán)環(huán)培養(yǎng)皿培養(yǎng)皿

8、紅外接種滅菌器紅外接種滅菌器第二十頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)培培 養(yǎng)養(yǎng) 箱箱生物生物(shngw)安全柜安全柜第二節(jié)第二節(jié) 細(xì)菌接種細(xì)菌接種(jizhng)(jizhng)與培養(yǎng)技術(shù)與培養(yǎng)技術(shù)一、基本一、基本(jbn)條條件件第二十一頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù) 培養(yǎng)基成份培養(yǎng)基成份(chng fn)(chng fn)培養(yǎng)基：人工配制的適合細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖(fnzh)的綜合營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：牛肉膏、蛋白胨、肉浸液、糖醇類、血液、雞蛋及動(dòng)物血清、生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽等水凝固劑：瓊脂、明膠抑制劑：孔雀綠、煌綠、膽鹽、抗生素等 指示劑：溴麝香草酚藍(lán)，溴甲酚紫、酚紅等 第二節(jié)第二節(jié) 細(xì)菌接種與培養(yǎng)細(xì)菌接種

9、與培養(yǎng)(piyng)(piyng)技術(shù)技術(shù)第二十二頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)第二節(jié)第二節(jié) 細(xì)菌接種與培養(yǎng)細(xì)菌接種與培養(yǎng)(piyng)(piyng)技術(shù)技術(shù)基礎(chǔ)培養(yǎng)基：普通瓊脂平板營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基：滿足營(yíng)養(yǎng)需求較高細(xì)菌的生長(zhǎng)，如血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板等鑒別培養(yǎng)基：含有某些特定的底物，用于鑒別細(xì)菌，如克氏雙糖(shun tn)鐵培養(yǎng)基（KIA）及各種生化反應(yīng)用培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基：具有選擇性抑制非目的菌生長(zhǎng)作用，用于選擇性培養(yǎng)目的菌，如SS平板、中國(guó)藍(lán)瓊脂平板、伊紅美藍(lán)瓊脂平板等增菌培養(yǎng)基：用于含菌量較少的標(biāo)本，如葡萄糖肉湯、GN增菌肉湯特殊培養(yǎng)基：厭氧培養(yǎng)基、L型細(xì)菌培養(yǎng)基培養(yǎng)基種類培養(yǎng)基種類(zh

10、ngli)（按用途分）（按用途分）第二十三頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)培養(yǎng)基培養(yǎng)基第二節(jié)第二節(jié) 細(xì)菌接種細(xì)菌接種(jizhng)(jizhng)與培養(yǎng)技術(shù)與培養(yǎng)技術(shù)第二十四頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)第二節(jié)第二節(jié) 細(xì)菌接種細(xì)菌接種(jizhng)(jizhng)與培養(yǎng)技術(shù)與培養(yǎng)技術(shù)液體液體(yt)培養(yǎng)基培養(yǎng)基第二十五頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基的種類(zhngli)(zhngli)（按物理性狀分類）（按物理性狀分類）液 體 培 養(yǎng) 基： 不 含 凝 固 劑 ， 用 于 增 菌 和 接 種 純 種 細(xì) 菌 。半 固 體 培 養(yǎng) 基 ： 含0 . 2 0 . 5 瓊 脂 ， 用

11、于 觀 察 細(xì) 菌 的 動(dòng) 力 。固 體 培 養(yǎng) 基： 含2 3 瓊 脂 ， 用 于 細(xì) 菌 的 分 離( f n l )培 養(yǎng) 。第二節(jié)第二節(jié) 細(xì)菌接種與培養(yǎng)細(xì)菌接種與培養(yǎng)(piyng)(piyng)技術(shù)技術(shù)第二十六頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)第二節(jié)第二節(jié) 細(xì)菌細(xì)菌(xjn)(xjn)接種與培養(yǎng)技術(shù)接種與培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)基滅菌培養(yǎng)基滅菌(mi jn) 基礎(chǔ)基礎(chǔ)(jch)(jch)培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：121121高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌1515分鐘分鐘 含糖培養(yǎng)基：含糖培養(yǎng)基：113 113 滅菌滅菌1515分鐘分鐘 含雞蛋、血清培養(yǎng)基：間歇滅菌含雞蛋、血清培養(yǎng)基：間歇滅菌3 3天天3 3次次 不耐高

12、溫的液體成分：濾過(guò)除菌不耐高溫的液體成分：濾過(guò)除菌調(diào)配調(diào)配溶化溶化調(diào)調(diào)PhPh過(guò)濾澄清過(guò)濾澄清分裝分裝滅菌滅菌檢定檢定保存保存培養(yǎng)基制備程序培養(yǎng)基制備程序第二十七頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù) （一）無(wú)菌技術(shù)（一）無(wú)菌技術(shù)(jsh)(jsh)u 細(xì)菌檢驗(yàn)的操作(cozu)應(yīng)在無(wú)菌室或生物安全柜內(nèi)進(jìn)行u 無(wú)菌室、生物安全柜使用前后均需進(jìn)行消毒滅菌u 細(xì)菌檢驗(yàn)使用過(guò)的物品使用前后需嚴(yán)格滅菌處理u 標(biāo)本的采集嚴(yán)格無(wú)菌操作u 無(wú)菌試管、燒瓶的使用時(shí)注意管口滅菌第二節(jié)第二節(jié) 細(xì)菌細(xì)菌(xjn)(xjn)接種與培養(yǎng)技術(shù)接種與培養(yǎng)技術(shù)二、細(xì)菌接種與培養(yǎng)技術(shù)二、細(xì)菌接種與培養(yǎng)技術(shù)第二十八頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)

13、技術(shù) （二）細(xì)菌接種（二）細(xì)菌接種(jizhng)與分離技術(shù)與分離技術(shù)第二節(jié)第二節(jié) 細(xì)菌接種細(xì)菌接種(jizhng)(jizhng)與培養(yǎng)技術(shù)與培養(yǎng)技術(shù)滅菌接種(jizhng)環(huán)（針）冷卻挑取標(biāo)本（細(xì)菌）接種滅菌接種環(huán)（針）平板劃線法 分區(qū)劃線連續(xù)劃線 第二十九頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)分區(qū)分區(qū)(fn q)(fn q)劃線法劃線法第一第一(dy)區(qū)劃線區(qū)劃線滅菌滅菌(mi jn)接接種環(huán)種環(huán)第二區(qū)劃線第二區(qū)劃線滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán)第三區(qū)劃線第三區(qū)劃線滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán)第二節(jié)第二節(jié) 細(xì)菌接種與培養(yǎng)技術(shù)細(xì)菌接種與培養(yǎng)技術(shù)第三十頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)連續(xù)連續(xù)(linx)(linx)劃線法劃

14、線法第二節(jié)第二節(jié) 細(xì)菌接種細(xì)菌接種(jizhng)(jizhng)與培養(yǎng)技術(shù)與培養(yǎng)技術(shù)第三十一頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)斜面(ximin)接種半固體(gt)穿刺接種液體(yt)接種第二節(jié)第二節(jié) 細(xì)菌接種與培養(yǎng)技術(shù)細(xì)菌接種與培養(yǎng)技術(shù)第三十二頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)（三）細(xì)菌培養(yǎng)（三）細(xì)菌培養(yǎng)(piyng)(piyng)方法方法一般培養(yǎng)（需氧培養(yǎng)）：培養(yǎng)需氧或兼性厭氧菌培養(yǎng)溫度：35 37 培養(yǎng)時(shí)間：1824小時(shí)二氧化碳培養(yǎng)法：燭缸法、二氧化碳(r yng hu tn)培養(yǎng)箱厭氧培養(yǎng)法：厭氧培養(yǎng)箱、厭氧袋、厭氧罐、皰肉培養(yǎng)法、硫乙醇酸鹽法等培養(yǎng)厭氧菌第二節(jié)第二節(jié) 細(xì)菌接種與培養(yǎng)細(xì)菌接種與培養(yǎng)

15、(piyng)(piyng)技術(shù)技術(shù)第三十三頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)三、細(xì)菌(xjn)的生長(zhǎng)現(xiàn)象第二節(jié)第二節(jié) 細(xì)菌接種細(xì)菌接種(jizhng)(jizhng)與培養(yǎng)技術(shù)與培養(yǎng)技術(shù)菌落(jnlu)與菌苔血平板上溶血現(xiàn)象第三十四頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)細(xì)菌在液體(yt)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)現(xiàn)象第二節(jié)第二節(jié) 細(xì)菌細(xì)菌(xjn)(xjn)接種與培養(yǎng)技術(shù)接種與培養(yǎng)技術(shù)菌膜對(duì)照沉淀渾濁沿穿剌線擴(kuò)散沿穿剌線擴(kuò)散(kusn)生長(zhǎng)生長(zhǎng)在穿剌線上生長(zhǎng)在穿剌線上生長(zhǎng)細(xì)菌在半固體培養(yǎng)基中的現(xiàn)象第三十五頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)一、碳水化合物的代謝一、碳水化合物的代謝(dixi)試驗(yàn)試驗(yàn)第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)菌細(xì)菌(xjn

16、)(xjn)生化鑒定技術(shù)生化鑒定技術(shù)原理：多糖原理：多糖單糖單糖(dn tn)(dn tn)丙酮酸丙酮酸酸性產(chǎn)物酸性產(chǎn)物( (或產(chǎn)氣或產(chǎn)氣) )pH pH 呈酸性變色呈酸性變色( (或出現(xiàn)氣泡或出現(xiàn)氣泡) )方法：方法： 將待檢細(xì)菌以無(wú)菌操作接種到糖發(fā)酵管將待檢細(xì)菌以無(wú)菌操作接種到糖發(fā)酵管中，置中，置3535溫箱培養(yǎng)溫箱培養(yǎng)181824h24h，觀察結(jié)果。，觀察結(jié)果。1 1、糖（醇、苷）類發(fā)酵試驗(yàn)、糖（醇、苷）類發(fā)酵試驗(yàn)結(jié) 果第三十六頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)一、碳水化合物的代謝一、碳水化合物的代謝(dixi)試試驗(yàn)驗(yàn)第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)菌生化細(xì)菌生化(shn hu)(shn hu)鑒定技術(shù)鑒定

17、技術(shù)原理：根據(jù)細(xì)菌在分解葡萄糖的代謝過(guò)程中對(duì)原理：根據(jù)細(xì)菌在分解葡萄糖的代謝過(guò)程中對(duì)氧分子需求氧分子需求(xqi)(xqi)的不同，將細(xì)菌分為氧化、的不同，將細(xì)菌分為氧化、發(fā)酵和產(chǎn)堿型三類發(fā)酵和產(chǎn)堿型三類 2 2、 O/FO/F試驗(yàn)試驗(yàn)結(jié) 果方法：取方法：取2 2支支HLHL葡萄糖培養(yǎng)管煮葡萄糖培養(yǎng)管煮沸驅(qū)氧，冷卻后接種細(xì)菌。將其中沸驅(qū)氧，冷卻后接種細(xì)菌。將其中一管敞開(kāi)，另一管用液體石蠟封管，一管敞開(kāi)，另一管用液體石蠟封管，培養(yǎng)培養(yǎng)18 18 24h24h觀察結(jié)果觀察結(jié)果第三十七頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù) 3 3、甲基紅試驗(yàn)、甲基紅試驗(yàn)(shyn)(shyn)第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)菌細(xì)菌(xjn)

18、(xjn)生化鑒定技術(shù)生化鑒定技術(shù)原理：細(xì)菌發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)生丙酮原理：細(xì)菌發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)生丙酮酸，進(jìn)一步分解生成大量混合酸，酸，進(jìn)一步分解生成大量混合酸，使培養(yǎng)使培養(yǎng)pHpH下降至下降至4.44.4以下，加入甲基紅以下，加入甲基紅后，呈現(xiàn)后，呈現(xiàn)(chngxin)(chngxin)紅色反應(yīng)。為甲基紅紅色反應(yīng)。為甲基紅試驗(yàn)陽(yáng)性。試驗(yàn)陽(yáng)性。方法：將待檢菌種接種于葡萄糖蛋白方法：將待檢菌種接種于葡萄糖蛋白胨水中胨水中,35,35培養(yǎng)培養(yǎng)18241824小時(shí)后小時(shí)后, ,往培養(yǎng)基往培養(yǎng)基中加入甲基紅指示劑少許中加入甲基紅指示劑少許, ,觀察結(jié)果。觀察結(jié)果。結(jié)結(jié) 果果第三十八頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)

19、 4 4、V-PV-P試驗(yàn)試驗(yàn)(shyn)(shyn)第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)菌生化鑒定細(xì)菌生化鑒定(jindng)(jindng)技術(shù)技術(shù)原理：細(xì)菌分解葡萄糖原理：細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸脫產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸脫羧生成乙酰甲基甲醇羧生成乙酰甲基甲醇(ji (ji chn)chn)，在堿性環(huán)境中，在堿性環(huán)境中，乙酰甲基甲醇乙酰甲基甲醇(ji chn)(ji chn)被被氧化為二乙酰，二乙酰氧化為二乙酰，二乙酰與胍基化合物結(jié)合，生與胍基化合物結(jié)合，生成紅色化合物，是為成紅色化合物，是為V-V-P P試驗(yàn)陽(yáng)性。試驗(yàn)陽(yáng)性。方法：把待檢細(xì)菌接種在葡萄糖蛋白胨方法：把待檢細(xì)菌接種在葡萄糖蛋白胨水中，水中，

20、3535培養(yǎng)培養(yǎng)1824h1824h后，按每毫升培養(yǎng)后，按每毫升培養(yǎng)液加入液加入0.1ml0.1ml含含2 2肌酸或肌酐的肌酸或肌酐的4040KOHKOH溶溶液液, ,數(shù)分鐘或數(shù)小時(shí)后觀察結(jié)果。數(shù)分鐘或數(shù)小時(shí)后觀察結(jié)果。結(jié)結(jié) 果果空白對(duì)照空白對(duì)照 陰性陰性 陽(yáng)性陽(yáng)性第三十九頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù) 5 5、 -半乳糖苷酶試驗(yàn)半乳糖苷酶試驗(yàn)(shyn)(shyn)（ONPGONPG）第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)菌生化細(xì)菌生化(shn hu)(shn hu)鑒定技術(shù)鑒定技術(shù)原理：有的細(xì)菌可原理：有的細(xì)菌可產(chǎn)生產(chǎn)生-半乳糖苷酶，半乳糖苷酶，能分解能分解(fnji)(fnji)鄰硝鄰硝基酚基酚-D-D半乳糖苷

21、半乳糖苷(ONPG)(ONPG)而生成黃色而生成黃色的鄰硝基苯酚，該試的鄰硝基苯酚，該試驗(yàn)也稱為驗(yàn)也稱為ONPGONPG試驗(yàn)試驗(yàn)。 方法：將被檢制成菌懸液，加入方法：將被檢制成菌懸液，加入1 1滴甲苯充滴甲苯充分振搖，分振搖，3737水浴水浴5 5 分鐘，使酶釋放，然后再分鐘，使酶釋放，然后再加入加入0.25ml ONPG0.25ml ONPG，混勻后，置于，混勻后，置于3737水浴水浴中溫育，菌懸液呈黃色為陽(yáng)性反應(yīng)。中溫育，菌懸液呈黃色為陽(yáng)性反應(yīng)。 結(jié)結(jié) 果果陰性陰性 陽(yáng)性陽(yáng)性第四十頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù) 6 6、七葉七葉(q y)(q y)苷水解試驗(yàn)苷水解試驗(yàn) 第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)菌生化

22、鑒定細(xì)菌生化鑒定(jindng)(jindng)技術(shù)技術(shù)原理：原理：某些細(xì)菌能分解七葉苷產(chǎn)生某些細(xì)菌能分解七葉苷產(chǎn)生(chnshng)(chnshng)葡萄糖與七葉素，七葉素與培養(yǎng)葡萄糖與七葉素，七葉素與培養(yǎng)基中的基中的Fe2+Fe2+結(jié)合后，形成黑色的化合物，使培結(jié)合后，形成黑色的化合物，使培養(yǎng)基變黑。養(yǎng)基變黑。 方法：將待檢細(xì)菌接方法：將待檢細(xì)菌接種到七葉苷培養(yǎng)基上，種到七葉苷培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后觀察結(jié)果，培培養(yǎng)后觀察結(jié)果，培養(yǎng)基變黑色者為陽(yáng)性，養(yǎng)基變黑色者為陽(yáng)性，培養(yǎng)基不變色為陰性。培養(yǎng)基不變色為陰性。 結(jié)結(jié) 果果+-第四十一頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù) 二、二、蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝蛋白質(zhì)和

23、氨基酸的代謝(dixi)第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)菌生化鑒定細(xì)菌生化鑒定(jindng)(jindng)技術(shù)技術(shù)原理：細(xì)菌產(chǎn)生色氨酸酶，分解培養(yǎng)基中原理：細(xì)菌產(chǎn)生色氨酸酶，分解培養(yǎng)基中色氨酸，生成靛基質(zhì)（吲哚），靛基質(zhì)與色氨酸，生成靛基質(zhì)（吲哚），靛基質(zhì)與對(duì)二甲基氨基苯甲醛作用對(duì)二甲基氨基苯甲醛作用(zuyng)(zuyng)，生成，生成玫瑰靛基質(zhì)，玫瑰靛基質(zhì)， 是為靛基質(zhì)試驗(yàn)陽(yáng)性。是為靛基質(zhì)試驗(yàn)陽(yáng)性。方法：將待檢菌接種于蛋白胨水中，方法：將待檢菌接種于蛋白胨水中，3535培養(yǎng)培養(yǎng)181824h24h，取出后沿試管壁加，取出后沿試管壁加入靛基質(zhì)試劑數(shù)滴，在兩液面觀察結(jié)果。入靛基質(zhì)試劑數(shù)滴，在兩液面觀察結(jié)

24、果。結(jié)結(jié) 果果1、靛基質(zhì)（吲哚）試驗(yàn)靛基質(zhì)（吲哚）試驗(yàn)第四十二頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù) 二、二、蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝(dixi)第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)菌細(xì)菌(xjn)(xjn)生化鑒定技術(shù)生化鑒定技術(shù)原理原理(yunl)(yunl)：細(xì)菌產(chǎn)生酶，分解含硫氨細(xì)菌產(chǎn)生酶，分解含硫氨基酸生成硫化氫，硫化氫與培養(yǎng)基中的亞鐵基酸生成硫化氫，硫化氫與培養(yǎng)基中的亞鐵鹽或鉛鹽結(jié)合生成黑色化合物。鹽或鉛鹽結(jié)合生成黑色化合物。方法：方法：將細(xì)菌穿刺接種到醋將細(xì)菌穿刺接種到醋酸鉛培養(yǎng)基中，酸鉛培養(yǎng)基中， 3535、181824h24h，觀察結(jié)果。，觀察結(jié)果。結(jié)果：結(jié)果：黑色黑色管為陽(yáng)性管為陽(yáng)性2、

25、硫化氫試驗(yàn)、硫化氫試驗(yàn)第四十三頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù) 二、二、蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝(dixi)第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)菌生化細(xì)菌生化(shn hu)(shn hu)鑒定技術(shù)鑒定技術(shù)原理：原理：細(xì)菌細(xì)菌(xjn)產(chǎn)生產(chǎn)生脲酶，水解尿素生成氨脲酶，水解尿素生成氨和二氧化碳，培養(yǎng)基呈和二氧化碳，培養(yǎng)基呈堿性反應(yīng)堿性反應(yīng)方法：將待檢菌接方法：將待檢菌接種于尿素培養(yǎng)基中，種于尿素培養(yǎng)基中，3535培養(yǎng)培養(yǎng)181824h24h取取出觀察。出觀察。結(jié)結(jié) 果果3、尿素酶試驗(yàn)?zāi)蛩孛冈囼?yàn) - +第四十四頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù) 二、二、蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝(dixi)第三

26、節(jié)第三節(jié) 細(xì)菌生化細(xì)菌生化(shn hu)(shn hu)鑒定技術(shù)鑒定技術(shù)原理：原理：細(xì)菌產(chǎn)生苯丙氨酸脫氨酶，使細(xì)菌產(chǎn)生苯丙氨酸脫氨酶，使苯丙氨酸脫氨形成苯丙氨酸脫氨形成(xngchng)苯丙酮苯丙酮酸，苯丙酮酸與三氯化鐵作用，形成酸，苯丙酮酸與三氯化鐵作用，形成(xngchng)綠色化合物綠色化合物方法：將待檢菌接種于苯丙氨酸方法：將待檢菌接種于苯丙氨酸微量培養(yǎng)管中（接種量稍大），微量培養(yǎng)管中（接種量稍大），培養(yǎng)后在培養(yǎng)基上直接滴加培養(yǎng)后在培養(yǎng)基上直接滴加1010氯化鐵試劑，出現(xiàn)綠色反應(yīng)者為陽(yáng)氯化鐵試劑，出現(xiàn)綠色反應(yīng)者為陽(yáng)性。性。 結(jié)結(jié) 果果4、苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn) - +第

27、四十五頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù) 三、碳源利用三、碳源利用(lyng)(lyng)試驗(yàn)試驗(yàn) 第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)菌生化細(xì)菌生化(shn hu)(shn hu)鑒定技術(shù)鑒定技術(shù)原理：原理：有的細(xì)菌能利用培養(yǎng)基中的枸櫞有的細(xì)菌能利用培養(yǎng)基中的枸櫞酸鹽作為唯一酸鹽作為唯一(wi y)的碳源，細(xì)菌在生的碳源，細(xì)菌在生長(zhǎng)過(guò)程中分解枸櫞酸鹽產(chǎn)生碳酸鹽，使長(zhǎng)過(guò)程中分解枸櫞酸鹽產(chǎn)生碳酸鹽，使培養(yǎng)基呈堿性反應(yīng)培養(yǎng)基呈堿性反應(yīng)方法：將待檢菌接種于枸櫞酸鹽培養(yǎng)方法：將待檢菌接種于枸櫞酸鹽培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后觀察結(jié)果。培養(yǎng)基由淡基上，培養(yǎng)后觀察結(jié)果。培養(yǎng)基由淡綠色變?yōu)樯钏{(lán)色者為陽(yáng)性，培養(yǎng)基中綠色變?yōu)樯钏{(lán)色者為陽(yáng)性，培養(yǎng)基中

28、無(wú)菌生長(zhǎng)、仍為綠色者為陰性。無(wú)菌生長(zhǎng)、仍為綠色者為陰性。結(jié)結(jié) 果果枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)枸櫞酸鹽利用試驗(yàn) + -第四十六頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù) 四、酶類試驗(yàn)四、酶類試驗(yàn)(shyn)(shyn) 第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)菌生化細(xì)菌生化(shn hu)(shn hu)鑒定技術(shù)鑒定技術(shù)原理：原理：某些某些(mu xi)(mu xi)細(xì)菌具有氧化酶細(xì)菌具有氧化酶（細(xì)胞色素氧化酶），能將二甲基（細(xì)胞色素氧化酶），能將二甲基對(duì)苯二胺或四甲基對(duì)苯二胺氧化生對(duì)苯二胺或四甲基對(duì)苯二胺氧化生成紅色的醌類化合物。成紅色的醌類化合物。 方法：方法：取潔凈濾紙條，粘取被檢取潔凈濾紙條，粘取被檢細(xì)菌菌落，滴加氧化酶試劑細(xì)菌菌落，

29、滴加氧化酶試劑1 1滴于滴于菌落上。或?qū)⒃噭┲苯拥渭釉诒粰z細(xì)菌菌落上。或?qū)⒃噭┲苯拥渭釉诒粰z細(xì)菌的菌落上。陽(yáng)性者立即出現(xiàn)紅色，繼而的菌落上。陽(yáng)性者立即出現(xiàn)紅色，繼而變?yōu)樯罴t色至深紫色。變?yōu)樯罴t色至深紫色。 結(jié)結(jié) 果果1、氧化酶（細(xì)胞色素氧化酶）試驗(yàn)氧化酶（細(xì)胞色素氧化酶）試驗(yàn)第四十七頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù) 四、酶類試驗(yàn)四、酶類試驗(yàn)(shyn)(shyn) 第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)菌生化鑒定細(xì)菌生化鑒定(jindng)(jindng)技術(shù)技術(shù)原理：細(xì)菌產(chǎn)生的觸酶（過(guò)氧化氫原理：細(xì)菌產(chǎn)生的觸酶（過(guò)氧化氫酶）能催化過(guò)氧化氫放出酶）能催化過(guò)氧化氫放出(fn ch)(fn ch)初生態(tài)氧，繼而形成氧分子出

30、現(xiàn)氣初生態(tài)氧，繼而形成氧分子出現(xiàn)氣泡。泡。 方法：方法： 取待檢細(xì)菌少許，置于取待檢細(xì)菌少許，置于潔凈的載玻片上，滴加潔凈的載玻片上，滴加3 3H2O2H2O2試劑試劑1 12 2滴，觀察結(jié)滴，觀察結(jié)果。一分鐘內(nèi)產(chǎn)生大量氣果。一分鐘內(nèi)產(chǎn)生大量氣泡者為陽(yáng)性，不產(chǎn)生氣泡泡者為陽(yáng)性，不產(chǎn)生氣泡者為陰性。者為陰性。 結(jié)結(jié) 果果2、觸酶試驗(yàn)觸酶試驗(yàn) + -第四十八頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù) 四、酶類試驗(yàn)四、酶類試驗(yàn)(shyn)(shyn) 第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)菌生化鑒定細(xì)菌生化鑒定(jindng)(jindng)技術(shù)技術(shù)原理：原理：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生凝固金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生凝固酶，使血漿中的纖維蛋白酶，

31、使血漿中的纖維蛋白(xin wi (xin wi dn bi)dn bi)原轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄缘睦w維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄缘睦w維蛋白(xin wi dn bi)(xin wi dn bi)。 方法：于方法：于3 3支試管中分別加入支試管中分別加入1:41:4稀釋的血漿稀釋的血漿0.5ml0.5ml，1 1支管加入待支管加入待檢菌肉湯培養(yǎng)物檢菌肉湯培養(yǎng)物0.5ml,0.5ml,另兩支分別另兩支分別加陰陽(yáng)性對(duì)照菌肉湯培養(yǎng)物加陰陽(yáng)性對(duì)照菌肉湯培養(yǎng)物0.5ml0.5ml，3535培養(yǎng)培養(yǎng)3 34h4h后觀察結(jié)果。后觀察結(jié)果。結(jié)結(jié) 果果3、凝固酶試驗(yàn)（試管法）凝固酶試驗(yàn)（試管法） 第四十九頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)

32、技術(shù) 四、酶類試驗(yàn)四、酶類試驗(yàn)(shyn)(shyn) 第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)菌生化鑒定細(xì)菌生化鑒定(jindng)(jindng)技術(shù)技術(shù)原理：原理：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生凝固金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生凝固(nngg)酶，使血漿中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)酶，使血漿中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄缘睦w維蛋白變?yōu)椴蝗苄缘睦w維蛋白。 方法：取未稀釋的兔血漿方法：取未稀釋的兔血漿和生理鹽水各一滴分別置和生理鹽水各一滴分別置于載玻片的兩側(cè)，挑取金于載玻片的兩側(cè)，挑取金黃色葡萄球菌少許分別與黃色葡萄球菌少許分別與它們混合，立即觀察結(jié)果。它們混合，立即觀察結(jié)果。細(xì)菌在生理鹽水中無(wú)自凝，細(xì)菌在生理鹽水中無(wú)自凝，菌液呈均勻混濁狀態(tài)凝固菌液

33、呈均勻混濁狀態(tài)凝固酶試驗(yàn)為陰性；菌液聚集酶試驗(yàn)為陰性；菌液聚集成團(tuán)塊或顆粒狀，則血漿成團(tuán)塊或顆粒狀，則血漿凝固酶試驗(yàn)為陽(yáng)性。凝固酶試驗(yàn)為陽(yáng)性。 結(jié)結(jié) 果果4、凝固酶試驗(yàn)（玻片法）凝固酶試驗(yàn)（玻片法） 第五十頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù) 四、酶類試驗(yàn)四、酶類試驗(yàn)(shyn)(shyn) 第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)菌細(xì)菌(xjn)(xjn)生化鑒定技術(shù)生化鑒定技術(shù)原理：某些細(xì)菌能還原培原理：某些細(xì)菌能還原培養(yǎng)基中的硝酸鹽為亞硝酸養(yǎng)基中的硝酸鹽為亞硝酸鹽，亞硝酸鹽與醋酸鹽，亞硝酸鹽與醋酸(c sun)(c sun)作用，生成亞硝酸，亞硝作用，生成亞硝酸，亞硝酸與試劑中的對(duì)氨基苯磺酸與試劑中的對(duì)氨基苯磺酸作用生

34、成重氮磺酸，再酸作用生成重氮磺酸，再與與- -萘胺結(jié)合，生成萘胺結(jié)合，生成N-N-萘胺萘胺偶氮苯磺酸偶氮苯磺酸( (紅色化合物紅色化合物) )。 方法：方法：將被檢細(xì)菌接種于硝酸鹽培養(yǎng)基中，將被檢細(xì)菌接種于硝酸鹽培養(yǎng)基中，3535培養(yǎng)培養(yǎng)18182424小時(shí)，加入甲液（對(duì)氨基苯磺小時(shí)，加入甲液（對(duì)氨基苯磺酸酸0.8g0.8g、5mol5molL L醋酸醋酸100ml100ml）和乙液（）和乙液（- -萘胺萘胺0.5g0.5g、5mol5molL L、醋酸、醋酸100ml100ml）等量混合液，觀察）等量混合液，觀察結(jié)果。立即出現(xiàn)紅色者為陽(yáng)性。若加入試劑不出現(xiàn)結(jié)果。立即出現(xiàn)紅色者為陽(yáng)性。若加入試

35、劑不出現(xiàn)紅色，需要檢查硝酸鹽是否被還原，可于培養(yǎng)管內(nèi)紅色，需要檢查硝酸鹽是否被還原，可于培養(yǎng)管內(nèi)加入少許鋅粉，如無(wú)色，說(shuō)明亞硝酸鹽進(jìn)一步分解，加入少許鋅粉，如無(wú)色，說(shuō)明亞硝酸鹽進(jìn)一步分解，硝酸鹽還原試驗(yàn)為陽(yáng)性。若加鋅粉后出現(xiàn)紅色，說(shuō)硝酸鹽還原試驗(yàn)為陽(yáng)性。若加鋅粉后出現(xiàn)紅色，說(shuō)明鋅使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，而待檢細(xì)菌無(wú)還原明鋅使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，而待檢細(xì)菌無(wú)還原硝酸鹽的能力，硝酸鹽還原試驗(yàn)為陰性。硝酸鹽的能力，硝酸鹽還原試驗(yàn)為陰性。5、硝酸鹽還原試驗(yàn)硝酸鹽還原試驗(yàn) 第五十一頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù) 紅色紅色(hngs)為陽(yáng)性為陽(yáng)性無(wú)色為陰性無(wú)色為陰性 四、酶類試驗(yàn)四、酶類試驗(yàn)(shyn)(

36、shyn) 第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)菌生化細(xì)菌生化(shn hu)(shn hu)鑒定技術(shù)鑒定技術(shù)5、硝酸鹽還原試驗(yàn)硝酸鹽還原試驗(yàn) -+無(wú)色無(wú)色+ +鋅粉鋅粉無(wú)色：陽(yáng)性無(wú)色：陽(yáng)性無(wú)色無(wú)色+ +鋅粉鋅粉紅色：陰性紅色：陰性+-結(jié)結(jié) 果果第五十二頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù) 四、酶類試驗(yàn)四、酶類試驗(yàn)(shyn)(shyn) 第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)菌細(xì)菌(xjn)(xjn)生化鑒定技術(shù)生化鑒定技術(shù)原理原理(yunl)(yunl)： B B群鏈球菌能產(chǎn)生群鏈球菌能產(chǎn)生CAMPCAMP因子，可促進(jìn)金黃色葡萄球菌因子，可促進(jìn)金黃色葡萄球菌 溶溶血素活性。其他鏈球菌不產(chǎn)生血素活性。其他鏈球菌不產(chǎn)生CAMPCAMP因子。因

37、子。方法：用產(chǎn)生方法：用產(chǎn)生-溶血素的金黃色溶血素的金黃色葡萄球菌在血平板上劃種一條直葡萄球菌在血平板上劃種一條直線，將待檢菌距金黃色葡萄球菌線，將待檢菌距金黃色葡萄球菌3mm3mm處垂直劃種一短線。用同樣處垂直劃種一短線。用同樣方法接種陰性和陽(yáng)性對(duì)照菌株。方法接種陰性和陽(yáng)性對(duì)照菌株。3535孵育孵育181824h24h。結(jié)結(jié) 果果6 6、CAMPCAMP試驗(yàn)試驗(yàn)對(duì)照陰性陽(yáng)性檢測(cè)菌陽(yáng)性陽(yáng)性矢狀溶血第五十三頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù) 五、復(fù)合生化五、復(fù)合生化(shn hu)(shn hu)反應(yīng)反應(yīng) 第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)菌生化細(xì)菌生化(shn hu)(shn hu)鑒定技術(shù)鑒定技術(shù) 原理：原理：KI

38、A瓊脂中含有牛肉(ni ru)膏、酵母浸膏、蛋白胨、乳糖、葡萄糖、枸櫞酸銨鐵、酚紅指示劑等。乳糖的濃度為葡萄糖的10倍，若細(xì)菌只分解葡萄糖而不分解乳糖，培養(yǎng)基中的葡萄糖被分解后只能產(chǎn)生少量的酸，在最初培養(yǎng)的811小時(shí)內(nèi)，這些酸也足以使培養(yǎng)基的底層和斜面變黃色。但連續(xù)培養(yǎng)數(shù)小時(shí)后，在細(xì)菌和氧的作用下，培養(yǎng)基的斜面所含氨基酸發(fā)生降解，釋放氨類，立即中和斜面部分的酸，培養(yǎng)1824小時(shí)后，整個(gè)斜面轉(zhuǎn)變成堿性，斜面又變成紅色。培養(yǎng)基深層中，氨基酸的降解作用不足以中和所形成的酸，故仍呈黃色。因此KIA斜面呈堿性，深層呈酸性反應(yīng)，說(shuō)明該菌只分解葡萄糖而不分解乳糖。若細(xì)菌分解乳糖則產(chǎn)生大量的酸，這些酸能中和斜

39、面產(chǎn)生的堿，使整個(gè)培養(yǎng)基呈黃色。若細(xì)菌能分解培養(yǎng)基中含硫氨基酸，則可產(chǎn)生H2S，H2S與培養(yǎng)基中枸櫞酸銨鐵起反應(yīng)，產(chǎn)生不溶性的黑色硫化亞鐵沉淀。 KIAKIA試驗(yàn)試驗(yàn)第五十四頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù) 六、復(fù)合生化六、復(fù)合生化(shn hu)(shn hu)反應(yīng)反應(yīng) 第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)菌生化細(xì)菌生化(shn hu)(shn hu)鑒定技術(shù)鑒定技術(shù) 方法：方法： 用接種針挑取待檢細(xì)菌(xjn)，先穿刺接種到KIA深層，距管底35mm為宜，再?gòu)纳顚酉蛏咸崞穑谛泵嫔嫌上轮辽蟿澗€，35培養(yǎng)1824小時(shí)，觀察結(jié)果 KIAKIA試驗(yàn)試驗(yàn) 常見(jiàn)的反應(yīng)結(jié)果：斜面堿性/底層堿性：不發(fā)酵糖類，如糞產(chǎn)堿桿菌。斜面

40、堿性/底層酸性：葡萄糖發(fā)酵，乳糖不發(fā)酵，如志賀菌。斜面堿性/底層酸性（黑色）：葡萄糖發(fā)酵、乳糖不發(fā)酵，產(chǎn)生H2S。如沙門(mén)菌、普通變形桿菌。斜面酸性/底層酸性：葡萄糖和乳糖發(fā)酵，如大腸埃希菌、克雷伯菌屬、腸桿菌屬。 第五十五頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù) 六、復(fù)合六、復(fù)合(fh)(fh)生化反應(yīng)生化反應(yīng) 第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)菌細(xì)菌(xjn)(xjn)生化鑒定技術(shù)生化鑒定技術(shù) KIAKIA試驗(yàn)試驗(yàn)(shyn)(shyn)結(jié)果結(jié)果第五十六頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)第四節(jié)第四節(jié) 微生物檢驗(yàn)微生物檢驗(yàn)(jinyn)(jinyn)的自動(dòng)化和微型化的自動(dòng)化和微型化一、一、 微生物自動(dòng)微生物自動(dòng)(zdng)(zd

41、ng)培養(yǎng)系統(tǒng)培養(yǎng)系統(tǒng)（一）自動(dòng)血培養(yǎng)檢測(cè)系統(tǒng)1.基本原理（1）放射性物質(zhì)標(biāo)記法 一般采用放射性碳14標(biāo)記法：細(xì)菌生長(zhǎng)時(shí)利用標(biāo)記底物產(chǎn)生含14C的CO2，當(dāng)14C標(biāo)記的CO2量超過(guò)界限時(shí)，檢測(cè)器報(bào)告陽(yáng)性生長(zhǎng)。（2）二氧化碳感受器 每一血液培養(yǎng)瓶底部都含有Novel顏色感應(yīng)器，當(dāng)血液培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)有微生物生長(zhǎng)釋出之CO2后，感應(yīng)器之酸堿值也跟著改變，從深綠色變?yōu)辄S色，檢測(cè)器報(bào)告陽(yáng)性。（3）均質(zhì)熒光技術(shù) 在血培養(yǎng)基內(nèi)含有發(fā)熒光物質(zhì)。微生物生長(zhǎng)代謝過(guò)程中產(chǎn)生各種帶電荷的原子團(tuán)，培養(yǎng)瓶發(fā)出的熒光，即可檢測(cè)有細(xì)菌存在。第五十七頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)2儀器的基本結(jié)構(gòu)和配套試劑 全自動(dòng)恒溫孵育系統(tǒng)包括恒溫裝

42、置和震蕩培養(yǎng)裝置，儀器培養(yǎng)瓶容量常分為60瓶、120瓶、240瓶等，對(duì)培養(yǎng)瓶進(jìn)行(jnxng)震蕩恒溫培養(yǎng)，溫度常設(shè)為37。儀器均配置電腦，在電腦上可設(shè)置培養(yǎng)時(shí)間、溫度等參數(shù)，顯示陽(yáng)性或陰性瓶所在的位置，及自動(dòng)分析。3注意事項(xiàng)及結(jié)果報(bào)告制度（1）培養(yǎng)瓶的選擇 如果患者未使用抗生素，可選擇一般需氧菌培養(yǎng)瓶，如果已經(jīng)使用抗生素則選用可中和血液中抗生素的培養(yǎng)瓶。如懷疑厭氧菌、L型菌、真菌、分枝桿感染，則選用厭氧菌培養(yǎng)瓶、L型菌培養(yǎng)瓶、真菌培養(yǎng)瓶、分枝桿菌培養(yǎng)瓶。（2）采血時(shí)間 對(duì)入院患者中有高熱、寒戰(zhàn)、白細(xì)胞增多或疑有感染者，最好在使用抗生素前采血送檢。住院患者出現(xiàn)發(fā)熱等敗血癥癥狀時(shí)，應(yīng)及時(shí)采血，盡

43、可能在使用抗生素前采血。已使用抗生素的患者最好在下次使用抗生素前采血。第四節(jié)第四節(jié) 微生物檢驗(yàn)微生物檢驗(yàn)(jinyn)(jinyn)的自動(dòng)化和微型化的自動(dòng)化和微型化第五十八頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)第四節(jié)第四節(jié) 微生物檢驗(yàn)微生物檢驗(yàn)(jinyn)(jinyn)的自動(dòng)化和微型化的自動(dòng)化和微型化（3）采血量 采血量一般為血培養(yǎng)瓶中肉湯培養(yǎng)基量的1/4-1/5為宜，成人一般每次采集3-10ml，以8-10ml最佳，小兒一般每次采集1-3ml即可。每天最好采血2-3次，以提高檢出率，并幫助判斷是感染菌或污染菌。（4）采血方法 一般多從肘靜脈采血，采集前應(yīng)嚴(yán)格消毒采血部位，采血過(guò)程中注意無(wú)菌操作，否則

44、易被皮膚表面細(xì)菌污染，導(dǎo)致假陽(yáng)性。使用真空采血系統(tǒng)，利用配套的一次性使用的無(wú)菌采血管，血液因負(fù)壓作用進(jìn)入培養(yǎng)瓶中。（5）標(biāo)本送檢 采血后應(yīng)及時(shí)送檢，檢驗(yàn)(jinyn)者收到血培養(yǎng)瓶后應(yīng)盡快上機(jī)。如不能及時(shí)送檢，應(yīng)將血培養(yǎng)瓶放置室溫保存。第五十九頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)第四節(jié)第四節(jié) 微生物檢驗(yàn)微生物檢驗(yàn)(jinyn)(jinyn)的自動(dòng)化和微型化的自動(dòng)化和微型化（二）自動(dòng)分枝桿菌培養(yǎng)檢測(cè)系統(tǒng) 多數(shù)自動(dòng)血培養(yǎng)檢測(cè)系統(tǒng)可檢測(cè)血液中的分枝桿菌，目前針對(duì)分枝桿菌有專門(mén)的自動(dòng)分枝桿菌培養(yǎng)檢測(cè)系統(tǒng)，可對(duì)各類標(biāo)本中的分枝桿菌進(jìn)行培養(yǎng)及檢測(cè)，原理基本同自動(dòng)血培養(yǎng)檢測(cè)系統(tǒng)，配套專門(mén)的培養(yǎng)瓶。 一般將各類標(biāo)本直

45、接送檢，檢驗(yàn)者收到標(biāo)本后，如為清亮的穿刺液標(biāo)本，可直接注入(zh r)培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，放入儀器自動(dòng)培養(yǎng)并檢測(cè)。如為痰液等其他含有雜菌或細(xì)胞的標(biāo)本，應(yīng)先進(jìn)行消化、中和等處理后再注入(zh r)培養(yǎng)瓶，否則會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。第六十頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)第四節(jié)第四節(jié) 微生物檢驗(yàn)微生物檢驗(yàn)(jinyn)(jinyn)的自動(dòng)化和微型化的自動(dòng)化和微型化二、微生物鑒定的自動(dòng)化和微型化（一）微生物數(shù)碼分類原理1數(shù)據(jù)庫(kù) 由許多細(xì)菌條目組成，每個(gè)條目代表(dibio)一個(gè)細(xì)菌種或一個(gè)細(xì)菌生物型。 2編碼 將細(xì)菌生化反應(yīng)模式轉(zhuǎn)換成 數(shù)學(xué)模式，可把生化反應(yīng)結(jié)果快速轉(zhuǎn)錄成數(shù)字（編碼），經(jīng)查閱編碼檢索本或電腦分析系統(tǒng)又可

46、將數(shù)字轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的細(xì)菌名稱。3查碼 在編碼檢索本內(nèi)尋找數(shù)碼信息：如菌名，鑒定結(jié)果的評(píng)價(jià)，生 化結(jié)果，陽(yáng)性百分率，必須增加的補(bǔ)充試驗(yàn)項(xiàng)目，指出注意要點(diǎn)等。第六十一頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)4 4解釋解釋(jish)(jish) 如果一個(gè)編碼只對(duì)應(yīng)一種細(xì)菌，無(wú)論幾率大小，為該種細(xì)菌的可能性( ID %) 均為99. 99 %。如果一個(gè)編碼對(duì)應(yīng)兩種或兩種以上種類的細(xì)菌，應(yīng)計(jì)算每種細(xì)菌出現(xiàn)的幾率所占的百分比ID % 。如ID % 99 %，為該種菌的可能性非常大；如ID % 90 %，為該種菌的可能性較大；如ID %80 %，為該種菌的可能性也較大，但需做補(bǔ)充試驗(yàn)進(jìn)一步確證；如ID %80 %，則一般無(wú)法準(zhǔn)確區(qū)分菌種，必須增加多個(gè)補(bǔ)充試驗(yàn)才可得出準(zhǔn)確結(jié)果。第四節(jié)第四節(jié) 微生物檢驗(yàn)微生物檢驗(yàn)(jinyn)(jinyn)的自動(dòng)化和微型化的自動(dòng)化和微型化第六十二頁(yè)，共六十八頁(yè)。細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)第四節(jié)第四節(jié) 微生物檢驗(yàn)微生物檢驗(yàn)(jinyn)(jinyn)的自動(dòng)化和微型化的自動(dòng)化和微型化（二）微生物自動(dòng)鑒定儀器二）微生物自動(dòng)鑒定儀器(yq)(yq)的基本結(jié)構(gòu)和配套試劑的基本結(jié)構(gòu)和配套試劑數(shù)碼分類鑒定系統(tǒng)的組成(z chn) 由鑒定卡、 添加試劑及檢索工具配套形成的完整 的微生物鑒定體系。（1）鑒定卡常用的生化反應(yīng)有： 發(fā)酵試驗(yàn)；同化試驗(yàn)；同化或發(fā)酵