1、ELISAELISA檢測檢測(jin c)(jin c)乙肝抗體乙肝抗體組員：李家成（1520150102） 林其聰（1520150103） 付 強（1520150104） 鄭海軍（1520150105） 管 汝（1420151143） 分工(fn gng)匯報：林其聰PPT制作：李家成，付強第一頁，共二十頁。醫學專題ELISA檢測乙肝抗體ELISA檢測(jin c)乙肝抗體第二頁，共二十頁。醫學專題ELISA檢測乙肝抗體肝表面(biomin)抗體ELISA檢測實驗目的實驗目的1.掌握ELISA的原理和操作方法。2.熟悉酶標儀的使用(shyng)方法。第三頁，共二十頁。醫學專題ELISA檢測乙

2、肝抗體 免疫標記技術免疫標記技術免疫標記技術是用熒光、酶、或者放射性核素等標記抗體或抗原(kngyun)，利用標記技術的高度敏感性進行的抗原(kngyun)抗體的反應。 細胞(xbo)1細胞(xbo)2標記物標記物分類熒光素放射免疫技術放射性核素免疫熒光技術酶免疫酶技術第四頁，共二十頁。醫學專題ELISA檢測乙肝抗體免疫(miny)酶技術 用酶標記的抗原或抗體進行的抗原抗體反應。可用酶標測定(cdng)儀測定(cdng)光密度(OD）來反應抗原或抗體含量，靈敏度可達到ngpg/ml。細胞(xbo)1標記物標記物DH+HOD+2H2O 酶具有高效催化性：可加快化學反應的速率；在反應前后沒有質和量

3、的改變；微量的酶便可發揮巨大的催化作用第五頁，共二十頁。醫學專題ELISA檢測乙肝抗體酶免疫(miny)技術 酶聯免疫吸附試驗(shyn) 酶免疫組化法用于檢測用于檢測(jin c)可溶可溶性抗原或抗體性抗原或抗體用于檢測組織或細胞用于檢測組織或細胞表面的抗原表面的抗原第六頁，共二十頁。醫學專題ELISA檢測乙肝抗體酶聯免疫吸附試驗(shyn)-ELISA ELISA是一種免疫測定（immunoassay，IA）?？乖蛘呖贵w的固相化及抗原或抗體的酶標記：加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物；產物的量與標本中受檢物質的量直接(zhji)相關，由此進行定性或定量分析。第七頁，共二十頁。醫

4、學專題ELISA檢測乙肝抗體酶聯免疫吸附實驗(shyn)ELISA 實驗原理 抗原或抗體吸附到固體相載體表面后，以及抗原抗體與酶連接后，仍保持免疫活性和酶活性，當酶遇到相應第底物時，在酶的催化下引起底物水解顯色。產物的量與標體中受檢物質的量直接相關，故可根據顏色反應的深淺(shnqin)進行定性或定量分析。 第八頁，共二十頁。醫學專題ELISA檢測乙肝抗體ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體(kngt)。在這種測定方法有三個必要的試劑：（1）免疫(miny)吸附劑（2）結合物（3）酶反應的底物第九頁，共二十頁。醫學專題ELISA檢測乙肝抗體ELISA的類型(lixng)間接法（測抗體）雙

5、抗體夾心(jixn)發（測大分子抗原）競爭發（測小分子抗原）第十頁，共二十頁。醫學專題ELISA檢測乙肝抗體第十一頁，共二十頁。醫學專題ELISA檢測乙肝抗體第十二頁，共二十頁。醫學專題ELISA檢測乙肝抗體競爭法 用于抗原和半抗原的定量(dngling)測定，也可用于測定抗體。以測定抗原為例，將特異性抗體吸附于固相載體表面，經洗滌后分成兩組：一組加酶標記抗原和待測抗原的混合液，而另一組加酶標記抗原，再經孵育洗滌后加底物顯色，這兩組底物降解量之差即為所要測定的未知抗原的量。 這種方法所測定的抗原只有一個結合部位就可，因此，對小分子抗原如激素和藥物之類的測定常用此法。該法的優點就是快，因此只有一

6、個保溫洗滌過程，但常需用較多的酶標記抗原。第十三頁，共二十頁。醫學專題ELISA檢測乙肝抗體操作步驟1.從冰箱取出試劑盒，室溫平衡(pnghng)30分鐘。2.按如下方式加待測血清，每孔1滴。3.每孔加酶結合物1滴（孔上方懸空滴加，無氣泡），混勻，空白孔不加，置37度溫箱30分鐘。4.取出反應板，棄液，拍干。5.每孔注滿洗條液，（不要溢出）靜置5秒后棄液，拍干，重復洗條5次，拍干。6.每孔加顯色劑A和B各1滴，置37度溫箱15分鐘。7.每孔加終止液1滴混勻，觀察結果。待1待2待2陽性(yngxng)陰性(ynxng)空白第十四頁，共二十頁。醫學專題ELISA檢測乙肝抗體第十五頁，共二十頁。醫學專題ELISA檢測乙肝抗體第十六頁，共二十頁。醫學專題ELISA檢測乙肝抗體第十七頁，共二十頁。醫學專題ELISA檢測乙肝抗體第十八頁，共二十頁。醫學專題ELISA檢測乙肝抗體第十九頁，共二十頁。醫學專題ELISA檢測乙肝抗體內容(nirng)總結ELISA檢測乙肝抗體。付 強（1520150104）。管 汝（1420151143）。微量的酶便可發揮巨大的催化作用。產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，由此進行(jnxng)定性或定量分析。產物的量與標體中受檢物質的量直接相關，故可根據顏色反