1、【綜述】中國圖書分類號R512.91文獻標識碼A文章編號1004.5503(2008)09082003誘導特異性T細胞免疫反應的HIV疫苗的研究進展李進郭軍【摘要】隨著HIV特異性T淋巴細胞在控制體內HIV復制方面的作用被認可,HIV疫苗研究的重點越來越多地集中在誘導特異性T細胞免疫反應的HW疫苗上，這類疫苗可能通過誘導或增強體內針對H1V的特異性T細胞免疫反應，有效控制HIV在體內的復制。本文對近年來誘導特異性T細胞免疫反應的HIV疫苗在健康和感染機體中應用的研究進展作一綜述。【關鍵詞】艾滋病;人類免疫缺陷病毒;特異性T細胞免疫反應;HIV疫苗艾滋病即獲得性免疫缺陷綜合征(Aquiredim

2、munodeficiencysyndrom,AIDS)對人類的生命健康構成了極大威脅，據權威機構的最新估計，目前全球約有3320萬人感染艾滋病毒，每天新增感染者約6800人,死亡約5700A，1o自20世紀80年代初發現AIDS并確定其病原為人類免疫缺陷病毒(Humanimmunodeficiencyvirus,HIV)以來，人們研制H1V疫苗的努力就從未停止過,但由于HIV基因的高度變異性及病毒結構上的特殊性，常規的以誘導中和抗體為機理的預防性疫苗在研制中受阻2】。2003年，重組gP120預防性HIV疫苗在經歷了數年數千人參與的DI期臨床觀察后宣告失敗口方,更使人們將目光轉向了誘導特異性T

3、細胞免疫反應的HIV疫苗的研制。HIV感染初期，感染者體內病毒載量的下降總伴隨著特異性CD8細胞數量高峰的出現，用抗CD8+細胞的單克隆抗體清除CD驢細胞，導致猴體內猴免疫缺陷病毒(Simianimmunodeficiencyvirus,SIV)復制失控，以及SIVgag基因的T細胞優勢表位上單-氨基酸突變,使感染猴體內本來已經得到控制的病毒載量再度升高這些現象從不同側面證實了特異性T細胞免疫反應是體內控制HIV復制的關鍵。利用疫苗誘導或增強體內針對HIV的特異性T細胞免疫反應，以此控制體內HIV的復制，具有重大研究價值。隨著體內誘導HIV特異性T細胞免疫反應的技術手段日趨成熟及猴SIV感染模

4、型的建立，以誘導特異性T細胞免疫反應為機理的HIV疫苗的研究近幾年進入了非常活躍的階段，迄今已有30多個誘導特異性T細胞免疫反應的HIV疫苗進入臨床觀察,包括多肽疫苗、滅活病毒疫苗、DNA疫苗、活病毒載體疫苗及其聯合應用等。本文就該類疫苗在健康和感染機體中的應用作一綜述。作者單位:深圳市源興生物醫藥科技有限公司(深圳518057).通訊作者:李進,E-mail：lijin1.誘導特異性T細胞免疫反應的HIV疫苗在健康機體中的應用誘導特異性T細胞免疫反應的HIV疫苗用于健康個體,在其體內誘導出針對病毒的特異性T細胞,雖然不能完全阻止感染的發生，但有可能增加感染建立的難度,降低感染的發生率;另外，

5、一旦感染發生，疫苗誘導的特異性CD8,細胞能在感染的初始階段將體內的HIV載量控制在一個較低水平，使CD4+記憶細胞免受大量破壞,從而延緩病情進展;再者,感染初期對病毒進行控制,可能使感染者體內慢性感染期的病毒載量保持在較低水平，這意味著較低的傳染性。Ellenberger等10報道，通過直腸內多次少量的方式,使經過HIV-1DNA疫苗初免、MVA疫苗加強免疫的試驗猴及空白對照組猴暴露于SHIV,結果14只對照猴分別在114次暴露后被感染,建立感染需要的平均暴露次數為4.6次；16只免疫組猴中的9只在不超過6次暴露后被感染，1只在經過10次暴露后被感染，另外6只(37.5%)經過17次暴露仍不

6、能被感染，其中1只經過26次暴露后還保持健康。經計算，免疫組猴每次暴露后，被感染的可能性較對照組降低了64%OLetvin等n:用含SIV的gag、pol、nef基因和HIV的env基因的復制缺陷型腺病毒載體疫苗免疫猴體，再用SHIV攻擊，雖然免疫組與對照組均被感染，但免疫組猴體內的病毒載量在高峰期和平臺期均明顯低于對照組，差別可達100倍;對照組猴體內的CD4細胞數量急劇下降，而免疫組猴體內的CD4細胞數量仍保持在較高水平。他們同時發現,env誘導的特異性細胞免疫反應在控制病毒載量和穩定CD4細胞數量方面發揮了很大的作用。SHIV是實驗室構建出的一種嵌合病毒，含有HIV的包膜基因,SIV的骨

7、架基因，感染猴體后通常很快起發病，這些特征與HIV感染不符I，使其作為攻擊病毒的價值受到質疑。有研究者用與H1V相似性更好的SIV作為攻擊病毒，疫苗的保護效果大都不如在SHIV模型上觀察到的顯著，雖然疫苗仍能誘導出針對SIV的特異性CD8和CD4緬胞,但對免疫猴體內的SIV載量只在早期有短暫控制或控制不明顯，也未見有明顯的穩定免疫猴體內CD4,細胞數量的效果（,3J4o但是，另有試驗顯示,疫苗在病毒感染早期對感染者體內病毒即便只有短暫控制，也會對疾病進程產生良性影響。Letvin等報道，在用表達SIV基因的DNA疫苗初免，腺病毒載體疫苗加強免疫撈猴后，用SIV攻擊，結果在攻擊后的112d內，免

8、疫組猴體內病毒載量低于空白對照組，112d后，免疫組與對照組猴體內的病毒載量差異無顯著意義,但這種感染早期對病毒的短期抑制，明顯影響到了試驗猴的存活率。當觀察時間延長到攻擊后的850d時,發現免疫組猴的存活率顯著高于對照組。Mattapallil等頃用同樣的疫苗免疫，并用同樣的病毒進行攻擊，發現免疫組猴體內高峰期SIV載量較空白對照組降低10倍,結果導致空白對照組猴體內50%80%的CD4記憶細胞被破壞，而免疫組猴體內的CD4記憶細胞只喪失了5%20%o由于H1V、SIV感染初期對CD”記憶細胞，尤其對黏膜組織中的CD4記憶細胞的破壞非常顯著,7J8,此階段對病毒載量進行控制有著重要的臨床意義

9、。2004年底，美國國家過敏和感染疾病研究所、美國Merck公司及AIDS疫苗試驗網絡三方聯合，將Merck公司的表達HIVgag、pol和nef基因的人5型復制缺陷型載體疫苗推進到了人體觀察尻。這個被命名為STEP的人體觀察計劃募集了3000名HIV陰性的高危人群，在幾個不同的地區進行。2007年9月，通過對1503名男性同性戀觀察對象數據的階段性分析發現,741名接種疫苗者中,24名感染了HIV,762名未接種疫苗的對照者中,21名被HIV感染，感染的發生率差異無顯著意義，同時，被感染者體內HIV載量差異也無顯著意義.STEP因此而終止。目前,該項觀察的數據還在繼續分析中。2.誘導特異性T

10、細胞免疫反應的HIV疫苗在感染機體中的應用高效抗逆轉錄病毒藥物（Highlyactiveanti-retroviraltherapy,HAART）的應用，使HIV感染從不治之癥轉變成為可以控制的慢性疾病。但HAART也存在許多不足,由于不能清除病毒，HAART必須長期服用，導致了諸如耐藥毒株產生以及毒副作用和經濟負擔加重等一系列問題，這種狀況要求人們尋求新的解決方案。由于體內細胞免疫反應在抑制HIV復制中起著關鍵作用,利用誘導特異性T細胞反應的疫苗來加強體內針對HIV的特異性細胞免疫反應,使體內HIV的復制得到更有效控制，或許可以使患者階段性停用HAART,或延遲對HAART的需要】。因此，以

11、誘導特異性T細胞免疫反應為機理的治療性HIV疫苗成為眾多研究人員的優先選擇。目前，有關治療性HIV疫苗的應用研究主要在經過HAART治療、體內HIV病毒載量已得到完全控制的感染者中進行，通常是在HAART治療的同時加用疫苗免疫,再分析性停藥,通過評價疫苗對病毒反跳的頻率、強度和病毒載量回歸到平臺期時的高度等因素的影響，以及疫苗免疫后體內各種免疫學指標與病毒控制的相關性來判定疫苗的效果21o通過動物實驗已觀察到治療性疫苗對病毒載量的控制效果，如Fuller等22】用SIV感染猴體,2周后開始用抗病毒藥物PMPA治療直到第30周,此期間用含SIVgag.nef基因及多個CTL細胞表位的DNA疫苗連

12、續6次免疫猴體,觀察對PMPA有反應的猴停藥后的情況，結果停用抗病毒藥物1年后,加用疫苗組的猴多數體內病毒載量仍能被控制在104以下,CD47細胞數保持穩定,而單用PMPA的對照組猴體內病毒載量仍明顯高于疫苗免疫組,CD4細胞數下降非常顯著。人體觀察中,不同的研究者所得到的結果不同，如Jacobson等方用ALVACvCP1452（表達HIVgpl20、gp41和pol基因片段的金絲雀痘病毒載體疫苗）對接受HAART穩定治療的慢性HIV感染者進行3輪免疫，再間歇性停用HAART,結果未發現ALVACvCP1452對體內的病毒有任何控制作用。但Levy等羽用HIV疫苗ALVAC-HIVvCP14

13、33（表達HIVgpl20.gp41.p55和來自nef、pol的CTL表位的金絲雀痘病毒載體疫苗）和Lipo-6T（含來自HIVgag.nef和pol的5個T細胞表位的脂多肽疫苗）聯合免疫正在接受HAART治療且病毒載量已得到控制的HIV慢性感染者，同時加用IL-2,結果免疫組患者體內的HIV特異性細胞免疫反應（包括CD4,和CD8細胞免疫反應）呈陽性的人數明顯高于對照組。停用HAART3個月后，免疫組有RNA水平來看，免疫組也低于對照組。最近報道的RNA水平來看，免疫組也低于對照組。最近報道的isi約24%（8/33）的患者無需恢復HAART治療,對照組無需恢復治療的患者約占5%（2/37

14、）,兩組間差異有顯著意義。延長觀察時間到100周【方,免疫組患者脫離HAART治療的累計天數的中間值（177（1）大于對照組（89d）;免疫組患者脫離HAART治療的時間比例為42.8%,而對照組為26.5%;從各患者第2次、第3次中斷HAART治療后4周時的HIV其他治療性疫苗,人體觀察的結果也提示，疫苗可以提升HIV感染者體內特異性CD4LCD8+細胞的強度和廣度，但對病毒的控制效果尚需進一步證實5”現有的研究結果提示，治療性疫苗可在一定程度上控制感染者體內的HIV復制，但離人們期待的治療效果尚有差距。目前，許多不同的治療性疫苗的臨床研究仍在進行中。3.結語誘導特異性T細胞免疫反應的疫苗在

15、健康人體的應用價值因STEP的失敗而受到質疑，但對于一個不誘導中和抗體的疫苗，未能降低HIV感染的發生率應在意料之中，至于對被感染的個體體內病毒載量的影響如何，有待更詳細的分析結果公布后才能判定。這類疫苗用于人群，理想的效果應該是延緩HIV感染者的病情進展及降低被感染者的傳染性,這些都需要足夠長時間的動態觀察才能做出判斷，現在完全否定誘導特異性細胞免疫的疫苗在健康人體的應用價值還為時過早。誘導特異性T細胞免疫反應的疫苗用于HIV感染者的治療，目前雖然還沒有明確的臨床效果，但已經積累了一些有利的數據，值得人們去進一步探索。與現有HAART以病毒復制的各個環節為靶點、直接抑制病毒復制的作用機理不同

16、，誘導特異性T細胞免疫反應的疫苗通過調動感染者體內的免疫力來抑制病毒，其作為治療性疫苗的成功使用,有望彌補HAART的不足或加強HAART的治療效果。參考文獻1JointUnitedNationsProgrammeonHIV/AIDS(UNAIDS)andWorldHealthOrganization.AIDSepidemicupdate,December200712LetvinNL.ProgresstowardanHIVvaccine.AnnuRevMed,2005,56：213-23.3 FlynnNM,ForthalDN,HarroCD,elal.Placebo-controlledph

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