1、農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)1999,1(3:3944Ch inese Jou rnal of Pesticide Science防治大豆疫霉根腐病的藥劑篩選朱振東王曉鳴田玉蘭武小菲(中國(guó)農(nóng)科院作物品種資源研究所北京100081摘要在離體條件下測(cè)定了8種內(nèi)吸性殺菌劑對(duì)大豆疫霉菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用。甲霜靈、甲霜靈錳鋅、安克錳鋅、殺毒礬、霜脲錳鋅、克露和加瑞農(nóng)為有效殺菌劑,霜霉威不具有抑菌效果。甲霜靈的EC50值為0.4870g mL,抑菌效果最好,安克錳鋅、甲霜靈錳鋅的EC50值分別為1.4261g mL和1.7697g mL,效果次之。在活體條件下,甲霜靈和甲霜靈錳鋅能完全抑制大豆疫霉菌對(duì)感病大豆品種的侵入,并

2、具有較長(zhǎng)的藥效期,安克錳鋅、殺毒礬和霜霉威雖然具有明顯的防治效果但藥效期很短。大豆疫霉菌菌株間對(duì)甲霜靈錳鋅的敏感性存在差異,但這種差異與菌株來(lái)源沒(méi)有相關(guān)性,EC50平均值為1.8302g mL,沒(méi)有發(fā)現(xiàn)耐藥性菌株。在我國(guó)黑龍江省目前缺乏有效抗病品種的情況下,建議應(yīng)用甲霜靈錳鋅防治大豆疫霉根腐病。關(guān)鍵詞大豆;疫霉根腐病;大豆疫霉菌;殺菌劑;化學(xué)防治由大豆疫霉菌(P hy top h thora sojae引起的大豆疫霉菌根腐病是在我國(guó)發(fā)生的一種新的大豆病害,目前已在黑龍江省造成危害1,2。該病在大豆的任何生育期均可造成危害,具有極大的破壞性和毀滅性。大豆對(duì)疫霉菌的抗性由顯性單基因控制,選育抗病品

3、種是防治該病的主要方法,但由于該菌遺傳變異性極大,在美國(guó)和加拿大已有多個(gè)抗病基因被不斷產(chǎn)生的新的生理小種所克服3。一些研究表明,甲霜靈對(duì)大豆疫霉根腐病具有一定的防治效果,特別是耐病品種輔以甲霜靈處理防病效果明顯4。在我國(guó),雖然已篩選出一些抗大豆疫霉菌1號(hào)生理小種的品種5,但由于目前黑龍江省病區(qū)生理小種結(jié)構(gòu)仍不明確,這些品種的實(shí)用性有待進(jìn)一步研究。因此,篩選并應(yīng)用殺菌劑是我國(guó)目前有效防治大豆疫霉根腐病的方法之一。1材料與方法1.1供試材料25%甲霜靈可濕性粉劑(南通染化廠;58%甲霜靈錳鋅可濕性粉劑(NOVA R T IS公司產(chǎn)品;64%殺毒礬M8可濕性粉劑(SANDO Z公司產(chǎn)品;69%安克錳

4、鋅可濕性粉劑(氰胺中國(guó)有限公司產(chǎn)品;72%杜邦克露可濕性粉劑(杜邦中國(guó)有限公司產(chǎn)品;72%霜脲錳鋅可濕性粉劑(河北萬(wàn)全農(nóng)藥廠;72.2%霜霉威水劑(江蘇新沂農(nóng)藥廠;47%加瑞農(nóng)可濕性粉劑(北興化學(xué)工業(yè)株式會(huì)社。大豆疫霉菌菌株U SA2R1和U SA2R25由美國(guó)俄亥俄州立大學(xué)Schm itthenner博士提供;“九五”國(guó)家攻關(guān)(962005201212資助課題PS M1和PM S2由黑龍江省農(nóng)科院合江地區(qū)農(nóng)科所馬淑梅研究員提供,其他11個(gè)菌株均從染病大豆植株分離獲得。除特別說(shuō)明外,所有試驗(yàn)均用4121菌株。合豐25號(hào)(已鑒定為感病品種,由黑龍江省農(nóng)科院合江地區(qū)農(nóng)科所馬淑梅研究員提供。1.2殺

5、菌劑對(duì)大豆疫霉菌菌絲生長(zhǎng)的影響在25黑暗條件下,供試菌株4121在稀釋V8培養(yǎng)基上培養(yǎng)7d,用打孔器從菌落邊緣打取直徑為5mm的圓形菌塊,移在含不同濃度藥劑的稀釋V8平板上(藥劑的濃度梯度分別是:甲霜靈和甲霜靈錳鋅為0、0.1、0.5、1、5、10g mL;安克錳鋅為0、0.5、1、1.5、2、2.5、3g mL;克露、霜脲錳鋅和殺毒礬為0、5、10、15、20、25、30g mL,加瑞農(nóng)和霜霉威為0,0.1, 0.5,1,5,10,50,100g mL,菌塊面朝下置于平板中央,每平板接種1塊,每處理重復(fù)三次, 25黑暗條件下培養(yǎng),5d后測(cè)量菌落直徑,作出不同藥劑的抑菌回歸方程,求出EC50和

6、EC95值。試驗(yàn)重復(fù)3次。1.3不同藥劑對(duì)大豆疫霉菌作用的活體測(cè)定供試品種為合豐25號(hào),以種子重量0.5%藥劑量拌種。藥劑處理種子播種后7、10、15、20、25d分別運(yùn)用下胚軸傷口接種4121菌株5,以同一播期未進(jìn)行處理種子的植株為對(duì)照,接種后在霧室保濕2d,然后移入溫室正常管理,6d調(diào)查發(fā)病情況。病級(jí)劃分標(biāo)準(zhǔn)為:0級(jí),沒(méi)有病斑擴(kuò)展;1級(jí),病斑擴(kuò)展5mm;2級(jí),病斑擴(kuò)展10mm;3級(jí),病斑擴(kuò)展15mm;4級(jí),病斑擴(kuò)展大于15mm,植株存活;5級(jí),植株死亡。試驗(yàn)重復(fù)2次。供試品種為合豐25號(hào),以種子重量0.5%藥劑量拌種。用修改的W alker和Schm itthen2 ner的菌層接種方法進(jìn)

7、行藥效試驗(yàn)6:底部帶孔的大小為9c m12.5c m12.5c m(底徑高口徑的標(biāo)準(zhǔn)塑料花盆用吸水紙封蓋底眼,加6c m高的新蛭石并加水浸透,將在直徑為9 c m的DV8A培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)10d的4121菌株接種體圓片置于蛭石中央,上面加2.5c m 高的蛭石,加水充分浸透后播種。每個(gè)藥劑處理10粒種子,均勻播于花盆中央,保證每粒種子都垂直于接種體層以便根直接穿過(guò)接種體層。播種后覆蓋2c m的蛭石,澆水浸透。每處理設(shè)接菌對(duì)照(未處理種子加接種體層和空白對(duì)照(未處理種子不加接種體層。溫室溫度控制在1828,出苗后每天澆水12次并根據(jù)需要輔以光照。25d后調(diào)查出苗后植株死亡率和病級(jí),計(jì)算防治效果。

8、試驗(yàn)重復(fù)2次。出苗后死亡率(%=(死苗數(shù) 出苗總數(shù)100病級(jí)(植株矮化率:Sco re=1-N a H aN bH b100式中N a:接菌處理活植株數(shù);N b:未接菌處理活植株數(shù);H a:接菌處理平均株高;H b:未接菌處理平均株高防治效果=(S c-S t S c100式中S c:接菌對(duì)照病級(jí);S t:藥劑處理病級(jí)。04農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)1999年1.4不同來(lái)源大豆疫霉菌分離物對(duì)甲霜靈錳鋅的敏感性方法同1.2。2結(jié)果與分析2.1殺菌劑對(duì)大豆疫霉菌菌絲生長(zhǎng)的影響測(cè)定了8種對(duì)低等真菌具有抑菌作用的內(nèi)吸性殺菌劑對(duì)大豆疫霉菌菌絲生長(zhǎng)的影響。結(jié)果表明,在離體條件下甲霜靈、甲霜靈錳鋅、安克錳鋅、霜脲錳鋅、克露

9、和殺毒礬6種藥劑能明顯抑制菌絲生長(zhǎng),其中甲霜靈的EC 50值為0.487g mL ,效果最好,其次為安克錳鋅和甲霜靈錳鋅(見(jiàn)表1。霜霉威為氨基甲酸酯類(lèi)內(nèi)吸性殺菌劑,在離體條件下抑菌作用很弱,其EC 50值為1185.6481g mL 。加瑞農(nóng)在50g mL 時(shí)對(duì)大豆疫霉菌的相對(duì)抑制率為64.84%,在100g mL 時(shí)完全抑制其生長(zhǎng),但低濃度的加瑞農(nóng)可加速大豆疫霉菌菌絲生長(zhǎng)。表16種殺菌劑對(duì)大豆疫霉菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用T ab le 1T he sen sitivity of hyp hal grow th of P hy top h thora sojae to 6fungicides藥劑F

10、ungicide抑菌回歸方程Inh ib ito ry equati on EC 50 g mL -195%置信度95%fiducial li m it EC 95 g mL-1y =3.2592+1.9243x8.02946.557810.414057.47492.2不同藥劑對(duì)大豆疫霉菌作用的活體測(cè)定運(yùn)用下胚軸傷口接種檢測(cè)6種殺菌劑在活體條件下對(duì)大豆疫霉菌的抑菌效果。結(jié)果表明,在活體條件下藥劑間對(duì)大豆疫霉菌的抑菌效果和藥效期差異明顯。0.5%劑量拌種,播種后25d 接種,甲霜靈和甲霜靈錳鋅的防效均保持100%,這兩種藥劑在活體條件下具有很高的抑菌效果和較長(zhǎng)的藥效期。0.5%安克錳鋅、殺毒礬、

11、霜脲錳鋅和霜霉威拌種,播種后7d 接種,其防效分別為68%、22%、0%和0%,播種后10d 接種,殺毒礬防效降至0,15d 后安克錳鋅完全失去作用。菌層法接種試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。對(duì)出苗率的調(diào)查結(jié)果表明,除霜霉威外,其他5種藥劑處理不影響種子萌發(fā),同時(shí)能防止由大豆疫霉菌引起的出苗前死亡,但霜脲錳鋅顯著延緩種子萌發(fā)。25d 后甲霜靈和甲霜靈錳鋅處理出苗后植株死亡率均為0,植株生長(zhǎng)發(fā)育正常,根系發(fā)達(dá),未表現(xiàn)任何大豆疫霉根腐病癥狀,顯然完全抑制了大豆疫霉菌的侵入。該結(jié)果再次表明,甲霜靈和甲霜靈錳鋅在活體條件下對(duì)大豆疫霉菌具有很高的抑制作用和較長(zhǎng)的作用期。安克錳鋅、殺毒礬和霜霉威防治效果依次為76.18%

12、、74.88%和71.09%,部分植株表現(xiàn)矮化或死亡,其14第3期朱振東等:防治大豆疫霉根腐病的藥劑篩選在活體條件下對(duì)大豆疫霉菌的作用效果明顯低于甲霜靈和甲霜靈錳鋅,不能抑制疫霉菌的入侵。霜脲錳鋅的防病效果最差,僅為43.91%,而且有28.57%的植株死亡。表20.5%藥劑拌種對(duì)大豆疫霉根腐病的防治效果T ab le2T he con tro l efficiency of coating seed w ith0.5%fungicides to soybean p hytop h tho ra roo t ro t disease殺菌劑Fungicide出苗率(%Seedling rate出

13、苗后死亡率(%M o rtality ofseedling病級(jí)D iseaseseverity防治效果(%Con tro lefficiency空白對(duì)照Con tro l96.670-2.3大豆疫霉菌分離物對(duì)甲霜靈錳鋅的敏感性測(cè)定分別來(lái)自于黑龍江省佳木斯、牡丹江、穆林、賓縣、安徽蒙城和美國(guó)的15個(gè)菌株對(duì)甲霜靈錳鋅的敏感性(見(jiàn)表3。結(jié)果表明:菌株間對(duì)甲霜靈錳鋅敏感性存在差異,其EC50值范圍在1.28652.3739g mL,平均值為1.8302g mL,EC95值在12.693042.1161g mL,平均值為27.4046g mL。來(lái)自于蒙城的PM C1菌株具有最高EC50值和EC95值,但

14、與最低值相比僅分別相差約2倍和3倍。另外,菌株間對(duì)甲霜靈錳鋅敏感性的高低與來(lái)源不具有相關(guān)性。因此,所測(cè)定菌株均為甲霜靈錳鋅敏感菌株,不存在抗藥性。3討論大豆疫霉菌為土傳病原菌,在大豆的任何生育階段均可造成嚴(yán)重危害,這為病害的防治,特別是藥劑防治帶來(lái)極大的困難。甲霜靈、甲霜靈錳鋅、安克錳鋅、殺毒礬和霜脲錳鋅在離體條件下對(duì)大豆疫霉菌均表現(xiàn)有效,但在活體條件下只有甲霜靈和甲霜靈錳鋅可完全抑制大豆疫霉菌的侵入并保持較長(zhǎng)時(shí)間的藥效,安克錳鋅和殺毒礬不能抑制大豆疫霉菌的侵入,其藥效期較短。在美國(guó)和加拿大,已有應(yīng)用甲霜靈防治大豆疫霉根腐病的報(bào)道,在播種時(shí)溝施甲霜靈能24農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)1999年表3大豆疫霉菌分離

15、物對(duì)甲霜靈錳鋅的敏感性T ab le 3T he sen sitivity of hyp hal grow th of iso lates of P hy top h thora sojae to m etalaxyl 2M Z分離物Iso late來(lái)源Sou rce 抑菌回歸方程Inh ib ito ry equati on EC 50 g mL -195%置信度95%fiducial li m itEC 95 g mL -1PSJ 141-1黑龍江佳木斯PS M 2黑龍江290農(nóng)場(chǎng)6-2黑龍江牡丹江16-1黑龍江穆林P M C 2U SA 2R 1美國(guó)y =4.6994+1.4510x1.

16、61131.27842.001921.9145U SA減輕感病品種的損失4,7。但是,甲霜靈為高抗藥性風(fēng)險(xiǎn)藥劑,許多疫霉菌已產(chǎn)生對(duì)甲霜靈的抗藥性8。自然條件下大豆疫霉菌便存在對(duì)甲霜靈具有高耐藥性的菌株,應(yīng)用甲霜靈防病可能選擇自然耐藥性菌株,導(dǎo)致抗藥性群體產(chǎn)生9。事實(shí)上美國(guó)大豆疫霉菌菌株已產(chǎn)生對(duì)甲霜靈的耐藥性10。在我國(guó),李寶篤等研究了大豆疫霉菌對(duì)甲霜靈的敏感性和變異性,未發(fā)現(xiàn)對(duì)甲霜靈具有耐藥性的菌株10。在本研究中我們也未發(fā)現(xiàn)對(duì)甲霜靈錳鋅具有耐藥性的菌株。因此,為了控制大豆疫霉根腐病在黑龍江省的危害,在目前大豆疫霉菌生理小種分布不明確和抗病品種還無(wú)法立即推廣的情況下,可以首選甲霜靈錳鋅進(jìn)行病害

17、防治。應(yīng)用甲霜靈錳鋅可以降低甲霜靈的用量,能延緩大豆疫霉菌對(duì)甲霜靈抗藥性的產(chǎn)生,同時(shí)兼治大豆其他根腐病及種子病害。安克錳鋅為卵菌低抗藥性風(fēng)險(xiǎn)藥劑,改變應(yīng)用方法如采用種衣劑延長(zhǎng)其藥效期,用于防治大34第3期朱振東等:防治大豆疫霉根腐病的藥劑篩選44 農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào) 1999 年 豆疫霉根腐病具有一定的前景。 參考文獻(xiàn) 1沈崇堯, 蘇彥純, 植物病理學(xué)報(bào), 1991, 21 ( 4 : 298 2韓曉增, 何志鴻, 張?jiān)雒? 大豆通報(bào), 1998, ( 6 : 5 6 3 ao Y. , T yler B. M. , F ung a l Genetics and B iology , 1996 , 2

18、0 : 43 51 M 4Schm itthenner A. F. , P lan t D isease , 1995, 69: 362 368 5Zhu Z. D. , W ang X. M. , S oy bean Genetics N ew sletter, 1998, 25: 52 53 6 a lker A. K. , Schm itthenner A. F. , C rop S cience, 1994, 24: 487 489 W 7A nderson T. R. , B uzzell R. I , P lan t D isease, 1982. 66 ( 12 : 1144 1

19、145 . 8王文橋, 劉國(guó)容, 植物病理學(xué)報(bào), 1996, 26 ( 4 : 294 296 9H unger R. M. , H amm P. B. , Ho rner C. E. et a l. , P lan t D isease, 1982, 66 ( 8 : 645 649 10 李寶篤, 彭友付, 沈崇堯, 植物病理學(xué), 1995, 25 ( 1 : 23 27 SCREEN ING O F FUNG IC I ES FO R CO NTROLL ING D PHY TO PHTHO RA ROO T RO T O F SOY BEAN Zhu Zhendong ang X ia

20、om ing T ian Yu lan u X iaofei W W ( In stitu te of C rop Germ p lasm R esou rces, CAA S, Beijing 100081 AbstractEffect of 8 system ic fung icides on g row th of P hy top h thora sojae w a s investiga ted in v itro. Am ong the tested chem ica ls, seven of them effectively inh ib it the g ro th of P.

21、 sojae excep t p rop am oca rb hyd roch lo 2 longer; In add ition d i ethom o rp h m ancozeb, oxad ixyl m ancozeb and p rop am oca rb hyd roch lo ride had better m to P hy top h thora soybean cu ltiva rs a re no t ava ilab le, app lying m eta laxyl m ancozeb to con tro l th is d isea se m ay ride. T he EC 50 va lues fo r inh ib ition of m ycelia l g row th by m eta laxyl, d i ethom o rp h m ancozeb, m eta laxyl m m ancozeb, oxad ixyl m ancozeb, cym oxan il m ancozeb, cu rza te2 8 w ere 0. 4870 g mL , 1. 4261 g mL , M be an a lterna tive and effective w ay. Key wordsSoybean; Phytop h tho ra r