1、低強壓下He-Ne激光對功能性前伸大鼠下頜髁突改建的影響及VEGF表達變化的研究 中圖分類號 學校代碼碩士學位論文影響及表達變化的研究作者 彭馨學科 口腔臨床醫學研究 口腔正畸學院 口腔醫學院指導 姓專方氛教名業向所師 雷勇華教授論文辯論日期 辯論委員會主中 南大 學年月原創性聲明本人聲明,所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知,除了論文中特別加以標注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經發表或撰寫過的研究成果,也不包含為獲得中南大學或其他單位的學位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的奉獻均已在論文中作了明確的說明。作者簽名: 日期:立立年

2、月互日望疊學位論文版權使用授權書本人了解中南大學有關保存、使用學位論文的規定,即:學校有權保存學位論文并根據國家或湖南省有關部門規定送交學位論文,允許學位論文被查閱和借閱;學校可以公布學位論文的全部或局部內容,可以采用復印、縮印或其它手段保存學位論文。同時授權中國科學技術信息研究所將本學位論文收錄到?中國學位論文全文數據庫?,并通過網絡向社會公眾提供信息效勞。期:叢年月蘭日中南大學碩士學位論文 中文摘要低強度激光對功能性前伸大鼠下頜髁突改建的影響及表達變化的研究中文摘要實驗目的:評價低強度?激光對髁突軟骨改建的影響,本實驗以大鼠為實驗對象,制作安氏類錯牙合畸形的功能性前伸下頜矯治模型,顯微測量

3、髁突軟骨厚度,并運用免疫組化的方法檢測的表達情況。實驗方法:選用周齡雄性大鼠只,隨機分成實驗組、對照組和空白組、天。實驗組及對照組大鼠上切牙用磷酸鋅水門汀粘斜面導板,并用正畸透明壓膜材料制作頸圈以防止大鼠前爪及后腿破壞斜面導板。實驗組大鼠戴上斜面導板后即刻用的.的氦氖激光. 照射顳下頜關節區,每天一次,每次分鐘/側,每只雙側照射。對照組大鼠僅佩戴斜面導板及頸圈,不接受激光照射。空白組大鼠無任何實驗處理。所有實驗動物均軟食飼養,自由飲水,置于恒溫實驗環境。實驗后、天分別取雙側髁突,放于。恒溫冰箱中,用%多聚甲醛固定,%脫鈣天,再逐級酒精脫水,石蠟包埋。石蠟切片進行染色,測量髁突軟骨厚度;免疫組化

4、方法檢測的表達。實驗結果:中南大學碩士學位論文 中文摘要、根據磨牙關系可見實驗組及對照組大鼠下頜前伸后咬合無偏斜,平均前伸量無統計學差異。、功能性前伸下頜后引起大鼠髁突軟骨厚度的變化。鏡下見實驗組及對照組比空白組關節后間隙增寬,前間隙縮窄,軟骨中份和后份細胞體積增大,軟骨層厚度增加,肥大層和成熟層細胞核肥大深染,細胞間質增加。、實驗組與空白組髁突天即呈現出明顯差異,而對照組直到實驗后天才能出現統計學意義。實驗組與對照組相比髁突軟骨中份、后份天組及天組增厚顯著。、陽性顯色表現為軟骨細胞的胞漿、包膜均可見棕黃色深染顆粒。染色分布于髁突軟骨的肥大層及成熟層;增殖層弱表達,纖維層未見陽性表達。實驗組髁

5、突軟骨中份、后份的表達增強,第天即與空白組出現差異,而對照組一直到第天組才與空白組出現有統計學意義的差異,且實驗組與對照組相比擬,在第天組及第天組,的平均光密度值明顯增強,.,有顯著統計學意義。實驗結論:、對下頜前伸的大鼠顳下頜關節應用低劑量的.激光,可以加速髁突軟骨的改建。、.激光使下頜前伸的大鼠髁突軟骨表達增加,加速骨替代軟骨的進程,促進鄰接區域骨中血管向軟骨侵入,從而加中南大學碩士學位論文中文摘要速軟骨的改建,促進下頜骨生長,為縮短功能性前伸下頜時間提供了新的可能。關鍵詞:.激光,下頜前伸,顳下頜關節,髁突軟骨,中南大學碩士學位論文英文摘要,. , ,:, . . , ,., ,. ?

6、, ., .,., ,.,. ,. , , , ? .:, ,.,. ., . /., ,.,. 。, . , ,. ,%, .,.?中南大學碩士學位論文英文摘要:、 .、., .,.、 , .,.、 , . . , . .:、耶 .、 ,. .:,目 錄中文摘要?.英文摘要縮略詞表?.實驗一低強度激光對功能性前伸大鼠下頜髁突改建的影響前言?. 日舌?.實驗設計結果?.討侖?.結論?.實驗二低強度激光對功能性前伸大鼠下頜髁突表達變化的研究前言?.實驗設計?.結果討論結論全文總結?.參考文獻?.綜苤?.激光在口腔醫學的應用?.致射?縮略詞表中文全稱縮略詞 英文全稱氦氖激光?二氨基聯苯氨鏈霉親和素

7、生物過氧化物酶.復合法 磷酸鹽緩沖液 血管內皮細胞生長因子顳下頜關節低強度激光治療。 : 釔鋁石榴石晶體摻鉻鉺釔鈧鎵石榴石晶體:實驗一中南大學碩士學位論文建的影響前言安氏類錯牙合畸形是我國常見的一種錯牙合畸形,以下頜發育缺乏最為常見。根據中華口腔醫學會年對全國七個地區的,名兒童及青少年的錯牙合畸形患病率調查,乳牙期安氏類錯牙合畸形的患病率為.%,替牙期類錯牙合畸形的患病率為.%,恒牙初期類錯牙合的患病率為.%。同期第五次全國人普查說明,年我國?歲的兒童及青少年有.億人,占總人口的.%【,由此可以粗略估計安氏類錯牙合畸形在我國患病人數數量可觀。嚴重的錯牙合畸形往往不僅局限于牙齒排列和牙合關系的異

8、常,還常伴有骨骼的改變。.【】認為安氏類錯牙合畸形中%以上都是由于下頜發育缺乏所致,我國學者伍軍、徐寶華對例恒牙初期安氏錯牙合患者進行研究,得出了類似的結果,真性上頜前突只占%,局部病例甚至上頜后縮,%的錯牙合伴有下頜后縮,即安氏錯牙合以下頜發育缺乏占多數【】。因此治療安氏類下頜骨發育缺乏的骨性錯牙合畸形任重道遠。功能性矯治器治療安氏類錯牙合可以利用生長發育期兒童自身的生長潛力,逐漸移動下頜向前,矯正下頜后縮,使面部協調美觀。但是功能性矯治器治療時間相對較長,如何能在保證效果的前提下最大限度的縮短佩戴時間是許多學者不斷研究探討的方向,其中顳下頜關節是研究的重點。顳下頜關節由顳骨關節面、關節盤和

9、髁狀突組成,是面部唯一的聯動關節,對頜面部的功能發揮著重要的作用。髁突作為顳下頜關節的重要組成局部,是下頜骨生長發育的中心。有別于其他關節來源于中胚層的間充質細胞,髁突軟骨細胞是由神經嵴細胞的頜突外胚間充質細胞分化為前成軟骨細胞,然后再由軟骨前體細胞最終分化成為成熟的肥大軟骨細胞覆蓋在關節外表。本實驗將探討低強度激光是否可以加速髁突軟骨的改建,從而縮短正畸治療時間。實驗一中南大學碩士學位論文實驗設計.材料和方法選取周齡雄性大鼠只長沙斯萊克景達實驗動物有限公司提供,體重。隨機分成實驗組、對照組及空白組各只。三組再隨機分成天、天、天、天組,每組各只。實驗組及對照組大鼠,腹腔注射水合氯醛./麻醉后,

10、佩戴自制自凝塑料的上頜斜面導板,使大鼠下頜前伸,磷酸鋅粘固。實驗組大鼠佩戴自制的上頜導板后,立即接受激光照射,每天一次,每次雙側各分鐘,實驗周期分別為天、天、天、天。激光功率,照射部位顳下頜關節區域直徑,激光密度./。對照組大鼠處理同實驗組,但不接受激光輻照。空白組大鼠無任何處理。所有動物均自由飲水,軟食喂養,置于恒溫實驗環境。各組實驗周期結束時,水合氯醛麻醉下經主動脈灌注液洗去體循環的血細胞,約/只,斷頭法取大鼠雙側顳下頜關節,再用%多聚甲醛溶液固定小時,%溶液脫鈣天,期問存放于恒溫冰箱中,更換液兩次,梯度酒精、異丁醇和正丁醇脫水,石蠟包埋為保證切面為矢狀向顴弓外側必須與石蠟底部平行,由外向

11、內連續切片,片厚,染色,光鏡觀察。圖.實驗大鼠 圖. 實驗激光電潦實驗一中南大學碩士學位論文圖. 大鼠髁狀突組織學由表及里分為【】:纖維層,增殖層,成熟層,肥大層,鈣化軟骨層結果實驗組,對照組大鼠佩戴功能性矯治器后下頜處于持續前伸狀態,下頜位置無左右偏移,不影響迸食軟性飼料。鑒于測量大鼠下頜前伸量受多種因素影響,我們僅就組織學進行分析。根據磨牙關系可見實驗組及對照組大鼠下頜前伸后咬合無偏斜,平均前伸量無統計學差異。功能性前伸下頜后引起大鼠髁突軟骨厚度的變化。鏡下見實驗組及對照組比空白組關節后間隙增寬,前間隙縮窄,軟骨中份和后份,細胞體積增大,軟骨層厚度增加,肥大層和成熟層細胞核肥大深染,細胞間

12、質增加。實驗組與空白組髁突天即呈現出明顯差異,而對照組直到實驗后天才能出現統計學意義。實驗組與對照組相比髁突軟骨中份、后份天組及天組增厚顯著。實驗一中南大學碩士學位論文主要儀器:北大物理系工廠.型氦氖激光器德國生物組織包埋機洲,德國石蠟切片機,德國展片機德國烤片機共聚焦顯微鏡 德國尼康科研級顯微鏡 日本電熱恒溫鼓風枯燥箱 上海新苗醫療器械廠江蘇金壇金城國勝實驗儀器廠.調速多用振蕩器.三用電熱恒溫水箱 天津市泰斯特儀器.實驗步驟染色步驟:脫蠟:二甲苯脫蠟分鐘×次:逐級酒精脫水:%酒精分鐘×次;%酒精分鐘×次;%酒精分鐘×次;%酒精分鐘×次;沖洗分

13、鐘;蘇木素染色分鐘,自來水沖洗分鐘:伊紅染色分鐘;%酒精秒;%酒精脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片。.實驗測量軟骨厚度測量【】: 倍鏡下,測量髁突軟骨的中份、后份的軟骨厚度。測量的起點以髁突軟骨前部出現成熟層軟骨細胞處開始,向后延續至軟骨消失處為測量的終點,將此區域人為地三等分為軟骨的前份、中份、后份。然后將前、中、后三個局部平均四等分,得到三個等分點,測量各局部三個等分點所在位置的軟骨厚度,并取平均值。統計學分析:將結果實驗組、對照組及空白組進行檢驗,.為有統計學意義。中南大學碩士學位論文 實驗一一圖. 髁突軟骨染色倍天實驗組; 天對照組; 天空白組; 天實驗組; 天對照組;天空白組;天實驗組

14、;天對照紐; 天空白紐;天實驗組; 天對照組; 天空白組:實驗一中南大學碩士學位論文四三一三,罰娶?§寒 實驗時問中南大學碩士學位論文實驗一圇丈箏四囊目窆 §掌實驗時閱圖.及表.中半代表實驗組與對照組相比具有統計學意義;代表實驗組與空白組相比有統計學意義;撐代表對照組與空白組相比具有統計學意義:實驗組髁突形態變化實驗組髁突軟骨:位于髁突外表的光滑的膠原纖維,纖維層增厚;增殖層細胞排列更加緊密,細胞小而密集,核漿比例增大,層數增加;成熟層細胞體積變大,核漿比例增大,細胞間質增加,層內細胞排列無規律。肥大層,細胞體積較成熟層細胞體積增大,排列無規律,破骨細胞數量增加。鈣化軟骨層

15、位于骨小梁之上,軟骨加速成骨。討論在正畸治療過程中,廣闊患者迫切的要求縮短治療時間,多種不同的方法都有在動物實驗和臨床中嘗試。在正畸牙粘膜下注射前列腺素【,注射甲狀旁腺素聃,注射皮質醇激素陽,注射骨鈣素 ,另外還有很多學者嘗試用中藥類藥物來加速骨改建,如丹參等?】,都可觀察到正畸牙移動速度加快。然而,無論是中藥抑或是西藥,都無法防止藥物應用的局限性以及隨之而來的副作用 。因而越來越多的學者轉向對機體更為溫和無創的加速方法【,】。低強度激光在大量體內及體外實驗都已經證實可以顯著減少正畸牙齒移動的時間【引,且對機體無任何副作用。在應用波長的激光提高了正畸病人牙齒移動速度。 觀察到低強度激光加速上頜

16、快速擴弓后骨小結形成,有利將激光應用于基質礦化、血管化及骨改建,縮短擴弓治療時間。.實驗一中南大學碩士學位論文到正畸牙齒移動后的保持階段的研究中,低強度激光作為無創傷性的方式,輔助短期佩戴保持器可以顯著縮短正畸術后的保持時間及增加牙齒移動后的穩定性,同時研究也說明,牙齒移動后僅接受激光照射不佩戴保持器會增加術后的復發可能性,推斷低強度激光對骨的活潑作用。臨床廣泛應用功能性矯正器將下頜從原來后縮的位置引導至前伸的位置,從而刺激下頜骨的生長,矯治下頜后縮的問題。理論上講,被動處于前伸位的髁突直接的關系到下頜骨生長量的增加。髁突前伸的同時間接調整了附著于顳下頜關節周圍的韌帶肌肉張力,因而也會問接對下

17、頜生長起到促進的作用。事實證明,通過生長改進治療可以刺激下頜加速生長,但能否使下頜生長長期增加卻存有爭議引。本實驗選擇周齡雄性大鼠的原因在于以下三個方面:第一:研究說明大鼠髁突根據其軟骨細胞的大小、排列緊密程度及基質鈣化程度的不同,呈現出明顯的層域化特點,這種組織形態與人類的髁突近似。運動類型上,大鼠的顳下頜關節可做前伸運動,升降運動和側方運動同樣與人類顳下頜關節運動類似【州;第二,全部選擇雄性大鼠可以防止雌性大鼠因激素周期性波動而對實驗可能產生的影響;第三,下頜后縮的安氏類錯牙合病人下頜骨改建在青春生長迸發期時對功能性矯正器的刺激最為有效。周齡的大鼠正好處于生長發育迸發期可以代表治療的理想年

18、齡階段。故鑒于以上三個原因大鼠可以作為良好的實驗動物選擇。本實驗應用上頜斜面導板是一種簡單的固定功能矯治器,使下前牙沿著導板斜面向前上方滑行約?,向前移動下頜及髁狀突在關節凹內的位置,從而刺激下頜生長,是常用的治療安氏類錯合的功能性矯治器【,。為了避免活動矯治器易脫落的問題,全天戴用的固定性矯治器可以很好的解決這個困擾,持續性導下頜向前,制作簡單,過程方便且保證了矯治的效果。但存在的缺點是飼養動物不能正常進食實驗中常用的硬質固體飼料,只能進軟食。在實驗分組方面,本實驗采用了三個組:空白組,實驗對照組,實驗組。這三組依次代表了正常大鼠組,單純受力組,及受力激光組,分別探討了正常大鼠髁突的增齡性變

19、化,單純受力后髁突的改變,以及力和激光兩個因素對髁突改建的影響。實驗未采用自身對照的目的是防止顳下頜關節的聯動效應,而使雙側的髁突改建相互影響。實驗組和對照組動物模型的髁突軟骨都受到下頜前伸所施加持續性外力的影響,可以看到下頜前伸所引發的髁突軟骨改建主要反映在各層細胞的大量增殖分化,尤其是關節軟骨中的增殖層。由于增殖層細胞具有多向分化能力,對所承當的外力具有敏感性,所以當承受的應力在生理范圍內時,細胞大量增殖,改中南大學碩士學位論文實驗一建修復髁突軟骨生長,使髁突軟骨保持活潑狀態;而一旦超出其承受能力,關節軟骨那么可能吸收變薄【】發生退行性變。持續性前伸力作用于下頜,髁突軟骨內的間充質細胞沿受

20、力方向排列且數量大量增加【】,并伴隨成熟軟骨細胞大量合成分泌型膠原。型膠原被廣泛認為是軟骨內成骨的信號,出現在軟骨成熟層中提示軟骨內正在進行成骨過程乜引。從髁狀突軟骨外表的纖維層到深層的骨組織是一個漸進的過程,由于施加了低強度激光及外力使軟骨到骨這個過程的加快。典型的髁突改建是在天及天實驗組髁突中份后份厚度增加明顯,此時,髁突小而密集的軟骨細胞增殖層在力與弱激光的刺激下大量分化為成熟的軟骨細胞。成熟層軟骨細胞又逐漸分化為肥大層軟骨細胞并不斷向胞外分泌基質,使細胞外基質增加。肥大層與軟骨下骨的交界處成骨活潑,轉變為其下的骨組織。鈣化軟骨層中無顯著細胞數目增加,但細胞體積增大。隨著細胞凋亡的發生,

21、軟骨細胞發生鈣化,軟骨下骨內血管長入鈣化軟骨層軟骨基質,礦物沉積加速,血管內未分化間充質細胞分化為成骨細胞,在軟骨基質上合成骨基質,軟骨最終被骨替代,完成適應性改建【】。對于天組,天組,實驗組與對照組髁突厚度并無明顯差異,我們推測可能是因為髁突軟骨接受的輻照劑量缺乏,時間較短有關,因為激光的生物刺激效應與照射劑量密切相關。.】用不同波長,不同劑量輻射的激光對成纖維細胞進行測試,研究細胞的形態,成活率及堿性成纖維細胞生長因子的增殖情況,發現波長為. ,激光能量密度為 /照射時,細胞成活率及堿性成纖維細胞生長因子表達最高,細胞的反響最好。.激光除了能輸出.阻和.的紅外光,最常用的是.的紅光,其激發

22、態光子從高能級到低能級的過程中釋放能量,與細胞線粒體色素作用,合成大量,提供了生物能量,促進細胞增殖,骨小結 形成,提高堿性磷酸酶活性,及骨鈣基因的表達。不同的細胞,最正確的輻射劑量存在差異。血管平滑肌細胞的最正確輻射劑量為./,細胞和倉鼠的成纖維細胞的最佳輻射劑量為./。此外,有研究還發現激光照射的時間和能量密度對生物刺激效應也有較大的影響。 】用的激光照射上頜擴弓大鼠的腭中縫。結果說明,接受相同總劑量,天組無促進作用,而分次小劑量的天組效果明顯;擴弓后立即進行激光照射要比擴弓天以后再接受相同劑量激光照射有效,因而得出低劑量輻照促進骨改建的生物效應不僅與激光照射的總劑量有關,也與激光照射開始

23、時間及照射能量密度直接相關。下頜前伸天后再使用的激光照射新西蘭兔髁突,無軟骨及纖維組織的增厚。照射開始宜早期進行在治療神經損傷方面也得出了相似的實驗一中南大學碩士學位論文結論。實驗人員發現在神經損傷后為了使神經功能最大程度恢復,進行早期規律的弱激光治療是極有幫助的,尤其在神經損傷后立即治療效果最正確;較為適宜的激光治療周期為到個月。如果在神經損傷后的第二周才開始進行弱激光治療,結果與未經激光照射組相比無明顯改善川。由實驗數據可知,實驗組與空白組在實驗天組時即可出現髁突厚度的明顯差異,且差異在第天組和第天組不斷增大。對照組與空白組在實驗第天組方可出現統計學差異,但不如實驗組明顯,說明單純大小適宜

24、的外力作用于髁突,可以促進髁突軟骨的生長,但是其促進生長的程度及反響速度不如的實驗結果相同時接受低強度激光輻照髁突軟骨。這個發現與吻合,激光照射可以刺激髁突生長,導致下頜前伸,從而到達下頜矯形的作用。體外實驗也證實了激光不僅促進成骨細胞,同時也可以促進軟骨細胞分化及活性,進而到達骨改建及軟骨分化的作用。在加速髁突軟骨改建的同時,】等人的臨床調查發現,低強度的弱激光屢次照射可以緩解治療過程中的不適感,提高患者對正畸治療的接受度。結論、對下頜前伸的大鼠顳下頜關節應用低劑量的激光,可以加速髁突軟骨的改建。中南大學碩士學位論文實驗二表達變化的研究前言正常的關節軟骨由關節腔內的滑液供應營養,這與關節軟骨

25、自身可以生成血管抑制劑,抑制軟骨中血管組織生成有密切的關系。當機體出現缺氧、炎癥、生長因子、細胞因子等刺激骨取代軟骨組織的因素時,肥大層軟骨成為軟骨下骨中血管向軟骨侵襲的目標與靶點。血管的生成為營養運輸創造了必要條件,為骨的修復和重塑奠定了根底【】。,是一種高血管內皮細胞生長因子 度特異的血管內皮細胞有絲分裂原,由糖蛋白單體以二硫鍵構成二聚體,相對分子量.。異構體是從一個單一的血管內皮生長因子的基因選擇性剪接的結果,其分子質量和生物學性質不同。通過與特異性受體、結合發揮促進血管新生和細胞增殖,增加血管通透性,以及淋巴內皮細胞增長,生長因子的表達的作用。因子是最有效的促血管生長因子,可以刺激血管

26、內皮細胞有絲分裂、增加內皮細胞滲透性,在很多在正常人和動物組織中都有表達,但一般表達水平都較低,當成骨活潑時,分泌大量增加。本實驗以為參考指標,測量其平均光密度值,進一步證實低強度?激光對功能性前伸引起髁突的改建的作用。全文總結中南大學碩士學位論文實驗設計.材料和方法實驗材料:同實驗一實驗方法:同實驗一.實驗儀器:同實驗一免疫組化主要試劑:兔抗多克隆抗體:武漢博士德生物試劑公司提供免疫組化試劑盒山羊封閉血清,生物素標記兔抗羊和復合物美國生物公司顯色試劑盒美國生物公司.實驗步驟免疫組化主要操作步驟:、常規石蠟切片脫蠟至水,:二甲苯脫蠟分鐘×次,梯度酒精水化。浸泡分鐘。、抗原修復,分鐘置

27、于恒溫水浴箱中。洗分鐘×次、滴加%,分鐘次,消除過氧化物酶活性。洗分鐘×次、滴加山羊封閉血清,孵育分鐘.、濾紙吸去封閉血清,不洗,滴加兔多克隆抗體:,冰箱過夜。沖洗分鐘次、滴加生物素標記的二抗,孵育小時。洗分鐘次、滴加,孵育小時。洗分鐘×次、顯色分鐘,鏡下觀察到有棕黃色陽性反響后,滴加沖洗分鐘次。、蘇木素復染細胞核分鐘,自來水沖洗分鐘。、%,%乙醇梯度脫水各分鐘,二甲苯透明分鐘次。、中性樹膠封片。、陰性對照:用代替一抗。.實驗測量判斷標準:陽性標準:細胞形態清晰,結構完整,包膜和胞漿為棕黃色。陽性細胞著色明顯高于背景色,陰性對照組代替一抗細胞未見陽性著色顆粒。中南

28、大學碩士學位論文 全文總結在高倍鏡下倍,對每張切片的髁突軟骨中份、后份進行觀測,采用? .軟件,計算平均光密度/,進行半定量分析。統計分析:.統計學軟件包,用檢驗,對實驗組、對照組及空白組進行分析比擬,.為有統計學意義。結果陽性表現為軟骨細胞的胞漿、包膜均可見棕黃色深染顆粒。陽性主要分布在髁突軟骨的成熟層和肥大層,增殖層弱表達,纖維層無表達。髁突軟骨中份、后份的平均光密度值表達:激光照射大鼠髁突后,實驗組髁突軟骨中份、后份的表達增強,第天即與空白組出現差異,而對照組一直到第天組才與空白組出現有統計學意義的差異,且實驗組與對照組相比擬,在第天組及第天組,的平均光密度值明顯增強,.,有顯著統計學意

29、義。天空白組;天對照組;天空白組;天實驗組;天對照組;天實驗組;天空白組天空白組;天實驗組;天對照組;天對照組;天實驗組;實驗二中南大學碩士學位論文,:囝口,.星蚴.圖.中,幸代表實驗組與對照組相比具有統計學意義;代表實驗組與空白組相比有統計學意義;代表對照組與空白組相比具有統計學意義;討論髁狀突具有較強的生長改建能力,終生保持著增殖與分化的潛能,為適應機體生長環境的變化或位置的改變,可以通過調節軟骨形成和后來的軟骨內骨化過程,從而使下頜骨與上頜骨生長相協調,形成正常的面部形態。本實驗比擬了個時間點,的平均光密度表達情況,對照組和空白組表達量在組內逐漸減少,這可能與周時大鼠處于生長發育頂峰期到

30、周大鼠成年這一增齡性過程有關,隨著生長發育的減慢停止,髁突軟骨內骨化速度減慢,分泌降低。之前孫磊在實驗中亦發現了髁突有相似的趨勢【。是高效的血管生成多肽及內皮細胞特異性的有絲分裂原和趨化因子,其基因的表達受到缺氧、腫瘤基因、抑瘤基因、細胞因子等多種因素的影響,如缺氧誘導因子.上調缺氧條件下的基因表達,瘤基因、中南大學碩士學位論文 實驗二等激活啟動子提高表達,而抑瘤基因負調控轉錄延伸因子降低表達。細胞因子及生長因子如、.、 .、.、.,、.、 .和 等都可以影響的表達,并且在適宜濃度范圍內多種骨形成細胞因子具有協同作用,使表達水平上調,且上調的水平高于單純應用一種細胞因子的水平。由于弱激光可以刺

31、激巨噬細胞、成纖維細胞、淋巴細胞、內皮細胞、角質形成細胞的增殖,增強細胞呼吸作用,的合成,釋放生長因子及細胞因子,增加膠原合成,故可以促進大量的分泌。大量分泌的通過介導、等通路釋放調節血管通透性,使纖維蛋白原和血漿蛋白向外滲出;通過介導的,生成的,誘導、纖溶酶原激活劑表達促進內皮細胞遷移,誘導微血管內皮細胞形成管樣結構或以發芽形式形成新生毛細血管;通過介導的、.旁路介導內皮細胞增殖,發動鈣離子;通過激活磷脂酰肌醇.與抗凋亡。簡言之,通過以上條途徑促進軟骨血管化,使軟骨吸收,從而發揮軟骨內成骨的作用。有人認為在軟骨血管化的過程中新生的小血管內源源不斷地輸送骨祖細胞,并調控其分化為成骨細胞。正常機

32、體的軟骨組織中無血管存在,表達水平較低,只有在軟骨內成骨過程中,軟骨下基骨內的微血管可向軟骨方向縱向生長,導致軟骨基質逐漸被吸收,并最終被骨基質所替代。關節軟骨在生長發育期,生長板肥大的軟骨細胞可以大量合成、分泌,誘導肥大細胞層血管發生,再給其注入受體嵌合蛋白后,血管侵入停止,骨小梁形成異常,軟骨向骨轉化停止。不僅與成骨細胞相互關聯,與破骨細胞功能之間也有著密切的關系。可以維持破骨細胞的存活,是破骨細胞增殖分化的調節因子。由于破骨細胞的存在,才使得軟骨細胞凋亡,細胞外機制改建,骨吸收成為可能。然而無限制的的表達使破骨細胞大量增加,骨組織吸收加劇,骨關節炎易感性上升瞠。對照組與空白組比擬,在實驗

33、天及實驗天的平均光密度都無明顯差異,直到實驗天組及實驗天組時,對照組才呈現出統計學差異,說明單純力的作用下前伸下頜可以改建髁突軟骨。而實驗組髁突中份、后份陽性表達增強,在實驗第天時即可出現具有統計學意義的增加,提示與對照組相比,實驗組可以更快地促進分泌,軟骨內骨化進程。肥大細胞軟骨層是從軟骨改建過程到軟骨內成骨過程的一個臨界區域,正是在這個區域內,成熟的軟骨細胞崩解,軟骨基質鈣化,大量新生小血管侵入,釋放前成骨細胞及成骨細實驗二中南大學碩士學位論文胞,軟骨內成骨過程開始。等前伸大鼠下頜時發現顳下頜關節表達水平較對照組顯著增高的程度與此處骨化的程度成正比。結論.激光使前伸的大鼠下頜髁突軟骨表達增

34、加,加速骨替代軟骨的進程,促進鄰接區域骨中血管向軟骨侵入,從而加速軟骨的改建,為縮短功能性前伸下頜時間提供了新的可能。全文總結中南大學碩士學位論文圖并信號傳導通路示意圖全文總結中南大學碩士學位論文全文總結本實驗選用周齡,.雄性大鼠,隨機分成實驗組、天,對照組、天及空白組、天。實驗組及對照組用磷酸鋅水門汀將斜面導板粘固于大鼠的上切牙,并用正畸透明壓膜材料制作頸圈以防止大鼠前爪及后腿破壞斜面導板。大鼠戴上斜面導板后顳下頜關節區即刻接受的.的氦氖激光照射,每天一次,每次分鐘/側,每只雙側照射。對照組大鼠僅佩戴斜面導板及頸圈,不接受激光照射。空白組無任何處理。各組實驗周期結束后分別取材,固定、脫鈣、脫

35、水、石蠟包埋。石蠟切片進行染色,測量髁突軟骨厚度;免疫組化方法檢測平均光密度值的表達。實驗結果如下:組織學染色發現:實驗組髁突軟骨與對照組形態比擬:位于髁突外表的光滑的膠原纖維,纖維層增厚;增殖層細胞排列更加緊密,細胞小而密集,核漿比例增大,層數增加;成熟層細胞體積變大,核漿比例增大,細胞間質增加,層內細胞排列無規律。肥大層,細胞體積較成熟層細胞體積增大,排列無規律,破骨細胞數量增加。鈣化軟骨層位于骨小梁之上,軟骨加速成骨。實驗組與空白組在實驗天組時即可出現髁突厚度差異,且差異在第天組和第天組增大。對照組與空白組在實驗第天組方可出現差異。實驗天及天組實驗組比對照組髁突軟骨增加更為顯著。免疫組化

36、結果顯示:陽性表現為軟骨細胞的胞漿、包膜均可見棕黃色深染顆粒。陽性主要分布在髁突軟骨的成熟層和肥大層,增殖層弱表達,纖維層無表達。髁突軟骨中份、后份的平均光密度值表達:激光照射大鼠髁突后,實驗組髁突軟骨中份、后份的表達增強,第天即與空白組出現統計學差異,而對照組一直到第天組才與空白組出現有統計學意義的差異,且實驗組與對照組相比擬,在第天組及第天組,的平均光密度值明顯增強,.,有顯著統計學意義。實驗結論:、對下頜前伸的大鼠顳下頜關節應用低劑量的.激光,可以加速髁突軟骨的改建。中南大學碩士學位論文全文總結、激光使下頜前伸的大鼠髁突軟骨表達增加,加速骨替代軟骨的進程,促進鄰接區域骨中血管向軟骨侵入,

37、從而加速軟骨的改建,促進下頜骨生長,為縮短功能性前伸下頜時間提供了新的可能。參考文獻中南大學碩士學位論文參考文獻.,.,.,. /. ,.:?.】傅民魁,王邦康,中國名兒童與青少年錯牙合畸形患病率的調查.中華口腔醫學雜志,.:.【】中華人民共和國國家統計局年第五次全國人口普查公報,. 【.,., . .:.,【】伍軍、徐寶華,安氏類分類錯牙合的分型及其上下面角的顱面特征口腔醫學縱橫,.:.】,., .,:.【】.,.,.:. ,【】 ,.,. ,.:.】,.,.,:.】,.,. ,.:.醫學,.:.,.,】. ,.:.【 ,.,. ,.:.,.,】 , .,.:.】 , , .,.,.:.【,

38、., .,.:.】,., , .,。:?.【】徐寶華,現代臨床口腔正畸學.北京:人民衛生出版社,【】李延武,馬肅,成年鼠髁突增齡性變化的組織學和組織化學研究.口腔醫學研究,.:.】徐邁,功能矯形前伸大鼠下頜后髁突軟骨的改建及表達變化的研究,.西安:第四軍醫大學,.【】林珠,段銀鐘,丁寅,口腔正畸治療學.北京:世界圖書出版公司.】陳揚熙,趙美英,牙頜面畸形功能矯形.人民衛生出版社,韓正學,黃培林,顳下頜關節盤前移位關節區組織病理變化的實驗研究.上海口腔醫學,.:?. 】 , ,. ,. :.,趙志河,下頜前伸后髁突軟骨成熟層內型膠原的【】沈剛,., 表達.華西口腔醫學雜志,.:.】 , , ,

39、.,;:】.,., . .:】,., ? . . :, :?.【】,.,. ,.:.參考文獻中南大學碩士學位論文醫學與康復雜志,.:.】周征,羅頌椒,徐國標,前伸下頜后大鼠髁突軟骨生長改建的定量組織學研究.口腔正畸學,.:.,【】,.,.,.:.】 ,.,.,.: 【】 ,., , .,. ,. :.】孫磊,漸進性咬合紊亂對大鼠髁狀突軟骨組織形態及、和.表達的影響,西安:第四軍醫大學,., , ,【】、,.,.:., ,【】 ,., .,.:.】 ,.,.:.中南大學碩士學位論文綜述綜述激光在口腔醫學的應用激光醫學開展簡史.激光醫學開展簡史激光醫學的開展大致可以分為個時期:以根底研究為主的時期

40、;臨床廣泛應用期;學科形成期;激光醫學開展的成熟期。早在年,利用受激發射光放大的原理,成功誘導在紅寶石晶體受激發射【。第二年,紅寶石視網膜凝固機即應用于眼科成為世界上第一臺醫用激光機【】,等對剝離的視網膜進行焊接;研究了紅寶石激光在宏觀及鏡下的傷害,探討了光凝治療的潛在價值及對人員的傷害。意識到激光生物學效應的潛在用途是無限的,通過特定波長可以更精確地研究微生物的基因突變方式。】在大鼠實驗中研究不同功率的激光對大腦及腫瘤的損傷。美國辛辛那提州的兩名研究人員對名患有惡性腫瘤、血管腫瘤及良性損傷的病人進行實驗,提出可以應用激光選擇性破壞特定染料染色的腫瘤細胞的意見,探索性地為系統性的光動力學療法奠

41、定了良好的根底。年美國皮膚病科學院指出高能量激光器能夠迅速,平安地對許多非炎癥性的皮膚良性病變進行治療,并且無不良的疤痕 。年,中國科學院長春光學精密機械研究所的研究人員艱苦奮斗,開拓創新,獨立自主研發了我國第一臺紅寶石激光器。,我國第一例紅寶石激光器進行視網膜凝固的動物實驗在北京同仁醫院成功完成【。從此,拉開了我國的激光醫學研究的序幕。隨著醫用激光器的改造和開展,激光逐漸進入到臨床應用階段。上世紀年代,醫用激光器的種類有了極大的豐富,不再局限于紅寶石激光器,激光器、激光器、氮分子激光器、激光器、氬離子器、氪離子激光器等等常用的醫用激光器到達十種以上,普及臨床各科。例如激光開始用于治療高血壓等

42、內科疾病,激光被用于神經外科,用于整形外科,】用于氣道病變手術。除此之外,半導體激光,紅寶石激光及固體激光等激光也不斷在胃腸、泌尿外科、胸外科、皮膚科、五官科、婦科等領域摸索,開拓適應癥,減少并發癥。綜述中南大學碩士學位論文到了世紀年代,激光仍以日新月異的速度飛速開展,不僅為生命科學和生物工程開辟了嶄新的研究途徑,也為臨床診斷及治療提供了新的手段,在此根底上逐漸形成邊緣學科一激光醫學,并成立了“激光醫學咨詢委員會,定期出版激光醫學期刊及專著【】。據統計,年美國醫院有%的手術是應用激光刀完成的,約有萬例,全美/的門診機構擁有激光醫療設備。在此期廣泛應用的激光掃描共聚聚焦顯微鏡和細徑柔性光纖內窺鏡

43、具有里程碑式的意義。隨后的年代,是激光醫學不斷拓展完善的時期。我國的激光醫學也進入各個大學的課堂,并在大學和省醫院設立激光醫學中心。.激光醫學在口腔應用的開展簡史激光在口腔診治方面也是較早研究的醫學領域之一。繼創造紅寶石激光器后,.年代許多口腔醫生根據自身的臨床經驗將:及激光摸索著應用于臨床。早期口腔激光治療僅限于在醫院進行口腔軟組織的切除,且當時激光器為連續光波輻射,增加了對周圍組織結構的傳導性熱損傷的危險性,限制了激光在口腔的應用。直到年,美國牙科激光公司, ,生產出商業化牙科:脈沖式激光器,使得激光在口腔治療中廣泛開展釗。隨著激光技術的日漸成熟及飛速開展,激光已應用于臨床齲病治療,局部軟

44、硬組織切除改形,根管碎屑及根管玷污層的處理等等。與傳統口腔旋轉器具相比,激光有著明顯的優勢:精確切削軟硬組織,對牙體牙髓溫度及機械危險性較小,無噪音,降低疼痛,相比將旋轉 放入口內,激光探頭具有更高的可接受程度。激光的特性方向性好:從空間分布來看,激光的高方向性主要指激光束的發散角小,接近衍射極限,約為量級。普通光源發出的光輻射沿冗立角分布,比激光束大倍。激光的高方向性使其能有效的傳輸較長的距離,還能保證聚焦后得到極高的功率密度,及橫向空間相干性。光束的立角為:./公式中表示平面發散角,九表示波長,是光束的橫截直徑。激光的方向性可以允許其傳輸很長的距離,并且保持很高的聚焦后的功率密度。高亮度:

45、光源在單位面積上向某一方向的單位立體角內發射的功率就稱為光源在該方向上的亮度。光源的亮度定義為光源單位發光外表中南大學碩士學位論文綜述沿給定方向上單位立體角內發出的光功率的大小。即/。由于激光的能量被集中在極短的時間內發射出來,因此激光功率極高。是尢球面度,普通光源光向四面八方發散,太陽的發光亮度約為/.。激光受到諧振腔的限制,發散角很小,相應亮度在/.的范圍內。單色性:激光的產生是受激輻射發生在譜線的固定兩能級之間,同時還受到諧振腔選頻作用的限制,能夠產生激光振蕩的頻率較小,因此頻帶很窄,單色性好。氣體激光器的單色性比固體激光器好,單色性最差的是半導體激光器。相干性:激光的高相干性是在光的波動理論根底上描述光波各個局部的位相關系。由于激光中每個光子的運動狀態頻率、相位、偏振態、傳播方向都相同,因此它的相干性比普通光源要強得多。激光的相干長度達×.相干性包括時間相干性與空間相干性。時間相