1、扶正治標法對青少年花粉癥患者相關基因表達的影響【摘要】 目的： 研究中藥治療花粉癥的作用機理。方法： 選擇50例花粉癥患者，口服敏康片，治療6個月后觀察療效及FcRI,IL-4R,IL-5R,HLA-A基因表達情況，并以20例變應性皮炎和19例正常人為對照，用Northern blot檢測FcRI,IL-4R,IL-5R的變化。用RT-PCR 法檢測HLA-A，計算相對光密度值。結果： 花粉癥組患者癥狀有明顯改善（P<0.05），治療前后血清總IgE比較差異有統計學意義（P<0.01），花粉癥組4個基因的表達治療前與正常人比較，差異均具有統計學意義(P&lt

2、;0.01)，治療后與治療前比較差異有統計學意義(P<0.01)。變應性皮炎組治療前FcRI,IL-4R與正常組比較差異有統計學意義(P<0.05)，治療前后FcRI比較，差異有統計學意義(P<0.05)。鼻炎組、皮炎組HLA-A相對光密度值均較正常組高，兩組治療前后也有不同程度的改善(P<0.05)。結論： 中藥可以調整花粉癥患者相關基因表達，改善患者過敏體質，緩解臨床癥狀。 【關鍵詞】 花粉癥； 敏康片； 基因表達； Northern blot； 中醫藥療法Abstract Objective: To evaluate the eff

3、icacy of Minkang tablet on gene express in the patients with hay fever. Methods： The trial involved 50 patients with hay fever,20 patients with atopic dermatitis, Minkang tablet(three capsule, twice a day, 6 months) was given to patients with hay fever(50)，also 19 as normal as control. Results： The

4、symptom and IgE after medication had difference highly statistically significant before medication. The FcRI,IL-4R,IL-5R,HLA-A related with atopy before and after medication, FcRI,IL-4R,IL-5R,HLA-A in the patients with hay fever and in normal were different highly statistically significant(P<

5、0.01) before medication; and genes express improved significantly(P<0.01) after medication. FcRI,IL-4R of the patients with atopic dermatitis and in normal were statistically significant(P<0.05) before medication, FcRI improved significantly(P<0.05) after medication. Conclusion：

6、 Minkang tablet was effective in controlling gene express on patients with hay fever.Key words hay fever; herb; gene express; northern blot; TCM花粉癥是一種常見的變態反應性疾病，臨床以鼻塞、流涕、噴嚏、鼻癢等為主要癥狀,全球平均發病率在 10%25%左右1。近年來，我國的發病率也有逐漸上升趨勢。西醫學的治療多采用對癥處理，能夠較好地控制臨床癥狀，但容易復發，副反應大。中醫治療從調整患者過敏體質著手，有標本同治的效果，但作用機理卻不清楚。2002年1月2

7、005年12月，我們就中藥對花粉癥患者相關基因表達的影響做了初步研究，現報告如下。1 對象與方法1.1 研究對象1.1.1 臨床資料 全部患者和正常人均來自我們2004年3月2004年12月在河南林州進行的臨床調查。花粉癥組50例，男性33例，女性17例，年齡1218歲，平均（14.5±1.2）歲。變應性皮炎組20例，男性13例，女性7例，年齡1217歲，平均（14.2±1.3）歲。正常組19例，男性13例，女性6例，年齡1317歲，平均（15.8±1.1）歲。經統計，各組基本情況差別無統計學意義。1.1.2 納入和排除標準 花粉癥診斷標準根據1997年中華醫學會

8、在海口修訂的變應性鼻炎診治標準2。變應性皮炎診斷參照Williams標準3。患者需同意進入治療觀察，在此期間堅持服用待試藥物，每周記錄癥狀，停止其他一切治療手段。排除以下病例：同時使用相應激素或其他藥物；合并有影響判定療效的鼻病如鼻息肉、鼻竇炎等；合并有心、腦血管，肝、腎和造血系統等嚴重原發性疾病。1.2 方法1.2.1 藥物及服法 花粉癥組和變應性皮炎組患者口服敏康片（靈芝、蟲草菌絲體等），每日2次，每次3片。正常組口服金施爾康（中美施貴寶有限公司生產）每日1次，每次2片。各組均治療6個月。1.2.2 主要儀器和試劑 Trizol(Invitrogen公司)，Invitrogen膠回收試劑盒

9、，Beckman DU7500紫外分光光度計（美國 Beckman 公司），電泳儀（Bio-Rad公司）。1.2.3 檢測項目 兩組均采用北京海奧公司IVT過敏原試劑檢測總IgE。用Northernblot法檢測FcRI,IL-4R和IL-5R基因表達水平。地高辛標記探針(FcRI,IL-4R,IL-5R引物均由Sangon公司合成)。FcRI引物序列參照文獻4；IL-4R引物序列參照文獻5；IL-5R引物序列參照文獻6。用RT-PCR 法檢測HLA-A，HLA-A 引物由Sangon 公司合成,引物序列參照文獻7：5-GACGACACGCAGTTCGTGC-3，5-CATGTCCGCCGCG

10、GTCCAA-3，目的片段331 bp，內參-actin 引物5-CACCATGTACCCTGGCATTG-3，5-TAACGCAACTAAGTCATAGT-3。采用英國Syngene公司凝膠分析系統(GDS 8000, Gene Tools from Syngene software)檢測計算各組光密度值。1.3 統計學方法 應用SPSS統計軟件,兩樣本均數差異采用t檢驗（方差不齊進行t檢驗）,取0.05為檢驗水準。2 結果2.1 臨床療效 參照中華醫學會在海口修訂的“變應性鼻炎診治標準及療效評定標準”2判斷療效。花粉癥組顯效22例，有效19例，無效9例，總有效率82，治療前癥狀積分為9.8

11、6±1.44，治療后為4.04±1.38，治療前后差異有統計學意義（P<0.05）。2.2 免疫學指標比較 經過敏原試劑檢測總IgE，花粉癥組與變應性皮炎組患者治療前后血清總IgE的比較見表1。 表1 兩組治療前后血清總IgE比較（略）Tab 1 Comparison of serum total IgE betweendifferent groups#: P<0.05，#: P<0.01，與治療前比較 2.3 基因表達水平比較 花粉癥組和變應性皮炎組IL-4R治療前與正常組比較差異有統計學意義（花粉癥組t=34.820 3，P&a

12、mp;lt;0.01；皮炎組t=18.466 8，P<0.01）。花粉癥組IL-4R治療前后比較,差異有統計學意義t=44.565 1, t(0.050 0)=2.0117, P<0.05。花粉癥組IL-5R治療前與正常組比較,差異有統計學意義（t=33.624 4，P<0.01），治療前后比較差異有統計學意義t=41.184 6, t(0.050 0)=2.011 7，P<0.05。 FcRI兩組治療前與正常組比較,差異有統計學意義花粉癥組t=52.831 9，P<0.01；皮炎組t=22.232 2, t(0.050 0

13、)=2.108 6, P<0.05，治療前后組內比較,差異亦有統計學意義花粉癥組t=55.105 7,P<0.01；皮炎組t=17.999 1, t(0.050 0)=2.109 8, P<0.05。詳見表2。 用RT-PCR 法檢測HLA-A，通過計算各組相對光密度值（目的條帶光密度內參-actin 條帶光密度），結果花粉癥組、變應性皮炎組HLA-A 均較正常組表達高，而兩組治療前后均有不同程度的改善（見表3）。直接從各組電泳結果也可看出，相關基因表達情況與以上處理結果一致（圖1）。表2 各組治療前后光密度值比較（略）Tab 2 Comparison

14、 of D value between three Groups#：P<0.05，#:P<0.01，與治療前比較; *:P<0.05，* :P<0.01,與正常組比較（4例抽提DNA失敗） 圖1 各組電泳圖（略）Fig 1 Electrophoregram in different Groups表3 各組HLA相對光密度（略）Tab 3 Comparatively D value of HLA-A betweenthree Groups#: P<0.05，#:P<0.01，與治療前比較； *:P<

15、0.05，*: P<0.01，與正常組比較（4例抽提DNA失敗） 3 討論 花粉癥是發生在鼻粘膜的變態反應性疾病，屬I型變態反應。變應原初次被吸入后, 刺激機體產生特異性IgE,T淋巴細胞和巨噬細胞等。特異性IgE結合在鼻粘膜上皮細胞和表面的肥大細胞、嗜堿細胞的細胞膜上，此時鼻粘膜便處于致敏狀態。當再次吸入變應原時，變應原即與肥大細胞、嗜堿細胞表面的IgE 發生橋連，同時激發T 淋巴細胞和巨噬細胞，繼而發生一系列生化反應，導致以組胺為主的多種介質釋放。這些介質通過鼻粘膜血管、腺體、神經末梢上的受體等,引起機體(系統)和鼻粘膜上皮細胞局部明顯的組織反應而發病。 目前大多數學者認為，

16、花粉癥是一種多基因疾病。其發病除與環境、免疫等因素有關外，還有明顯的遺傳傾向, 但其遺傳基因尚不清楚。鑒于過敏者在遺傳學上有結構和功能上的特征和缺陷，而現代基因技術又為探討這種特征和缺陷，弄清中醫藥對相應基因表達的調控作用提供了可能，因此，本項研究將從體質之本先天（遺傳）因素出發，研究花粉癥（過敏體質患者）的基因表達特點以及治本中藥對相關基因表達的影響，并以特應性皮炎為平行對照，正常人為參照。由于變態反應炎癥中有很多細胞因子參與，且相應有高水平表達，所以在相關細胞因子及其受體的基因位點尋找特應癥的候選基因也是一個研究的方向。目前研究主要在集中在IL-4,IL-5,IgE等。現已證明，IL-4為

17、多反應性免疫調控因子，對B細胞、T細胞、巨噬細胞等的增殖、分化具有重要調控作用，能誘導B細胞產生IgE；IL-5則促進嗜酸性粒細胞增生、分化；位于嗜堿性粒細胞和肥大細胞表面的IgE/FcRI復合體結合相應變應原，介導型速發型超敏反應8。產生IgE 的調控基因位于HLA 區域，許多花粉癥的基因研究集中在這一區域。目前國外對上述基因的研究較多，關于它們與過敏性疾病相關性的結論也較為明確9-11，故而本項研究選擇了這幾個基因。 花粉癥屬于祖國醫學“鼻鼽”范疇。多數醫家認為本病的病因病機是風寒之邪外襲，肺脾腎內虛。其病機中外邪固然是致病誘因，但根本還在于肺氣虛。敏康片是何裕民教授的經驗方，由靈芝、蟲草

18、、白芷等組成，具有益肺、固本、通竅之功效。方中靈芝滋補強壯、益氣固本，蟲草補肺益腎，助陽填精，強壯滋補，白芷通鼻竅。現代研究提示靈芝有較強的免疫調節能力12，蟲草多糖單獨或協同PHA 誘導IL-2R 的表達,促進可溶性IL- 2R 的生成，對外周血淋巴細胞具有雙向免疫調節作用13。服藥后患者主要臨床癥狀積分有所改善，血清總IgE也有所下降，表明體內的高致敏狀態有所緩解。 我們的研究結果提示，患者的相關基因表達水平也有所改變14。IL-4R在兩組患者中治療前均較正常組高，花粉癥組治療后降低。花粉癥組治療前IL-5R較正常組高，治療后降低。兩組治療前FcRI均較正常組高，治療后均降低。變應性皮炎組

19、IL-4R,FcRI治療前均較正常組表達高，治療后只有FcRI有所降低。花粉癥組、皮炎組HLA-A 均較正常組表達高，而治療后有不同程度的改善。從以上結果可以看出，FcRI,HLA-A,IL-4R和IL-5R主要在花粉癥患者中改變比較多，敏康片的療效也相對較好。而變應性皮炎組上述基因表達改變不大，療效也不是很明顯。這主要是因為我們在立項時，主要查詢了花粉癥的文獻，在此基礎上選擇上述基因作為觀察項目。而敏康片的配方也主要針對花粉癥，從中醫理論上講不適合皮炎病機，療效亦一般。通過對幾個基因的檢測，我們可以初步看出，敏康片對花粉癥等的作用，一方面是調節相關IgE調控基因，達到改善機體高敏狀態的作用，

20、另一方面可以調節細胞因子相關基因，緩解機體的炎癥，減輕癥狀。這是個多環節的調節過程。 對照藥物選用金施爾康主要是從體質研究的角度考慮，同時顧及醫學倫理和患者的可接受度。金施爾康作為多種維生素和微量元素的復合保健品，并沒有明確的治療變應性鼻炎的療效，只具有安慰劑的性質。同時，有研究表明變應性鼻炎患者存在微量元素的失衡，肺氣虛、脾氣虛和腎氣虛者，發鋅含量低于常人，銅/鋅值升高，同時發錳含量亦升高15,因此，從某種意義而言，金施爾康也具有治療作用，也帶有治本的性質，但不同于治療組藥物改善氣虛體質的治本，它改善、調整的是患者體內可能存在的微量元素失衡的狀況。【參考文獻】 1 王德云.應重視對變應性鼻炎

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