1、多巴胺D1受體在帕金森腦黑質紋狀體的表達 作者：樊平 石葛明 康云霄 郭巍巍 王磊【摘要】 目的 觀察帕金森（PD）病人腦黑質紋狀體多巴胺D1受體的表達變化。方法 采用免疫放射自顯影法觀察PD標本(PD組)中黑質紋狀體多巴胺D1受體的含量改變，并與非神經系統疾病腦標本(對照組)進行對照研究。結果 PD組多巴胺D1受體標記信號在殼及尾狀核比對照組減弱，黑質多巴胺D1受體的標記信號比對照組增強；灰度值分析顯示，殼及尾狀核的灰度值比對照組分別增加了11.35%和10.52%，而黑質比對照組減了48.89%（P<0.01）。結論 多巴胺D1受體在PD人腦標本殼及尾狀核的表達降低、黑質表達

2、增加。 【關鍵詞】 帕金森病；多巴胺D1受體；紋狀體；黑質研究表明，帕金森病（Parkinsons disease，PD）是由中腦黑質多巴胺能神經元退行性變導致紋狀體相應神經支配減少所致的神經退行性疾病，目前左旋多巴（LDOPA）替代療法仍是PD的主要治療手段1，在疾病的初期會起到很好的治療效果，但隨之出現的藥效減退及異動癥等副作用影響了PD的治療2。LDOPA引起的副作用的機制目前尚不十分清楚，推測與多巴胺受體的表達改變、進而導致基底神經節傳出活動障礙有關。研究表明，多巴胺D1受體主要分布于基底神經節傳出通路直接通路上的中型有棘GABA能神經元3，在運動調控中起著重要的作用4，多巴胺D1受體

3、的表達變化明顯改變基底神經節的傳出活動。有關PD時多巴胺D1受體在基底神經節表達改變的研究結論不一5，6。本研究利用免疫放射自顯影技術觀察PD患者腦黑質紋狀體多巴胺D1受體表達的變化，探討LDOPA產生副作用的機制。1 材料與方法1.1 材料人腦標本8例，4例死亡前診斷為PD（PD組），死亡后病理檢查確診，在治療期間均有LDOPA服藥史；另4例為死于非中樞神經疾病患者（對照組）。1.2 方法尸檢腦標本切成35 mm，經10%甲醛固定、石蠟包埋。石蠟塊行常規切片，片厚8 m。裱片、脫蠟入水后分別進行0.01 mol/L枸櫞酸緩沖液（pH6.0）抗原修復、0.2 % TritonX100、8%正常

4、羊血清預處理（4，1 h）、1250大鼠單克隆抗多巴胺D1受體抗體孵育（4，48 h）、小鼠抗大鼠IgG（1100）室溫孵育2 h、125I標記的羊抗小鼠IgG（1 Ci/ml）室溫孵育1 h，每步間以TBS洗片3次。125I標記的切片經洗片、風干，將載片置于放射自顯影盒內，載片上覆以 Kodak Biomax MS膠片，曝光7 d，行顯影、定影。對照組省去一抗，余者相同。1.3 圖像分析將膠片掃描，分辨率為300 dpi，以TIFF格式儲存。利用ImageJ 軟件測量有關腦區的灰度值。1.4 統計學分析所得數據用x±s表示，采用t檢驗。2 結果2.1 殼、尾狀核及黑質多巴胺D1受體

5、免疫反應對照組多巴胺D1受體標記信號主要分布于新紋狀體的殼及尾狀核；舊紋狀體的外側蒼白球、內側蒼白球僅見微弱的標記；邊緣紋狀體的伏核也可見較弱的標記信號。中腦黑質可見較強的多巴胺D1受體標記信號。PD組多巴胺D1受體標記信號在殼及尾狀核明顯減弱；黑質多巴胺D1受體的標記信號明顯增強，見圖1。2.2 PD黑質紋狀體多巴胺D1受體表達的灰度值變化殼及尾狀核的灰度值比對照組分別增加了11.35%和10.52%，而黑質則比對照組減少了48.89%（P<0.01）。見表1。表1 PD黑質紋狀體多巴胺D1受體表達的灰度值變化(略)3 討論 以往研究表明，多巴胺D1受體主要存在于參與基底神經節

6、中紋狀體傳出聯系“直接通路”的殼及尾狀核，直接投射到內側蒼白球和黑質網狀部的GABA能投射神經元3，激活多巴胺D1受體能夠提高腺苷酸環化酶的活性，從而抑制“直接通路”內側蒼白球和黑質網狀部的GABA能傳出神經元，進而興奮丘腦皮質投射神經元，增強丘腦皮質通路的活動；殼及尾狀核多巴胺D1受體表達的降低最終將導致丘腦皮質通路活動的減弱。本研究顯示，殼及尾狀核多巴胺D1受體的表達減少，黑質多巴胺D1受體的表達增加。PD患者腦殼及尾狀核多巴胺D1受體表達的減少一方面可能與黑質多巴胺神經元退性變后投射到這些腦區多巴胺的減少7，導致多巴胺D1受體表達減少有關；另一方面也可能是在疾病治療過程中LDOPA的使用

7、改變了多巴胺D1受體的表達所致。黑質多巴胺D1受體表達的增加可能與黑質致密部多巴胺能神經元退性變后星形膠質細胞增生有關；細胞培養的研究證實，星形膠質細胞能夠表達多巴胺D1受體8，膠質細胞的增生導致了該區域多巴胺D1受體的增多。此外，黑質多巴胺D1受體表達的增加也可能與黑質網狀部GABA能神經纖維多巴胺D1受體含量增加有關；免疫細胞化學的研究顯示，黑質網狀部也存在多巴胺D1受體，位于來自殼及尾狀核GABA能神經元的軸突或軸突末梢。由于本研究所采用的方法難以確切區別黑質的致密部和網狀部，因此不能排除PD組黑質多巴胺D1受體的增加是由于網狀部多巴胺D1受體含量增加所致的可能性，其意義尚難推測。 以往

8、對PD人腦標本多巴胺D1受體含量變化的研究主要是利用配基受體的放射自顯影方法，研究結果多不一致，表現為殼和尾狀核多巴胺D1受體的增加、降低或沒有改變5，6。這些結果的差異很可能與疾病過程中藥物的應用，特別是LDOPA的使用有關。研究顯示，多巴胺激動劑能夠引起多巴胺D1受體的胞內化9，從而導致配基配體的研究方式檢測不到這部分受體，從而呈現無改變的假象，LDopa在疾病治療過程中的應用也可能會產生同樣的作用。本研究采用多巴胺D1受體特異性抗體識別抗原的免疫放射自顯影方法，能夠檢測組織內蛋白含量的改變，可真實反映多巴胺D1受體含量的變化。有研究表明， 6羥多巴胺大鼠PD模型尾殼核多巴胺D1受體明顯降

9、低10，提示長期的多巴胺缺乏降低了支配靶區殼及尾狀核多巴胺D1受體的表達。還有研究發現，給予正常大鼠施予多巴胺D1受體激動劑對其運動行為幾乎沒有明顯的影響，然而對PD大鼠卻產生明顯的運動行為改變，提示可能與PD時腦內存在多巴胺D1受體的超敏感有關。 綜上，結合本研究及其他研究結果5，10認為，超敏很可能與D1受體激活后，其下游效應因子活性增強，從而引起D1受體功能性超敏有關，是否如此值得進一步研究。【參考文獻】 1 Hauser RA.Levodopa：past，present，and futureJ.Eur Neurol，2009；62(1):18.2 Nagatsua T，Sawadab

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