1、免疫層析技術在微囊藻毒素檢免疫層析技術在微囊藻毒素檢測中的應用測中的應用指導教師：答辯人：班級： 學號：一、選題背景一、選題背景 近年來近年來, 水體富營養化已經成為全球關注水體富營養化已經成為全球關注的環境熱點問題。富營養化直接導致藻類的環境熱點問題。富營養化直接導致藻類大量生長大量生長, 藻類會產生毒素。微囊藻毒素是藻類會產生毒素。微囊藻毒素是其中的最常見的一種具有肝毒性，腎毒性，其中的最常見的一種具有肝毒性，腎毒性，生殖毒性，免疫系統毒性的環狀七肽化合生殖毒性，免疫系統毒性的環狀七肽化合物。物。 而微囊藻毒素是一種化學性質和化學結而微囊藻毒素是一種化學性質和化學結構都很穩定的化合物，常規

2、飲用水處理技術構都很穩定的化合物，常規飲用水處理技術不能直接有效地脫除水體中的微囊藻毒素，所以不能直接有效地脫除水體中的微囊藻毒素，所以目前快速檢測和控制微囊藻毒素顯得極為重要。目前快速檢測和控制微囊藻毒素顯得極為重要。 二、微囊藻毒素的研究現狀二、微囊藻毒素的研究現狀 就目前來說針對微囊藻毒素的檢測方法有就目前來說針對微囊藻毒素的檢測方法有生物生物測試法測試法，化學分析法化學分析法，生物化學分析法生物化學分析法等等。生物等等。生物測試法操作快速、簡便，靈敏度較低，專一性不高。測試法操作快速、簡便，靈敏度較低，專一性不高。化學分析法準確度和靈敏度高，但該方法儀器昂貴，化學分析法準確度和靈敏度高

3、，但該方法儀器昂貴，操作繁瑣。生物化學分析法靈敏度高，但選擇性差。操作繁瑣。生物化學分析法靈敏度高，但選擇性差。為了適應我國環保工作的現狀要求，水體中微囊藻為了適應我國環保工作的現狀要求，水體中微囊藻毒素的檢測方法的發展趨勢是低成本、便于攜帶、毒素的檢測方法的發展趨勢是低成本、便于攜帶、準確快速、操作簡便和靈敏度高。準確快速、操作簡便和靈敏度高。三、免疫層析技術三、免疫層析技術 免疫層析技術是一種將免疫技術和色譜層析免疫層析技術是一種將免疫技術和色譜層析技術相結合的快速免疫分析方法。其原理是以條技術相結合的快速免疫分析方法。其原理是以條狀纖維層析材料為固相，借助毛細作用使樣品溶狀纖維層析材料為

4、固相，借助毛細作用使樣品溶液在層析條上移動，同時，液在層析條上移動，同時， 使樣品中的待測物與使樣品中的待測物與層析材料上針對待測物的受體（如抗體或抗原）層析材料上針對待測物的受體（如抗體或抗原）發生高特異、高親和性的免疫反應，發生高特異、高親和性的免疫反應， 層析過程中層析過程中免疫復合物被富集或截留在層析材料的一定區域免疫復合物被富集或截留在層析材料的一定區域（檢測帶），通過酶促顯色反應或直接使用可目（檢測帶），通過酶促顯色反應或直接使用可目測著色標記物短時間便可得到直觀的試驗結果。測著色標記物短時間便可得到直觀的試驗結果。 免疫層析技術又叫做免疫層析試紙條技術，免疫層析試紙條的結構主要包

5、括PVC底板，樣品墊，結合墊，NC膜，吸收墊。四、實驗步驟1、金納米籠的制備、金納米籠的制備 2、金納米籠標記抗體的制備、金納米籠標記抗體的制備 3、免疫層析試紙條的制備、免疫層析試紙條的制備4、不同濃度的微囊藻毒素的檢測、不同濃度的微囊藻毒素的檢測 金納米籠的制備實質上是往一定量的金溶金納米籠的制備實質上是往一定量的金溶液中加入一定量的還原劑使金離子變成金原液中加入一定量的還原劑使金離子變成金原子。我們本次做的實驗是往子。我們本次做的實驗是往HAuCl4溶液中加溶液中加入還原劑抗壞血酸。入還原劑抗壞血酸。 金標抗體的制備實質上是蛋白質等生物大分子在等于或略高于蛋白質等電點時容易與金納米籠結合形成牢固的復合物。我們本次實驗是先把金納米籠溶液的pH調至9，再往里加微囊藻毒素抗體。不同濃度的微囊藻毒素的檢測不同濃度的微囊藻毒素的檢測 該圖表明不同濃度的抗原，所得到的峰面積不同，可以以此為根據進行微囊藻毒素的定量檢測。 緩沖底液對檢測的影響 由以上圖可以看出，用PBS+Tween作為緩沖底液來稀釋抗原對檢測的效果最好。五、總結 免疫層析技術可以高效快速的對微囊藻免疫層析技術可以高效快速的對微囊藻 毒素進行定性和定量檢測。免疫層析技術毒素進行定性和定量檢測。免疫層析技術的這些特點克服了傳統檢測方法時間長，的這些特點克服了傳統檢測方法時間長，操作過程復雜，需要大型