1、假奓包葉抗菌活性部位提取工藝研究                         作者：趙敏，張?jiān)拢愱桑瑥堣矗踯姂?#160; 【摘要】  目的篩選假奓包葉抗菌活性部位的最佳分離工藝。方法以沒食子酸為檢測(cè)指標(biāo)，采用HPLC測(cè)定沒食子酸的含量，對(duì)假奓包葉的提取分離工藝進(jìn)行研究。結(jié)果最佳工藝為：以水作為溶劑，采用溫浸法提取，原料粉碎為中

2、粉，液料比201(gml)，提取溫度為50，提取時(shí)間8 h,提取1次。結(jié)論該提取分離方法提高了假奓包葉的利用率，且簡(jiǎn)便可行，提取物具有抗菌活性，可用于生產(chǎn)。 【關(guān)鍵詞】  抗菌活性部位; 假奓包葉; 提取工藝假奓包葉又名金沙葉、艾桐、老虎麻，原植物為大戟科假奓包葉屬植物假奓包葉Discocleidion rufescens (Franch.) Pax et Hoffm.，主產(chǎn)于陜西、甘肅、湖北、湖南、川貴等地1。民間以根皮入藥，具有清熱解毒、泄水消積的功效，用于水腫、食積、毒瘡、鵝掌風(fēng)等癥2。在對(duì)其化學(xué)成分研究中發(fā)現(xiàn)，該植物中含有的結(jié)構(gòu)類型包括黃酮類、有機(jī)酸類、三萜類和蒽醌類化合物等

3、，其中，沒食子酸的含量較高，且該化合物具有抗菌、殺錐蟲、抗腫瘤、清除自由基和抗氧化等藥理活性36。故本研究以沒食子酸含量作為指標(biāo)，對(duì)假奓包葉葉中的抗菌活性成分的提取工藝進(jìn)行初步研究和探討。1 儀器與試藥LC-2010A型高效液相色譜儀(日本島津公司);AE240S型分析天平(瑞士METTLER公司);HS6150D超聲振蕩儀(天津市恒奧科技有限責(zé)任公司);RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠);HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋(國(guó)華電器有限公司);SHZ-D循環(huán)水真空泵(河南鞏義市英峪予華儀器廠)。假奓包葉采于陜西漢中地區(qū)，經(jīng)西安大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系天然藥物化學(xué)研究室王軍憲教授鑒定為大戟科植物假奓包

4、葉Discocleidion rufescens (Franch.) Pax et Hoffm.的葉;沒食子酸對(duì)照品(實(shí)驗(yàn)室自制，純度>98%);高效液相用甲醇為色譜純;蒸餾水自制;其余試劑均為分析純。2 方法與結(jié)果2.1 含量測(cè)定2.2 提取工藝首先對(duì)提取溶劑和提取方法進(jìn)行了篩選，并在此基礎(chǔ)上采用正交法對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)選。選取5個(gè)對(duì)提取率影響較大的因素(粉碎度、液料比、溫度、時(shí)間和次數(shù))、每個(gè)因素選擇3個(gè)水平進(jìn)行考察，按L18(37)表安排實(shí)驗(yàn)，以沒食子酸的含量為實(shí)驗(yàn)指標(biāo)，篩選抗菌部位的最佳提取工藝。1        

5、; 沒食子酸的產(chǎn)率(%)= 沒食子酸含量(mg·ml-1)×體積(ml)藥材重量(mg)× 100%從表2的實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析可以看出，在實(shí)驗(yàn)考察范圍內(nèi)，各因素對(duì)沒食子酸含量的影響程度大小次序?yàn)椋篋>E>C>A>B。提取時(shí)間對(duì)提取液中沒食子酸產(chǎn)率影響最大，液料比對(duì)產(chǎn)率的影響最小。從表3的正交實(shí)驗(yàn)方差分析可以看出，在實(shí)驗(yàn)考察范圍內(nèi)，僅提取時(shí)間因素各水平間具有顯著性差異。結(jié)合實(shí)際操作，最終確定以沒食子酸為指標(biāo)的抗菌部位提取的最佳工藝條件是A2B1C2D3E1，即以水作為溶劑，采用溫浸法提取，原料粉碎度為中粉，液料比為201，提取溫度為50，

6、提取時(shí)間8 h，提取1次。3 討論有報(bào)道用酸醇提取藥材中的多酚類物質(zhì)7，故我們也將這種方法列入至提取溶劑的考察中。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，酸水提取液中的沒食子酸含量較低，表明沒食子酸在酸性條件下不穩(wěn)定，不宜在酸性條件下提取。實(shí)驗(yàn)同時(shí)也考察了堿性條件下沒食子酸的穩(wěn)定性，取濃度為0.126 7 mg·ml-1的沒食子酸對(duì)照品甲醇溶液，用4%NaOH調(diào)pH為12，密塞后于60下靜置0.5 h，測(cè)定靜置前后沒食子酸的含量，結(jié)果顯示靜置后無法測(cè)出沒食子酸的色譜峰，說明沒食子酸在堿性下不穩(wěn)定，不宜在堿性條件下提取。在預(yù)試和正交實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，我們初步篩選出假奓包葉中抗菌活性部位的提取工藝，通過體外抗菌實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，

7、證實(shí)其具有一定的抑菌活性。該方法簡(jiǎn)便可行，可用于生產(chǎn)。【文獻(xiàn)】  1 院中國(guó)植物志編輯委員會(huì). 中國(guó)植物志，四十四卷，第3分冊(cè)M. 北京：科學(xué)出版社，1979：64.2 中國(guó)藥材公司.中國(guó)中藥資源志要M.北京：科學(xué)技術(shù)出版社，1994：625.3 Nose M，Koide T，Morikawa K，et al. Formation of reactive oxygen intermediates might be involved in the trypanocidal activity of gallic acidJ. Biol Pharm Bull，1998，21(6)：583.

8、4 Ohno T，Inoue M，Ogihara Y. Cytotoxic activity of gallic acid against liver metastasis of cells P815J. Anticancer-Res，2001，21(61A)：3875.5 Qiu X，Takemura G，Koshiji M，et al. Gallic acid induces vascular smooth muscle cell death via hydroxyl radical productionJ. Heart Vessels，2000，15(2)：90.6 Yoshino M，Haneda M，Naruse M，et al. Prooxidant action of gallic acid compounds：copper-dependent strand breaks and the f