1、顯微鏡技術和顯微鏡顯微鏡技術和顯微鏡掌握常掌握常用顯微用顯微鏡的結鏡的結構及性構及性能特點能特點熟悉顯微熟悉顯微技術的基技術的基礎理論，礎理論，顯微鏡的顯微鏡的應用應用了解顯微了解顯微鏡的維護，鏡的維護，顯微技術顯微技術的進展的進展教教 學學 基基 本本 要要 求求內內 容容 提提 要要第一節第一節 光學顯微鏡光學顯微鏡第二節第二節 光學顯微鏡的分類及其應用光學顯微鏡的分類及其應用第三節第三節 電子顯微鏡電子顯微鏡第四節第四節 顯微鏡的維護、常見故障及排除顯微鏡的維護、常見故障及排除第五節第五節 顯微攝影術顯微攝影術第一節第一節 光光 學學 顯顯 微微 鏡鏡一、光學顯微鏡的工作原理一、光學顯微

2、鏡的工作原理二、光學顯微鏡的基本結構二、光學顯微鏡的基本結構三、光學顯微鏡的性能參數三、光學顯微鏡的性能參數四、像差和色差四、像差和色差五、光學顯微鏡的不足之處五、光學顯微鏡的不足之處一、光學顯微鏡的工作原理一、光學顯微鏡的工作原理 顯微鏡是由兩組會聚透鏡組成的光學折射成像系統。把顯微鏡是由兩組會聚透鏡組成的光學折射成像系統。把焦距較短、靠近觀察物、成實像的透鏡組稱為物鏡（焦距較短、靠近觀察物、成實像的透鏡組稱為物鏡（object lens），而焦距較長，靠近眼睛、成虛像的透鏡組稱為目鏡），而焦距較長，靠近眼睛、成虛像的透鏡組稱為目鏡（ocular lens）。被觀察物體位于物鏡的前方，被物鏡

3、作第）。被觀察物體位于物鏡的前方，被物鏡作第一級放大后成一倒立的實像，然后此實像再被目鏡作第二級一級放大后成一倒立的實像，然后此實像再被目鏡作第二級放大，放大， 得到最大放大效果的倒立的虛像，位于人眼的明視距得到最大放大效果的倒立的虛像，位于人眼的明視距離處。離處。光學顯微鏡的工作原理圖光學顯微鏡的工作原理圖二、光學顯微鏡的基本結構二、光學顯微鏡的基本結構三、光學顯微鏡的性能參數三、光學顯微鏡的性能參數(一一) 放大率放大率(二二)數值孔徑數值孔徑(三三)分辨率分辨率(四四)視野視野(五五) 景深與焦長景深與焦長(六六)鏡像亮度和清晰度鏡像亮度和清晰度(七七)工作距離工作距離(一一) 放放 大

4、大 率率 顯微鏡的放大率顯微鏡的放大率(amplification)或稱放大倍數是或稱放大倍數是指顯微鏡經多次成像后最終所成指顯微鏡經多次成像后最終所成(放大的放大的)像的大小相像的大小相對于原物體大小的比值，常記作對于原物體大小的比值，常記作M。 M=maq M是顯微鏡的總放大倍數；是顯微鏡的總放大倍數；m是物鏡的放大倍數；是物鏡的放大倍數；a是目鏡的放大是目鏡的放大倍率，一般表達為明視距離倍率，一般表達為明視距離(正常視力者為正常視力者為25cm)與目鏡焦距之比；與目鏡焦距之比；q為為在雙目顯微鏡中所增設的棱鏡所起的放大倍數，一般取值為在雙目顯微鏡中所增設的棱鏡所起的放大倍數，一般取值為1

5、.6倍。倍。 (二二) 數數 值值 孔孔 徑徑 數值孔徑數值孔徑(numerical aperture)又叫鏡又叫鏡口率，是物體與物鏡間媒質的折射率口率，是物體與物鏡間媒質的折射率n與物與物鏡孔徑角的一半鏡孔徑角的一半()正弦值的乘積，通常縮正弦值的乘積，通常縮寫為寫為NA，即，即 NA=nsin 顯微鏡的數值孔徑與其放大率成正比，顯微鏡的數值孔徑與其放大率成正比，與分辨率、景深成反比，它的平方與圖像與分辨率、景深成反比，它的平方與圖像亮度成正比。亮度成正比。 NA=nsinNA=nsin 最高數值孔徑最高數值孔徑油浸物鏡油浸物鏡 較高數值孔徑較高數值孔徑干物鏡干物鏡 低數值孔徑低數值孔徑干物

6、鏡干物鏡 油油油油(二二) 數數 值值 孔孔 徑徑 分辨率：顯微鏡的最重要參數，能夠區分辨率：顯微鏡的最重要參數，能夠區分開兩個質點的最小距離。分開兩個質點的最小距離。D=0.61Nsin/2D：分：分 辨辨 率率 ：光波的波長：光波的波長N：介質折射率：介質折射率 ：物鏡鏡口角：物鏡鏡口角N與與D成反比成反比 ，與與D成正比成正比(三三) 分分 辨辨 率率提高顯微鏡分辨率的方法提高顯微鏡分辨率的方法 （1）增大物鏡的數值孔徑）增大物鏡的數值孔徑 在物鏡和蓋玻片之間充以在物鏡和蓋玻片之間充以n 較大的油，較大的油，如香柏油如香柏油n =1.52,不僅使不僅使n 增大，而且孔徑增大，而且孔徑角也

7、增大。角也增大。 （2）用短波長的光照射）用短波長的光照射 如紫外光顯微鏡，電子顯微鏡。如紫外光顯微鏡，電子顯微鏡。(四四) 視視 野野 視野視野(visual field)又稱視場又稱視場(field)，是指通過顯微鏡所能看到，是指通過顯微鏡所能看到標本所在空間的范圍。標本所在空間的范圍。 (五五) 景景 深深 與與 焦焦 長長 景深景深(depth of field)又稱焦點深度，又稱焦點深度，是指在成一幅清晰像的前提下，像平面是指在成一幅清晰像的前提下，像平面不變，景物沿光軸前后移動的距離稱不變，景物沿光軸前后移動的距離稱“景深景深”。 景物不動，像平面沿光軸前后移動景物不動，像平面沿光

8、軸前后移動的距離稱的距離稱“焦長焦長”。 (六六) 鏡鏡 像像 亮亮 度度 和和 清清 晰晰 度度 鏡像亮度即顯微鏡的圖像亮度的簡稱。鏡像亮度即顯微鏡的圖像亮度的簡稱。高倍率工作條件下的暗場、偏光、攝影顯高倍率工作條件下的暗場、偏光、攝影顯微鏡等都需要足夠的亮度，與照明及物鏡微鏡等都需要足夠的亮度，與照明及物鏡的性能參數相關。的性能參數相關。 鏡像清晰度是指圖像的輪廓清晰、襯鏡像清晰度是指圖像的輪廓清晰、襯度適中的程度。度適中的程度。 (七七) 工工 作作 距距 離離 工作距離是指從物鏡前表面中心到被觀察標本工作距離是指從物鏡前表面中心到被觀察標本間滿足工作要求的距離范圍，與物鏡的數值孔徑成間

9、滿足工作要求的距離范圍，與物鏡的數值孔徑成反比。反比。 一般情況下，物鏡的數值孔徑赿大，其工作距一般情況下，物鏡的數值孔徑赿大，其工作距離赿小。離赿小。四、像四、像 差差 和和 色色 差差(一一)、像差、像差 1球差球差( spheric aberration ) 2彗差彗差(broom aberration) 3像散像散(astigmatism) 4場曲場曲 5畸變畸變(distortion) (二二)、色差、色差(一一)、像、像 差差 (aberration) 像差是指透鏡所成的像與理想像像差是指透鏡所成的像與理想像在形狀、顏色等方面存在差異。在形狀、顏色等方面存在差異。1球球 差差 (

10、spheric aberration ) 透鏡的球差透鏡的球差 光軸上的點光源所發出的光光軸上的點光源所發出的光錐入射到透鏡的球折射面時，由錐入射到透鏡的球折射面時，由于通過透鏡邊緣的光線不滿足近于通過透鏡邊緣的光線不滿足近軸光線的條件，因此不能和通過軸光線的條件，因此不能和通過近軸曲面的光線會聚成一個理想近軸曲面的光線會聚成一個理想的亮點，而是形成一個中間亮邊的亮點，而是形成一個中間亮邊緣逐漸模糊的彌散斑，這就是透緣逐漸模糊的彌散斑，這就是透鏡的球面像差，簡稱為球差。鏡的球面像差，簡稱為球差。 球差可以通過設置光闌而減球差可以通過設置光闌而減小。小。 2彗彗 差差 (broom aberra

11、tion) 近光軸外的點光源發出的光束，經過透近光軸外的點光源發出的光束，經過透鏡中央和邊緣部分后在垂直于光軸的同一成鏡中央和邊緣部分后在垂直于光軸的同一成像平面上也不能交于同一個像點。離光軸越像平面上也不能交于同一個像點。離光軸越近的像會聚越好，亮度越大，亮點越小。于近的像會聚越好，亮度越大，亮點越小。于是在成像平面上便形成一個頂端小而亮，遠是在成像平面上便形成一個頂端小而亮，遠離光軸方向形成逐漸增寬且亮度減弱的模糊離光軸方向形成逐漸增寬且亮度減弱的模糊尾部，形如彗星，稱為彗差。尾部，形如彗星，稱為彗差。 透透 鏡鏡 的的 彗彗 差差光軸光軸透鏡透鏡3像像 散散 (astigmatism)

12、遠離光軸的物點發出的光，即使是以遠離光軸的物點發出的光，即使是以細光束成像也不可能會聚于一點，而是在細光束成像也不可能會聚于一點，而是在像空間不同的成像面上或者成橢圓彌散斑，像空間不同的成像面上或者成橢圓彌散斑，或者在特殊位置形成圓形彌散斑，甚至是或者在特殊位置形成圓形彌散斑，甚至是形成兩個垂直方向上的短亮線，這種成像形成兩個垂直方向上的短亮線，這種成像缺陷稱為像散。缺陷稱為像散。 一般來說，透鏡像散隨透鏡形狀、光一般來說，透鏡像散隨透鏡形狀、光闌位置而異，可以用正、負透鏡適當組合闌位置而異，可以用正、負透鏡適當組合而消除。而消除。透透 鏡鏡 的的 像像 散散物點物點物鏡物鏡光軸光軸 水平水平

13、焦平面焦平面 垂直垂直焦平面焦平面明晰圓明晰圓4場場 曲曲 一個平面的物體通過透鏡成像后，雖一個平面的物體通過透鏡成像后，雖然像平面上任意一點仍然是清晰的，但所然像平面上任意一點仍然是清晰的，但所成的像不再是一個平面，而成了一彎曲的成的像不再是一個平面，而成了一彎曲的面，這就是場曲。面，這就是場曲。 5畸畸 變變 (distortion) 由于像平面上各處放大率不同引起的由于像平面上各處放大率不同引起的成像缺陷稱為畸變成像缺陷稱為畸變 。畸變的原因是由于透畸變的原因是由于透鏡邊緣與透鏡近軸的放大率不同而引起的。鏡邊緣與透鏡近軸的放大率不同而引起的。 如果離光軸越遠處放大率越大，則像如果離光軸越

14、遠處放大率越大，則像的外部線段將比中間線段長，結果形成了枕的外部線段將比中間線段長，結果形成了枕形畸變，這種畸變稱為正畸變。形畸變，這種畸變稱為正畸變。 反之則形成邊緣放大率小而近軸放大反之則形成邊緣放大率小而近軸放大率大的桶形畸變，稱為負畸變率大的桶形畸變，稱為負畸變 。透透 鏡鏡 的的 畸畸 變變(二二)、 色色 差差 色差色差(chromatic aberration )是一種由白光或是一種由白光或復色光經透鏡成像時，會因各種色光存在著光程復色光經透鏡成像時，會因各種色光存在著光程差而造成顏色不同、位置不重合、大小不一致的差而造成顏色不同、位置不重合、大小不一致的不同成像效果，從而造成像

15、和物的較大失真。不同成像效果，從而造成像和物的較大失真。透鏡的色差透鏡的色差透鏡的軸向色差（）和垂軸色差（）透鏡的軸向色差（）和垂軸色差（）B五、光學顯微鏡的不足之處五、光學顯微鏡的不足之處1、放大倍數的極限：、放大倍數的極限： 2000 2000 2、分辨率的極限：、分辨率的極限： 0.2 0.2 m （可見光照明）（可見光照明）3、景深的極限：、景深的極限： 0.1 0.1 m （要求金相準備）（要求金相準備）4、不能分析化學成分、不能分析化學成分第二節第二節 光學顯微鏡的分類及其應用光學顯微鏡的分類及其應用一、雙目生物顯微鏡一、雙目生物顯微鏡二、熒光顯微鏡二、熒光顯微鏡三、相襯顯微鏡三、

16、相襯顯微鏡四、倒置顯微鏡四、倒置顯微鏡五、暗場顯微鏡五、暗場顯微鏡六、紫外光顯微鏡六、紫外光顯微鏡七、偏光顯微鏡七、偏光顯微鏡八、激光掃描共聚焦顯微鏡八、激光掃描共聚焦顯微鏡九、干涉相襯顯微鏡九、干涉相襯顯微鏡十、近場掃描光學顯微鏡十、近場掃描光學顯微鏡一、雙一、雙 目目 生生 物物 顯顯 微微 鏡鏡 雙目顯微鏡雙目顯微鏡(binocular microscope)的結構是的結構是利用一組復合棱鏡把透過物鏡后的光束分成強度相利用一組復合棱鏡把透過物鏡后的光束分成強度相同的兩束而形成兩個中間像，分別再由左右目鏡放同的兩束而形成兩個中間像，分別再由左右目鏡放大。來自物鏡的光線經棱鏡組分光成兩束平行

17、光束，大。來自物鏡的光線經棱鏡組分光成兩束平行光束，進入目鏡，雙目顯微鏡必須滿足分光后兩束光的光進入目鏡，雙目顯微鏡必須滿足分光后兩束光的光程必須相同和兩束光的光強度大小一致這兩個基本程必須相同和兩束光的光強度大小一致這兩個基本要求。要求。目鏡物鏡聚光器光源一、雙一、雙 目目 生生 物物 顯顯 微微 鏡鏡二、熒二、熒 光光 顯顯 微微 鏡鏡 熒光顯微鏡熒光顯微鏡 (fluorescence microscopy)是以是以紫外線為光源來激發生物標本中的熒光物質，產紫外線為光源來激發生物標本中的熒光物質，產生能觀察到各種顏色熒光的一種光學顯微鏡。利生能觀察到各種顏色熒光的一種光學顯微鏡。利用它可研

18、究熒光物質在組織和細胞內的分布。用它可研究熒光物質在組織和細胞內的分布。 為防止紫外線進入物鏡，可以采用暗視場照明。為防止紫外線進入物鏡，可以采用暗視場照明。 熒光（熒光（Fluorescence）：）： 細胞中的某些物質（如葉綠素）經紫外線照細胞中的某些物質（如葉綠素）經紫外線照射后能發出可見光線，稱為熒光。射后能發出可見光線，稱為熒光。 自發熒光：由細胞本身存在的物質經紫外線自發熒光：由細胞本身存在的物質經紫外線照射后發出的熒光。照射后發出的熒光。 誘發熒光：一些細胞成分本身經紫外線照射誘發熒光：一些細胞成分本身經紫外線照射后不發熒光，但用熒光染料（酸性品紅、甲基綠、后不發熒光，但用熒光染

19、料（酸性品紅、甲基綠、吖叮橙等熒光色素）進行活體染色或固定后切片吖叮橙等熒光色素）進行活體染色或固定后切片染色，就能在熒光鏡下看見熒光，這種熒光叫誘染色，就能在熒光鏡下看見熒光，這種熒光叫誘發熒光。發熒光。二、熒二、熒 光光 顯顯 微微 鏡鏡透透 射射 熒熒 光光 顯顯 微微 鏡鏡 原原 理理落落 射射 熒熒 光光 顯顯 微微 鏡鏡 原原 理理三、相三、相 襯襯 顯顯 微微 鏡鏡 光線只有通過染色標本時其波長、振光線只有通過染色標本時其波長、振幅發生變化，人眼才能看見。幅發生變化，人眼才能看見。 活細胞和未染色的標本由于光的波長活細胞和未染色的標本由于光的波長和振幅不發生變化，人眼看不到，但其

20、相和振幅不發生變化，人眼看不到，但其相位有變化，因此利用光的干涉和衍射效應位有變化，因此利用光的干涉和衍射效應把透過標本不同區域的光波光程差轉變成把透過標本不同區域的光波光程差轉變成振幅差，使細胞內各種結構之間呈現清晰振幅差，使細胞內各種結構之間呈現清晰可見的明暗對比。可見的明暗對比。 相襯顯微鏡比普通光學顯微鏡多了相襯顯微鏡比普通光學顯微鏡多了2個個部件：部件： 在聚光器上增加一個環形光闌；在聚光器上增加一個環形光闌； 在物鏡后焦面增加一個相板，相板上在物鏡后焦面增加一個相板，相板上有一個環形區，通過環形區的光比從其它有一個環形區，通過環形區的光比從其它區域透過的光超前或滯后區域透過的光超前

21、或滯后1/4，這樣就使，這樣就使通過標本不同區域光波的相位差轉變為振通過標本不同區域光波的相位差轉變為振幅差。幅差。三、相三、相 襯襯 顯顯 微微 鏡鏡相襯顯微鏡照明原理相襯顯微鏡照明原理 光通過標本致密區時發生衍射，產生光通過標本致密區時發生衍射，產生偏折光，相位和未受影響的直射光相比被偏折光，相位和未受影響的直射光相比被推遲了推遲了1/4。只有未發生偏折的的直射光。只有未發生偏折的的直射光可通過相位板的環形區，其它的偏折光在可通過相位板的環形區，其它的偏折光在物鏡的后焦面上產生了一個與通過相位板物鏡的后焦面上產生了一個與通過相位板的環形區的光不同的的環形區的光不同的1/4的光程差。兩組的光

22、程差。兩組光在平面上成像。光在平面上成像。三、相三、相 襯襯 顯顯 微微 鏡鏡 如相板的環形區使直射光超前如相板的環形區使直射光超前1/4，加上開始，加上開始直射光超前的直射光超前的1/4，直射光共超前，直射光共超前1/2 ，直射光和，直射光和偏折光疊加形成的合成波振幅減少，產生暗反差。偏折光疊加形成的合成波振幅減少，產生暗反差。 如相板的環形區使直射光滯后如相板的環形區使直射光滯后1/4，加上開始，加上開始直射光超前的直射光超前的1/4，兩者相抵直射光不發生變化，兩者相抵直射光不發生變化，直射光和偏折光無相位變化，形成的合成波振幅增直射光和偏折光無相位變化，形成的合成波振幅增加，產生明反差。

23、加，產生明反差。三、相三、相 襯襯 顯顯 微微 鏡鏡四、倒四、倒 置置 顯顯 微微 鏡鏡 倒置顯微鏡倒置顯微鏡(Inverted Microscope)的的組成和普通顯微鏡一樣，只不過物鏡與照組成和普通顯微鏡一樣，只不過物鏡與照明系統顛倒，前者在載物臺之下，后者在明系統顛倒，前者在載物臺之下，后者在載物臺之上，用于觀察培養的活細胞，具載物臺之上，用于觀察培養的活細胞，具有相差物鏡。有相差物鏡。倒置顯微鏡倒置顯微鏡五、暗五、暗 場場 顯顯 微微 鏡鏡 暗視野顯微鏡（暗視野顯微鏡（dark field microscope）的聚光鏡中央有檔光片，使）的聚光鏡中央有檔光片，使照明光線不直接進入物鏡，

24、只允許被標本照明光線不直接進入物鏡，只允許被標本反射和衍射的光線進入物鏡，因而視野的反射和衍射的光線進入物鏡，因而視野的背景是黑的，物體的邊緣是亮的。利用這背景是黑的，物體的邊緣是亮的。利用這種顯微鏡能見到小至種顯微鏡能見到小至 4nm200nm的微粒的微粒子，分辨率可比普通顯微鏡高子，分辨率可比普通顯微鏡高50倍。倍。暗視野照明方式 六、紫六、紫 外外 光光 顯顯 微微 鏡鏡 使用紫外光源可以明顯提高顯微鏡的分辨使用紫外光源可以明顯提高顯微鏡的分辨率，對于生物樣品使用紫外光照明還具有獨率，對于生物樣品使用紫外光照明還具有獨特的效果。生物細胞中的原生質對可見光幾特的效果。生物細胞中的原生質對可

25、見光幾乎是不吸收的，而蛋白質和核酸等生物大分乎是不吸收的，而蛋白質和核酸等生物大分子對紫外光具有特殊的吸收作用。因此，可子對紫外光具有特殊的吸收作用。因此，可以使用紫外光顯微鏡（以使用紫外光顯微鏡（ultraviolet microscope）研究單個細胞的組成與變化情）研究單個細胞的組成與變化情況。況。 七、偏七、偏 光光 顯顯 微微 鏡鏡 偏光顯微鏡是利用光的偏振特性，對具有雙折偏光顯微鏡是利用光的偏振特性，對具有雙折射性射性(即可以使一束入射光經折射后分成兩束折射即可以使一束入射光經折射后分成兩束折射光光)的晶體、液晶態物質進行觀察和研究的重要光的晶體、液晶態物質進行觀察和研究的重要光學

26、儀器。學儀器。 利用它可以清楚地觀察到纖維絲、紡錘體、膠利用它可以清楚地觀察到纖維絲、紡錘體、膠原、染色體、卵巢、骨骼、毛發、活細胞的結晶或原、染色體、卵巢、骨骼、毛發、活細胞的結晶或液晶態的內含物、神經纖維、肌肉纖維、植物纖維液晶態的內含物、神經纖維、肌肉纖維、植物纖維等的細微結構，從而可以分析細胞、組織的變化過等的細微結構，從而可以分析細胞、組織的變化過程。程。 偏光顯微鏡是在一般顯微鏡的基礎上偏光顯微鏡是在一般顯微鏡的基礎上增添了使普通光轉變成線偏振光和檢測偏振增添了使普通光轉變成線偏振光和檢測偏振光的裝置或觀察干涉圖樣的特殊透鏡。即光光的裝置或觀察干涉圖樣的特殊透鏡。即光源前有偏振片（

27、起偏器），使進入顯微鏡的源前有偏振片（起偏器），使進入顯微鏡的光線為偏振光，鏡筒中有檢偏器（一個偏振光線為偏振光，鏡筒中有檢偏器（一個偏振方向與起偏器垂直的起偏器）。方向與起偏器垂直的起偏器）。七、偏七、偏 光光 顯顯 微微 鏡鏡 偏光顯微鏡的載物臺是可以旋轉的。偏光顯微鏡的載物臺是可以旋轉的。當載物臺無樣品時，無論如何旋轉載物臺，當載物臺無樣品時，無論如何旋轉載物臺，由于兩個偏振片是垂直的，顯微鏡里看不到由于兩個偏振片是垂直的，顯微鏡里看不到光線。而放入旋光性物質后，由于光線通過光線。而放入旋光性物質后，由于光線通過這類物質時發生偏轉，因此旋轉載物臺便能這類物質時發生偏轉，因此旋轉載物臺便能

28、檢測到這種物體。檢測到這種物體。七、偏七、偏 光光 顯顯 微微 鏡鏡 偏光顯微鏡的結構偏光顯微鏡的結構激光掃描共聚焦顯微鏡原理圖激光掃描共聚焦顯微鏡原理圖八、激光掃描共聚焦顯微鏡八、激光掃描共聚焦顯微鏡激光掃描共聚焦顯微鏡實物圖激光掃描共聚焦顯微鏡實物圖1. 激光掃描共聚焦顯微鏡工作原理激光掃描共聚焦顯微鏡工作原理 激光掃描共聚焦顯微鏡是在熒光顯微鏡激光掃描共聚焦顯微鏡是在熒光顯微鏡成像的基礎上裝有激光掃描裝置，以單色激成像的基礎上裝有激光掃描裝置，以單色激光作為光源，使樣品被激發出熒光，利用計光作為光源，使樣品被激發出熒光，利用計算機進行圖像處理，從而得到細胞或組織內算機進行圖像處理，從而得

29、到細胞或組織內部微細結構的熒光圖像。部微細結構的熒光圖像。1. 激光掃描共聚焦顯微鏡工作原理激光掃描共聚焦顯微鏡工作原理 共聚焦顯微鏡利用激光掃描束經照明孔形成共聚焦顯微鏡利用激光掃描束經照明孔形成點光源對標本內焦平面上的每一點掃描，由于照點光源對標本內焦平面上的每一點掃描，由于照明孔與檢測孔相對于物鏡焦平面是共軛的，焦平明孔與檢測孔相對于物鏡焦平面是共軛的，焦平面上的點同時聚焦于照明孔和檢測孔，焦平面以面上的點同時聚焦于照明孔和檢測孔，焦平面以外的點不會在檢測孔處成像，這樣就得到了標本外的點不會在檢測孔處成像，這樣就得到了標本清晰的光學切面圖，克服了普通光鏡圖像模糊的清晰的光學切面圖，克服了

30、普通光鏡圖像模糊的缺點。缺點。 在顯微鏡載物臺上加一個微量步進馬達，在顯微鏡載物臺上加一個微量步進馬達，使載物臺上下移動，改變焦平面，不同層使載物臺上下移動，改變焦平面，不同層次的光切面圖像經計算機圖像三維重組，次的光切面圖像經計算機圖像三維重組，就能獲得樣品的立體結構圖像。就能獲得樣品的立體結構圖像。1. 激光掃描共聚焦顯微鏡工作原理激光掃描共聚焦顯微鏡工作原理2. 激光掃描共聚焦顯微鏡的基本結構激光掃描共聚焦顯微鏡的基本結構1.1.抑制圖像的模糊，獲得清晰的圖像抑制圖像的模糊，獲得清晰的圖像2. 2. 具有更高的軸向分辨率，并可獲取連續光學切片具有更高的軸向分辨率，并可獲取連續光學切片3.

31、 3. 增加側向分辨率增加側向分辨率4. 4. 由于點對點掃描去除了雜散光的影響由于點對點掃描去除了雜散光的影響3. 共焦顯微鏡與傳統顯微鏡的區別共焦顯微鏡與傳統顯微鏡的區別4. CLSM在醫學檢驗中的應用在醫學檢驗中的應用1細胞的三維重建細胞的三維重建 2細胞定量熒光測定細胞定量熒光測定 3 細胞內鈣離子、細胞內鈣離子、pH值和其它離子的值和其它離子的動態分析動態分析 4 細胞間通訊和膜的流動性細胞間通訊和膜的流動性 九、干涉相襯顯微鏡九、干涉相襯顯微鏡（interference contrast microscope） 干涉相襯顯微鏡利用偏振光，有四個特殊的光干涉相襯顯微鏡利用偏振光，有四

32、個特殊的光學組件：偏振器、棱鏡、滑行器和檢偏器。學組件：偏振器、棱鏡、滑行器和檢偏器。 偏振器直接裝在聚光系統的前面，使光線發生偏振器直接裝在聚光系統的前面，使光線發生線性偏振。在聚光器中安裝了石英線性偏振。在聚光器中安裝了石英Wollaston棱鏡，棱鏡，可將一束光分解成偏振方向不同的兩束光（可將一束光分解成偏振方向不同的兩束光（x和和y），），二者成一小夾角。聚光器將兩束光調整成與顯微鏡二者成一小夾角。聚光器將兩束光調整成與顯微鏡光軸平行的方向。最初兩束光相位一致，在穿過標光軸平行的方向。最初兩束光相位一致，在穿過標本相鄰的區域后，由于標本的厚度和折射率不同，本相鄰的區域后，由于標本的厚度

33、和折射率不同，引起兩束光發生光程差。引起兩束光發生光程差。 在物鏡的后焦面處安裝了第二個在物鏡的后焦面處安裝了第二個Wollaston棱鏡棱鏡(滑行器滑行器)，把兩束光波合并成一束。這時兩束光的，把兩束光波合并成一束。這時兩束光的偏振面（偏振面（x和和y）仍然存在。）仍然存在。 最后光束穿過第二個偏振裝置最后光束穿過第二個偏振裝置(檢偏器檢偏器)，檢偏器，檢偏器將兩束垂直的光波組合成具有相同偏振面的兩束光，將兩束垂直的光波組合成具有相同偏振面的兩束光，使二者發生干涉。使二者發生干涉。九、干涉相襯顯微鏡九、干涉相襯顯微鏡 x和和y波的光程差決定著透射光的多波的光程差決定著透射光的多少，光程差值為

34、少，光程差值為0時，沒有光穿過檢偏時，沒有光穿過檢偏器；光程差值等于波長一半時，穿過的器；光程差值等于波長一半時，穿過的光達到最大值。于是在灰色的背景上，光達到最大值。于是在灰色的背景上，標本結構呈現明暗差。標本結構呈現明暗差。九、干涉相襯顯微鏡九、干涉相襯顯微鏡 為了使影像的反差達到最佳狀態，可調為了使影像的反差達到最佳狀態，可調節滑行器的縱行微調改變光程差，光程差可節滑行器的縱行微調改變光程差，光程差可改變影像的亮度。調節滑行器可使標本的細改變影像的亮度。調節滑行器可使標本的細微結構呈現出正或負的投影形象，通常是一微結構呈現出正或負的投影形象，通常是一側亮，而另一側暗，這便造成了標本的人為

35、側亮，而另一側暗，這便造成了標本的人為三維立體感，類似大理石上的浮雕。三維立體感，類似大理石上的浮雕。九、干涉相襯顯微鏡九、干涉相襯顯微鏡干涉相襯顯微鏡的光路圖干涉相襯顯微鏡的光路圖十、近場掃描光學顯微鏡十、近場掃描光學顯微鏡（near-field scanning optical microscope） 近場掃描光學顯微鏡的微探頭是一個中空的、近場掃描光學顯微鏡的微探頭是一個中空的、針狀的、頂部小于針狀的、頂部小于150nm，內孔直徑為，內孔直徑為50nm的玻的玻璃微管，管壁鍍鋁膜，最終使光線只能從直徑為璃微管，管壁鍍鋁膜，最終使光線只能從直徑為50nm（可見波長的（可見波長的1/10左右）

36、的內孔射入，微管左右）的內孔射入，微管的尾部接上十分靈敏的光量子探測器測量進入內的尾部接上十分靈敏的光量子探測器測量進入內孔的光量。孔的光量。 近場掃描光學顯微鏡技術的理論分辨率極限約近場掃描光學顯微鏡技術的理論分辨率極限約10nm。由于采用可見光對生物樣品損害很少，而。由于采用可見光對生物樣品損害很少，而且既可以用在空氣中（與電子顯微鏡必須在真空條且既可以用在空氣中（與電子顯微鏡必須在真空條件下相比要優越），又可以用在水中（與一般的光件下相比要優越），又可以用在水中（與一般的光學顯微鏡相比也有優越性）。學顯微鏡相比也有優越性）。 近場掃描光學顯微鏡技術將對研究活體中的病近場掃描光學顯微鏡技術

37、將對研究活體中的病毒和染色體等生物物質的結構和形態發揮作用。毒和染色體等生物物質的結構和形態發揮作用。 十、近場掃描光學顯微鏡十、近場掃描光學顯微鏡第第 三三 節節 電電 子子 顯顯 微微 鏡鏡一、電子顯微鏡的基本結構一、電子顯微鏡的基本結構二、電子顯微鏡的分類及其應用二、電子顯微鏡的分類及其應用 一、電子顯微鏡的基本結構一、電子顯微鏡的基本結構 電子光學系統電子光學系統 真空系統真空系統 供電系統供電系統 機械系統機械系統 觀察顯示系統觀察顯示系統照明系統照明系統成像系統成像系統（一）電子光學系統（一）電子光學系統照明系統照明系統 照明系統主要由照明系統主要由電子槍電子槍和和聚光鏡聚光鏡組成

38、。組成。 電子槍是發射電子的照明光源。電子槍是發射電子的照明光源。 聚光鏡是把電子槍發射出來的電子會聚而聚光鏡是把電子槍發射出來的電子會聚而成的交叉點進一步會聚后照射到樣品上。成的交叉點進一步會聚后照射到樣品上。 照明系統的作用就是提供一束亮度高、照照明系統的作用就是提供一束亮度高、照明孔徑角小、平行度好、束流穩定的照明明孔徑角小、平行度好、束流穩定的照明源。源。 1. 電電 子子 槍槍 電子槍是電鏡的電子發射源，其作用是形成電子槍是電鏡的電子發射源，其作用是形成電子束，并控制電子束的發射，獲得一高亮度和電子束，并控制電子束的發射，獲得一高亮度和高穩定度的照明電子光源。高穩定度的照明電子光源。

39、 常用的電子槍由常用的是熱陰極三極電子槍，常用的電子槍由常用的是熱陰極三極電子槍，它由發夾形鎢絲陰極、柵極帽和陽極組成。它由發夾形鎢絲陰極、柵極帽和陽極組成。 電子槍的結構及工作原理圖電子槍的結構及工作原理圖燈燈 絲絲2. 聚聚 光光 鏡鏡 聚光鏡用來會聚電子槍射出的電子束，聚光鏡用來會聚電子槍射出的電子束，以最小的損失照明樣品，調節照明強度、以最小的損失照明樣品，調節照明強度、孔徑角和束斑大小。一般都采用雙聚光鏡孔徑角和束斑大小。一般都采用雙聚光鏡系統。第一聚光鏡是強激磁透鏡，束斑縮系統。第一聚光鏡是強激磁透鏡，束斑縮小率為小率為10105050倍左右，將電子槍第一交叉倍左右，將電子槍第一交

40、叉點束斑縮小為點束斑縮小為1 15m5m；而第二聚光鏡是弱；而第二聚光鏡是弱激磁透鏡，適焦時放大倍數為激磁透鏡，適焦時放大倍數為2 2倍左右。結倍左右。結果在樣品平面上可獲得果在樣品平面上可獲得2 210m10m的照明電的照明電子束斑。子束斑。（一）電子光學系統（一）電子光學系統成像系統成像系統 電子透鏡：能使電子束聚焦的裝置電子透鏡：能使電子束聚焦的裝置 電子透鏡是電鏡的核心部件，其工作方電子透鏡是電鏡的核心部件，其工作方式是利用復雜的電極和線圈結構形成靜電式是利用復雜的電極和線圈結構形成靜電場和磁場。場和磁場。 電子透鏡存在各種像差（電子透鏡存在各種像差（aberration），），這是影

41、響成像質量的主要因素。這是影響成像質量的主要因素。 電子透鏡電子透鏡電電 磁磁 透透 鏡鏡 的的 結結 構構 電子電子電子源電子源電子軌跡電子軌跡銅導線銅導線軟鐵殼軟鐵殼軟鐵殼軟鐵殼焦點焦點(二二) 真真 空空 系系 統統 主要由機械泵、油擴散泵或離子泵、主要由機械泵、油擴散泵或離子泵、聯動控制閥門、真空排氣管道、空氣聯動控制閥門、真空排氣管道、空氣過濾器和用于真空度指示的真空測量過濾器和用于真空度指示的真空測量規等組成。規等組成。(三三) 供供 電電 系系 統統 供電系統包括高壓電源、真供電系統包括高壓電源、真空系統供電電源、透鏡電源、輔空系統供電電源、透鏡電源、輔助電源及安全保護系統的電源

42、等。助電源及安全保護系統的電源等。 (四四) 機機 械械 系系 統統 機械系統包括電鏡座、標本室、機械系統包括電鏡座、標本室、磁屏蔽外殼、鏡筒、制冷系統及控制磁屏蔽外殼、鏡筒、制冷系統及控制工作臺等，這些部分都有著相當高的工作臺等，這些部分都有著相當高的性能。性能。 (五五) 觀觀 察察 顯顯 示示 系系 統統 觀察顯示系統由熒光屏和照相室兩部觀察顯示系統由熒光屏和照相室兩部分組成。分組成。 電鏡通過顯像管的熒光屏把電子所成電鏡通過顯像管的熒光屏把電子所成的像轉換成光學影像后供肉眼觀察。的像轉換成光學影像后供肉眼觀察。 電子感光板是常用的記錄手段之一，電子感光板是常用的記錄手段之一，可以利用照

43、相機在照相室內拍照。可以利用照相機在照相室內拍照。二、電子顯微鏡的分類及其應用二、電子顯微鏡的分類及其應用電子顯微鏡的電子顯微鏡的 （四）超高壓電子顯微鏡（四）超高壓電子顯微鏡 （一）透（一）透 射射 電電 子子 顯顯 微微 鏡鏡（Transmission electron Microscope，TEM）光鏡、透射電鏡和掃描電鏡的工作原理圖光鏡、透射電鏡和掃描電鏡的工作原理圖1. 成成 像像 原原 理理電子束和固體樣品的作用電子束和固體樣品的作用2. 的的 工工 作作 原原 理理 透射電子顯微鏡是以電子束透透射電子顯微鏡是以電子束透過樣品經過聚焦與放大后所產生的過樣品經過聚焦與放大后所產生的物

44、像，物像， 投射到熒光屏上或照相底片投射到熒光屏上或照相底片上進行觀察。上進行觀察。 透射電鏡的分辨率為透射電鏡的分辨率為0.10.2nm，放大倍數為幾萬幾十萬，放大倍數為幾萬幾十萬倍。倍。3. 的的 結結 構構 照明系統照明系統 成像系統成像系統 放大系統放大系統 紀錄系統紀錄系統電子槍電子槍聚光鏡聚光鏡物鏡物鏡中間鏡中間鏡投影鏡投影鏡3. 的結構的結構成像系統成像系統 物鏡是用來形成第一幅高分辨率電子物鏡是用來形成第一幅高分辨率電子顯微圖像或電子衍射花樣的透鏡。透射電顯微圖像或電子衍射花樣的透鏡。透射電子顯微鏡分辨本領的高低主要取決于物鏡。子顯微鏡分辨本領的高低主要取決于物鏡。因為物鏡的任

45、何缺陷都被成像系統中其它因為物鏡的任何缺陷都被成像系統中其它透鏡進一步放大。欲獲得物鏡的高分辨率，透鏡進一步放大。欲獲得物鏡的高分辨率，必須盡可能降低像差。通常采用強激磁，必須盡可能降低像差。通常采用強激磁，短焦距的物鏡。短焦距的物鏡。3. 的結構的結構成像系統成像系統 中間鏡是一個弱激磁的長焦距變倍透中間鏡是一個弱激磁的長焦距變倍透鏡，可在鏡，可在0-20倍范圍調節。在電鏡操作倍范圍調節。在電鏡操作過程中，主要是利用中間鏡的可變倍率過程中，主要是利用中間鏡的可變倍率來控制電鏡的放大倍數。來控制電鏡的放大倍數。 3. 的結構的結構成像系統成像系統 如果把中間鏡的物平面和物鏡的像平面如果把中間鏡

46、的物平面和物鏡的像平面重合，則在熒光屏上得到一幅放大像，這就重合，則在熒光屏上得到一幅放大像，這就是電子顯微鏡中的成像操作。如果把中間鏡是電子顯微鏡中的成像操作。如果把中間鏡的物平面和物鏡的后焦面重合，則在熒光屏的物平面和物鏡的后焦面重合，則在熒光屏上得到一幅電子衍射花樣，這就是電子顯微上得到一幅電子衍射花樣，這就是電子顯微鏡中的電子衍射操作。鏡中的電子衍射操作。3. 的結構的結構成像系統成像系統 投影鏡的作用是把經中間鏡放大（或縮小）投影鏡的作用是把經中間鏡放大（或縮小）的像進一步放大，并投影到熒光屏上，它和物鏡的像進一步放大，并投影到熒光屏上，它和物鏡一樣，是一個短焦距的強磁透鏡。投影鏡的

47、激磁一樣，是一個短焦距的強磁透鏡。投影鏡的激磁電流是固定的。因為成像電子束進入投影鏡時孔電流是固定的。因為成像電子束進入投影鏡時孔鏡角很小，因此它的景深和焦距都非常大。即使鏡角很小，因此它的景深和焦距都非常大。即使改變中間鏡的放大倍數，使顯微鏡的總放大倍數改變中間鏡的放大倍數，使顯微鏡的總放大倍數有很大的變化，也不會影響圖像的清晰度。有很大的變化，也不會影響圖像的清晰度。4. 透透 射射 電電 鏡鏡 的的 主主 要要 部部 件件 樣品臺的作用是承載樣品，并使樣品臺的作用是承載樣品，并使樣品能作平移、傾斜、旋轉，以選擇感興趣樣品能作平移、傾斜、旋轉，以選擇感興趣的樣品區域或位向進行觀察分析。的樣

48、品區域或位向進行觀察分析。 樣品臺樣品臺4. 透透 射射 電電 鏡鏡 的的 主主 要要 部部 件件 消像散器可以是機械式的，可以是電磁式消像散器可以是機械式的，可以是電磁式的。機械式的是在電磁透鏡的磁場周圍放置幾塊的。機械式的是在電磁透鏡的磁場周圍放置幾塊位置可以調節的導磁體，用它們來吸引一部分磁位置可以調節的導磁體，用它們來吸引一部分磁場，把固有的橢圓形磁場校正成接近旋轉對稱的場，把固有的橢圓形磁場校正成接近旋轉對稱的磁場。電磁式的是通過電磁極間的吸引和排斥來磁場。電磁式的是通過電磁極間的吸引和排斥來校正橢圓形磁場的校正橢圓形磁場的 。 消像散器消像散器4. 透透 射射 電電 鏡鏡 的的 主

49、主 要要 部部 件件 在透射電子顯微鏡中有許多固定光闌和可在透射電子顯微鏡中有許多固定光闌和可動光闌，它們的作用主要是擋掉發散的電子，動光闌，它們的作用主要是擋掉發散的電子，保證電子束的相干性和照射區域。保證電子束的相干性和照射區域。光闌光闌5. 透射電子顯微鏡的優點透射電子顯微鏡的優點 主要優點：分辨率高，可用來主要優點：分辨率高，可用來觀察組織和細胞內部的超微結構以觀察組織和細胞內部的超微結構以及微生物和生物大分子的全貎。及微生物和生物大分子的全貎。 掃描電子顯微鏡的工作原理是用一束掃描電子顯微鏡的工作原理是用一束極細的電子束掃描樣品，在樣品表面激發極細的電子束掃描樣品，在樣品表面激發出次

50、級電子，次級電子由探測體收集，并出次級電子，次級電子由探測體收集，并在那里被閃爍器轉變為光信號，再經光電在那里被閃爍器轉變為光信號，再經光電倍增管和放大器轉變為電信號來控制熒光倍增管和放大器轉變為電信號來控制熒光屏上電子束的強度，顯示出與電子束同步屏上電子束的強度，顯示出與電子束同步的掃描圖像。的掃描圖像。 2. 掃掃 描描 電電 鏡鏡 的的 結結 構構二次電子探測器的工作原理圖二次電子探測器的工作原理圖3. 掃掃 描描 電電 鏡鏡 的的 特特 點點分分辨辨率率高高3. 掃掃 描描 電電 鏡鏡 的的 特特 點點立立體體感感強強3. 掃掃 描描 電電 鏡鏡 的的 特特 點點放大倍率范圍廣放大倍率

51、范圍廣3. 掃掃 描描 電電 鏡鏡 的的 特特 點點樣品適應性大樣品適應性大應用范圍廣應用范圍廣樣品臺樣品臺探針探針步進電機步進電機雙螺旋雙螺旋測微頭測微頭1.掃描隧道顯微鏡的工作原理掃描隧道顯微鏡的工作原理 掃描隧道顯微鏡是根據量子力學原理中的隧道掃描隧道顯微鏡是根據量子力學原理中的隧道效應和三維掃描而設計。當原子尺度的針尖在不到效應和三維掃描而設計。當原子尺度的針尖在不到一個納米的高度上掃描樣品時，此處電子云重疊，一個納米的高度上掃描樣品時，此處電子云重疊，外加一電壓（外加一電壓（2mV2V），針尖與樣品之間產生隧），針尖與樣品之間產生隧道效應而有電子逸出，形成隧道電流，通過隧道電道效應而

52、有電子逸出，形成隧道電流，通過隧道電流獲取顯微圖像，而不需要光源和透鏡。流獲取顯微圖像，而不需要光源和透鏡。“掃描隧掃描隧道顯微鏡道顯微鏡”因此而得名。因此而得名。掃描隧道顯微鏡的工作原理圖掃描隧道顯微鏡的工作原理圖2. STM 的的 基基 本本 結結 構構 STM STM 儀器由具有減振系統的儀器由具有減振系統的STM STM 頭部頭部( (含探針和含探針和樣品臺樣品臺) )、電子學控制系統和包括、電子學控制系統和包括A/D A/D 多功能卡的計多功能卡的計算機組成。算機組成。2. STM 的的 重重 要要 部部 件件 隧道針尖的結構是掃描隧道顯微技術要解決的主隧道針尖的結構是掃描隧道顯微技

53、術要解決的主要問題之一。針尖的大小、形狀和化學同一性不僅影要問題之一。針尖的大小、形狀和化學同一性不僅影響著掃描隧道顯微鏡圖像的分辨率和圖像的形狀，而響著掃描隧道顯微鏡圖像的分辨率和圖像的形狀，而且也影響著測定的電子態。且也影響著測定的電子態。針尖、壓電陶瓷針尖、壓電陶瓷 、三維掃描控制器、減震系統、三維掃描控制器、減震系統3. STM 的的 工工 作作 模模 式式恒恒 高高 模模 式式3. STM 的的 工工 作作 模模 式式恒恒 流流 模模 式式4. STM 的的 特特 點點分辨率高：橫向分辨率可達分辨率高：橫向分辨率可達0.1nm0.1nm，縱向分辨率可，縱向分辨率可達達0.01nm0.

54、01nm可在真空、大氣、液體等條件下工作可在真空、大氣、液體等條件下工作非破壞性測量非破壞性測量可實時地得到實空間中表面的三維圖像，可用于可實時地得到實空間中表面的三維圖像，可用于具有周期性或不具備周期性的表面結構研究。具有周期性或不具備周期性的表面結構研究。配合掃描隧道譜可以得到有關表面結構的信息配合掃描隧道譜可以得到有關表面結構的信息(四四) 超高壓電子顯微鏡超高壓電子顯微鏡第四節第四節 顯微鏡的維護、常見故障及其排除顯微鏡的維護、常見故障及其排除一、顯微鏡的使用一、顯微鏡的使用二、顯微鏡的維護二、顯微鏡的維護三、顯微鏡的常見故障及排除三、顯微鏡的常見故障及排除四、顯微鏡拆裝的注意事項四、

55、顯微鏡拆裝的注意事項五、電子顯微鏡的維護五、電子顯微鏡的維護(一一) 光學顯微鏡的使用方法光學顯微鏡的使用方法低倍鏡的使用：低倍鏡的使用： 1.對光：轉動粗調節螺旋，降低載物臺；旋對光：轉動粗調節螺旋，降低載物臺；旋轉物鏡轉換器，使轉物鏡轉換器，使10倍物鏡頭對準鏡臺孔；然后倍物鏡頭對準鏡臺孔；然后升高聚光鏡，打開光圈，將反光鏡的凹面對準光升高聚光鏡，打開光圈，將反光鏡的凹面對準光源，直至視野明亮為止。源，直至視野明亮為止。 2.將要觀察的切片放在載物臺上，固定好，將要觀察的切片放在載物臺上，固定好，并將要觀察的部位移至中央。并將要觀察的部位移至中央。 (一一) 光學顯微鏡的使用方法光學顯微鏡

56、的使用方法低倍鏡的使用：低倍鏡的使用： 3.調焦距：旋轉粗調螺旋，升高載物臺，至物調焦距：旋轉粗調螺旋，升高載物臺，至物鏡距玻片約鏡距玻片約0.5cm時，再緩慢降低鏡臺，直到看清圖時，再緩慢降低鏡臺，直到看清圖像為止。像為止。 4.調節兩瞳孔間的距離：一邊用雙眼自目鏡中調節兩瞳孔間的距離：一邊用雙眼自目鏡中觀察，一邊用雙手握住兩個目鏡管，前后或左右移動，觀察，一邊用雙手握住兩個目鏡管，前后或左右移動，直到雙眼看到一共同視野為止。直到雙眼看到一共同視野為止。 5.為使右眼圖像更清晰，可輕輕轉動微調螺旋，為使右眼圖像更清晰，可輕輕轉動微調螺旋，欲使左眼圖像清晰，需旋轉鏡管長度調節環。欲使左眼圖像清

57、晰，需旋轉鏡管長度調節環。(一一) 光學顯微鏡的使用方法光學顯微鏡的使用方法高倍鏡的使用：高倍鏡的使用： 用低倍鏡看清圖像后，將要進一步放大的結用低倍鏡看清圖像后，將要進一步放大的結構移至視野中央，一邊從側面觀察，一邊旋轉物構移至視野中央，一邊從側面觀察，一邊旋轉物鏡轉換器，將高倍鏡頭對準鏡臺孔；升高聚光鏡，鏡轉換器，將高倍鏡頭對準鏡臺孔；升高聚光鏡，將光線調節到最亮的程度；然后，稍微轉動微調將光線調節到最亮的程度；然后，稍微轉動微調螺旋，即可觀察到清晰的圖像。螺旋，即可觀察到清晰的圖像。(一一) 光學顯微鏡的使用方法光學顯微鏡的使用方法油鏡的使用：油鏡的使用： 用低倍鏡看清圖像后，將所要觀察

58、的結構移用低倍鏡看清圖像后，將所要觀察的結構移至視野中央，在標本所要觀察的部位滴一滴鏡油，至視野中央，在標本所要觀察的部位滴一滴鏡油，旋轉物鏡轉換器，將油鏡頭對準鏡臺孔，使油鏡旋轉物鏡轉換器，將油鏡頭對準鏡臺孔，使油鏡頭下端與鏡油接觸，然后，輕輕轉動微調螺旋，頭下端與鏡油接觸，然后，輕輕轉動微調螺旋，即可看清物像。使用油鏡時，應把聚光鏡的光圈即可看清物像。使用油鏡時，應把聚光鏡的光圈充分開大。充分開大。 用完油鏡后，必須用擦鏡紙蘸清洗劑，用完油鏡后，必須用擦鏡紙蘸清洗劑，將鏡頭和玻片擦凈。將鏡頭和玻片擦凈。（二）顯（二）顯 微微 鏡鏡 的的 維維 護護 1.搬動顯微鏡時，應該用右手握鏡臂搬動顯

59、微鏡時，應該用右手握鏡臂,左左手托鏡座，平貼胸前，以防撞碰。切勿用一手托鏡座，平貼胸前，以防撞碰。切勿用一只手斜提，前后搖擺。只手斜提，前后搖擺。 2.每次使用顯微鏡前，要檢查顯微鏡的每次使用顯微鏡前，要檢查顯微鏡的主要部件有無缺損，發現問題，及時報告。主要部件有無缺損，發現問題，及時報告。使用時，要嚴格按操作程序，正確地緩慢移使用時，要嚴格按操作程序，正確地緩慢移動有關機械部分。動有關機械部分。 （二）顯（二）顯 微微 鏡鏡 的的 維維 護護 3.禁止拆卸顯微鏡的各個部件，更不允許與其禁止拆卸顯微鏡的各個部件，更不允許與其它顯微鏡對換，以免安裝不當影響觀察效果。它顯微鏡對換，以免安裝不當影響觀察效果。 4.如鏡頭表面有灰塵，應該用擦鏡紙擦，不允如鏡頭表面有灰塵，應該用擦鏡紙擦，不允許用口吹、手指抹，或用其它紙、布擦。許用口吹、手指抹，或用其它紙、布擦。 5.顯微鏡用完后，將顯微鏡用完后，將4倍鏡頭對準鏡臺孔，升倍鏡