1、 第六講第六講 人類疾病的動物模型人類疾病的動物模型第一節(jié) 動物模型的概念（animal model of human disease)一 、人類疾病動物模型：是生物醫(yī)學科學研究中建立的具有人類疾病模擬性表現的動物實驗對象和材料。二、動物模型的意義1、避免人體實驗造成的危害 2、可復制臨床上平時不易見到的疾病 3、可復制發(fā)病率低、潛伏期和病程長的疾病 4、嚴格控制試驗條件，增加實驗的可比性 5、樣品易得，實驗操作簡化 6、有助于全面認識疾病本質 第二節(jié)第二節(jié) 動物模型分類動物模型分類一 動物模型分類一）按產生原因分類1、自發(fā)性動物模型 （Spontaneous Animal Model）如肥胖

2、小鼠、高血壓大鼠、突變裸鼠等2、誘發(fā)性或實驗性動物模型 （Experimental Animal Model）通過化學、放射線等3、陰性動物模型 不能復制某些疾病的動物品種或品系，即一定的刺激或處理對一些實驗動物產生效應但對另外的實驗動物無反應 4、孤立動物模型 某種疾病最初在一些動物身上發(fā)現并被研究，但在人體內無法證實，如哺乳動物上皮乳頭瘤，瘋牛病 二）按系統(tǒng)范圍分類如心血管、消化等系統(tǒng)疾病模型嚴重聯合免疫缺陷小鼠（severe-combined immuodeficient mice SCID） 外觀正常與正常小鼠無異，生長發(fā)育正常l胸腺、脾、淋巴結重量不及正常的30%,組織學上表現為T、

3、B淋巴細胞缺失lT、B細胞功能陰性，對外來抗原無細胞免疫和抗體反應，但其巨噬細胞、紅細胞、自然殺傷細胞等功能正常。第三節(jié)第三節(jié) 動物模型的選擇和設計動物模型的選擇和設計一）原則1 相似性 結扎兔的闌尾血管，可以使闌尾壞死、穿孔并導致腹膜炎，但這與人類急性梗阻性闌尾炎合并穿孔和腹膜炎不一樣。結扎兔闌尾基部而保留原來的血液供應。2 重復性 品種、品系、年齡、性別、體重、健康3可靠性 鉛中毒使沙鼠出現相應的腎病變4適用性、可控性5 易行性和經濟性二）注意事項二）注意事項1、要盡可能再現所要求的人類疾病2、注意實用價值（易于管理飼養(yǎng) 3、注意環(huán)境的影響 （出血、麻醉、噪聲）4、不盲目用近交系5、靈長類

4、不一定接近人 6、正確評估模型價值7、中醫(yī)中動物不能脈診。第四節(jié)、動物模型的建立第四節(jié)、動物模型的建立一、誘發(fā)性腫瘤模型一）概念二）誘發(fā)腫瘤動物實驗方法l經口給藥法l涂抹法l注射法l氣管灌注法l穿線法l埋藏法三）誘發(fā)腫瘤的要求1 方法簡單易行重復性高2 腫瘤誘發(fā)率高3 所誘發(fā)的腫瘤與人類腫瘤有相似性4 選擇對致癌劑敏感的種系5 致癌劑量要適當6 輔以誘癌動物的飼養(yǎng)條件四）誘發(fā)腫瘤的要求和注意事項1 設置陰性和陽性對照2 有的實驗要輔以促癌劑才能成功3 動物實驗結果注意種屬的區(qū)別4 注意對人和環(huán)境的保護5 注意將腫瘤發(fā)生的內外因結合起來l1、肺水腫模型 P184l0.1%腎上腺素按照 5ml/g

5、靜脈注射l0.8%一氧化氮 給大鼠吸入l2、誘發(fā)性肝癌（Liver Carcinoma）l1）二乙基亞硝胺誘發(fā)肝癌 0.25%DEN灌胃， 10mg/kg,每周一次 ，其余5天 0.025%DEN飲水，l4個月可成功 l3、誘發(fā)性鼻咽癌l1 二甲基膽蒽插管法 半年后動物死亡l2 二乙基亞硝胺滴鼻法 半年后死亡l4、誘發(fā)性皮膚癌l方法：甲基膽蒽蓖麻油涂抹皮膚，每周3次，150200天后出現乳頭狀瘤（三）移植性腫瘤動物模型 1）實體瘤的移植l人肝癌胰腺癌原位移植人肝癌胰腺癌原位移植 方法方法：1820g 的裸鼠，新鮮癌組織切成2mm3小塊，暴露肝臟或胰腺，植入，縫合，長到2cm3時（35周后）取出

6、。l人肺癌人肺癌（Lung Carcinoma）裸鼠原位移裸鼠原位移植植 ：暴露氣管，用8號針頭于氣管環(huán)之間刺小孔，用6號針頭向右支氣管注射4105PG（肺巨細胞癌），45周后死亡。l2）腹水瘤移植l2.53.0107mL，每只鼠接種0.2 mL。作腹腔注射（接種成腹水瘤）或皮下注射（接種成實體瘤） 消化系統(tǒng)動物模型消化系統(tǒng)動物模型l一）幽門螺桿菌感染動物模型 經口感染無特異病原CD1小鼠48周內，為胃腺體消失，上皮細胞脫落，潰瘍形成及粘膜固有層炎性細胞浸潤。二）胃潰瘍動物模型1、造模機制 1)常用方法：應激法：以各種傷害性刺激引起潰瘍2）藥物法 投予組胺、胃泌素等3）燒灼法 用電極燒灼胃壁三

7、）呼吸系統(tǒng)疾病動物模型三）呼吸系統(tǒng)疾病動物模型 l（一）慢性支氣管炎動物模型 （animal model of chronic bronchitis)l二氧化硫法：小鼠1% so2每天20s，20dl煙霧法：大鼠，鋸目、煙葉、干辣椒、硫磺混合點燃，每天1h，44dl二）肺炎1、大腸桿菌肺炎 家兔：菌液3.0107mL，通過支氣管注射，回抽見氣泡后注射入氣管。l2、白念珠菌肺炎 Wistar大鼠：氣管內注射菌液，對照組同時用生理鹽水氣管內注入。l3、支原體肺炎 金黃地鼠：鼻腔滴入 四、心血管系統(tǒng)疾病動物模型四、心血管系統(tǒng)疾病動物模型l一、高血壓模型l一）常用動物 犬、大鼠l二）自發(fā)性高血壓大鼠

8、用WISTAR大鼠繁殖近親交配得到l三）實驗性高血壓模型 l1 實驗性腎動脈狹窄性高血壓l二腎一夾(twokidneyoneclip)腎性高血壓：用套環(huán)縮小腎動脈，同時給予青霉素鈉注射液1O萬U只，四周可成。l2 腎外包扎性高血壓 乳膠膜繞腎門交叉包扎，并切除右腎l3 神經源性及應急性高血壓：l 噪音加電刺激 大鼠：每天二次，20d，足底電擊l二 高血脂和動物粥樣硬化模型l一）高脂飼料誘發(fā)高血脂及粥樣硬化模型l方法：l小型豬：1%2%高脂食物飼喂6個月,l小鼠：雄性小鼠飼以1%膽固醇及10%豬油的高脂食物l二）非喂養(yǎng)法誘發(fā)高血脂及動脈粥樣硬化癥模型l1、免疫誘發(fā)模型 大鼠主動脈勻漿給兔注射，可

9、引起血膽固醇升高l2、兒茶酚胺誘發(fā)模型 給兔靜注去甲腎上腺素1mg/24hl3、半光氨酸誘發(fā)模型 給兔皮下注射半胱氨酸硫代內酯每天2025mg/kgl二、肝膽疾病動物模型l一）四氯化碳誘發(fā)急性中毒性肝炎l1、造模機制 進入肝細胞后，溶解線粒體膜的脂質，造成酶的破壞，使肝細胞壞死。l2、造模方法l1）小鼠 40% CCL4橄欖油口服0.4mll2)大鼠 CCL4 0.05ml/100g皮下注射l3）兔 CL4 1.2ml/kg一次性口服l二)肝纖維化動物模型l1、造模機制 引起肝組織長期損傷，導致肝纖維化l2、造模方法939369365l1）免疫法 雄性Wistar大鼠，取豬血清腹腔注射，每周2

10、次共8次l2）四氯化碳法 Wistar大鼠，皮下注射40%50%油溶液，每周2次，從第2周起，隔日經20%30%酒精1ml灌胃l3、模型特點l1）免疫法 肝纖維化86%左右，對動物生長發(fā)育無影響，是較理想的模型l2）四氯化碳模型 大鼠成活率60%80%l三）膽石癥動物模型三）膽石癥動物模型l1 病因病因:l與生活習慣有關l膽囊的慢性炎癥l盲目節(jié)食減肥l膽固醇的代謝失調。l感染腸道寄生蟲者l2、造模機制 l感染、膽汁淤滯、膽固醇代謝障礙、自主神經調節(jié)障礙l4、造模方法 l1）感染法 膽囊注入蛔蟲卵l2）食餌法 雌性豚鼠，飼喂高膽固醇食物如：酪蛋白1%，蔗糖1.5%,豬油1%，纖維素1%，膽酸0.

11、02%,膽固醇0.05%l3）狹窄成石法 包括膽囊、膽總管結扎法l4）切除迷走神經法l5）異物植入法l五 胰腺炎動物模型l一 病因:膽汁返流l胰液分泌亢進,使胰管內壓升高 -暴飲暴食，酒精 l二 方法:l一）結扎胰管l二）牛膽酸鈉致急性出血性胰腺炎l大鼠注射牛膽酸鈉導致胰腺細胞壞死出血l治療: l 解痙止痛 .胰酶抑制劑,針取陽陵泉、足三里,胰腺切除 第六節(jié)第六節(jié) 內分泌、營養(yǎng)代謝性疾病動物內分泌、營養(yǎng)代謝性疾病動物模型模型l一、甲狀腺疾病動物模型l1、模型機制 l飼喂甲狀腺腫病區(qū)糧食、抗甲狀腺藥物、手術摘除、口服甲狀腺素等l2 、造模方法l1）缺碘及功能減退法 飼喂缺碘食物l2）實驗性甲狀腺

12、腫法 腹腔注射PTUl3)淋巴細胞性甲狀腺炎法 選用Beagle犬4）實驗性甲亢法 腹腔注射T4l3、模型特點l二、糖尿病動物模型二、糖尿病動物模型l1、造模機制 注射高血糖因子、引起胰島細胞損傷的藥物、手術切除胰腺、自發(fā)性糖尿病鼠l2、造模方法l1）自發(fā)性糖尿病鼠l2）四氧嘧啶法 1的生理鹽水配制，40mg/kg靜注,注射后2h高血糖，6h低血糖，18h高血糖，穩(wěn)定2周后作為成功模型,但對肝腎有損傷。l3）鏈脲佐菌素法 SD大鼠，禁食12 h ，PH4.5，1的生理鹽水配制，STZ 50 mgkg尾靜脈內注射造模，3 d后測血糖，大于167 mmolL為模型l3 治療:l磺脲類降糖藥-刺激胰

13、島細胞釋放胰島素l雙胍類降糖藥 -促進外周組織對血糖的利用 l三、肥胖動物模型l一）營養(yǎng)性肥胖動物模型l 造模方法l1） 基礎或者營養(yǎng)飼料 第七節(jié)第七節(jié) 外科學動物模型外科學動物模型l小腸缺血再灌注小腸缺血再灌注l方法：麻醉，展開腸系膜，結扎動靜脈，并設置對照組。于不同時相去除結扎線，恢復血循環(huán)。如去除結扎線后血循環(huán)未恢復者要剔除。l腎缺血再灌注腎缺血再灌注 方法：結扎腎動脈，不同時間解除結扎，并注射胰島素觀察不同濃度的胰島素的作用。 需要設置對照組，并同時選用多只大鼠或家兔。l癲癇模型癲癇模型l方法：注射馬桑內酯：雄性以3mgkg，雌性以2.5mgkg為宜。 l腦缺血再灌注模型腦缺血再灌注模

14、型l方法：暴露并用魚線阻塞頸總動脈，一定時間后抽去線，恢復血循環(huán)。l治療：可采用注射干細胞法。第八節(jié)第八節(jié) 五官、皮膚科五官、皮膚科l一 耳鼻喉科l1 氨基甙類抗生素中毒性耳聾 抗生素破壞毛細胞，改變內耳微循環(huán)等，大鼠肌注慶大霉素80250mg/kg,持續(xù)14周。2鼻超敏反應 10的2、4二異氰酸甲苯酯（TDI)橄欖油10ml滴入兩個鼻孔，連續(xù)7日后改為隔日滴，出現噴嚏，鼻癢，大量酸性和肥大細胞出現于鼻粘膜上，組胺含量增多。l二 系統(tǒng)性紅斑狼瘡方法：1 、淋巴細胞分離 取出親代鼠脾、淋巴結細胞，按2：1混合制成細胞懸液。 2 、 淋巴細胞靜脈注射 1x107個，0天和7天各注射一次，同時注射50IU肝素 第四周就出現SLE病變。癥狀：大量抗組蛋白、抗dsDNA抗體等。l治療：糖皮質激素，IL-2 等l陽虛動物模型陽虛動物模型 輕化可的松小鼠每日肌注0.41.25g/kg，連續(xù)10天后出現反應遲鈍，豎毛等癥狀。用于補陽藥物篩選，陽虛本質研究。 陰虛動物模型陰虛動物模型 每天甲狀腺素3mg和利血平20mg予小鼠灌胃3周即可，造成甲亢癥狀，口渴，煩躁，體重減輕，用于補陰藥物篩選和陰虛的研究。第九節(jié)第九節(jié) 中醫(yī)證候動物模型中醫(yī)證候動物模型p216l血虛動物模型血虛動物模型 2的乙酰苯肼，1ml/100g體重皮下注射。造成口唇粘膜發(fā)白，四肢無力，毛