1、    亞硒酸錳()-葉綠酸鈉的制備及其對小鼠的急性毒性和小鼠肝癌H22的初步試驗        摘要：目的：制備亞硒酸錳()-葉綠酸鈉，并測定其對小鼠的急性毒性及對小鼠肝癌H22的抑制情況。方法：以蠶沙提取葉綠素，由葉綠素制備脫鎂葉綠酸，與錳絡合后制得錳()葉綠酸，再以亞硒酸化合制得亞硒酸錳()-葉綠酸鈉；測定亞硒酸錳()-葉綠酸鈉的急性毒性及對小鼠肝癌H22的抑制情況。結果：作者首次合成了亞硒酸錳()-葉綠酸鈉。測得其LD50=1175 mg.kg1(95%的可信區間為8

2、511621 mg.kg-1；其對小鼠肝癌H22的抑癌率為4547(灌胃劑量為500 mg.kg-1)。結論：亞硒酸錳()-葉綠酸鈉常溫下性質穩定，毒性小，對小鼠肝癌H22有明顯的抑制作用，可進一步做臨床試驗。關鍵詞：亞硒酸；脫鎂葉綠酸錳()；葉綠酸；亞硒酸錳()-葉綠酸鈉；肝癌H22分類號：R914.4，R96文獻標識碼：A文章編號：1006-0103(2000)01-0006-03SYNTHESIS OF SODIUM CHLOROPHYLLIN-MANGANESE()SELENITE AND ITS ACUTE TOXICITY AND PRELIMINARY TESTOF INHIBI

3、TING EFFECT ON HEPATOMA(H22)OF RATSLI Xiao-yong，（Department of Sports Medicine,Chengdu Institute of Physical Education;）TAO Hai-peng,YU Hua-shan，（School of Pharmacy,West China University of Medical Sciences(WCUMS);）WANG Chao-jun（Institute of Cancer Research,WCUMS，Chengdu 610041 China）Abstract：OBJECT

4、IVE：To synthesize Sodium chlorophyllin-manganese() selenite(SCMS) and to test its acute toxicity and preliminary inhibiting effect on hepatoma(H22) of rats.METHODS：Pheophorbin,made from chlorophyl extracted from excretion of silkworms,was coordinated with MnCl2，and the formed manganese() chlorophyll

5、in reacted with selenous acid (H2SeO3)to produce SCMS.The acute toxicity of SCMS and its inhibiting effect on hepatoma (H22) of rats were tested.RESULTS：The authors first synthesized SCMS.Its LD50=1 175 mg.kg-1(95% confidence 8511 621 mg.kg1).Its rate of tumor inhibiting on hepatoma(H22) of rats was

6、 4547%(dosage=500 mg.kg-1 per.os).CONCLUSION：The characteristics of SCMS is stable at normal temperature.Its toxicity is low.It is obvious that SCMS has inhibiting effect hepatoma(H22) of rats.It is valuable to go further into its clinical experiment.Key words：Selenous acid;Pheophorbin;Manganese()ch

7、lorophyllin;Sodium chlorophyllin-manganese()selenite(SCMS);Hepatoma(H22)CLC number：R914.4,R96Document code：AArticle ID：1006-0103(2000)01-0006-03微量元素錳在人體組織內的腦、腎、胰及肝含量較高，動物的肝內含錳量豐富。錳與蛋白質、DNA及RNA的合成關系密切，哺乳動物細胞有二種RNA多聚酶，其中一種需要錳。人體胎盤及大鼠肝的細胞核依賴的RNA及DNA多聚酶，主要通過錳刺激RNA及DNA多聚酶的活性，促進蛋白質的合成。由于錳及其它陽離子與DNA帶負電荷的磷酸

8、基團產生穩定作用而維持DNA的二級結構能正常的合成蛋白質，因此，以微量元素錳與脫鎂葉綠酸絡合制得錳葉綠酸而產生抗癌作用。硒對抑制癌腫和心血管疾病的發生發展有一定作用，并能刺激免疫球蛋白及抗體的產生，增強機體對疾病的抵抗力1。作者首次合成了亞硒酸錳()-葉綠酸鈉，用于動物實驗，結果該化合物顯示出對小鼠肝癌H22有明顯的抑制效果。1實驗部分1.1儀器與試劑紅外分光光度計(Perkin Elmer 983)；紫外分光光度計(日本島津UV-240);原子吸收分光光度計(Perkin Elmer 703)；旋轉薄層蒸發器。二氯化錳、亞硒酸、石油醚、乙醇、硫酸、氫氧化鈉均為分析純。1.2亞硒酸錳()-葉綠

9、酸鈉的制備用乙醇氫氧化鈉溶液從蠶沙中提取葉綠酸鈉溶液(pH1213)，回收乙醇，加水稀釋濃縮液，振搖，用石油醚萃取雜質，在堿液中加酸使之酸化產生難溶于水的脫鎂葉綠酸2，將脫鎂葉綠酸溶于NaOH溶液(pH10)中，加二氯化錳，再酸化，產生難溶于水的墨綠色錳()葉綠酸。將錳()葉綠酸加水，NaOH(pH10)，H2SeO3水溶液，再加H2SO4酸化至pH3，析出棕色沉淀物，離心。在沉淀中加少量水，加NaOH溶解，溶液pH10，真空干燥得紫黑色亞硒酸錳()-葉綠酸鈉固體物。1.3性狀鑒定亞硒酸錳()-葉綠酸鈉為紫黑色固體物，溶于水，難溶于乙醇、乙醚，常溫下穩定，高于70逐漸分解，長時間光照下亦分解。

10、硒元素的含量為0.77%，錳元素的含量為0.071%。錳()-葉綠酸鈉的紫外吸收光譜為402.2、5014、6565 nm,與Ni2+葉綠酸鈉的光譜(402.2、501.4、652.7nm)很相近3。其紅外光譜見1，由1可見，亞硒酸錳()-葉綠酸鈉IR 1 562 cm1及1 416 cm1處有強吸收峰，在1 700 cm1處無吸收峰。亞硒酸錳()-葉綠酸在1 700 cm1處也有強吸收峰。1亞硒酸錳()-葉綠酸鈉的紅外吸收光譜Fig 1IR spectrum of Sodium chlorophyllin-manganese()selenitc(SCMS)2動物實驗2.1亞硒酸錳()-葉綠酸

11、鈉的急性毒性實驗NIH小鼠(20 g左右)70只，分為7組，每組10只，各半。測得亞硒酸錳()-葉綠酸鈉對NIH小鼠腹腔給藥的LD50為1 175 mg.kg-1(95%的可信區間為8511621 mg.kg1)，急性毒性較小。2.2亞硒酸錳()-葉綠酸鈉對小鼠肝癌H22的抑癌實驗無菌操作下取H22瘤細胞液，計數，稀釋至每ml3×107個，每鼠右腋皮下接種0.2 ml(約含瘤細胞6×106個)。將接種瘤細胞后的小鼠分為3組(對照組、實驗組、5 -FU組)，每組1315只，接種后24小時開始給藥。5-FU組，取5-FU原液0.1 ml，加生理鹽水4.4 ml;實驗組用亞硒酸錳

12、()-葉綠酸鈉以注射水溶解稀釋為5%，3組均間日一次，共三次，0.5 g.kg1。對照組給同體積的蒸餾水。于接種810天處死動物，稱重，解剖腫瘤，測瘤重，計算組平均瘤重，以下述公式計算抑瘤率，此實驗按同一方法重復3次。結果見表1。表1亞硒酸錳()-葉綠酸鈉對小鼠肝癌H22的抑瘤情況Table 1The effect of tumor inhibiting of hepatoma(H22) of rats with SCMSGroupsNo.Mean WT/gTI Rate/%Control4143±0.3659SCMS378486±0.282940.655-FU300.57

13、±0.311660.14No.=number of rat;WT=Weight tumour;TI=tumour inhibiting2.1.1對小鼠口服(灌胃)的抑癌實驗將接種后的小鼠隨機分成3組(對照組、5-FU組、實驗組)，每組不少于12只，接種后24小時開始給藥5-FU腹腔注射300 mg.kg1間日一次；本品口服(灌胃)0.1 ml.10g-1,每日一次，對照組給予同體積蒸餾水。實驗結果見表2。表2亞硒酸錳()-葉綠酸鈉對小鼠肝癌H22的抑瘤情況Table 2The effect of tumor inhibiting of hepatoma(H22) of rats wi

14、th SCMS (by oral administration)GroupsDosage/mg.kg1NoMean WT/gTI Rate/%1Control201.05±0.435-FU30×3150.47±0.1854.48SCMS500×9210.56±0.2345.362Control182.14±0.595-FU30×3201.48±0.5830.8SCMS500×9191.115±0.6947.83Control161.525±0.605-FU30×4120.79

15、±0.4948.2SCMS250×10181.42±0.366.8The number inoculation of tumor cell on rats was 2.5×106 when the dosage of SCMS reduced to half 兩種不同給藥途徑的實驗結果，肌皮下注射本品溶液對動物雖有一定毒性反應，但對小鼠肝癌H22顯示出明顯的抑制效果；口服(灌腸)實驗表明本品對小鼠肝癌H22的抑瘤試驗顯示，當劑量為500 mg.kg1時，有穩定的抑瘤作用，而當劑量減少一倍時，則抑瘤率明顯下降。3討論以上研究合成的亞硒酸錳()-葉綠酸鈉，元

16、素分析測得錳含量為0.071%，提示脫鎂葉綠酸約有10%絡合錳；硒含量為0.77%，提示錳()葉綠酸約有7.6%化合亞硒酸。Mn2+(離子半徑r=0.82pm)的卟啉化合物的穩定性小于Mg2+(r=0.72pm)3，4；Mn2+與脫鎂葉綠酸絡合過程中，Mn2+在堿性溶液pH10中，易被空氣中氧氧化而形成難溶于水的MnO2。在堿性溶液pH10，可能有小部分Mn2+被氧化成Mn3+5，而Mn3+(r=0.65pm)的卟啉絡合物的穩定性較大4，錳()葉綠酸鈉的UV光譜的最大吸收峰402.2 nm,656.4 nm，表明其絡合穩定相當于Ni2+(r=0.69pm)的葉綠酸鈉3，4，這證明錳()葉綠酸鈉

17、是Mn3+絡合。三價錳的化合物是很少見的，要得一個較穩定的Mn3+化合物是極困難的5。錳()葉綠酸鈉是一個新發現較穩定的三價錳絡合物。本品對小鼠肝癌H22的抑制實驗，肌皮下注射，出現一定的毒性反應，體重減輕，皮下及皮膚褐色，藥物很少被吸收，但對小鼠肝癌H22顯示出明顯的抑制效果。從小鼠口服本藥物實驗的結果顯示，無肌皮下注射的一般毒性反應；當劑量500 mg.kg1時，有穩定的抑癌作用(抑癌率為4547)；當劑量減少一倍時，則抑癌率明顯下降。從動物實驗結果看，口服用藥方便，藥效也好，可進行臨床試驗。作者簡介：李曉勇，男，四川成都人，講師，理學碩士，主要從事藥理及藥物合成的教學和研究。作者單位：李曉勇（成都體育學院運動醫學系）陶海鵬（華西醫科大學藥學院）俞華珊（華西醫科大學藥學院）王朝俊（華