1、nm 23-H1基因蛋白和核增殖抗原在喉鱗狀上皮癌中的表達及其意義         08-07-05 10:36:00     作者：樸杰,嚴龍國,嚴永    編輯：studa0714【摘要】  目的 探討nm 23-H1基因蛋白及核增殖抗原（PCNA）在喉鱗狀上皮癌中的表達及其與臨床病理特征的關系. 方法 選擇喉鱗狀上皮癌標本50例，另選擇喉癌旁黏膜標本10例，采用免疫組織化學SP法進行染色，觀察nm 23-H1基因蛋白和P

2、CNA的表達情況，分析PCNA和nm 23-H1基因蛋白的表達與喉鱗狀上皮癌的病理類型、TNM分級、臨床分期及淋巴結轉移情況的關系. 結果 nm 23-H1基因蛋白在喉鱗狀上皮癌中的表達率為68%，在喉癌旁組織中為90%,兩者間比較有顯著性差異；nm 23-H1基因蛋白的表達強度與喉鱗狀上皮癌的TNM分級、臨床分期和淋巴結轉移情況呈顯著相關.PCNA在喉鱗狀上皮癌中的表達率為74%，在喉癌旁組織中為40%，兩者間比較有顯著性差異；PCNA的表達強度與喉鱗狀上皮癌的組織學類型、TNM分級、臨床分期和淋巴結轉移情況呈顯著相關. 結論 nm 23-H1基因蛋白和PCNA的表達強度可作為判斷喉鱗狀上皮

3、癌生物學特性的主要指標，nm 23-H1基因蛋白低表達和PCNA高表達與喉鱗狀上皮癌生物學特性有關.喉鱗狀上皮癌組織中nm 23-H1基因蛋白和PCNA的表達呈負相關. 【關鍵詞】  癌，鱗狀細胞；喉腫瘤；免疫組織化學；增殖細胞抗原    ABSTRACT: OBJECTIVE To study the expression of nm 23-H1 and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in laryngeal squemous cell cacinoma(LSCC) and its relation

4、ship with the characteristis of clinicopathology. METHODS The expression of nm 23 and PCNA was detected by immunohistochemical SP method in 50 cases of  LSCC and 10 cases of normal laryngeal mucosa, and the relationship among expression of PCNA and nm 23-H1 gene protein and pathologic type, TNM

5、 grade, clinical stage, and metastasis of lymph node. RESULTS The positive rate of nm 23 H1 was 68% and 90% in LSCC and normal larynx mucosa, respectively, and there was a significant difference between two groups. The intensity of positive expression of nm 23 H1 was significantly related with the T

6、NM grade, clinical stage and metastasis of lympho node in LSCC. The positive rate of PCNA was 74% and 40% in LSCC and normal larynx mucosa, respectively，and The intensity of positive expression of PCNA was significantly related with the histopathological type, TNM grade, clinical stage and metastasi

7、s of lympho node in LSC. CONCLUSION The intensity of positive expression of  nm 23 H1and PCNA can be as the important index for judging the biological characteristics of LSCC. The low expression of nm 23 H1 and high expression of PCNA is related with biological characteristics of LSCC. There is

8、 negative correlation between the expression of nm 23 H1 and PCNA protein in LSCC.    Key words:carcinoma, squamous cell;laryngeal neoplasms；immunohistochemistry;proliferating cell nuclear antigen    喉鱗狀上皮癌是常見的喉部惡性腫瘤，約占全身惡性腫瘤的2%，且發病率呈逐年上升趨勢.本研究選擇50例喉鱗狀上皮癌標本，觀察了癌組織中nm 23

9、-H1基因蛋白和PCNA的表達情況，探討了PCNA和nm 23-H1基因蛋白的表達與喉鱗狀上皮癌的病理類型、TNM分級、臨床分期及淋巴結轉移的關系.    1  材料與方法    1.1  材料  選擇2000年1月2005年12月在延邊大學附屬醫院手術切除的50例喉鱗狀上皮癌病理標本，全部患者中男性為45例，女性為5例；平均年齡為61歲.全部標本均經100 g/L甲醛固定，常規石臘包埋，行5 m厚連續切片.鼠抗人nm-23 H1單克隆抗體、鼠抗人PCNA單克隆抗體和通用型SP kit盒均為北京中山公司產

10、品，工作液濃度均為180；試劑盒：試劑A為封閉用正常羊血清工作液；試劑B為生物素化二抗工作液羊抗鼠IgG；試劑C為辣根酶標記鏈霉素卵白素工作液S-A/HRP.儀器：石蠟切片機為LEICA RAi 2135型；OLYMPUS光學顯微鏡為日本OLYMPUS公司產品;真彩色病理圖像分析系統為CMIAS系列，為北京航空航天大學產品;CD-t型快速生物醫學微波爐為上海創大科技有限公司產品.    1.2  方法    1.2.1  免疫組織化學染色  采用免疫組織化學S-P法進行染色.具體步驟：石蠟切片，常規脫蠟，

11、蒸餾水沖洗，PBS浸泡5 min（如需采用抗原修復，則在此步驟后進行），30 mL/L過氧化氫去離子水（五色液體）孵育510 min，以消除內源性過氧化物酶的活性；滴加試劑A(藍色液體)，室溫孵育1015 min，滴加適當比例稀釋的一抗，37 孵育2，3 h或4 過夜，PBS沖洗3次，每次3 min；滴加試劑B(黃色液體)，37 孵育1015 min，PBS沖洗3次，每次3 min；滴加試劑C(橙色液體)，37 孵育1015 min，PBS沖洗3次，每次3 min；DAB或AEC顯色劑顯色，自來水沖洗，酒精脫水，透明，封片，如果需要可行復染.    1.2.2&#

12、160; 結果判斷  nm 23-H1基因蛋白陽性表現為在癌細胞的胞漿及胞膜上著色，以胞漿為主，呈棕黃色顆粒；PCNA陽性表現為在細胞核內著色，呈棕黃色顆粒.陽性細胞數少于15%時判定為陰性，多于15%為陽性.    1.2.3  統計學處理  采用SPSS 11.0統計軟件對數據進行確切概率法處理.    2  結果    2.1  組織學分類  按WHO喉癌的病理分類標準進行組織學分類，本組50例喉鱗狀上皮癌標本中高分化鱗狀上皮癌（圖1 A）為31例，中分化鱗狀上皮癌（圖1 B）為15例，低分化鱗狀上皮癌（圖1 C）為4例.    A:高分化鱗狀上皮癌；B：中分化鱗狀上皮癌；C：低分化鱗狀上皮癌    圖1  喉鱗狀上皮癌HE染色所見    ×1002.2  臨床分期  TNM分期結果示，50例喉鱗狀上皮癌患者中T1級者為11例,T2級者為23例,T3級者為12例,T4級者為