1、    尼莫通對大鼠三叉神經刺激后血漿神經肽變化的影響張志堅許國英慕容慎行吳秀麗林珉婷 【摘要】目的觀察尼莫通對三叉神經刺激后血漿神經肽變化的影響。方法30只SD大鼠隨機分為假手術組、刺激組及尼莫通組。采用放射免疫法測定各組血漿中P物質（SP）、血管活性腸肽（VIP）、神經肽Y（NPY）、降鈣素基因相關肽（CGRP）、-內啡肽（-EP）、強啡肽A（DynA）與亮啡肽（LEK）含量。結果與假手術組比較，刺激組NPY、CGRP、SP與VIP升高；與刺激組比較，尼莫通組SP、NPY降低，-EP升高。結論三叉神經受刺激后，引起血管舒縮的神經肽大量釋放，尼莫通可部

2、分地抑制這種釋放，并可導致鎮痛物質-EP的升高。 【關鍵詞】尼莫通大鼠三叉神經刺激神經肽 Effects of nimotop on plasma neuropeptides in rats after trigeminal stimulation Zhang ZhijianXu GuoyingMurong Shenxinget al （Department of Neurology, First Affiliated Hospital of Fujian Medical University, Fuzhou 350005） 【Abstract】ObjectiveTo observe the

3、effects of nimotop on plasma neuropeptides in rats after trigeminal stimulation.Methods30 SD rats were divided into pseudo-operation group, trigeminal stimulation group and nimotop treatment group.The plasma levels of substance P(SP), vasoactive intestinal peptide(VIP),neuropeptide Y (NPY),calcitoni

4、n gene-related peptide(CGRP),-endorphin (-EP),dynorphin A (DynA) and leu-enkephalin (LEK) in each group were determined with radioimmunoassay method.ResultsCompared with pseudo-operation group,the levels of NPY,CGRP,SP and VIP in trigeminal stimulation group were significantly increased;compared wit

5、h trigeminal stimulation group, the levels of SP and NPY in nimotop treatment group were significantly decreased while the level of -EP increased.ConclusionThere was plenty of neuropeptide release of vasomotion after trigeminal stimulation. Administration of nimotop might antagonize the change, and

6、raised the plasma level of -EP. 【Key words】NimotopRatTrigeminal stimulationNeuropeptides 目前有許多證據表明偏頭痛的發病源于神經系統。三叉神經激活后所釋放的神經肽及其對頭顱血管所起的效應成為關注的熱點。因此，三叉神經刺激動物模型被廣泛應用。除了在這些模型上觀察三叉神經激活后各種神經肽的改變以探討偏頭痛的發病機理外，尚探討各種藥物對這些肽類的含量及效應的影響，以尋求或驗證防治偏頭痛的有效藥物。為此，我們應用大鼠三叉神經刺激模型，觀察尼莫通對大鼠三叉神經刺激后血漿神經肽含量的影響，現將結果報告如下。 1材料與方

7、法 1.1動物及分組30只健康雄性SD大鼠（上海西普爾必凱實驗動物有限公司提供，清潔級），體重250350 g，隨機分為假手術組、三叉神經刺激組(刺激組)與應用尼莫通組(尼莫通組)，每組各10只。 1.2方法 1.2.1動物模型用5%水合氯醛麻醉（0.4 g/kg）后，將大鼠固定在手術臺上，腹股溝處剃毛切口，分離出股動脈并插管。按Dimitriadou的方法1，將大鼠固定在立體定向儀（江灣型C，上海第二軍醫大學制造）上，門齒固定桿設在-2.5 mm。頭頂正中切口，充分暴露前囟。在前囟旁3.03.2 mm(據動物大小可變動)、后3.2 mm顱骨處鉆一直徑2 mm孔。操作定向儀將不銹鋼雙極電極由鉆

8、孔處垂直插入，深度在硬腦膜下9.2 mm(達三叉神經節)。應用生理電子刺激儀（SDQ-1型，蚌埠實用技術研究所產）進行電刺激。刺激電流1.0 mA,頻率5 Hz，波寬5 ms,持續5分鐘后采集血樣。假手術組的電極只插入4.5 mm深度，不做電刺激。尼莫通組經股動脈導管給予尼莫通注射液0.025 ml+生理鹽水1 ml，隨即行電刺激，其余操作同刺激組。 1.2.2樣本測定每毫升血樣放入抑肽酶500單位，1%肝素10 l，迅速低溫離心，取血漿置-70保存待測。所有血液樣本均采用放射免疫法測定P物質（SP）、血管活性腸肽（VIP）、神經肽Y（NPY）、降鈣素基因相關肽（CGRP）、-內啡肽（-EP）

9、、強啡肽A（DynA）與亮啡肽（ LEK）。放免藥盒由第二軍醫大學神經生物學教研室提供。操作均按藥盒說明書進行。 1.2.3統計學處理數據用均數±標準差(±s)表示，資料在微機上用SPSS軟件包進行t檢驗。 2結果 大鼠三叉神經刺激后、先用尼莫通再予電刺激之后血中神經肽的變化見表1。與假手術組對比，刺激組NPY、CGRP、SP與VIP均升高，差異有顯著性意義(P0.05001)；尼莫通組LEK、-EP、VIP與CGRP升高，差異有顯著性意義(P0.05001)。與刺激組比，尼莫通組SP、NPY降低，-EP升高，差異均有顯著性意義(均P0.05)。 表1刺激組及尼莫通組大鼠血

10、中神經肽變化（±s，ng/L） 假手術組 （n=10） 刺激組 （n=10） 尼莫通組 （n=10） SP 271.1±118.3 560.8±507.4* 183.7±79.9 LEK 3530.0±1021.2 4241.9±779.2 5076.0±1526.7* VIP 156.4±98.2 381.7±243.6* 318.7±156.5* NPY 745.2±217.1 1180.3±426.8* 858.4±163.8 -EP 519.0±2

11、32.7 551.6±384.3 984.8±381.9* DynA 276.3±172.9 398.8±164.5 297.7±127.8 CGRP 126.4±37.6 236.2±131.9* 232.5±93.0* 與假手術組比*P<0.05，*P<0.01;與刺激組比 P<0.05 3討論 在幾種哺乳動物及人類，均已發現 SP與CGRP共存于三叉神經節的同一神經元內。CGRP是已知最強的血管擴張劑。SP的前體為前速激肽原，致血管擴張作用僅次于CGRP。刺激貓的三叉神經節可使CGRP與SP

12、釋放增加2，同時顱內外血流亦增加。三叉神經痛患者在做半月神經節熱凝時出現刺激側面部潮紅，同時肘靜脈血中CGRP與SP含量顯著升高3。本實驗結果顯示大鼠三叉神經受刺激后SP與CGRP含量升高。這些證據皆支持CGRP與SP很可能參與偏頭痛發病機理的觀點。本實驗在三叉神經刺激前給大鼠施用尼莫通，發現與刺激組比，其SP含量降低，CGRP含量不變，提示鈣拮抗劑可能影響SP的釋放，但具體機理不明。推測SP作為一級感覺神經元的遞質，與傷害信息的傳遞有關。一般尼莫通具有抗細胞損傷作用，使傷害減少，從而使SP水平相應降低。 動物的去神經實驗顯示顱內血管的大多數交感神經纖維來自同側頸上神經節，且多分布在動脈。NP

13、Y與酪氨酸羥化酶的雙重免疫染色顯示該兩種物質同存于血管周圍交感神經纖維中。體外實驗證實NPY的血管收縮效應強過同樣濃度去甲腎上腺素，故認為NPY是交感神經縮血管物質中最強的一種。但在動物模型與偏頭痛患者中進行的有關NPY含量研究結果不甚一致4,5。本實驗檢測結果表明三叉神經激活可伴有交感纖維激活并釋放NPY，這種物質的升高可因刺激前給予尼莫通而受到抑制。此結果支持了NPY可能參與偏頭痛發病的觀點，同時又對鈣拮抗劑擴張血管的機理提出新的看法。以往認為鈣拮抗劑主要為拮抗鈣離子進入血管平滑肌而達到舒血管的作用，但從本實驗結果來看可能還有其它機理。有人經頸動脈注入NPY，可在不影響糖代謝的情況下引起顯

14、著、持續地皮質血流減少，故認為NPY有直接收縮血管的作用6。因此，NPY含量的減少無疑使致血管收縮的因素減少，尼莫通可使NPY含量降低，間接起著防止血管痙攣的作用。 VIP亦具擴血管效應。哺乳動物的腦動脈具有含VIP免疫活性的神經分布。有動物實驗顯示刺激三叉神經節引起大部分顱內外血管擴張，血流增加，實驗者認為這種血管擴張大部通過面神經中副交感神經來實現7，而VIP是此副交感神經所釋放的最終遞質8。刺激貓的三叉神經后，頸靜脈血中VIP含量增高9。本研究結果顯示三叉神經刺激后，大鼠血中VIP含量增高，且刺激前施用尼莫通并不改變這種升高。此表明副交感神經在三叉激活后亦可能參與了偏頭痛的發病機理，但尼

15、莫通對這個系統似乎無甚影響。 -EP屬內啡肽，具多種生理功能，為已知最強的內源性嗎啡樣鎮痛物質。在偏頭痛病人中的研究提示-EP水平較低10。本實驗中示大鼠三叉神經受刺激后，-EP水平無明顯改變，但在刺激前應用尼莫通后其水平大為提高，此結果意味著尼莫通可能有提高機體痛閾作用，但其升高-EP機理不明。LEK屬腦啡肽，其前體為前腦啡肽，廣泛存在于神經系統的各級水平。在中樞內，含腦啡肽的神經元大部是參與構成局部的神經通路，起著調節內分泌與運動、參與感覺整合等功能。因此，含LEK神經元與神經系統各部均有聯系。本實驗顯示大鼠在三叉神經受刺激后， LEK含量不升高，但在刺激前應用尼莫通之后， LEK含量較假

16、手術組升高，這種升高可能提示中樞神經系統的調節活動呈活躍狀態。DynA具有抗傷害作用，其在整個中樞神經系統的分布類似腦啡肽，但無后者廣泛。本實驗沒有發現在三叉神經刺激后，或刺激前給予尼莫通等情況下DynA有所變化。 本研究顯示大鼠三叉神經受刺激后的血管效應是受多重因素影響的。在刺激前應用尼莫通可使SP與NPY含量降低，這可能反映了尼莫通的抗損傷與血管舒張的作用機理。尼莫通可使-EP水平提高的結果具較大意義，但需進一步探討其機理。 本課題由福建省教委資助項目，課題編號J96033 作者單位：張志堅（福建醫科大學附屬第一醫院神經內科350005） 許國英（福建醫科大學附屬第一醫院神經內科35000

17、5） 慕容慎行（福建醫科大學附屬第一醫院神經內科350005） 吳秀麗（福建醫科大學附屬第一醫院神經內科350005） 林珉婷（福建醫科大學附屬第一醫院神經內科350005） 參 考 文 獻 1，Dimitriadou V,Buzzi MG,Moskowitz MA,et al.Trigeminal sensory fiber stimulation induces morphological changes reflecting secretion in rat dura mater mast ells.Neuroscience,1991,44:97 2，Goadsby PJ,Edvinss

18、on L,Ekman R.Release of vasoactive peptides in the extracerebral circulation of humans and the cat during activation of the trigeminovascular system.Ann Neurol, 1988,23:193 3，Nicolodi M,Del Bianco E.Sensory neuropeptides (substance P,calcitonin gene-related peptide) and vasoactive intestinal polypep

19、tide in human saliva：their pattern in migraine and cluster headache.Cephalalgia, 1990,10:39 4，Gallai V,Sarchielli P,Trequattrini A,et al.Neuropeptide Y in juvenile migraine and tension-type headache.Headache, 1994,34:35 5，Goadsby PJ,Edvinsson L,Ekman R.Vasoactive peptide release in the extracerebral circulation of human during migraine headache.Am Neurol, 1990,28:183 6，Tuor UI, Kelly PA,Edvinsson L, et al. Neuropeptide Y and the cerebral circulation. J Cereb Blood Flow Metab, 1990,10:591 7