1、1.熒光和磷光的產生過程熒光：處于基態的分子吸收光子能量，躍遷至電子激發態， 然后通過內轉換和振動弛豫回到第一激發單重態的最低振動能級，最后躍遷回基態時發射的光S0 一*激發態振動弛豫 7內轉換振動弛豫發射熒光磷光：處于基態的分子吸收光子能量，躍遷至電子激發態， 然后通過內轉換和振動弛豫和系間竄越到了第一激發三重態，最后回到基態時發射的光S0 >激發態 '振動弛豫> 內轉換 > 系間跨越：> 振動弛豫發射熒光2激發光譜和發射光譜概念，有何異同（1）激發光譜：固定發射光的波長，測量激發光的波長與發射光強度之間的 關系（選擇最佳激發波長）（2） 發射光譜：固定激發波

2、的波長，測定發射光強度與發射光波長的關系（選 擇最佳發射波長）同：都是給樣品能量使之發光 測量發光強度異：控制的變量不同。3化合物熒光與結構的關系a. 具有一定的熒光量子產率b. 具有合適的結構女口：大的共軛n鍵、剛性平面結構、最低的單重電子激發態為 S1為求* n型、取代基為給電子基團4熒光量子產率、熒光猝滅、系間跨越、振動弛豫A. 熒光量子產率 Q:量子產率表示物質將吸收的光能轉化為熒光的本領，是熒光物質發出光子數與吸收光子數的比值。B. 熒光猝滅：指熒光物質分子與溶劑分子之間相互作用，導致熒光強度下降的現象， 熒光猝滅分為靜態猝滅、動態猝滅等。C. 系間跨越：處于激發態分子的電子發生自旋

3、反轉而使分子的多重性發生變化的過程；分子由激發單重態跨越到激發三重態。D. 振動弛豫：同一電子能級內異熱交換形式由高振動能級至地振動能級間的躍遷。時間為10-12s5實時定量PCR與普通PCR的區別所謂實時熒光定量 PCR技術1，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR技術是起點檢測，實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。具有重現性，誤差小的特點。傳統PCR技術是終點檢測，即 PCR到達平臺期后進行檢測，而PCR經過

4、對數期擴增到達平臺期時，檢測重現性 極差。同一個模板在96孔PCR儀上做96次重復實驗，所得結果有 很大差異，因此無法直接從終點產物量推算出起始模板量。加入內標后，可部分消除終產物定量所造成的不準確性。但即使如此，傳統的定量方法也都只能算作半定量、粗略定量的方法。6.簡述影響熒光效率的主要因素答：（1）分子結枸的影響：發熒光的物質中都舍有共覘雙鍵的強吸收基團，共鞭體系越大， 熒光敷率越高，分子的刖性平直結構利干熒光的產生*取代基對熒光物胡的熒光特征和強度 有很夫影響：給電子取代基可使熒光增強，吸電子取代基使熒光誠弱；重原子兢應使關光減 騎。（2）環境因素的影響I溶劑的極性對熒光物質的熒光強庫產注影響，濬刑的極性越強. 熒光肖度越大逞度對潛液熒光強度影響明區，對于大多數靈光務質，升高淳度會使非®I扌 躍辻引起的熒光的就率降檢溶液pH值跖含有酸性或減