1、專題八生物技術實踐第 15 講生物技術實踐1.微生物的分離和培養2.某種微生物數量的測定3.培養基對微生物的選擇作用4.利用微生物發酵來生產特定的產物5.運用發酵加工食品的基本方法6.微生物在其他方面的應用7.從生物材料中提取某些特定的成分(1)倒平板時，應將打開的皿蓋放到一邊，以免培養基濺到皿蓋上。(×)(2)消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對細胞的傷害。()(3)用稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時，只要稀釋度足夠高，就能在培養基表面形成單個菌落。()(4)對細菌進行計數只能采用稀釋涂布平板法，而不能用平板劃線法。(×)(5)醋酸菌在無氧條

2、件下利用乙醇產生醋酸。(×)(6)酵母菌是嗜溫菌，所以果酒發酵所需的最適溫度高于果醋發酵溫度。(×)(7)將長滿毛霉的豆腐裝瓶腌制時，底層和近瓶口處需加大用鹽量。(×)(8)提煉玫瑰精油的玫瑰花應在花開的初期采收，因為此階段的花含玫瑰精油最高。(×)(9)油水混合物中加入無水硫酸鈉，有利于分離油層。(×)(10)萃取是利用了芳香油易溶于有機溶劑的特性進行提取的一種方法。(),1利用稀釋涂布平板法統計的菌落數為什么往往比活菌的實際數目低？提示：是因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。統計結果一般用菌落數而不是用活菌數來表示。

3、2怎樣準確鑒定某種細菌能夠分解尿素？提示：在以尿素為唯一氮源的培養基中加入酚紅指示劑，如果 pH 升高，指示劑將變紅。3說出利用水蒸氣蒸餾法提取植物芳香油的原理。提示：利用水蒸氣將揮發性較強的植物芳香油攜帶出來，形成油水混合物，冷卻后，混合物又會重新分出油層和水層。全1(2018· 國，T37)在生產、生活和科研實踐中，經常通過消毒和滅菌來避免雜菌的污染。回答下列問題：(1)在實驗室中，玻璃和金屬材質的實驗器具_(填“可以”或“不可以”)放入干熱滅菌箱中進行干熱滅菌。(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高溫瞬時消毒法，與煮沸消毒法相比，這兩種方法的優點是_

4、。(3)密閉空間內的空氣可采用紫外線照射消毒，其原因是紫外線能_，在照射前，適量噴灑_，可強化消毒效果。(4)水廠供應的自來水通常是經過 _(填“氯氣”“乙醇”或“高錳酸鉀” )消毒的。(5)某同學在使用高壓蒸汽滅菌鍋時，若壓力達到設定要求，而鍋內并沒有達到相應溫度，最可能的原因是_。解析：(1)能耐高溫的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培養皿)和金屬用具等可以放入干熱滅菌箱中進行干熱滅菌。(2)煮沸消毒法即在 100煮沸 56 min 可以殺死微生物細胞和一部分芽孢；巴氏消毒法即在 7075煮 30

5、60;min或在 80煮 15min，可以殺死微生物，并且保證營養物質不被破壞。因此，與煮沸消毒法相比，牛奶消毒常采用的巴氏消毒法或高溫瞬時消毒法的優點是在達到消毒目的的同時，營養物質損失較少。(3)因紫外線能破壞 DNA 結構，所以密閉空間內的空氣可采用紫外線照射消毒。在照射前，適量噴灑消毒液，可強化消毒效果。(4)通常乙醇消毒是 75% 的酒精，有氣味，影響水質，不適宜消毒自來水；高錳酸鉀本身有顏色，消毒后溶液呈紫紅色，無法使用；因此水廠供應的自來水通常是經過氯氣消毒的。(5)采用高壓蒸汽滅菌時，鍋內的水加熱煮沸，將其中原有的冷空

6、氣徹底排除后才能將鍋密閉。如果未將鍋內冷空氣排盡，則會出現壓力達到設定要求，而鍋內并沒有達到相應溫度的現象。答案：(1)可以(2)在達到消毒目的的同時，營養物質損失較少(3)破壞 DNA 結構消毒液(4)氯氣(5)未將鍋內冷空氣排盡全2(2018· 國，T37)將馬鈴薯去皮切塊，加水煮沸一定時間，過濾得到馬鈴薯浸出液。在馬鈴薯浸出液中加入一定量蔗糖和瓊脂，用水定容后滅菌，得到M 培養基。回答下列問題：(1)M 培養基若用于真菌的篩選，則培養基中應加入鏈霉素以抑制_的生長，加入了鏈霉素的培養基屬于_培養基。(2)M 培養基中的

7、馬鈴薯浸出液為微生物生長提供了多種營養物質，營養物質類型除氮源外還有_(答出兩點即可)。氮源進入細胞后，可參與合成的生物大分子有_(答出兩點即可)。(3)若在 M 培養基中用淀粉取代蔗糖，接種土壤濾液并培養，平板上長出菌落后可通過加入顯色劑篩選出能產淀粉酶的微生物。加入的顯色劑是_，該方法能篩選出產淀粉酶微生物的原理是_。(4)甲、乙兩位同學用稀釋涂布平板法測定某一土壤樣品中微生物的數量，在同一稀釋倍數下得到以下結果：甲同學涂布了 3 個平板，統計的菌落數分別是 110、140 和 149，取平均值 133；乙同學

8、涂布了 3 個平板，統計的菌落數分別是 27、169 和 176，取平均值 124。有人認為這兩位同學的結果中，乙同學的結果可信度低，其原因是_。解析：(1)M 培養基若用于真菌的篩選，說明 M 培養基能滿足真菌的生長，而能抑制其它微生物的生長，鏈霉素是一種抗生素，可以抑制細菌的生長。加入了鏈霉素的培養基能篩選出真菌，該培養基屬于選擇培養基。(2)微生物生長需要多種營養物質除氮源外，還需要碳源、無機鹽、水以及特殊營養物質等。氮元素是蛋白質和核酸等生物大分子的組成元素，因此氮源進入細胞后，可參與合成的生物大

9、分子有蛋白質和核酸。(3)淀粉遇碘液會變成藍色，篩選產淀粉酶的微生物，依據淀粉遇碘液顯藍色，產淀粉酶的菌落周圍淀粉被水解，形成透明圈，再根據透明圈，來篩選產淀粉酶的微生物。(4)乙同學結果不合理，因為 1 個平板的計數結果與另 2 個相差懸殊，結果的重復性差，不能簡單的用其平均數作為最終結果。答案：(1)細菌選擇(2)碳源、無機鹽蛋白質、核酸(3)碘液淀粉遇碘液顯藍色，產淀粉酶的菌落周圍淀粉被水解，形成透明圈(4)乙同學的結果中，1 個平板的計數結果與另 2 個相差懸殊，結果的重復性差全3(2014· 國

10、，T39)為了調查某河流的水質狀況，某研究小組測定了該河流水樣中的細菌含量，并進行了細菌分離等工作。回答下列問題：(1)該小組采用稀釋涂布平板法檢測水樣中細菌含量。在涂布接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養了一段時間，這樣做的目的是_；然后，將 1mL 水樣稀釋 100 倍，在 3 個平板上用涂布法分別接入 0.1mL 稀釋液；經適當培養后， 3 個平板上的菌落數分別為39、38 和 37，據此可得出每升水樣中的活菌數為_。(2)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細菌，操

11、作時，接種環通過 _滅菌，在第二次及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線，這樣做的目的是_。(3)示意圖 A 和 B 中，_表示的是用稀釋涂布平板法接種培養后得到的結果。4(2017· 國，T37)某些土壤細菌可將尿素分解成 CO  2 和 NH  3，供植物吸收和利用。(4)該小組將得到的菌株接種到液體培養基中并混勻，一部分進行靜置培養，另一部分進行振蕩培養，結果發現：振蕩培養的細菌比靜置培養的細菌生長速度快。分析其原因是：振蕩培養能提高培養液中

12、_的含量，同時可使菌體與培養液充分接觸，提高_的利用率。解析：(1)為了確定培養基的滅菌是否合格，通過隨機取若干滅菌后的空平板培養一段時間，觀察培養基上是否有菌落生成，用來進行對照。三個培養基上平均數為 38，所以每升水樣中活菌數為 38×10×100×10003.8×107。(2)接種環用灼燒進行滅菌。在第二次及以后劃線時，總是從上一次的末端開始劃線，這樣做的目的是：通過劃線次數的增加，使每次劃線時菌體的數目逐漸減少，以便得到菌落。(3)A 是平板劃線法，B 是稀釋涂布平板法。(4)振蕩培養可以增加液體培養基的氧

13、氣含量，促進好氧型微生物的生長；同時還能使菌體與培養液充分接觸，提高營養物質的利用率。答案：(1)檢測培養基平板無菌是否合格3.8×107(2)灼燒將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落(3)B (4)溶解氧營養物質全回答下列問題：(1)有些細菌能分解尿素，有些細菌則不能，原因是前者能產生 _。能分解尿 素 的 細 菌 不 能 以 尿 素 的 分 解 產 物 CO2 作 為 碳 

14、源 ， 原 因 是 _，但可用葡萄糖作為碳源，進入細菌體內的葡萄糖的主要作用是_ 答出兩點即可)。(2)為了篩選可分解尿素的細菌，在配制培養基時，應選擇_(填“尿素”“NH4NO 3”或“尿素 NH 4NO 3”)作為氮源，不選擇其他兩組的原因是 _。(3)用來篩選分解尿素細菌的培養基含有 KH 2PO 4 和 Na 2HPO 4，其作用有_(答出兩點即可)。解析：(1)細菌分解尿素是由于細菌體內合成脲酶的結果，尿素

15、是有機物，分解尿素的細菌是分解者，而不是生產者，只能生產者才能利用 CO2 作為碳源合成有機物。葡萄糖通常既作為碳源，也可作為能源，作為碳源可轉變成其它有機物。(2)篩選分解尿素的細菌，通常只能用尿素作為唯一氮源，對于 “NH 4NO 3”或“尿素NH 4NO 3”均含有無機氮源。(3)KH 2PO 4 和 Na 2HPO 4 為微生物培養可提供 P 元素和無機鹽離子如鉀離子和鈉離子。答案：(1)脲酶分解尿素的細菌是異養型生物，不能利用

16、 CO 2 來合成有機物為細胞生物生命活動提供能量，為其他有機物的合成提供原料(2)尿素其他兩組都含有 NH 4NO 3，能分解尿素的細菌和不能分解尿素的細菌都能利用NH 4NO 3，不能起到篩選作用(3)為細菌生長提供無機營養，作為緩沖劑保持細胞生長過程中 pH 穩定全5(2014· 國，T39)植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解，回答下列問題：(1)分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶是由 3 種組分組成的復合酶，其中葡萄糖苷酶可將_分解成_

17、。(2)在含纖維素的培養基中加入剛果紅(CR)時，CR 可與纖維素形成_色復合物。用含有 CR 的該種培養基培養纖維素分解菌時，培養基上會出現以該菌的菌落為中心的_。(3)為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學設計了甲、乙兩種培養(成分見下表)：培養基甲酵母膏無機鹽淀粉纖維素粉瓊脂CR 溶液水培養基乙據表判斷，培養基甲_(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是_；培養基乙_(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是_。解析：(1)葡萄糖苷酶可將纖維二糖分解成葡萄糖。(2)剛果紅與纖維素形成紅色復合物，當纖

18、維素被纖維素酶分解后，紅色復合物無法形成，出現以纖維素分解菌為中心的透明圈，可以通過是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌。 (3)纖維素分解菌分離和鑒別培養基屬于固體培養基，而培養基甲中沒有瓊脂，是液體培養基，要分離和鑒別纖維素分解菌， 需要以纖維素為主要碳源的培養基， 培養基乙不具有選擇的作用。答案：(1)纖維二糖葡萄糖(2)紅透明圈(3)不能液體培養基不能用于分離單菌落不能培養基中沒有纖維素，不會形成 CR 纖維素紅色復合物，即使出現單菌落也不能確定其為纖維素分解菌全6(2016· 國，T39)某同學用新鮮的泡菜濾液為實驗材

19、料分離純化乳酸菌。分離純化所用固體培養基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產生的乳酸能溶解培養基中的碳酸鈣。回答下列問題：(1)分離純化乳酸菌時，首先需要用 _對泡菜濾液進行梯度稀釋，進行梯度稀釋的理由是_。(2)推測在分離純化所用的培養基中加入碳酸鈣的作用有 _和_。分離純化時應挑選出_的菌落作為候選菌。(3)乳酸菌在20 長期保存時，菌液中常需要加入一定量的_(填“蒸餾水”、“甘油”或“碳酸鈣”)。解析：(1)分離純化乳酸菌時，首先需要用無菌水對泡菜濾液進行梯度稀釋；進行梯度稀釋的理由是在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的乳酸菌將被分散成單個細胞，從而能在培養基表

20、面形成單個的菌落。若直接培養，由于泡菜濾液中菌的濃度高，則很難分離得到單菌落。(2)由題意可知，分離純化所用固體培養基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產生的乳酸能溶解培養基中的碳酸鈣。由此可推測在分離純化所用的培養基中加入碳酸鈣的作用有中和乳酸菌代謝過程中產生的乳酸和鑒別能產生乳酸的乳酸菌；根據產酸菌在含 CaCO 3 的培養基上產生透明圈的原理，分離純化時應挑選出具有透明圈的菌落作為候選菌，然后用平板劃線法進一步分離純化。(3)對于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。即將 1mL 培養的菌種轉移到已滅菌的盛有 1mL 

21、;甘油的甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在20的冷凍箱中保存。所以乳酸菌在20長期保存時，菌液中常需要加入一定量的甘油。答案：(1)無菌水泡菜濾液中菌的濃度高，直接培養很難分離得到單菌落(2)鑒別乳酸菌中和產生的乳酸具有透明圈(3)甘油全7(2015· 國，T39)已知微生物 A 可以產生油脂，微生物 B 可以產生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生產。回答有關問題：(1)顯微觀察時，微生物 A 菌體中的油脂通常可用于_染色。微生物 A 產生的油脂不易揮發，可選用_(填“萃取法”或“水蒸氣蒸餾法

22、”)從菌體中提取。(2)為了從自然界中獲得能產生脂肪酶的微生物 B 的單菌落，可從含有油料作物種子腐爛物的土壤中取樣，并應選用以_為碳源的固體培養基進行培養。(3)若要測定培養液中微生物 B 的菌體數，可在顯微鏡下用_直接計數；若要測定其活菌數量，可選用_法進行計數。(4)為了確定微生物 B 產生的脂肪酶的最適溫度，某同學測得相同時間內，在 35、40、45溫度下降解 10g 油脂所需酶量依次為 4mg 、1mg 、6mg ，則上述三個溫度中，_條件下該酶活力最小。

23、為了進一步確定該酶的最適溫度，應圍繞_設計后續實驗。解析：(1)油脂可被蘇丹染液(或蘇丹)染液染成橘黃色(或紅色)。由于微生物 A 產生的油脂不易揮發，故采用萃取法。(2)能產生脂肪酶的微生物 B 可以分解脂肪，故可以以脂肪為碳源的固體培養基進行培養，不產生脂肪酶的微生物無法生存。(3)微生物 B 的菌體數，可在顯微鏡下用血細胞計數板直接計數；活菌用稀釋涂布平板法，只有活的菌體才能形成菌落。(4)45降解 10g 油脂所需酶量最大，故酶活性最小；40溫度下，降解 10g 油脂所需酶量最小，故酶活

24、性最大，由此可知要想探究該酶的最適溫度需要圍繞 40溫度設置溫度梯度進行實驗。答案： (1)蘇丹 (或者蘇丹 ) 萃取法(2)油脂(3)血細胞計數板稀釋涂布平板(4)45 40考點一微生物的應用1微生物純化培養的方法比較(1)平板劃線操作(2)稀釋涂布平板操作：先將菌液進行一系列梯度稀釋后涂布平板，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而在培養基表面形成單個菌落。如圖所示：(1)為了確定培養基的滅菌是否合格，微生物學實驗一般會設置空白對照：隨機取若干滅菌后的空白平板培養基在適宜條件下培養一段時間，觀察培養基上

25、是否有菌落生成。(2)觀察菌落需用固體培養基，因此培養基要添加瓊脂。(3)倒平板的溫度一般在 50 左右適宜，溫度過高會燙手，溫度過低培養基又會凝固。(4)平板需倒置，這樣既可使培養基表面的水分更好地揮發，又防止皿蓋上的水珠落入培養基，造成培養基污染。(5)平板劃線法只適用于微生物的提純，不適合進行計數，并且在最后一次劃線的末端處的菌種最純。(6)利用平板菌落計數法的計算公式估算水樣中的活菌數：C/V ×M( 稀釋倍數)。(7)菌種用甘油管藏法長期保存，保存時菌液中常添加一定量的甘油。2把握微生物分離與計數的兩個實例(1)土壤中分解尿素的細菌的

26、分離與計數篩選菌株：利用選擇培養基篩選菌株。測定微生物數量的常用方法：活菌計數法和顯微鏡直接計數。過程：土壤取樣樣品稀釋微生物的培養與觀察。鑒定方法：含酚紅指示劑以尿素為唯一氮源的培養基細菌出現紅色透明圈，則該菌能分解尿素。(2)分解纖維素的微生物的分離實驗原理：即：可通過是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌。流程：土壤取樣選擇培養梯度稀釋涂布平板挑選菌落。微生物的分離與計數(1)篩選微生物的“兩”種選擇培養基以尿素為唯一氮源的培養基：篩選尿素分解菌。富含纖維素的培養基：篩選纖維素分解菌。(2)鑒別微生物的“兩”種鑒別培養基添加酚紅指示劑的培養基：尿素分解菌可使該培養基變紅。添加剛果紅的培養基：纖

27、維素分解菌的菌落周圍產生透明圈。(3)微生物計數的“兩”種方法直接計數法：顯微鏡直接計數法。間接計數法：稀釋涂布平板法(活菌計數法)，統計的菌落數往往比活菌的實際數目低。全1(2016· 國，T39)空氣中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小組欲用平板收集教室空氣中的微生物，以了解教室內不同高度空氣中微生物的分布情況。實驗步驟如下：配制培養基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl 、X 、H 2O)；制作無菌平板；設置空白對照組和若干實驗組，進行相關操作；將各組平板置于 37 恒溫箱中培養一段時間，統計各組平板上菌

28、落的平均數。回答下列問題：(1)該培養基中微生物所需的氮來源于 _。若要完成步驟，該培養基中的成分 X 通常是_。(2)步驟中，實驗組的操作是_。(3)若在某次調查中，某一實驗組平板上菌落平均數為 36 個/平板，而空白對照組的一現個平板上出現了 6 個菌落，這種結果說明在此次調查中出現了 _象。若將30(即 36 6)個/平板作為本組菌落數的平均值，該做法 _(填“正確”或“不正確”)。解析：(1)依據配制培養基的成分可知，該培養基中微生物所需的氮來源于牛肉膏、蛋白胨。因為該實驗是&

29、#160;“用平板收集教室空氣中的微生物”，所使用的培養基應為固體培養基，配制時，需加入凝固劑，據此推知，該培養基中的成分 X 通常是瓊脂。(2)依題意可知，該實驗的目的是，用平板收集教室空氣中的微生物，以了解教室內不同高度空氣中微生物的分布情況。所以步驟中，實驗組的操作是，將各實驗組平板分別放置在教室不同高度的位置上，開蓋暴露一段時間，以收集教室不同高度空氣中的微生物。(3)設置的空白對照組，在整個實驗過程中沒有用來收集空氣中的微生物，若空白對照組的一個平板上出現了 6 個菌落，說明培養基的配制是不成功的，在此次調查中出現了污染現象，所以若將 

30、;30(即 366)個/平板作為本組菌落數的平均值，該做法不正確。答案：(1)牛肉膏、蛋白胨瓊脂(2)將各實驗組平板分別放置在教室不同高度的位置上，開蓋暴露一段時間(3)污染不正確安2(2018· 徽六校教育研究會聯考)為解決塑料袋造成的“白色污染”問題，某同學試圖從土壤中尋找一種能加速塑料袋自然降解的目的菌，請根據有關知識回答下列問題：(1)為培養該目的菌，需要配制出供其 _所需的營養基質培養基，對培養基滅菌常用的方法是_。在接種前需要檢驗使用的培養基滅菌是否合格，方法是_。(2)為了確保能夠從樣品中分離得到所需要的微生物，我們可在接種之前進行

31、0;_培養，以增加目的菌的濃度。實驗室常用的接種方法有_和_。(3)該同學在稀釋倍數為 104 的培養基中測得平板上菌落數分別為 24、23、25，則每毫升樣品中的菌落數是_個(涂布平板時所用稀釋液的體積為 0.2 mL)。用該方法統計的數目往往比活菌的實際數目_。解析：(1)培養基可以為目的菌的生長繁殖提供營養物質，常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌法；在接種前需要檢測使用的培養基是否被污染，可以將未接種的培養基在37(或適宜溫度)恒溫箱中倒置培養一段時間，觀察是否有菌落生成。(2)為了確保能夠從樣品中分離得到所需要的微生物，在接種之前用以聚乙烯塑

32、料為唯一碳源的選擇培養基進行選擇培養，以增加目的菌的濃度；實驗室常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法。(3)根據題意可知，每克樣品中的菌落數平板上菌落數的平均值÷體積×稀釋倍數(242325)÷0.2×1041.2×106；由于細菌會相互重疊，因此用該方法統計的數目往往比活菌的實際數目少。答案： (1)生長繁殖高壓蒸汽滅菌法將未接種的培養基在 37(或適宜溫度)恒溫箱中倒置培養一段時間(或 12 天)，觀察是否有菌落生成(2)選擇平板劃線法稀釋涂布配制培養基   

33、60;  X  培養 觀察平板法(3)1.2×106少3對微生物進行分離培養，實驗基本步驟如下：滅菌、倒平板(1)圖中步驟 X 表示_。(2)某興趣小組嘗試對家庭飲用水中的大腸桿菌含量進行檢測，用濾膜對家庭飲用水過濾后，將濾膜轉移到伊紅美藍培養基上進行檢測，若有大腸桿菌，伊紅美藍培養基上會出現_色菌落，從功能上看，伊紅美藍培養基被稱做_培養基。(3)分離幽門螺桿菌配制培養基時，要加入尿素和 _指示劑，這是因為幽門螺桿菌含有_；若有幽門螺桿菌，則菌落周圍會出現_色透明圈。臨床上常讓病人喝一定量用 

34、14C 標記的尿素，檢測呼出的氣體中有無 14CO 2 來判斷是否感染了幽門螺桿菌(14C 呼氣試驗)，其基本原理是_。解析：(1)滅菌、倒平板后的 X 步驟表示接種。在無菌條件下操作時，先將菌液稀釋，然后將菌液涂布到培養基平面上，菌液稀釋的目的是為了獲得單一菌落。(2)測定飲用水中大腸桿菌的數目的方法：將已知體積的水過濾后，將濾膜放在伊紅美藍培養基上培養。在該培養基上大腸桿菌的菌落呈現黑色，可根據培養基上黑色菌落的數目，計算出水樣中大腸桿菌的數目。從功能上看，伊紅美藍培養基被稱做鑒別培養基。(3)由于幽門螺桿菌在分解尿素的

35、過程中合成脲酶，脲酶將尿素分解成氨，會使培養基堿性增強，pH 升高，所以可在培養基中加入酚紅指示劑和尿素，若有幽門螺桿菌，尿素被分解后產生氨，pH 升高，指示劑變紅，則菌落周圍會出現紅色透明圈。臨床上常讓病人喝一定量用 14C 標記的尿素，檢測呼出的氣體中有無 14CO 2 來判斷是否感染了幽門螺桿菌(14C呼氣試驗)，其基本原理是幽門螺桿菌能將 14C 標記的尿素分解為 NH 3 和 14CO 2。答案：(1)接種(2)黑鑒別(培養基) (3)

36、酚紅脲酶紅幽門螺桿菌能將 14C 標記的尿素分解為 NH 3 和 14CO2安4(2018· 徽滁州期末)科學家篩選培育良種纖維素分解菌對玉米芯進行降解，并進一步利用酵母菌發酵制備乙醇。回答下列問題：(1)篩選纖維素分解菌時，一般在以_為唯一碳源的培養基中添加染料，通過是否產生_來篩選纖維素分解菌。(2)請用文字敘述圖 1 中分解玉米芯絲菌用量與還原糖濃度的關系 _。(3)圖 2 表示酵母菌量與酒精產生量的關系，酵母菌接種量超過 40mL 后，酒

37、精產量反而減少的原因是_。為確定發酵罐內酵母菌的數量，常用稀釋涂布平板法統計細菌數量，統計的數據往往會偏小的原因是_。解析：(1)纖維素分解菌具有分解纖維素的能力，因此其培養基中一般添加纖維素作為唯一碳源；剛果紅能與培養基中的纖維素形成紅色復合物，當纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅纖維素的復合物就無法合成，培養基中會出現以纖維素分解菌為中心的透明圈，所以我們就可以通過是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌。(2)根據圖 1 中的曲線變化分析，隨著纖維素分解菌用量的增加，還原糖濃度先增加后降低，即在底物玉米芯用量一定的情況下，菌用量的增加有利于玉米芯酶解為還原糖，當菌用量過大時，還原

38、糖含量下降。(3)圖 2 顯示，酵母菌接種量超過 40mL 后，酒精產量反而減少，其主要原因是酵母菌接種量過大導致酵母菌種群密度過大，不利于酵母菌的發酵活動；稀釋涂布平板法統計細菌數量時，由于兩個或多個細菌形成一個菌落，所以統計的數據往往會偏小。答案：(1)纖維素透明圈(2)在底物玉米芯用量一定的情況下，菌用量的增加有利于玉米芯酶解為還原糖，當菌用量過大時，還原糖含量下降(3)酵母菌接種量過大導致酵母菌種群密度過大，不利于酵母菌的發酵活動 兩個或多個細菌形成一個菌落河5(2018· 南中原名校第六次質考 )多氯聯苯

39、(PCB)是一種對人體有害的有機物，某科技小組欲從受 PCB 污染的土壤中分離出能分解 PCB 的細菌。請回答下列問題：(1)要從受 PCB 污染的土壤中分離出能分解 PCB 的細菌，應配制以_作為唯一的碳源的選擇培養基；配制培養基時用到的玻璃器皿需用_進行滅菌。(2)分離前可通過選擇培養增加土壤中 PCB 分解菌的濃度，選擇培養時需要不斷震蕩錐形瓶的目的是_。(3)用稀釋涂布平板法統計 PCB 分解菌的濃度時，常需同時培養空白培養基，其目的是_。若實驗中發現空白培養基上生長

40、有 3 個菌落，為準確測定樣液中 PCB分解菌的濃度，則需要_。(4)在純化土壤中的 PCB 分解菌時，發現培養基上的菌落連成一片，最可能的原因是_，應當怎樣操作才可避免此種現象？_。解析：(1)分析題意可知，要從土壤中篩選出能分解 PCB 的細菌，應采用以 PCB 作為唯一的碳源的選擇培養基；實驗中的玻璃器皿一般采用干熱滅菌法進行滅菌。(2)培養 PCB 分解菌時，需要不斷的震蕩錐形瓶，目的是為了讓 PCB 分解菌充分與培養液接觸，進而充分利用營養物質。(3)用稀

41、釋涂布平板法統計 PCB 分解菌的濃度時，為了檢測所用培養基滅菌是否徹底，需要培養空白培養基作為對照。若實驗中發現空白培養基上生長有 3 個菌落，說明培養基滅菌不徹底，為準確測定樣液中 PCB 分解菌的濃度，則需要重新配制培養基進行實驗。(4)若 PCB 分解菌的菌落在培養基上連成一片，說明菌液濃度過高，則應該對菌液進行梯度稀釋。答案：(1)多氯聯苯(PCB)干熱滅菌法(2)讓 PCB 分解菌充分利用營養物質(3)檢測所用培養基滅菌是否徹底重新配制培養基進行實驗(4)菌液濃度過高對菌液進行梯度稀

42、釋(加大稀釋倍數)考點二傳統發酵技術的應用1果酒和果醋的制作2腐乳的制作(1)制作原理(2)實驗流程及影響因素3.泡菜的制作1把握控制雜菌的“四大措施”(1)通過發酵條件控制雜菌。無氧發酵時的無氧環境可以抑制好氧菌。乳酸菌發酵、酒精發酵形成的酸性環境抑制雜菌繁殖。(2)利用鹽控制雜菌：如腐乳的制作。(3)利用酒精控制雜菌：如果酒、腐乳的制作。(4)利用香辛料控制雜菌：如腐乳、泡菜的制作。2乳酸菌、乳酸、亞硝酸鹽的數量隨時間變化的曲線模型構建全1(2018· 國，T37)回答下列與酵母菌有關的問題：或(1)分離培養酵母菌通常使用_(填“牛肉膏蛋白胨”“MS” “麥芽

43、汁瓊脂”)培養基，該培養基應采用_滅菌法滅菌。若將酵母菌劃線接種在平板上，培養一段時間后會觀察到菌落，菌落的含義是_。(2)酵母菌液體培養時，若通入氧氣，可促進_(填“菌體快速增殖”、“乙醇產生”或“乳酸產生”)；若進行厭氧培養，可促進_(填“菌體快速增殖”、“乙醇產生”或“乳酸產生”)。(3)制作面包時，為使面包松軟通常要在面粉中添加一定量的酵母菌，酵母菌引起面包松軟的原因是_。解析：(1)麥芽汁瓊脂培養基的碳氮比較高，而且含糖量高，更適合酵母菌；該培養基應采用高壓蒸汽滅菌法滅菌；若將酵母菌劃線接種在平板上，培養一段時間后可觀察到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體，這就是菌落。(2)酵

44、母菌液體培養時，若通入氧氣，進行有氧呼吸產生 H 2O 和 CO 2，釋放能量多，細胞增殖快；若進行無氧培養，進行無氧呼吸，產生酒精和 CO 2，釋放能量少，增殖慢。(3)制作面包時，在面粉中添加一定量的酵母菌，因酵母菌可以分解面粉中的葡萄糖，產生二氧化碳，二氧化碳是氣體，遇熱膨脹而形成小孔，使得面包松軟多孔。答案：(1)麥芽汁瓊脂高壓蒸汽由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體(2)菌體快速增殖乙醇產生(3)酵母菌分解葡萄糖會產生 CO 2，CO 2 使面包松軟全2(2016

45、3; 國，T39)蘋果醋是以蘋果汁為原料經發酵而成的。回答下列問題：(1)酵母菌的呼吸代謝途徑如圖所示。圖中過程和是蘋果醋生產的第一階段，在酵母菌細胞的_中進行，其產物乙醇與_試劑反應呈現灰綠色，這一反應可用于乙醇的檢驗；過程在酵母菌細胞的_中進行。與無氧條件相比，在有氧條件下，酵母菌的增殖速度_。(2)第二階段是在醋酸桿菌的作用下將第一階段產生的乙醇轉變為醋酸的過程，根據醋酸桿菌的呼吸作用類型，該過程需要在_條件下才能完成。(3)在 生 產 過 程 中 ， 第 一 階 段 

46、和 第 二 階 段 的 發 酵 溫 度 不 同 ， 第 一 階 段 的 溫 度_(填“低于”或“高于”)第二階段的。(4)醋酸桿菌屬于 _核生物，其細胞結構中 _(填“含有”或“不含有” )線粒體。解析：(1)圖示中的過程和分別表示無氧呼吸的第一、第二階段，其場所均為細胞質基質；橙色的重鉻酸甲溶液在酸性條件下與乙醇(酒精)反應變成灰綠色。過程表示有氧呼吸的第二、第三階段，其場所

47、分別為線粒體基質和線粒體內膜，即過程在酵母菌細胞的線粒體中進行。與無氧條件相比，在有氧條件下，酵母菌的增殖速度快。(2)醋酸桿菌是一種好氧菌，在氧氣充足的條件下才能進行旺盛的生命活動，因此將第一階段產生的乙醇轉變為醋酸的過程，需要在有氧條件下才能完成。(3)第一階段即果酒的制作，所控制的溫度范圍是 1825，第二階段即果醋的制作，所控制的溫度范圍是 3035，所以第一階段的溫度低于第二階段的。(4)醋酸桿菌屬于原核生物，其細胞結構中不含線粒體等復雜的細胞器。   高純度     蘋果蘋果汁

48、60;              果汁蘋果酒原醋等原料答案：(1)細胞質基質重鉻酸鉀線粒體快(2)有氧(3)低于(4)原不含有全3(2017· 國，T37)豆豉是大豆經過發酵制成的一種食品。為了研究影響豆豉發酵效果的因素，某小組將等量的甲、乙兩菌種分別接入等量的 A 、B 兩桶煮熟大豆中并混勻，再將兩者置于適宜條件下進行發酵，并在 32 h內定期取樣觀測發酵效果。回答下列問題：(1)該實

49、驗的自變量是_、_。(2)如果發現發酵容器內上層大豆的發酵效果比底層的好，說明該發酵菌是_。(3)如果在實驗后，發現 32 h 內的發酵效果越來越好，且隨發酵時間呈直線上升關系，則無法確定發酵的最佳時間；若要確定最佳發酵時間，還需要做的事情是_。(4)從大豆到豆豉，大豆中的成分會發生一定的變化，其中，蛋白質轉變為 _，脂肪轉變為_。解析：(1)該實驗的自變量是菌種、發酵時間。(2)如果發現發酵容器內上層大豆的發酵效果比底層的好，說明該發酵菌是好氧菌。(3)如果在實驗后，發現 32 h 內的發酵效果越來越好，且隨發酵時間呈直線

50、上升關系，則無法確定發酵的最佳時間；若要確定最佳發酵時間，還需要做的事情是延長發酵時間，觀測發酵效果，最好的發酵效果所對應的時間即為最佳發酵時間。(4)從大豆到豆豉，大豆中的成分會發生一定的變化，其中，蛋白質轉變為氨基酸和肽，脂肪轉變為脂肪酸和甘油。答案：(1)菌種發酵時間(2)好氧菌(3)延長發酵時間，觀測發酵效果，最好的發酵效果所對應的時間即為最佳發酵時間(4)氨基酸和肽脂肪酸和甘油安4(2018· 徽江淮十校 4 月聯考)下圖為蘋果醋的工業生產流程，以及實驗室分離、純化發酵菌的方法步驟。請回答以下問題：鮮蘋 蘋果醋純化發酵菌的方法步驟：配制培養基培養基滅菌接種培養挑選符合要求的菌落。(1)在微生物的實驗室培養中，獲得純凈培養物的關鍵是 _，因此需對培養基和培養皿進行滅菌，空氣中的細菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使破壞DNA 的結構，也能使蛋白質_。(2)上圖中過程與過程需要接種的發酵菌分別是_。(3)某同學計劃統計食醋中該發酵菌的總數，他選用 104、105、106 稀釋液進行涂布，每種稀釋液都設置了3 個培養皿。從對照實驗的角度看，還應設置的一組對照組是_，設置對照組的目的是_。(4)對同一濃度的發酵菌稀釋液，分別用血球計數板計數和稀釋涂布平板法計