1、1 非發酵菌及檢驗2 非發酵菌及檢驗 非發酵菌（nonfermenters）是指一群不能利用或僅以氧化形式利用糖類, 生化特性十分相近的革蘭陰性無芽胞桿菌。 括多個菌屬，主要有：假單胞菌屬 不動桿菌屬 產堿桿菌屬 莫拉菌屬 黃桿菌屬3 分群依據： 1. 氧化酶試驗陽性（不動桿菌及個別假單胞菌為陰性） 2. 葡萄糖氧化/發酵（O/F）：應開管產酸，閉管不變。 3. 動力：大多為專性需氧菌，半固體上動力不明顯（動力觀察應在30或室溫1224小時培養物懸滴法為準或以鞭毛染色鑒別） 4. 麥康凱培養基上生長：可分群見表4菌 屬 氧化酶 葡萄糖 O/F 懸滴動力 觸媒 硝酸鹽還原 麥康凱上生長假單胞菌屬

2、 + O / - + + + / - +不動桿菌屬 - O / - - + - +產堿桿菌屬 + - + + + / - +莫拉菌屬 + - - + + / - +黃桿菌屬 + O / F - + - + / - 非發酵菌主要菌屬的生化反應5 廣泛存在于自然界的空氣、水和土壤中。種類多達200余種，大多數為條件致病菌。革蘭陰性，直或微彎曲，大多有鞭毛（單鞭毛或單端叢毛），無芽胞，專性需氧。第二節 假單胞菌屬 （Pseudomonas）6 為假單胞菌的代表，為條件致病菌，也是醫院感染的常見病菌之一。（一）生物性狀1、形態染色性：革蘭陰性菌桿，呈球桿狀或長絲狀，長短不一，單個或短鏈排列。無芽胞，無

3、莢膜，單端有鞭毛13根，運動活潑。 銅綠假單胞菌 （P.aeruginosa）7 培養特性： 專性需氧，4不長，42可生長。 血平板：常見透明溶血環 普通平板：可產多種色素，主要有：綠膿素（蘭綠色，可溶于水）和熒光素（只溶于水）。從臨床標本中分離的菌株大多產生此色素8 麥康凱上可形成5種不同形態的菌落： 典型型：灰綠色，大小不一，扁平濕潤，邊緣不齊，表面可見金屬光澤。大腸菌群型：圓形凸起，灰白色半透明。粗糙型：菌落中央凸起，邊緣扁平，表面粗糙。侏儒型：細小無光澤，半透明菌落粘液型：光滑凸起呈粘液狀9生化反應： 氧化酶，O/F上能氧化分解葡萄糖、木糖產酸、精氨酸雙水解酶，枸櫞酸鹽，硝酸鹽。抵抗力

4、：較強，臨床分離株對多種抗生素耐藥10 （二）致病性： 可產生多種致病物質：內毒素、外毒 素、菌毛、莢膜、胞外酶和溶血物質除自然界外，也存在于人體皮膚上及與外界相通的腔道中。多為繼發感染，如燒傷后的創面感染，也可引起肺炎、腦膜炎、尿道感染，嚴重時可引起敗血癥，死亡率甚高。11 （三）微生物學檢驗 1、標本采集：血液、腦脊液、胸腹水、尿液、痰液、膿汁等。醫院環境監控：可采空氣、水、物體表面等。 2、檢驗程序 3、檢驗方法： （1）直接鏡檢： （2）分離培養：血液和體液可先增菌，再轉種血平板和麥康凱平板分離；膿汁、分泌物、尿可直接種于上述培養基分離培養。12 （3）鑒定：根據菌落特征、色素、生姜氣

5、味、菌體形態、氧化酶試驗等作出鑒定。對無色素的菌株應與其他假單胞菌鑒別。13腦脊液、胸腹水、膿汁、痰、尿液分 離 培 養血、麥康凱直接涂片染色血液體液糞 便分 離 培 養SS、麥康凱初步鑒定菌落特征，色 素菌體形態、氧化酶最后鑒定生化反應血清學噬菌體分型：增 菌營養肉湯銅綠假單胞菌的檢驗程序：14銅綠假單胞菌的鑒定要點及與其他假單胞菌的區別試驗銅綠假單胞菌熒光假單胞菌惡臭假單胞菌斯氏假單胞菌嗜麥芽假單胞鼻疽假單胞菌類鼻疽假單胞氧化酶 /熒光素/ / 青膿素/ / 動力 葡糖氧化 乳糖氧化 蔗糖氧化 木糖氧化 賴氨酸脫羧酶 精氨酸水解酶 硝酸鹽還原 / / 明膠液化 / 42生長 / / 15

6、第三節第三節 不動桿菌不動桿菌 不動桿菌（Acinetobacter）為一群氧化酶陰性，不發酵糖類、無動力的革蘭陰性菌。含6個種：醋酸鈣不動桿菌 洛菲不動桿菌 溶血不動桿菌 鮑曼不動桿菌 瓊氏不動桿菌 約翰遜不動桿菌16 一、生物學性狀 形態與染色 革蘭陰性球桿菌，常成雙排列，不易退色，多數有莢膜、無芽孢、無鞭毛。 培養特性 專性需養，營養要求不高。 最適溫度35 ，鮑曼不動桿菌42可生長。 血平板上 圓形凸起、23 mm ，光滑、邊緣整齊、灰白色的菌落，部分菌落呈黏液狀（溶血不動桿菌可形成 -溶血環）； 不產生色素。 麥康凱平板 形成粉紅色菌落。17 生化反應 氧化酶陰性，觸酶陽性，葡萄糖O

7、/F為氧化型。 不動桿菌屬主要菌種生化反應特征： 二、致病性 該菌廣泛存在于自然界，屬條件致病菌，也是醫院感染的常見病菌之一，常引起呼吸道、消化道和泌尿生殖道感染。18 三、微生物學檢查 標本采集：血液、腦脊液、痰液、尿液、膿汁等。 檢驗程序： 檢驗方法： （1）直接鏡檢：腦脊液、尿液離心取沉淀物涂片，膿汁和痰液直接涂片染色鏡檢可見革蘭陰性球桿菌成雙排列，細胞內外可見，常染成革蘭假陽性。 （2）分離培養：19 （3）初步鑒定：染色為革蘭陰性球菌或球桿菌，成雙排列。氧化酶（），硝酸鹽還原（）。動力（），不發酵葡萄糖。 符合上述五項即可判定為不動桿菌屬的細菌。20膿汁、痰液、尿液腦脊液、血液 分

8、離 培 養（血液瓊脂、麥康凱瓊脂）增菌培養直接 涂片革蘭染色挑選可疑菌落生化反應初步鑒定KIA：底層、斜面不變硝酸鹽還原、氧化酶、動力最后鑒定35 1824h不動桿菌屬及產堿桿菌屬檢驗程序21醋酸鈣不動桿菌鮑曼不動桿菌溶血不動桿菌 約 翰 遜不動桿菌瓊氏不動桿菌洛菲不動桿菌葡萄糖氧化 +/_ 木糖氧化 +/_ 乳糖氧化 精氨酸雙水解酶 _ /+ 鳥氨酸脫羧酶 苯丙氨酸脫氨酶 丙二酸鹽利用 _/+ 檸檬酸鹽利用 +/_ 明膠液化 生長溫度37 41 42 不動桿菌屬主要菌種生化反應特征22 產堿桿菌屬（Alcaligenes）為一群有動力，專性需氧，不分解糖類的革蘭陰性菌桿。括2個種，即糞產堿桿

9、菌，去硝化產堿桿菌。后者又分為去硝化亞種和木糖氧化亞種。廣泛存在于自然界，水和土壤中及人體皮膚粘膜有其存在。常從臨床標本中分離出。第四節產堿桿菌屬第四節產堿桿菌屬23 一、生物學性狀 形態與染色：為革蘭陰性短桿菌，成對或鏈狀排列，有周鞭毛，有動力，無芽胞，多數無莢膜。 培養特性：需氧，最適溫度2537，營養要求不高。 血平板：形成較大灰白、扁平、邊緣菲薄的菌落。 麥康凱和SS：形成透明無色菌落（少數菌株在SS上不長）。24 液體培養：均勻混濁生長，表面形成菌膜，管底有粘性沉淀。在含蛋白胨的肉湯中產氨，使PH達8.6，為本菌鑒別特征。 生化反應：氧化酶，觸酶，硝酸鹽還原，枸櫞酸鹽利用； 不產生靛

10、基質和硫化氫，不液化明膠，無苯丙氨酸脫氨酶和精氨酸雙水解酶。大多數不能氧化分解各種糖類。25 二、微生物檢驗 標本采集：膿汁、分泌物、尿液、血液等。 檢驗程序：同前 鑒 定：根據菌落形態、染色性、氧化酶試驗，再根據生化反應作進一步鑒定。26硝酸鹽還原枸櫞酸鹽利用氧化酶尿素酶/ 丙二酸鹽/O/F試驗葡萄糖 O/木糖 O/DNA中GC（mol%） 55.959.4 66.069.8 63.968.9O：氧化；F：發酵；糞產堿桿菌木糖氧化亞種去硝化亞種 產堿桿菌的鑒別27銅綠假單胞菌純培養的鏡下形態（革蘭染色）28銅綠假單胞菌在血瓊脂平板上的菌落特征（18-24h）29 綠 膿 桿 菌30銅綠假單胞菌綠膿素銅綠假單胞菌熒光素31