1、1 / 6 專業實踐能力一、病理解剖技術1. 病理尸體解剖的方法和步驟1病理尸體解剖的準備2體表檢查一 體表檢查 稱體重，量體長，觀察發育、營養狀況，檢查體表有無黃疸，發疳，出血點，疤痕，創口等，與其部位，大小；眼、耳、鼻、口腔等有無潰瘍、分泌物或液體流出，外生殖器有病變，淺表淋巴結腫大否；有無尸冷、僵、腐敗現象。3胸腹腔檢查二 體腔檢查 1， 胸、腹壁皮膚切開與剝離：根據情況，選擇y 形、 t 形或直線切口切開皮膚。切開腹膜時，先切一小孔，插入兩指，再從兩指之間剪開，以免劃破臟。剝離胸壁皮膚時，應注意將胸肌一并剝離，但勿損與肋間肌。2， 腹腔檢查：檢查腹腔有無積液和積氣，腹膜情況，各器官的位

2、置。與關系，有無粘連，肝脾腫大否，其邊緣在鎖骨中線肋緣下與劍突下幾厘米，檢查左右橫膈的高度。三 胸腔檢查 1、必要時在胸腔未切開前檢查有無氣胸。可有注射器吸水后，在第一肋間處自胸壁刺入，觀察有無氣體自水面下上升。2. 在肋骨軟骨聯接線側約0.5cm 處，將第二肋骨到肋弓的軟骨切斷，緊沿胸骨后壁將橫與縱隔割離，注意勿損與心包與大血管，然后檢查胸腔有無積液，其量與性質，必要時涂片檢查與細菌培養。3. 切斷第一肋骨，別離胸鎖關節，將胸骨與肋骨取下，觀察各器官的位置，兩肺外表情況，胸腺是否已經脂肪化。鋸開胸骨，看骨髓造血情況。4. 自心尖部向上，作人形剪開心包，檢查腔液量，心包膜壁情況，必要時取心血作

3、細菌培養。5. 疑有空氣體栓塞時，將心包剪開一小口，用鑷子拉緊切口兩側心包膜，心包腔注滿水，然后，在水上剪開右心房與肺動脈，觀察有無氣泡逸出，或者先結扎進出心臟的大血管，取出心臟， 淹沒于水下剪開右心，觀察有無氣泡逸出。4臟器官的取出與檢查四 各臟器的取出 各器官取出前，應仔細檢查周圍情況與與其他器官的關系，檢查有困難時，一時不能明確者，可與其它器官一并取出，然后再仔細檢查。檢查各器官前，應稱其重量，量大小。1. 心臟的取出與檢查，在體剖開右心，檢查肺動脈有無栓塞后，將心臟提起，從根部或心包膜壁分別剪斷上、下腔靜脈，于距瓣膜2cm處肺靜脈和主動脈于距瓣膜5cm處，取出心臟，假設有心、血管畸形，

4、那么應將心臟連同肺臟一并取出。檢查心臟增大否，外膜光滑度，有無滲出物等，心臟按血流方向剖開，測量各瓣膜的周徑與左右心室的厚度。 a ：右心剖開法：第一步，用刀或剪將右心從上、下靜脈入口處直線剖開，如欲防止破壞竇房結，從下腔靜脈向上， 剖至房室間溝上1cm處，向右心耳剪開， 保持上腔靜脈口完整，上腔靜脈至少保存1cm。第二步，從此線中點沿心臟右緣剖至心尖部，檢查三尖瓣，并用手指檢查動脈有無血栓或狹窄。第三步，從心尖部沿心室中隔剖至肺動脈，檢查肺動脈瓣。 b ：左心剖開法：第一步，用刀或剪將左心房從左、右靜脈入口之間作直線剖開，以手指檢查二尖瓣是否狹窄。第二步，從此線的左端沿心臟左緣剖開至心尖剖。

5、第三步，從心尖部沿心室中隔，避開肺動脈剖開肺動脈剖開主動脈，檢查二尖瓣與主動脈瓣。剖開有瓣膜病變的心臟時，應注意防止破壞有病變的瓣膜。心臟剖開后，檢查心肌厚度、硬度、色澤、心膜光滑度，瓣膜周圍有無增厚，與贅生物，有無狹窄或關閉不全，檢查冠狀動脈開口情況。2. 肺臟的取出：可由肺根部將主支氣管和血管切斷取出，或與頸部器官一并取出。如兩層胸膜間有粘連，需細心別離，勿損與肺，如粘連結實，可連同胸膜壁層一并剝離，取出肺臟。取出后檢查其外表情況。切開檢查肺切面的改變，有無病灶、氣腫、萎陷等，肺門淋巴結腫大否，切面情況。3. 頸部器官的取出：a，充分別離頸部皮膚與軟組織，用長刀刺入割斷舌下系帶，緊沿下頜骨

6、面向左、右盡量地將下頜與舌間的軟組織別離。b，將舌拉下，自硬腭后緣割離軟腭，注意應將兩側扁桃體完全取下。 c，將舌、咽、喉頭、氣管、食管、肺拉下于橫膈上將食管、下腔靜脈與主動脈切斷，連同胸腔器官一并取出。4. 腹腔與盆腔器官的取出：一般先將脾臟摘出，繼之取出小腸、腎上腺、肝、膽囊、胃、十二指腸、胰，最后取出腎與盆腔器官。2 / 6 將脾臟提至腹腔前方，割斷脾門部血管，取出脾臟。檢查其大小，重量，硬度，外表色澤。切面有無外翻；有無糊狀物刮下，脾門血管與脾小體、脾小梁的情況等。小腸與大腸的取出前，應檢查腸系膜淋巴結與血管，找出空腸的起端，切斷，自腸系膜附著處將腸割下，直至直腸處將其切斷取出，腸的斷

7、端應鉗緊或結扎，以免糞便污染腹腔。待其他器官檢查完畢后再檢查腸。先量其長度，在腸系膜附著處沿縱軸剪開腸腔，檢查粘膜有無病變，腔有無寄生蟲等，必要時可保持腸與腸系膜的關系，并將其一并取出。十二指腸在原位從前面剪開，用手擠壓膽囊：看膽道通暢否。沿胃大彎剪開胃，檢查粘膜病變，將胃與十二指腸從后壁別離，與胰臟一并取出，在檢查胰臟前，注意觀察脾靜脈有何變化。檢察胰臟重量， 大小，硬度，作多橫切面，檢查切面情況。小心別離腎上腺周圍組織，取出腎上腺，別離右側腎上腺時，將肝向上方推，注意別離與皮膚上腺相連的肝組織，腎上腺取出后，作多人橫切面，檢察皮質與髓質的特征，有無出血等。取出肝與膽囊前，應仔細檢查膽管、門

8、靜脈、肝靜脈，然后剪斷肝門的膽管與血管，別離鐮狀韌帶，將門靜脈與肝背部部一段下腔靜脈與肝一并取出。檢查肝的大小，重量，硬度，色澤，注意檢查肝靜脈與腔靜脈，切面外翻否，小葉結構清楚否與有無其它病變。別離腎周圍脂肪結締組織，將腎提出，凸面向上剖開，注意包膜剝離要難否，檢查外表的性狀，切面皮質與髓質紋理是否清楚，腎盂粘膜有無病變。然后連輸尿管一起取出腎臟。盆腔器官的取出：先別離腹膜與周圍組織，再取盆腔器官，男性可將直腸、膀胱一并取出，結腸斷端應結扎或縫合。5尸檢后的修復尸檢時應盡少破壞尸體的外形，檢查完畢后，應吸去體腔的血水，凡不需保存的器官，均應放回體腔，并應以木屑或其它吸水物質填塞，逢合切口。縫

9、合時要盡量注意整副尸體外形，將體表洗凈擦干，包裹或穿著妥善后放入尸箱。6微生物和寄生蟲檢查 采取細菌培養的方法 1. 心血培養標本：1.1用無菌鑷子提起右心耳，在下腔靜脈入口處的上方進展燒灼消毒，用一有柄銅片在酒精燈上燒紅，燒灼器官外表，面積約2*2cm. 1.2 用無菌吸管或注射器從消毒部位插入，順下腔靜脈入口推進，取血液2-3ml 1.3在無菌操作下，將吸取之血液立即注入無菌的肉湯培養基，或有玻璃珠的培養瓶，立即洗凈吸管或注射器，以免凝固，假設在右心取不到血液，可從下腔靜脈吸取。1.4腔胸腔、腹腔滲出液，心包腔積液，必要時作細菌培養，采取液體時應盡量防止污染。采取腦脊液培養時，于尸檢前用無

10、菌手術，在第二與第三腰椎間隙作穿刺，取腦脊液2-3ml, 置于無菌試管送檢。1.5腸容物培養：在回腸末端與乙狀結腸下端，或病變明顯處的漿膜面經燒灼滅菌后剪開，用棉花拭子插入腸腔，在粘膜面擦取粘液、滲出物粘膜，放入無菌試管或培養基送檢。1.6 臟器細菌培養：臟器外表灼燒滅菌，切取不小于2*2*1.5cm 的組織塊，裝無菌容器送檢。1.7腦組織作病毒別離：用無菌手術取大腦皮質，中腦，海馬，腦橋組織塊，每塊不小于2*2*1.5cm ，以冰瓶保藏迅速送檢。路途遙遠者，可將檢材放入無菌甘油瓶，在低溫下送檢。7化學和毒物檢查8尸檢記錄尸體檢時所見由尸檢室技術人員或指定工作人員，按剖檢者口述填寫臨時記錄單，

11、必要時攝影記錄，做為書寫尸檢記錄的根底二、病理大標本制作技術1. 大體標本的收集、取材、固定和保存1收集 (尸體解剖和活體組織檢查、其次是動物實驗的模型收集標本) 2取材越新鮮越好，標本應仔細處理，盡可能的修掉多余的組織3固定甲醛氣飽和于水的甲醛液，濃度40% ；體積 10% ，濃度 4% 的甲醛固定，10% 福爾馬林4保存含血多的標本用凱氏法；膽色素用柯氏法；虐色素、脂肪等標本用甲醛4. 大體標本的裝缸與封存法封存在玻璃或有機玻璃標本缸: 修整標本、適當標本缸、標本支架、拴好的標本略加沖洗、封口松香蜂蠟、502膠、玻璃膠封口法三、組織的取材、固定方法和切片技術2. 組織固定 1固定的方法單純

12、固定液甲醛、重鉻酸鉀、苦味酸、升汞、醋酸、鉻酸、餓酸、丙酮、三氯醋酸、乙醇和混合固定液b-5液淋巴組織、 bouin 液結締組織三色染色、carnoy液染色體、 muller 液媒染和硬3 / 6 化組織、 orth 液胚胎神經脂肪、pfg 液肽類抗原、plp 和plpd 液糖類組織、rossman 液糖原、 zenker 液細胞核細胞質三色染色、4% 多聚甲醛免疫組化、甲醛鈣液脂肪組織組織化學、乙醇甲醛皮下組織肥大細胞、乙醚乙醇細胞涂片、中性緩沖甲醛液免疫組化、中性甲醛液常用2固定后洗滌：一般沖洗24h小組織 210h 1用水配制的固定液固定的組織洗滌法、2用含乙醇固定液固定的組織洗滌法、3

13、特殊固定液固定的組織洗滌法3. 組織的脫水1脫水的方法：2考前須知乙醇純乙醇不宜過長否那么組織過度硬化丙酮收縮比乙醇更嚴重異丙醇、過氧己環、四氫呋喃、環己酮、松脂醇4. 組織的透明1透明的方法2考前須知二甲苯易使組織變硬變脆氯仿易揮發和吸收水分香柏油透明時間長松油醇、丁香油、冬青油5. 組織的浸蠟與組織處理程序1浸蠟的方法2石蠟的應用3自動組織處理機的應用4組織處理程序人工操作程序自動組織處理機程序6. 骨和含鈣組織脫鈣方法1脫鈣的方法硝酸脫鈣法：10% 硝酸水溶液、硝酸10ml和10% 甲醛 90ml的混合液。鹽酸脫鈣法：鹽酸8.5ml ，甲酸 5ml，氯化鋁 7g，蒸餾水 100ml；鹽酸

14、和甲酸各20ml，蒸餾水 100ml。8. 石蠟切片法 1切片前準備和黏附劑：固定后標本經脫水、透明、浸蠟和包埋后，制成蠟塊。鋒利的刀片；充足的經處理的載玻片和恒溫烤箱，毛筆和鉛筆。2切片制作方法：組織經石蠟包埋制成蠟塊，用切片機制成切片的過程。 3切片的考前須知：組織的固定和取材；組織的脫水、透明和浸蠟；切片；切片刀和切片機；特殊切片的制作。9. 冰凍切片方法1直接冰凍切片法：恒冷箱切片；半導體制冷冷凍切片法；甲醇制冷器；二氧化碳冷凍法。2冰凍切片粘片法：蛋白甘油粘片法；lille明膠粘片法；乙醇明膠粘片法四、木精 - 伊紅染色方法he 染色1.he染色的方法1人工操作程序2自動染色機程序3

15、冰凍切片染色方法2.he染色試劑的配制1木精染液配制harris 木精的配制：木精1g；硫酸鋁鉀 15g；氧化汞 0.5g ；乙醇 10ml，蒸餾水 200ml；先用蒸餾水加熱溶解硫酸鋁鉀，用無水乙醇溶解木精再倒入已溶解的硫酸鋁鉀的蒸餾水中，煮沸1分鐘，稍冷卻，慢慢參加紅色氧化汞 0.5g ，繼續加熱至染液變為紫紅色，用紗布蓋住瓶口，用前濾紙過濾后每100ml加冰醋酸 5ml。2伊紅染液的配制水溶性伊紅：伊紅-y0.5 1g；蒸餾水 100ml。先將水溶性伊紅參加蒸餾水中，再用玻璃棒將伊紅攪溶解后過濾，每 100ml加冰醋酸 1滴。乙醇性伊紅液：伊紅-y0.5 1g；90% 乙醇 100ml。

16、先將伊紅溶于乙醇中，用玻璃棒研碎溶解后，每100ml加冰醋酸 1滴。直接用 85% 乙醇脫水。3分化液配制( 濃鹽酸 0.5 1ml；75% 乙醇 99ml) 4返藍液的配制(1%的氨水 ) 5考前須知 ( 脫蠟、染色、脫水、透明與封膠) 五、常用的特殊染色技術1. 結締組織染色法2 masson三色染色法4 / 6 2. 膠原纖維染色法1 vg 染色法2 sirius red苦味酸法3. 網狀纖維染色法1 gomori法2 janes法4. 彈力纖維染色法1維多利亞藍2醛復紅法3地衣紅4weigert s染色法5彈力和膠原纖維雙重染色法5. 肌肉染色法1橫紋肌染色法ptah 6. 糖原染色法

17、pas 法7. 粘多糖染色法1 mowry 阿爾辛蘭 - 過碘酸雪夫 abpas 法2 singh阿爾辛蘭地衣紅法8. 黑色素染色法1黑色素染色法masson fontana 2 lillie硫酸亞鐵染色法9. 含鐵血黃素染色法普魯士藍染色法10. 膽色素染色法hall 膽紅素反響染色法11. 脫色素法1脫甲醛色素法2脫黑色素法13. 淀粉樣物質染色法1剛果紅染色法15. 細菌染色法1 grams 染色法2 ziehl-neelson抗酸桿菌染色法3胃幽門螺桿菌染色法16. 螺旋體染色法1硝酸銀染色法2 giemsa染色法18. 乙型肝炎外表抗原染色法1 shikata 地衣紅染色法3維多利亞

18、蘭染色法19. 神經組織染色法1神經細胞尼氏小體染色法2神經纖維染色法3神經髓鞘染色法4神經膠質細胞染色法20. 神經分泌細胞染色1親銀反響法2嗜銀反響法21. 嗜鉻細胞染色法1 giemsa改進法八、免疫細胞化學技術2. 熒光顯微鏡檢查方法5 / 6 1顯微鏡觀察 2標本制作要求載玻片厚度0.8 1.2mm；蓋玻片 0.17mm ，光潔；標本不易太厚；封裱劑常用甘油，無自發熒光，無色透明3考前須知嚴格要求經行操作；暗室中進展檢查；防止紫外線對眼睛的損害；檢查時間每次12h為宜；標本應集中檢查，節省時間保護光源；標本染色后立即檢查；熒光亮度判斷標準四級：“- 無或可見微弱自發熒光；“+僅能見明

19、確可見的熒光；“+可見明亮的熒光；“+可見耀眼的熒光3. 免疫酶化學的組織固定和切片1固定 amex 法，同新鮮組織冷凍切片同樣的抗原保持性和石蠟切片保存的良好組織結構；機制：組織在丙酮中固定脫水，組織細胞水分逐漸被丙酮取代；繼之，用苯甲酸酯取代組織的丙酮，經二甲苯置換后，石蠟包埋。微波固定，保持良好的組織結構和抗原性；適用切片的酶組化、icc以與免疫電鏡等2切片：冰凍切片icc研究首選和石蠟切片4. 酶的標記和染色方法 1酶標抗體法：通過共價鍵將酶連接在抗體上，制成酶標抗體，再借酶對底物的特異催化作用，生成有色的不溶性產物或具有一定電子密度的顆粒，在光鏡或電鏡下進展細胞外表與細胞各種抗原成分

20、的定位。5. 生物素 - 抗生物素免疫細胞化學技術 1目前廣泛使用的生物素- 抗生物素方法生物素- 抗生物素 - 過氧化物酶復合物技術abc 技術、橋抗生物素 - 生物素技術、標記生物素- 抗生物素技術2其他生物素- 抗生物素染色法快速abc 法、二步 abc 法、 pap 法與 abc 法連續應用十四、腎活檢標本制作技術1. 標本的處理標本分三局部，分兩半，一半行光鏡檢查；另一半大部做免疫病理，小部做電鏡檢查。免疫熒光標本應放于滴有生理鹽水的小紗布上，一同置入小瓶中送檢；光鏡標本即放進10% 甲醛固定液中，電鏡標本立即放入2.5%戊二醛于 4度冰箱固定。2. 免疫病理標本的制作 1冰凍制片方

21、法：將標本置于恒冷切片機的冷凍頭上，加少許oct 包埋劑，于冷室-20 度冷凍切片，厚度要求 34um ，附貼于載玻片上，需十片以上備用。3. 光學顯微鏡的標本制作1石蠟包埋制片：1. 腎組織的固定緩沖甲醛、磷酸氫二鈉和復合固定faa 固定液；室溫固定45分鐘2. 脫水 70-80-90-95-100，每梯度兩缸，每缸20分鐘、透明氯仿或二甲苯，兩缸每缸10分鐘、浸蠟 58-62 度石蠟，兩缸每缸30分鐘、包埋3. 切片 2-3um4. 染色2常用的染色方法he 染色、 pas 染色、 pasm 染色、 pasm-masson 復合染色法、纖維蛋白染色法十五、診斷細胞學技術1. 細胞涂片、組織印片和壓片的制備1涂片質量的根本要求2涂片方法涂抹法、拉片法、推片法3痰涂片的制作選擇有效成分用棉簽等均勻涂抹于載玻片上。4. 固定1常用固定液95% 乙醇、乙醚乙醇固定液、carnoy液、甲醇、丙酮2固定方法浸入法、滴加法5. 涂片的染色方法巴氏染色、he 染色、瑞氏染色、邁格姬染色 1 he 染色法質量穩定，細胞透明度好，核質比照鮮明；胞質顏色單一，不易觀察胞質角化程度，不適做雌激素水平的測定。6. 液基薄層細胞技術1液