1、文檔收集于互聯網，已重新整理排版.word版本可編借，有幫助歡迎下載支持.斯普瑞達(SPRIDA)對SMMC-7721肝癌細胞生長和粘附功能的影響作者：劉培勛，周則衛，徐文清，劉曉秋，劉正明，李松年【摘要】目的 使用SMMC-7721肝癌細胞株對SPRIDA-A、SPRIDA-B 和SPRIDA-A+SPRIDA-B體外抑制腫瘤生長和粘附功能進行研究。方法 采用 MTT 比色分析法觀察 SPRIDA-A、SPRIDA-B、SPRIDA-A+SPRIDA-B 對SfflC-7721肝癌細胞生長和粘附功能的影響，測定其生長抑制率和 粘附抑制率。結果SPRIDA-A對SMMC-7721肝癌細胞生長抑

2、制作用不 明顯，SPRIDA-B和SPRIDA-A+SPRIDA-B對肝癌細胞生長有明顯抑制作 用，并呈劑量依賴關系；SPRIDA-B對SMMC-7721肝癌細胞粘附功能有 明顯抑制作用，并呈劑量依賴關系。SPRIDA-B作用于SMMC-7721肝癌 細胞后，可見明顯的凋亡細胞形態岀現。結論SPRIDA-B對SMMC-7721 肝癌細胞生長和粘附功能有明顯抑制作用，并可誘導細胞凋亡，是一 個極具研究價值的抗腫瘤及抗轉移的新藥。【關鍵詞】SPRIDA-A； SPRIDA-B；肝癌細胞；轉移；粘附；凋 亡Effects of SPRIDA on growth and adhesion of hep

3、atoma cell SMMC-7721Abstract Objective Study on SPRIDA-A, SPRIDA-B and SPRIDA-A+SPRIDAB inhibit growth and adhesion of tumor in vitro by using hepatoma cell line SMMC-7721. Methods MTT was used to investigate the effect of SPRIDA-A, SPRIDA-B, SPRIDA-A+SPRIDAB1文檔來源為:從網絡收集整理.word版本可編借.文檔收集于互聯網，已重新整理排版

4、.word版本可編借，有幫助歡迎下載支持.on growth and adhesion of hepatoma cell SMMC-7721, and detect the inhibition rate of growth and adhesion. ResuIts SPRIDA-A could not obviously inhibit the growth of hepatoma cell SMMC-7721 , SPRIDA-B and SPRIDA-A+SPRIDA-B could obviously inhibit the growth and adhesion of hepato

5、ma cell SMMC-7721 in a dose dependent manner It was clear that SPRIDA-B could induce the apoptosis of the cells, when it was used on hepatoma cell SMMC-7721. Conclusion SPRIDA-B that could obviously inhibit the growth and adhesion of hepatoma cell SMMC-7721 and induce the apoptosis of the cells, was

6、 an antitumor and antimetastasis drug with remarkable value for study.Key words SPRIDAA； SPRIDA-B； hepatoma cell；metastasis； adhesion； apoptosis苦豆子Sophor alopecuroides L為豆科槐屬植物，在我國西北 地區分布廣泛。我們從其全草中提取、分離得到生物堿I,并經半合 成、純化制備得 SPRIDA-A 和 SPRIDA-B, SPRIDA-A 和 SPRIDA-B 為同分 異構體。SPRIDA-A為人工構型，SPRIDA-B為天然構型。兩

7、者由于構型 不同，生物活性也可能不同，為了驗證其體外抗腫瘤和抗腫瘤轉移作 用，我們利用SMMC-7721肝癌細胞進行了其體外抗腫瘤及抗轉移作用 的研究13。1材料與方法1. 1材料1. 1. 1藥物SPRIDA-A、SPRIDA-B,均為白色固體粉末，引吸濕 性強，溶于水，純度大于95%,由木實驗室自制。1. 1.2主要試劑RPMI60培養基、小牛血清、胰蛋白酶、MTT、 二甲基亞硯(DMSO)購于中國醫學科學院血液學研究所，ECMGEL購 自sigma公司。1.1.3細胞系SMMC-7721肝癌細胞株，購于中國醫學科學院基 礎醫學研究所。1. 2方法1. 2. 1細胞培養SMMC-7721肝

8、癌細胞常規培養于10%小牛血清、 100U/ml青霉素及100U/ml鏈霉素的RPMI60培養基中，置于37C C02培養箱內培養，23d傳代1次，以維持細胞處于對數成長期。1.2.2 SPRIDA-A、 SPRIDA-B、 SPRIDA-A+SPRIDA-B 對 SMMC-7721 肝癌細胞生長的影響 采用唾哇氮藍(MTT)比色分析法。將對數生長 期細胞接種于96孔培養板,細胞濃度為8X104/ml,每孔0. 2ml,將 SPRIDA-As SPRIDA-B. SPRIDA-A+SPRIDA-B 與細胞共培養 24h,加 150 U1 DMSO,全自動酶標儀測定波長490nm光密度(A)值，

9、每孔設6 個復孔。試驗重復三次，計算各組均值。試驗組按下式計算細胞生長 抑制率：生長抑制率(%)= (1-試驗組A值/對照組A) X 100%1. 2. 3 SPRIDA-A、SPRIDA-B 對 SMMC-7721 肝癌細胞粘附功能的 影響 采用唾哩氮藍(MTT)比色分析法。96孔板每孔中分別鋪上ECMCEL 各50ul, 4C過夜。加入1 %BSA150 u 1/孔，37C孵箱內孵育2h,倒 置瀝干。9002與細胞共培養24h,調節細胞濃度為8X104/ml,每孔 加0. 2ml,吸附lh,用無血清培養液洗2次，加入200 U 1完全培養液, 加MTT20U1/孔,37C孵箱內孵育4h,加

10、DMS0150 u 1/孔。全自動酶 標儀測定波長490nni的光密度(A)值，每孔設4個復孔，試驗重復二 次，計算粘附抑制率：粘附抑制率()=(1-加藥組A值/未加藥組A值)X 100%1. 2. 4 SPRIDA-A、SPRIDA-B對SWC-7721肝癌細胞形態的影響 將對數生長期細胞接種于預先置有蓋玻片的6孔培養板內，細胞濃度 為 8X104/ml,每孔 2nd, SPRIDA-A、SPRIDA-B 終濃度分別為 3. 7879 X10-4mol/L. 1. 1364X10-3mol/L、2. 2727X 10-3mol/L 與細胞共培 養24h,取出蓋玻片，Ciemsa染色后光鏡下進

11、行細胞形態學觀察4, 5o2試驗結果2. 1 SPRIDA-A、SPRIDA-B單用SWC-7721肝癌細胞的生長抑制 作用見表lo表1 SPRIDA-A. SPRIDA-B單用SMMC-7721肝癌細胞的生長抑制 作用由表1可見，SPRIDA-B對SmC-7221肝癌細胞生長的抑制作用 大于SPRIDA-Ao隨著SPRIDA-B藥物濃度增大，抑制率也明顯增加， 并呈劑量依賴關系。當藥物濃度為1. 1364X10-3mol/L時，抑制率可 達60%o兩組比較,差異有顯著性(P<0. 05)o2. 2 SPRIDA-B SPRIDA-A+SPRIDA-B 對 SMMC-7221 肝癌細胞的

12、生 長抑制作用見表2。表 2 SPRIDA-B、SPRIDA-A+SPRIDA-B 對 SMMC-7221 肝癌細胞的生 長抑制作用由表 2 可見，SPRIDA-B, SPRIDA-A+SPRIDA-B 對 SMMC-7221 肝癌 細胞的生長均有抑制作用，并呈劑量依賴關系，但在同一劑量條件下 相比，SPRIDA-A+SPRIDA-B對SMMC-7221肝癌細胞的生長抑制作用更 加明顯，但兩組比較，P0. 05,差異無顯著性。2. 3 SPRIDA-A, SPRIDA-B, SPRIDA-A+SPRIDA-B 對 SMMC-7221 肝癌細胞的生長抑制作用見表3。表 3 SPRIDA-A, S

13、PRIDA-B, SPRIDA-A+SPRIDA-B 對 SMMC-7221 肝癌細胞的生長抑制作用由表3可見，SPRIDA-A對SMC-7221肝癌細胞生長抑制作用不 明顯，而SPRIDA+SPRIDA-B和SPRIDA-B對SMMC-7221肝癌細胞生長均 有明顯的抑制作用，并呈劑量依賴關系。當藥物濃度為1.1364X 10-3mol/L 時，抑制率 SPRIDA-B 為 54%, SPRIDA+SPRIDA-B 為 64%。但 組間比較，差異無顯著性(P0. 05)o2.4 SPRIDA-A SPRIDA-B對SMMC-7221肝癌細胞粘附功能的影 響見表4。粘附能力是癌細胞侵蝕的始動步

14、驟，高侵襲的腫瘤細胞與基底膜 成分的異質性粘附能力通常增高，而腫瘤細胞間的同質性粘附能力則 會下降。粘附試驗表明，20min即可見SPRIDA-A組成部分細胞貼壁粘 附，而SPRIDA-B組細胞仍處于圓形的懸浮狀態。在本試驗劑量范圍內，SPRIDA-A對肝癌細胞的粘附功能沒有明顯影響oSPRIDA-B對肝癌細胞 的粘附功能有明顯抑制作用，并呈劑量依賴關系。當SPRIDA-B藥物濃 度為 3. 7879X 10-4mol/L. 1. 1364 X 10-3mol/L、2. 2727 X 10-3mol/L 時，粘附抑制率分別為68%、90%、77%,與SPRIDA-A相比差異有顯著 性(P<

15、;005)o2. 5 SPRIDA-B.環磷酰胺對SMMC-7221肝癌細胞的生長抑制作用 見表5。表4 SPRIDA-A. SPRIDA-B對SMMC-7221肝癌細胞粘附功能的影 響表5 SPRIDA-B.環磷酰胺對SMC-7221肝癌細胞的生長抑制作用在木試驗劑量范圍內，環磷酰胺對SMMC-7221肝癌細胞的增值作 用不明顯。而SPRIDA-B對SMMC-7221肝癌細胞有明顯抑制作用，并呈 劑量依賴關系。當SPRIDA-B藥物濃度為4. 3030X10-3mol/L時，抑制 率可達67%。但兩組相比，P0.05,差異無顯著性。2.6 SWC-7221肝癌細胞的形態學觀察觀察不同濃度的

16、SPRIDA-A、SPRIDA-B 作用于 SMMC-7221 細胞 24h 后發現，SPRIDA-A 組細胞形態大而有規則，核質比大，染色質深而致密，并且視野中細 胞數目很多，而SPRIDA-B組細胞稀疏，數目少，形態不規則，有的呈 梭形，有的呈圓形，核質比大，染色質較疏松。當SPRIDA-B濃度為 1. 1364X10-3mol/L時，可見有明顯的凋亡細胞形態出現；細胞體積 明顯變小，薄膜皺縮，胞核固縮，染色質濃染，有的細胞表現為核碎 裂，個別細胞部分胞漿崩解為碎片狀，可見由膜裹內容物的所謂凋亡 小體形成。3結論試驗結果表明：（l）SPRIDA-A單用對SMMC-7221肝癌細胞的生長 抑

17、制作用不明顯。（2）SPRIDA-B單用對SWC-7221肝癌細胞的生長抑 制有明顯作用，隨著SPRIDA-B藥物濃度增大，抑制率也明顯增加，并 呈劑量依賴關系,與SPRIDA-A相比,兩組間相比,P<0. 05,差異 具有顯著性。（3）SPRIDA-A+SPRIDA-B對SMMC-7221肝癌細胞生長有明 顯的抑制作用,并呈劑量依賴關系。與SPRIDA-B單用相比,P0. 05, 兩組間差異無顯著性。（4）粘附試驗表明，SPRIDA-A對肝癌細胞的粘 附功能沒有明顯影響，SPRIDA-B對肝癌細胞的粘附功能有明顯抑制作 用，并呈劑量依賴關系。與SPRIDA-A相比差異有顯著性（P<

18、;0. 05）o （5）在試驗劑量范圍內，環磷酰胺對SWC-7221的抑制作用不明顯，而 SPRIDA-B對SMMC-7221肝癌細胞有明顯抑制作用，并呈劑量依賴關系。 但兩組相比，P0. 05,差異無顯著性。（6）不同濃度的SPRIDA-A作用 于SfflC-7221肝癌細胞后，細胞形態大而規則，核質比小，染色質深 而致密，并且視野中細胞數目很多。而SPRIDA-B組細胞稀疏，數目少, 形態不規則，核質比大，染色質較疏松。當SPRIDA-B濃度為1. 1364 X 10-3mol/L時，可見明顯的凋亡細胞形態出現。4討論SPRIDA-A與SPRIDA-B由于立體結構不同，可能表現為不同的生 物活性，試驗結果證實了這一點。可能與底物與受體作用有關。因為 從結構上講，SPRIDA-A具剛性，而SPRIDA-B具柔性，SPRIDA-B易與 受體作用。所以SPRIDA-B活性更強。SPRIDA-B不僅對SMMC-7221肝癌細胞生長有明顯的抑制作用， 而且對其粘附功能也有明顯抑制作用，并可誘導細胞凋亡，從而影響 腫瘤細胞的侵襲和轉移，SPRIDA-B是一個很有開發價值的抗腫瘤及抗 轉移藥物，值得深入研究?！緟⒖嘉墨I】1衛生部新藥(西藥)臨床前研究指導原則匯編(藥學、藥理 學、毒理學).1993, 137.2周則衛，